钙激活的氯离子通道文献一篇

Ano2是钙激活氯离子通道的分子基础_藏雨轩

2014年11月第34卷第11期 基础医学与临床Basic ＆Clinical Medicine November 2014Vol．34No．11 收稿日期：2014-02-12 修回日期：2014-08-25 基金项目：国家自然科学基金（81202031）；吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目（2013-351）；2013年吉林省大学生创新创业训练计划（856号）；吉林医药学院大学生科研项目［吉医学科字（2012）第12号］ * 通信作者（corresponding author ）：haof863@126．com 文章编号：1001-6325（2014）11-1477-05 研究论文 Ano2是钙激活氯离子通道的分子基础 藏雨轩1 ，方 芳2，朱杭飞2，向国艳1，张雲乔1，李瑷彤1 ，郝 峰 1* （吉林医药学院1.生物化学检验教研室；2.免疫学教研室，吉林吉林132013） 摘要：目的探讨Ano2是否为钙激活氯离子通道的分子基础。方法用ＲT-PCＲ技术扩增Ano2编码基因，将Ano2 连接到真核表达载体pEGFP-N3；通过脂质体介导将Ano2转染至FＲT 细胞，抗生素筛选获得稳定表达Ano2的细胞系；倒置荧光显微镜下观察Ano2在FＲT 细胞中的表达和分布， Western blot 检测Ano2的表达；全细胞膜片钳技术研究Ano2的电生理学特性。结果成功构建pEGFP-Ano2真核表达载体；Ano2表达在FＲT 细胞膜上；Ano2电流呈Ca 2+、时间和电压依赖性，电流和电压关系呈外向整流。结论Ano2是钙激活氯离子通道的分子基础。 关键词：Ano2；FＲT 细胞；转染；钙激活氯离子通道 中图分类号：Q 424 文献标志码：A Ano2is the molecular identity of calcium-activated chloride channels ZANG Yu-xuan 1，FANG Fang 2，ZHU Hang-fei 2，XIANG Guo-yan 1，ZHANG Yun-qiao 1， LI Ai-tong 1，HAO Feng 1* （1.Dept．of Biochemistry Laboratory ；2.Dept．of Immunology ，Jilin Medical College ，Jilin 132013，China ） Abstract ：Objective To investigate that whether Ano2is the molecular identity of calcium-activated chloride channels．Methods The full length coding sequence of Ano2was amplified by ＲT-PCＲ，Ano2and eukaryotic ex- pression vector pEGFP-N3were ligated ；Then recombinant plasmids were transfected into FＲT cells using liposome ，and the stable transfection FＲT cells were selected with antibiotic ；the expression and location of Ano2was ob-served by the inverted fluorescence microscope and its expression was detected by Western blot ；the electrophysio-logical properties of Ano2were researched by whole-cell patch-clamp technique．Ｒesults pEGFP-Ano2was suc-cessfully constructed ，FＲT cell membrane expressed Ano2；the electrophysiological properties of Ano2were Ca 2+-，time-and voltage-dependent ，and an outward-rectifying I /V relationship was observed．Conclusions Ano2is the molecular identity of calcium-activated chloride channels． Key words ：Ano2；FＲT cells ；transfection ；calcium-activated chloride channels 钙激活氯离子通道（calcium-activated chloride channels ，CaCCs ）是一类在内皮细胞、平滑肌细胞和神经元等细胞广泛表达的阴离子通道，在跨上皮液体转运、嗅觉信号传导和平滑肌收缩等多种生理过程中扮 演重要角色 ［1-2］ ，同时CaCCs 也是治疗高血压、腹泻和 某些特定肿瘤等疾病潜在的药物靶点［3］ 。跨膜蛋白16 家族（transmembrane protein 16）共有10个成员，目前已证实Ano1（anoctamin 1）是CaCCs 的分子基础 ［4-5］ ，但