启动子DNA甲基化和组蛋白乙酰化对胃癌中PDX1表达的影响_马娟

第37卷第2期2016年3月中山大学学报（医学科学版）JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY （MEDICAL SCIENCES ）

Vol．37No．2Mar．

2016

收稿日期：2015－10－16

基金项目：国家自然科学基金（81001112）；广州市科技局珠江科技新星项目（2012J2200019）；广东省医学科研基金（A2014021）

作者简介：马娟，医学博士，副主任医师，研究方向：消化道肿瘤的临床及基础研究，E－mail ：majuanhku＠hotmail．com ；刘庆华，通信作者，

医学博士，副教授，E－mail ：mjlqh＠163．com

启动子DNA 甲基化和组蛋白乙酰化对胃癌中PDX1

表达的影响

马

娟1，余莲英1，廖山婴1，王蓓蓓1，徐丽姝1，沙卫红1，王启仪1，刘庆华

2

（1．广东省人民医院／／广东省医学科学院／／广东省老年医学研究所消化科，广东广州510080；2．中山大学附属第一医院肾

内科，广东广州510080）

摘

要：

【目的】已知胃癌中PDX1表达下调，本研究旨在探讨DNA 甲基化和组蛋白乙酰化修饰对PDX1基因表达的

调控。【方法】免疫组化法检测胃癌组织芯片中PDX1、Dnmt1和HDAC 的表达，分析其相关性。5’－aza－dC 和TSA 处理胃癌细胞，RT－PCR 检测PDX1mRNA 水平，分析DNA 去甲基化和组蛋白乙酰化对PDX1表达的影响；构建6个PDX1启动子片段至pGL3载体，检测转录活性，分析去甲基化和乙酰化对PDX1启动子转录活性的影响。MSP 和BSP 评估PDX1启动子

DNA 甲基化状态以及启动子活性受5’－aza－dC 和SssI 的影响；ChIP 评估PDX1启动子组蛋白乙酰化状态以及启动子活性受TSA 的影响。【结果】免疫组化结果显示与正常组织对比，胃癌组织中的PDX1表达下调，Dnmt1和HDAC 表达上调，PDX1和Dnmt1及HDAC 的表达负相关（P ＜0．05）；5’－aza－dC 和TSA 使PDX1在胃癌细胞中重获表达；F383是PDX1启动子核心，5’－aza－dC 和TSA 增强F383转录活性，SssI 抑制F383转录活性；MSP 结果显示F383在胃癌细胞中呈完全甲基化；BSP 结果显

示与对照比较，位于F383区域内17个CpG 位点中80％以上呈现甲基化。ChIP 分析结果提示F383呈组蛋白H3和H4低乙酰化。【结论】PDX1基因在胃癌中表达沉默与启动子DNA 高甲基化和组蛋白低乙酰化有关。

关键词：胃癌；PDX1；DNA 甲基化；组蛋白乙酰化中图分类号：R73

文献标志码：A

文章编号：1672－3554（2016）02－0175－08

DNA Methylation and Histone Acetylation of the Promoter Regulate PDX1Expression in

Gastric Cancer

MA Juan 1，YU Lian-ying 1，LIAO Shan-ying 1，WANG Bei-bei 1，XU Li-shu 1，SHA Wei-hong 1，

WANG Qi-yi 1，LIU Qing-hua 2

（1．Department of Gastroenterology and Hepatology ，Guangdong General Hospital ／／Guangdong Academy of Medical Sciences ／／

Guangdong Institute of Geriatrics ，Guangzhou 510080，China ；2．Department of Nephrology ，The First Affiliated Hospital ，Sun Yat-sen University ，Guangzhou 510080，China ）

Corresponding to ：LIU Qing-hua ，E-mail ：mjlqh＠163．com

Abstract ：【Objective 】The expression of pancreatic-duodenal homeobox 1（PDX1）is aberrantly reduced in gastric cancer．This study aimed to determine the regulation of DNA methylation and histone acetylation on the expression of PDX1in gastric cancer．

【Methods 】The expression of PDX1，Dnmt1and HDAC was detected in human gastric cancer tissue chips by immunohistochemistry ，

and its correlations were analyzed．PDX1expression in response to demethylation （5’-aza-dC ）and acetylation （TSA ）was assessed in human gastric cancer cells by reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR ）．Six PDX1promoter fragments were cloned into pGL3vector and the transcription activity of promoters in response to demethylation and acetylation was detected by dual luciferase assay．In gastric cancer cell lines ，promoter DNA methylation was evaluated by methylation-specific PCR （MSP ）and bisulfite DNA sequencing PCR （BSP ）while histone acetylation was detected by chromatin immunoprecipitation （ChIP ）assay．

【Results 】Compared to gastric normal tissues ，the expression of PDX1protein was weak but the expression of Dnmt1and HDAC was

DOI:10.13471/https://www.360docs.net/doc/603034163.html,ki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2016.0032

中山大学学报（医学科学版）第37卷

PDX1即胰十二指肠同源异型基因1（pancreatic duodenal homeobox1），与胚胎发育和消化道分化有关［1－2］。我们前期研究报道PDX1在胃癌中低表达，是潜在的抑癌基因［3－4］，启动子甲基化与PDX1转录表达有关［5］，故推测PDX1表达调控与表观遗传学修饰有关。为此，本研究检测胃癌组织芯片中PDX1、DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase，DNMT）和组蛋白去乙酰基酶（histone deacetylase，HDAC）的表达，分析其相关性；使用DNMT抑制剂5－杂氮－2＇－脱氧胞苷（5’－aza－dC）和HDAC抑制剂制霉菌素A（TSA）处理胃癌细胞，检测PDX1启动子活性；评估胃癌细胞中PDX1启动子DNA甲基化和组蛋白乙酰化状态。

1材料与方法

1．1实验对象

购买三张相同的胃癌和正常组织组合微阵列芯片，每张芯片有217例／217点，包括172例腺癌、12例黏液腺癌、5例未分化癌、6例印戒细胞癌、3例类癌、1例鳞癌，9例恶性间质瘤和8例正常胃组织，每例一点。3株人胃癌细胞AGS、SGC7901和TMK1，培养于含100mL／L胎牛血清、100μg／mL青霉素、100μg／mL链霉素的RPMI－1640培养液中，37℃、体积分数5％CO2恒温孵育箱中常规培养和传代。

1．2免疫组化

组织芯片常规脱蜡、修复抗原，一抗PDX1（1：300）、Dnmt1（1∶200）、HDAC（1∶200）（Santa－Cruz）孵育、二抗（羊抗兔，1∶100，DaKo）室温下孵育1 h。最后3，3’－二氨基联苯胺（DAB）显色、苏木素复染、中性树脂封片。根据病理切片染色深度及染色面积共同评估，予以评分［4］。

1．3RT－PCR

Trizol试剂提取细胞总RNA，取1μg RNA样品使用试剂盒（ThermoScriptTM RT－PCR System，Invitrogen）逆转录合成cDNA。以cDNA为模板，行聚合酶链反应。PDX1引物序列为：5’－CGGAAGAAAAAGAGCCATTG－3’（Forward）和5’－GCCAGAGGAAGAGGAG GACT－3’（Reverse），扩增产物354bp；GAPDH引物序列为：5’－GACCACAGTCCATGCCATCAC－3’（Forward）和5’－GTCCACCACC CTGTTGC TGTA－3’（Reverse），扩增产物454bp［4］。

1．4启动子活性检测

构建PDX1启动子报告基因，瞬时转染24h，加入5’－aza－dC或／和TSA于细胞培养液中，继续培养24h后收集细胞，按Dual－Luciferase reporter system（Promega）操作步骤，检测荧光素酶／Renilla 活性相对比值。空质粒pGL3作为对照。详见以往研究［5－6］。

1．5甲基化特异性PCR

收集胃癌细胞，提取基因组DNA，进行亚硫酸钠修饰。使用甲基化和非甲基化引物，以亚硫酸盐修饰的基因组DNA为模板，进行聚合酶联反应。根据电泳显示的不同条带判断甲基化状态［5］。1．6亚硫酸盐测序法

设计针对启动子CpG位点的特异性BSP引物，以亚硫酸盐修饰后的基因组DNA为模板，经过95℃预变性20min，然后94℃30s，52℃30s，72℃45s，共40个循环，72℃最后延伸10min，得到PCR扩增产物。纯化PCR产物并将其插入至pGEM－T4载体（Promega）中，分别挑选10个阳性克隆测序，确定CpG位点的甲基化率。

1．7染色体免疫共沉淀（ChIP）

收集2×106个TMK1细胞，按照ChIP试剂盒（Upstate Biotechnologies，Charlottesville，VA）说明书操作，使用一抗acetyl－histone H3（lys9and 14），acetyl－histone H4（lys5，8，12and16）（Upstate Biotechnology）或rabbit IgG（Santa Cruz）

upregulated．Our results also showed that PDX1is negatively correlated with Dnmt1and HDAC．PDX1expression was restored by5’-aza-dC and by TSA in gastric cancer cells．F383（-22063～-21681nt）wihich displayed significant promoter transcript activity，which was increased by5’-aza-dC and TSA but decreased by SssI methylase．F383was completely methylated in gastric cancer cells by MSP and more than80％of17single CpG sites located at F383were methylated compared with gastric normal tissues by BSP（P＜0．01）．F383had also lower acetylation level of histone H3and H4in gastric cancer cells by ChIP assay．【Conclusion】PDX1silencing was resulted by promoter hyper-methylation and histone hypo-acetylation in gastric cancer．

Key words：gastric cancer；PDX1；DNA methylation；histone acetylation

［J SUN Yat-sen Univ（Med Sci），2016，37（2）：175－182］176

第2期

孵育，进行real－time RT–PCR定量分析，评估组蛋白乙酰化水平。IgG作为阴性对照。

1．8统计学方法

计数资料用均数±标准差表示，采用配对t 检验；等级资料采用Spearman等级相关分析。P＜0．05被认为有统计学意义。

2结果

2．1PDX1、DNMT和HDAC在胃癌组织中的表达及相关性分析

免疫组化结果显示PDX1正常表达于胃黏膜腺体细胞的胞核和胞浆，以胞核为主（图1A＆D）。PDX1在8例正常对照中表达水平为2．75±0．16，包括2例＋＋、6例＋＋＋，阳性率100％；PDX1在202例胃癌组织中表达微弱（图1G＆J），表达水平约为1．47±0．07，包括31例阴性、82例＋、52例＋＋、37例＋＋＋，阳性率84．65％。两组半定量分析比较有显著性差异（t＝3．736，P＜0．001；图1M）。

DNMT在正常胃黏膜组织中表达微弱（图1B ＆E），约0．25±0．16，包括6例阴性、2例＋；DNMT 高表达于胃癌细胞的胞核和胞浆，以胞核为主（图1H＆K），表达水平为0．99±0．05，包括53例阴性、107例＋、34例＋＋、8例＋＋＋。两组比较有显著性差异（t＝－2．68，P＝0．008；图1M）。

同样，HDAC在正常胃黏膜组织中表达微弱（图1C＆F），表达水平为0．50±0．33，包括6例阴性、2例＋＋；HDAC在癌组织中的表达增强，癌细胞的胞核和胞浆中均见HDAC表达，以胞核为主（图1I＆L），表达水平为1．40±0．07，包括29例阴性、96例＋、45例＋＋、32例＋＋＋；两组比较有统计学意义（t＝－2．70，P＝0．008；图1M）。

进一步分析PDX1与HDAC及Dnmt1的相关性，Spearman等级比较结果显示胃癌组织芯片中PDX1的表达与Dnmt1（r＝0．723，P＝0．043）和HDAC表达均呈负相关（r＝0．849，P＝0．008；图1 N＆O）。

2．2PDX1表达受DNA去甲基化和组蛋白乙酰化调节

培养AGS、SGC7901、TMK1细胞，在培养液中加入终浓度为5μmol／L的5－杂氮－2＇－脱氧胞苷（5’－aza－dC）或终浓度为0．5μmol／L的制霉菌素A（TSA），24h后收集细胞，RT－PCR检测PDX1mRNA水平。结果显示PDX1在胃癌细胞中表达微弱，5’－aza－dC和TSA均可使PDX1mRNA表达水平上调（图2A－B）。

培养SGC7901细胞，取5’－aza－dC（5、10、20μmol／L）或TSA（0．5、1μmol／L）单独或联合加入培养液中，24h后收集细胞，RT－PCR检测PDX1表达。结果显示单独加入5’－aza－dC或TSA均可使PDX1mRNA表达重获，且随着5’－aza－dC或TSA剂量增加PDX1表达升高（图2C－D）；两者合用时PDX1的表达较单独使用5’－aza－dC或TSA 进一步增加，提示DNA甲基化与组蛋白乙酰化修饰对PDX1基因表达有协同作用（图2E）。

2．3PDX1启动子活性受DNA甲基化和组蛋白乙酰化调节

如前期研究［6］，针对PDX1基因5’端－2500nt －＋500nt区域的6个CpG岛，构建分别含有一个CpG岛的报告基因F345、F297、F383、F314、F283和F724（图3A），瞬时转染胃癌细胞，使用启动子检测试剂盒检测各片段的转录活性，以筛选PDX1启动子。结果显示AGS、TMK1和KATOIII细胞中F383转录活性最强，是空质粒pGL3的10．12±0．21、9．73±0．73、11．31±0．34倍；F345和F297启动子活性也有一定升高，F345转录活性是pGL3的5．23±0．23、5．90±0．46、3．79±0．84倍，F297转录活性是pGL3的5．03±0．12、3．64±0．42、2．51±0．22倍（图3B）。

培养TMK1细胞，加入5＇－aza－dC或转染SssI 处理后的报告基因，检测转录活性。与pGL3比较，F345、F297、F383的转录活性增加了6－14倍，5＇－aza－dC使其进一步升高，SssI则抑制了其转录活性（图3C）。结果提示F383是PDX1启动子核心区域，其转录活性受DNA甲基化直接调节。

培养AGS和KATOIII，加入TSA处理24h，检测F383的转录活性。结果显示与TSA处理前比较，TSA处理后的F383转录活性在KATOIII细胞中显著升高约6．48倍（t＝－9．148，P＝0．01），在AGS 细胞轻微升高约1．34倍（t＝－4．246，P＝0．05；图3D＆E）。这提示F383受到组蛋白乙酰化的调节，AGS和KATOIII结果不同反映出不同细胞株对TSA的敏感性不同。

2．4PDX1启动子在胃癌细胞中呈DNA高甲基化和组蛋白低乙酰化

培养AGS、SGC7901和TMK1细胞，采取MSP

马娟，等．启动子DNA甲基化和组蛋白乙酰化对胃癌中PDX1表达的影响177

中山大学学报（医学科学版）

第37卷

A B C

PDX1

Dnmt1

HDAC

G a s t r i c C a n c e r

N o r m a l C o n t r o l

D E F

G H I

J K L

M N O

A－L ：The expression of PDX1，Dnmt1and HDAC were investigated in gastric cancer tissue chips by IHC （×200）．Three same tissue chips were used for detection of PDX1，Dnmt1and HDAC proteins．Each chip contains 217cases including 172adenocarcinoma ，12mucinous adenocarcinoma ，5undifferentiated carcinoma ，6signet－ring cell carcinoma ，3carcinoid ，1squamous carcinoma ，9malignant interstitialoma and 8normal stomach tissue．M ：Semi－quantitative comparison of PDX1，Dnmt1and HDAC in gastric cancer．Gastric normal tissues were used as control．PDX1protein was positive in cell nuclear and cytoplasm of gastric normal gland cells while it was weak or absent in gastric cancer （P ＜0．001）．Reversely ，Dnmtl （P ＜0．01）and HDAC （P ＜0．05）was strong in astric cancer but decreased in normal control．（vs control ，1）P ＜0．05，2）P ＜0．01，3）P ＜0．001）．N ＆O ：The expression of PDX1was negative correlated with Dnmt1（P ＜0．05）and HDAC respectively by Spearman correlation analysis （P ＜0．01）．

图1

PDX1、Dnmt1和HDAC 在胃癌组织中的表达相关性

Fig．1

The expression and association of PDX1，Dnmt1and HDAC in gastric cancer

178

第2期

和BSP 检测PDX1启动子DNA 甲基化情况。MSP 结果显示F383在3株胃癌细胞中均呈完全甲基化，表明PDX1启动子普遍存在DNA 甲基化（图

4B ）。进一步选取F383片段的17个CpG 位点（图4A ），BSP 评估这些位点甲基化情况。结果显示正

常胃黏膜组织中F383相对应的17个CpG 位点甲基化率为1．94％±1．2％，三株细胞中F383的CpG 位点甲基化率显著升高，分别为82．35％±5．9％、

97．1％±1．9％、81．8％±2．8％（P 皆＜0．01；图4C ）。

收集TMK1细胞，ChIP 法检测乙酰化组蛋白

H3（Acetyl－H3）和乙酰化组蛋白H4（Acetyl－H4）

结合的F383DNA 的相对值，评估F383组蛋白乙酰化水平。结果，与Input IgG 比较，F345、F297、

F314、F283和F724结合的Acetyl－H3和Acetyl－H4水平近似于Input IgG （图4D ），提示F383的转

录活性与组蛋白乙酰化的低水平有关。

3

讨论

Pdx1是Homeobox 家族的转录因子，选择性表

达于胰腺、十二指肠及胃幽门腺体，一旦PDX1发生缺陷，这些部位就难以正常发育［1，7－9］。PDX1在幽门螺杆菌感染或伴有肠化生的胃黏膜中表达下调［10］，在胃癌组织中表达也降低，且与临床TNM 分期相关［3－4］，提示PDX1表达在胃粘膜的癌变多阶段过程中逐步出现。基因组水平的表观遗传修饰可能参与其中。本文探讨了DNA 甲基化和组蛋白乙酰化修饰对PDX1转录活性的调节作用。结果表明PDX1基因5’端－2063～－1681nt 的功能性片段F383具有最强启动子活性，存在着DNA 高甲基化和组蛋白低乙酰化，抑制了PDX1转录活性，调控着胃癌细胞中PDX1的表达。

Three gastric cancer cell lines including AGS ，SCG7901and TMK1were used for detection of PDX1expression with 5′－aza－dC and ／or TSA treatment by RT－PCR．A ：After 5′－aza－dC （5μmol ／L ）treatment ，PDX1mRNA level was increased as 3－12folds．B ：After TSA （0．5μmol ／L ）treatment ，PDX1mRNA level was increased as 2－8folds．C ：After 5′－aza－dC treatment with 0，5，10and 20μmol ／L ，PDX1mRNA level was gradually increased．D ：After TSA treatment with 0，0．5and 1．0μmol ／L ，PDX1mRNA level was also gradually increased．E ：With combination of 5′－aza－dC and TSA treatment ，PDX1expression level was higher than single 5′－aza－dC or TSA treatment．

图2DNA 去甲基化和组蛋白乙酰化使胃癌细胞中PDX1重获表达

Fig．2The expression of PDX1was retrieved by DNA demethylation and histone acetylation

D E

A B C

马娟，等．启动子DNA 甲基化和组蛋白乙酰化对胃癌中PDX1表达的影响

179

中山大学学报（医学科学版）第37卷

PDX1特异性的表达由5’侧翼端保守的

启动子区域调控，即－2852～－2547nt （AreaI ）、

－2247～－2071nt （AreaII ）和－1973～－1694nt

（Area III ）［11－12］。AreaI 和AreaII 介导内分泌腺细胞表达［11］，形成复合体调节Pdx1表达［13］。AreaIII 可与Ptf1a 结合介导小鼠胚胎早期胰腺β细胞的

pdx1瞬时表达［14］。我们的前期研究针对PDX1上

游－2500nt ～＋500nt 区域内的6个CpG 岛，构建不同报告基因，证实位于AreaIII 的报告基因片段

F383具有最强的启动子活性

［6］

。本文培养AGS 、

TMK1、KATOIII 细胞，转染PDX1报告基因，结果

仍然显示F383启动子活性最强，支持前期研究［6］。

表观遗传学修饰主要包括DNA 甲基化和组蛋白修饰。DNMT 和HDAC 是DNA 甲基化和组蛋白乙酰化修饰过程中调控基因表达的关键酶［15］。胃癌中某些抑癌基因启动子存在DNA 甲基化或组蛋白乙酰化修饰［16］。本研究检测到胃癌组织中

DNMT 和HDAC 表达上调，PDX1表达下调，与DNMT 和HDAC 负相关；在胃癌细胞中PDX1受5’－aza－dC 和TSA 作用恢复表达，有一定的剂量

依赖性，而且5’－aza－dC 和TSA 联合作用可使

PDX1表达进一步升高，反映了两者的协同作用。

这支持了以往的研究［17－19］。Gu 报道DNMT 和

HDAC 在卵巢癌中表达上调［17］。Cameron 报道DNA 甲基化抑制剂使结肠癌细胞中目的基因表达

轻度上调，合用HDAC 抑制剂则显著增强基因表达水平［18］。Capobianco 等［19］报道合用5’－aza－dC 和HDAC 抑制剂治疗多重耐药的骨肉瘤细胞的效果优于单独用药。这些研究结果表明组蛋白去乙酰化和DNA 高甲基化共存于基因失活的过程中。此外组蛋白甲基化修饰也可能参与其中，有研究已证实胃癌中组蛋白甲基化修饰调节抑癌基因的表达［17，20］。PDX1启动子是否存在组蛋白甲基化，尚需进一步研究。

抑癌基因启动子DNA 甲基化在肿瘤细胞中是普遍现象［15］。Homeobox 基因如aristaless－like

homeobox－4［21］、CDX1［22］和CDX2［23］启动子高甲基

化与其在结直肠癌和食管鳞癌中异常表达有关。本研究使用5’－aza－dC 或泛甲基化酶SssI 处理后

TMK1细胞，F383的启动子活性升高或降低；同时MSP 和BSP 显示胃癌细胞中F383呈DNA 高甲基

化，结合前期研究评估PDX1启动子在胃癌组织中也呈DNA 高甲基化［5］，提示着F383包含的CpG 岛是转录功能区，其DNA 高甲基化抑制了PDX1转录活性，使PDX1在胃癌中的表达降低，支持以往研究［22－23］，为homeobox 基因DNA 甲基化与肿瘤

A ：Schematic of PDX15′flank promoter region （－2500nt ～＋500nt ）containing six CpG islands．Six PDX1promoter fragments including F345，F297，F383，F314，F283and F724were constructed in pGL3vector．

B ：After transient transfection of PDX1reporter fragments in AGS ，TMK1and KATOIII cells ，the transcription activity of six fragments were detected by dual luciferase assay．Compared to empty vector pGL3，the transcription activity of F383was strongest with the folds as 10．11±0．21，9．73±0．73，11．31±0．34．

C ：The transcription activity of F383was slightly increased with 5′－aza－dC treatment but obviously decreased with SssI treatment （P ＜0．05）．The transcription activity of F345and F297also changed to 5′－aza－dC or SssI treatment．It implied function of 5′－aza－dC and SssI were general for DNA methylation．

D ＆

E ：With TSA treatment ，the transcription activity of F383were increased as 1．34folds in AGS （P ＝0．05）and 6．48folds in KATOIII cells （P ＝0．01）．

图3DNA 甲基化和组蛋白乙酰化影响胃癌细胞PDX1基因启动子活性

Fig．3DNA methylation and histone acetylation affected transcription activity of PDX1in gastric cancer cells

A

B

C

E

D 180

第2期

相关增添了证据。

组蛋白乙酰化／去乙酰化修饰主要通过组蛋白乙酰基转移酶（HAT ）和组蛋白去乙酰基酶（HDAC ）协调作用来调控基因的转录表达。启动子组蛋白H3和H4赖氨酸（包括K5、K8、K9、K12、

K16）乙酰化的缺失，与抑癌基因转录失活继而促

进癌症发生有关［15］。宫内发育迟缓的胎鼠中，出现

HDAC 聚集和组蛋白H3和H4去乙酰化，导致USF－1无法结合Pdx1启动子。待小鼠出生后，出

现组蛋白H3赖氨酸4（H3K4）去甲基化和组蛋白

H3赖氨酸9（H3K9）甲基化，提示HDAC 可能逆

转小鼠pdx1表观遗传改变、影响pdx1表达

［24］

。本

研究结果显示F383的组蛋白乙酰化水平低，TSA 可使其启动子活性显著升高，提示启动子组蛋白低乙酰化影响了PDX1转录活性，这支持了以往的研究［24］。

总之，本文证实，F383是PDX1启动子核心区

域，F383的DNA 高甲基化和组蛋白低乙酰化抑制了PDX1的转录表达，导致PDX1表达下调。将来有望在动物体内改变PDX1启动子甲基化和组蛋白乙酰化，使PDX1在胃癌中再表达，评估治疗效果。

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［1］

［2］

［3］

A ：Schematic of 17CpG sites at F383by BSP analysis．

B ：F383was full methylated in AGS ，SGC7901and TMK1cells by MSP analysis．

C ：More than 80％of DNA methylation for 17CpG sites of F383in AGS ，SGC7901and TMK1cells were detected （vs normal control ，1）P ＜0．01）．

D ：The acetylation level of histone H3and histone H4of F383had no change but that of the other four fragments was higher than IgG．

图4F383在胃癌细胞中的DNA 甲基化和组蛋白乙酰化状态

Fig．4DNA methylation and histone acetylation status of F383in gastric cancer cells

A

B

C D

马娟，等．启动子DNA 甲基化和组蛋白乙酰化对胃癌中PDX1表达的影响

181

中山大学学报（医学科学版）第37卷

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（编辑孙慧兰）［14］

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