FQ-PCR检测淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体

FQ-PCR检测淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体
FQ-PCR检测淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体

FQ-PCR检测淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体

【摘要】目的对422例患者淋球菌,沙眼衣原体和解脲支原体的检测结果进行分析,给临床诊治提供参考。方法应用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对422例患者,取其宫颈、尿道分泌物或前列腺液同时进行NG、CT、UU的检测。结果422例患者总检出阳性率65.64%,单一感染阳性率54.27%,重叠感染阳性率11.37%。男性316例阳性率67.41%,女106例阳性率60.38%。男女阳性检出率差异无显著的统计学意义(χ2=1.27,P>0.05)。检测结果显示:UU检出率最高,在UU阳性患者中女性高于男性,差异有显著的统计学意义(χ2=4.20,P<0.05)。结论STD感染中,NG、CT、UU占有一定比例,应尽可能的为患者进行全面的检查,以及时发现合并感染,给予有效的治疗。FQ-PCR技术检测NG、CT、UU具有操作简单、反应时间短、结果客观准确,敏感性和特异性好的优点,适宜门诊初查。

【关键词】性传播疾病(STD) ;荧光定量PCR ;淋球菌(NG);沙眼衣原体(CT) ;解脲支原体(UU)

性病是当今世界范围流行最广泛的传染病,它的概念已从过去经典的5种性病演变为包括艾滋病在内的与性行为接触密切相关的20余种传染病,统称性传播疾病(STD[1])。目前STD在我国的发病率有逐渐增多的趋势,卫生部列出淋病、非淋菌性尿道炎等为其中重点防治的对象。为了进一步深入了解淋球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)和解脲支原体(UU)在一般人群中的感染率,评估NG、CT、UU 在人群中传播的危险性,本文应用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对422例来自皮肤科、妇产科、泌尿外科的患者,取其宫颈、尿道分泌物或前列腺液同时进行NG、CT、UU的检测,现就其结果分析如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源标本均来自汕头大学医学院第一附属医院皮肤科、妇产科、泌尿外科的422例患者,男性316例,女性106例,年龄23~69岁。用无菌棉拭子插入女性宫颈1~1.5 cm或男性尿道2~3 cm,转动5~10 s并停留数秒后,将棉拭子密闭送检,或经前列腺按摸后取得前列腺液置无菌管密闭送检。

1.2 仪器与试剂LightCycler TM型核酸扩增仪(德国罗氏公司);TGL-16G 型低温离心机(上海安亭科学仪器厂);HB-100型恒温金属浴(杭州博日科技有限公司);HF-safe-760 s型生物安全柜(ClassⅡ,上海力申科学仪器有限公司)。荧光PCR试剂盒由深圳匹基生物工程公司提供(其为国内首家获得核酸扩增荧光体外诊断试剂盒新药证书的生产厂家)。

1.3 检测方法FQ-PCR法是在常规PCR基础上,添加了一条标记荧光发光分子和一个荧光淬灭分子的双标记探针,前者标记在5′端,后者标记在3′端。完整的探针在激光激发下,发光分子所产生的荧光被淬灭分子全部吸收,从而无荧光。PCR扩增中,当扩增链在延伸过程中遇到已与模板结合的特异性荧光探

解脲支原体检查方法

如对您有帮助,可购买打赏,谢谢 解脲支原体检查方法 导语:解脲支原体很有可能会出现感染的现象,而这个是男性体内的一种激素,如果通过检查发现这个解脲支原体有什么异常现象的话,在报告结果中是会 解脲支原体很有可能会出现感染的现象,而这个是男性体内的一种激素,如果通过检查发现这个解脲支原体有什么异常现象的话,在报告结果中是会表现出来的,而解脲支原体的检查方法有是有很多的,一般在做这个检查的时候都是很多男性出现了尿多尿急尿频繁的现象,所以才到医院做检查,那么解脲支原体检查方法有哪些? 解脲支原体的检查方法主要有三种,第一种检查方法就是血液检查,主要是通过抽血化验。第二种检查方法就是通过口腔的涂片的培养来进行检查。第三种检查方式就是PCR的技术检测,这种检查方式可以检查出igm的抗体情况,然后再判断感染的情况。这种疾病的治疗可以使用四环素,比如米诺环素、多西环素等等,但是建议最好两种到三种的抗生素结合一起使用,治疗效果更好。 支原体是细胞外生存的最小微生物,是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,大小一般在0.3~0.5um之间,呈高度多形性,有球形、杆形、丝状,分枝状等多种态。它不同于细胞,也不同于病毒,种类繁多、分布广泛、造成的危害相当大,给人类健康和科研工作带来不利影响。从人体分离的16种支原体中,5种对人有致病性,即肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体,生殖支原体及发酵支脲解支原体属含脲解支原体等体、脲解支原体及人型支原体等对人有致病性。 男性支原体检查方法有哪些?男性支原体检查方法如下: 1、血常规:周围血白细胞计数一般正常嗜酸性粒细胞增多。 2、血清学检全:采用补体结合试验着恢复期血清抗体效价比急性预防疾病常识分享,对您有帮助可购买打赏

1医学检验毕业论文 (三种肺炎支原体检测法的临床应用分析)

毕业论文 题目:三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 地市: 学校: 准考证号: 考生姓名: 王莹 指导老师: 二〇一八年八月十四日

三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 摘要 目的探讨肺炎支原体(MP)咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应(PCR)法和血清MP被动凝集法(MP-Ab)等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性方法采用3MP检测法对362例临床拟诊呼吸道(非细菌性)感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究,每患儿取咽拭子做快速培养和PCR,同时取血清做MP-Ab检测,对3种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。结果回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。MP快速培养法检出阳性78例,阳性率为51.3%,病程为(4.5±2.6)天;PCR法检测出阳性103例,阳性率为67.8%,病程为(6.2±3.5)天;MP-Ab法检测出阳性127例,阳性率83.5%,病程(8.1±4.5)天。结论 3种MP检测法的敏感性与病程有相关性,临床医生应根据患儿病程选取检测方法,以提高阳性检出率和敏感性。 关键词肺炎支原体,快速培养法,咽拭子聚合酶链反应,血清抗体,配对研究

目录 前言 (4) 第一章文献综述 (5) §1.1 肺炎支原体的定义 (5) §1.2 肺炎支原体的发病机制 (5) §1.3 肺炎支原体的分类 (5) §1.4 肺炎支原体的临床表现 (5) §1.5 肺炎支原体的临床诊断 (5) §1.6 肺炎支原体的实验室检查 (6) 第二章材料和方法 (7) §2.1 样本 (7) §2.2方法概述 (7) §2.3临床诊断MP感染的诊断标准 (7) §2.4实验方法 (7) §2.5统计学方法 .................................................................... .. (8) 第三章结果 (9) 第四章讨论 (10) 结论 (11) 参考文献 (11) 附录 (12) 错误!未定义书签。

两种梅毒检测方法对比

第20卷第12期航空航天医药2009年12月29 两种梅毒检测方法对比 于晓明,胡雪峰,迟丽娜 (中航工业哈尔滨二四二医院,黑龙江哈尔滨150066) 摘要目的:比较甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、螺旋体明胶颗粒凝集试验(11PPA)两种梅毒血清学试验的检测结果。方法:将2008~2009年性病门诊138例确诊梅毒患者血清同时用甲苯胺红不加热血清试验 7musT试验、螺旋体明胶颗粒凝集试验7rPPA试验检测,比较两种梅毒检测实验方法的灵敏度和特异性。结果:138份血清中,98份血清TRUST阳性,17份经抗梅毒治疗血清TRusT阴性,TPPA试验132份血清为阳性。结论:TRUsT试验可作为梅毒的人群筛查、疗效、复发或再感染的检测指标,嗍试验是检测梅毒螺旋体抗体的特异性方法,主要作为梅毒的确证试验。两种不同方法同时进行梅毒检测,将减少漏诊、误诊率,为梅毒的确诊提 供参考依据,并且在判定梅毒的发展、痊愈及药物疗效方面都具有十分重要的意义。 关键词梅毒;甲苯胺红不加热血清试验(TRUST);螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA) 中图分类号:R446.11文献标识码:A文章编号:1005—9334(2009)12—0029—02 ComparisonoftheDifferentMethodsExamingTreponema/YUX/ao—ming,HUXue一乃ng,CHI 厶一//Harbin242HospitalofAVIC,Harbin150066,China Abstract0bjL吣tive:toselectthebestscreeningmethodsuitingforblooddonorsbyassessingthevalidityof TRUSTandTPPA.Methods:TRUSTWasusedtoscreenpatientswithsyphihsfromblooddonors。andTPPAWagusedto confirmedpositiveresultsdetected byTRUST.Results:thesensitivity.falsepositiverateandfalsenegativerateofTRUSTwere39.02%,3.03%,and60.98%respectively.111esensitivity,falsepositiverateandfalsenegativerateofEUSAwere 98.73%。20.59%and1.22%.Conclusions:ThecombinationofTRUSTandELISAisthefirstchoiceto∞reenpatientswithsyphilisfromblooddonors.Moreovertllisscreeningcontributestobloodsafety. KeywordsTreponema:TRUST;TPPA l材料与方法 1.1一般资料138例患者均为性病门诊确诊者,其中男83例,占印.14%,女55例,占39.86%。I期梅毒68例,Ⅱ期梅毒51例,Ⅲ期梅毒19例。年龄18~72岁,平均32岁。 1.2试剂TRUST试剂为上海荣盛生物技术有限公司提供。TPPA试剂为日本富士瑞必欧株式会社提供。试剂均在有效期内使用。 1.3方法TRUST试验:室温下,生理盐水稀释至l:32,每孔滴加心磷脂抗原,100次/min振荡器上水平振荡8min,观察凝集结果,确定其阳性滴度。TPPA试验:室温下,在U型板上用稀释液将血清稀释,分别加入致敏和未致敏的明胶颗粒,孵育2h观察结果。 2结果 结果判定:TRUST过筛试验在漆圈中出现肉眼可见红色凝集块为阳性;若红色颗粒均匀分布未见凝集为阴性。TPHA确证试验(凝集)++++:红细胞形成膜状覆盖整个孔底,边缘形成皱褶;(凝集)+++:形成膜状覆盖部分孔底;(凝集)++:形成膜状,边缘成圆环;(凝集)+:成薄膜状,周围边有粗大圆环;(可凝)±:成纽扣状,中心稍薄;(不凝集)一:成光滑扣状结果表1。表l138例梅毒患者的TRUST和TPPA试验结果(例%) 从表1两种方法检测为阳性的138份样本中。TRUST法检出111份,占80%(11138);TPPA法检出133份,占96.4%(133/138);抗TPPA法阳性检出率明显高于TRUST法。 3讨论 从表1中可看出68例I期梅毒血清,TPPA阳性64例,阳性率94.1%,与顾伟鸣悼1报道的96.3%结果相近,TPPA对I期梅毒的敏感度为94.1%,对I期梅毒的敏感度高于TRUST。TRUST具有操作简便、报结果快、价格便宜等优点,可作为梅毒的人群筛查、疗效、复发或再感染的检测指标,当梅毒患者经抗梅毒治疗后,血清滴度下降,可作为疗效观察的指标。TRUST试验所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇组成,中,结果清晰易读,稳定性好:缺点是许多因素影响结果,高脂皿症和抗心磷脂抗体阳性的血清均可干扰出现假阳性结果,而且该试验在非淋菌性尿道炎患者中存在生物学假阳

肺炎支原体抗体检测(被动凝集法)

肺炎支原体抗体检测 (被动凝集法) 1.目的:规范实验室肺炎支原体抗体检测操作。 2.范围: xxxx院xxxx科 3.测定原理: 将肺炎支原体(Mac株)的细胞膜成分致敏人工载体明胶粒子制造而成。这种致敏粒子和样本中的肺炎支原体抗体进行反应发生凝集,由此可以检测出血清和血浆中的肺炎支原体抗体,并且用来测定抗体的效价。 4.标本: 4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本,血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆,枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。 4.2样本中的沉淀物和悬浮物,红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果,应离心除去,并确定样本未变质方可使用。 4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。 4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时;如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中;若需48小时以上保存或运输,则应冻存于-20℃以下,避免反复冻融。使用前恢复到室温,轻轻摇动混匀。 5.试剂:珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。 5.1试剂盒在2℃—10℃储存,防止冷冻,避免强光照射,有效期12个月。 5.2 试剂盒开启使用后,冷冻干燥品配好后,2℃—10℃保存可使用7日,使用前必须做对照试验。 5.3试剂组成 5.3.1血清稀释液(液体):用于稀释样品和复溶致敏粒子和未致敏粒子。 5.3.2致敏粒子(冷冻干燥):肺炎支原体(Mac株)抗原致敏的明胶粒子。使用时加入规定量的血清稀释液。复溶后的试剂含有0.9%的致敏粒子。 5.3.3未致敏粒子(冷冻干燥)鞣化的明胶粒子冻干制品。使用时加入规定量的血清稀释液。 5.3.4阳性对照血清(液体)肺炎支原体(Mac株)抗体阳性的兔血清用血清稀释液1:10 稀释后的制品。 6.临床标本测定 6.1试剂的准备 6.1.1溶解液(液体):按照测定操作规则使用。 6.1.2血清稀释液(液体):按照测定操作规则使用。 6.1.3致敏粒子(冷冻干燥):加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温(15~30℃)下进行调制。 6.1.4未致敏粒子(冷冻干燥):加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温(15~30℃)下进行调制。 6.1.5阳性对照血清(液体):按照操作规则使用。 6.2 手工操作步骤 6.2.1 用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中,共计4滴(100ul),从第2孔至第8孔(或更多)各滴入1滴(25ul)血清稀释液。 6.2.2 用微量移液管取样品25ul至第1孔中,然后用微量加样器或微量移液管以倍比稀释的方式从第1孔稀释至第8孔中(或更多)。 6.2.3用试剂盒中提供的滴管在第2孔中加入1滴(25ul)未致敏粒子,用另一个滴管向第3

支原体检查

附录XIIB支原体检查法 主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞进行支原体检查时,应同时进行培养法和指示细胞法(DNA染色法)。病毒类疫苗的病毒收获液、原液采用培养法检查支原体,必要时,亦可采用指示细胞法筛选培养基。也可采用经国家药品检定机构认可的其他方法 第一法培养法 推荐培养基及其处方 (1)支原体肉汤培养基 猪胃消化液 500ml 氯化钠2.5g 牛肉浸液(1:2)500ml 葡萄糖 5.0g 酵母浸粉5.0g 酚红0.02g pH值7.6±0.2。于121℃灭菌15分钟。 (2)精氨酸支原体肉汤培养基 猪胃消化液 500ml 牛肉浸液(1:2)500ml 葡萄糖 1.0g 酵母浸粉5.0g L-精氨酸2.0g 酚红0.02g 氯化钠2.5g pH值7.1±0.2。于121℃灭菌15分钟。 (3)支原体半流体培养基按(1)项处方配制,培养基中不加酚红,加入琼脂2.5~3.0g。 (4)支原体琼脂培养基按(1)项处方配制,培养基中不加酚红,加入琼脂13.0~15.0g。 培养基灵敏度检查(变色单位试验法)(1)菌种肺炎支原体(ATCC 15531)、口腔支原体(ATCC 23714),由国家药品检定机构分发。 (2)操作将菌种接种于适宜的支原体培养基中,经36℃±1℃培养至培养基变色,盲传2代后,将培养物接种到待检培养基中,做10倍系列稀释,肺炎支原体稀释至10-7~10-9,接种在支原体肉汤培养基内;口腔支原体稀释至10-3~10-5,接种在精氨酸支原体肉汤培养基

内。每个稀释度接种3支试管,置36℃ 士1℃ 培养7~14天,观察培养基变色结果。 ( 3 )结果判定以接种后培养基管数的2 / 3以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。 液体培养基的灵敏度:肺炎支原体(ATCC 15531 )应达到10-8,口腔支原体(ATCC 23714)应达到10-4。 检查法(1)供试品如在分装后24小时以内进行支原体检查者可贮存于2~8℃ ;超过24小时应置一20℃ 以下贮存。 ( 2 )检查支原体采用支原体半流体培养基和支原体肉汤培养基(或支原体琼脂培养基)。支原体半流体培养基(或琼脂培养基)在使用前应煮沸10~15分钟,冷却至56℃ 左右,然后加人灭能新生牛血清(培养基与血清体积比为8:2 ),并可酌情加入适量青霉素,充分摇匀。液体培养基除无需煮沸外,使用前亦应同样补加上述成分。 取每支装量为10ml的支原体半流体培养墓(已冷至36℃ 士1℃ )和支原体肉汤培养基各4支,每支培养基接种供试品0.5~1.0ml,置36℃ 士1℃ 培养21天。于接种后的第7天从4支中取2支进行次代培养,每1支培养基转种支原体半流体培养基及支原体肉汤培养基各2支,置36℃ 士l℃ 培养21天,每隔3天观察1次. ( 3 )结果判定培养结束时,如接种供试品的培养基均无支原体生长,则供试品判为合格;如疑有支原体生长,可取加倍量供试品复试,如无支原体生长,供试品判为合格,如仍有支原体生长,则供试品判为不合格。 【附注】质量检定部门应会同培养基制造部门定期抽检支原体培养基灵敏度。 第二法指示细胞培养法(DNA染色法) 将供试品接种于指示细胞(无污染的Vero细胞或经国家药品检定机构认可的其他细胞)中培养后,用特异荧光染料染色。如供试品污染支原体,在荧光显微镜下可见附在细胞表面的支原体DNA着色。 试剂(1)二苯甲酰胺荧光染料浓缩液称取二苯甲酰胺荧光染料5mg,加人100ml不含酚红和碳酸氢钠的Hank 's平衡盐溶液中,室温下用磁力搅拌器搅拌30~40分钟,使完全溶解,-20℃ 避光保存。 (2)二苯甲酰胺荧光染料工作液无酚红和碳酸氢钠的Hank ' s溶液100ml中加人二苯甲酰胺荧光染料浓缩液lml,混匀。 (3)固定液醋酸:甲醉(体积比1:3)混合溶液。 (4)封片液量取0.1mol / L枸橼酸溶液22.2ml、0.2mol / L磷酸氢二钠溶液27.8ml、甘油50.0ml,混匀,调pH值至5.5。 培养墓及指示细胞(1) DMEM完全培养基。 ( 2 ) DMEM无抗生素培养基。

男性解脲支原体阳性怎样检查和治疗

男性解脲支原体阳性怎样检查和治疗 男性解脲支原体发病率越来越高,要治疗,我们得先了解它,支原体是细胞外生存的最小微生物,是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,大小一般在0.3~0.5um之间,呈高度多形性,有球形、杆形、丝状,分枝状等多种态。它不同于细胞,也不同于病毒,种类繁多、分布广泛、造成的危害相当大,给人类健康和科研工作带来不利影响。从人体分离的16种支原体中,4种对人有致病性,即肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体,生殖支原体,在泌尿生殖系统感染中,男性解脲支原体感染相对高发。那么男性解脲支原体检查方法有哪些?解脲支原体的检查方法主要有三种: 第一种、血液检查,主要是通过抽血化验。 第二种、通过口腔的涂片的培养来进行检查。 第三种、PCR的技术检测,这种检查方式可以检查出抗体情况,然后再判断感染的情况。 男性解脲支原体的治疗 1、西药治疗 西药抗生素是西医治疗支原体、衣原体感染的主要方法,但由于支原体、衣原体对作用于细胞壁的抗生素耐药,所以西医只能用抑制膜蛋白和胞浆蛋白合成药物,如喹诺酮类、四环素和红霉素等抗生素来治疗。然而虽然支原体、衣原体对这类抗生素敏感,但由于抗生素具有抗药性、耐药性等副作用,所以患者如果长期服的话容易导致体内的菌群失调,因此在治疗时要注意治疗时长和用量。一般服用2~3

个疗程后即可治愈,否则就要及时更换治疗方法。 2、中药治疗 中药在治疗支原体、衣原体感染时,主要是通过改变支原体、衣原体在患者体内的生存环境和提高患者自身的抵抗力,来达到去病固本的效果。多年来专利中药利尿消炎丸就对支原体、衣原体的治疗取得了显著地效果。 中药利尿消炎丸的配方中含有滑石、桃仁、赤芍、红花、瞿麦、当归、萹蓄、鱼腥草、车前子、王不留行等五十几味中药成分,这些中药成分不但使利尿消炎丸具有极强的杀菌作用,能够有效的杀灭各种细菌、病毒、病原体、使支原体、衣原体、淋病转阴,而且还使其具备了清热解毒、活血行气止痛和利尿通淋的功效,因此不但能够针对性地治疗支原体、衣原体感染,而且还可以同时治疗由支原体、衣原体感染引发的其他并发症。 此外中药治疗还有一个最大的优势,就是不会产生任何的副作用。但需要提醒大家的是由于中药主要是通过对患者进行全面的调理来达到治疗的效果,所以治疗时间上就会比西药长一点,因此患者在治疗时一定要有耐心,千万不可操之过急,半途而废。 以上就是对男性解脲支原体怎么检查和治疗的详细介绍,希望能够帮助到大家,祝大家早日康复。

肺炎支原体IgM抗体检测SOP

肺炎支原体IgM抗体检测SOP 一、检验目的 规范实验室人员操作,以保证实验结果的准确性。 二、预期用途 该产品用于定性检测血清、血浆或全血中的肺炎支原体IgM抗体。是引起社区获得性呼吸道感染的主要病原体之一,可以导致支气管炎和非典型性肺炎。主要引起人非典型肺炎、气管炎及支气管炎,多经口和呼吸道等途径传播,多发于儿童和青年人。MP感染已占小儿呼吸道疾病30%以上,且有增加趋势。人体感染肺炎支原体后,能产生特异性IgM和IgG抗体。IgM 抗体出现早,一般在感染后1周出现,3~4周达高峰,以后逐渐降低。再次感染或重复感染后,常在1-2周内出现较高水平的IgG抗体。MP肺炎与一般呼吸道感染和肺炎的临床症状没有明显区别,MP感染早期诊断有利于MP肺炎的治疗。血青学诊断法是临床常用的主要诊断方法之一,灵敏度和特异性适中,常用的主要有酶联免疫吸附试验和凝集试验。 三、检验原理 本产品以胶体金作为指示标记,用胶体金标记抗人IgM单抗,以基因工程技术表达肺炎支原体P1蛋白抗原标被硝酸纤维素膜,应用“间接法”免疫层析技术原理,检测的肺炎支原体感染病人血清、血浆或全血中的肺炎支原体抗体IgM,在检测过程中,若样本中存在肺炎支原体抗体gM, 则肺炎支原体抗体1gM与样本吸附垫中的胶体金一抗人IgM单抗结合物形成复合物,复合物沿硝酸纤维素膜移动到检测区,与检测线上包被的肺炎支原体P1蛋白抗原结合,多余的未被结合的结合物继续移动到质控区,与质控线上包被的羊抗鼠IgG 抗体结合,反应膜上出现1条红色的检测线和1条红色的质控线;若样本中不存在肺炎支原体抗体IgM,则胶体金一抗人IgM单抗结合物直接沿硝酸纤维素膜移动到质控区,与质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体结合,仅形成一条红色的质控线。 四、主要组成成份 1、试剂盒组分 包括肺炎支原体1gM抗体检测卡,样品稀释液。 1.1、检测卡主要组分:包括金标垫和硝酸纤维素检测膜,金标垫内包被有胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体;硝酸纤维素检测膜的检测线上包被有基因工程技术表达的肺炎支原体P1蛋白抗原,质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体。

儿童支原体RNA检测及肺炎支原体抗体的比较

儿童支原体RNA检测及肺炎支原体抗体的比较 发表时间:2016-05-09T11:40:39.230Z 来源:《中国医学人文》(学术版)2016年1月第2期作者:王玉琪 [导读] 比较2种检测方法的优缺点。结论:MP-RNA、MP-IgM均是诊断MP感染的有效指标,为临床诊断及治疗提供了有力的依据。 王玉琪 浙江大学医学院附属儿童医院浙江杭州 310052 【摘要】目前:通过对肺炎支原体(MP)RNA检测及抗炎支原体抗体(MP-IgM)的研究,探讨两种检测方法在临床中的应用。方法:对208例肺炎住院患儿行呼吸道分泌物MP-RNA及血清MP-IgM测定,比较2种检测方法的优缺点。结论:MP-RNA、MP-IgM均是诊断MP感染的有效指标,为临床诊断及治疗提供了有力的依据。 【关键词】肺炎支原体;抗体检测;RNA检测 肺炎支原体是(MP)是小儿呼吸道感染常见的病原体之一,可引起上呼吸道及下呼吸道感染,尤其是社区获得性肺炎(CAP)的重要病原[1]。MP的实验室检测方法有很多,血清学检测是目前MP感染的常规实验室手段[1],利用酶联免疫吸附试验,如检测持续高滴度MP-IgM或恢复期抗体滴度较急性期4倍或4倍以上变化可诊断。近年随着分子生物学技术的发展,RNA恒温扩增实时荧光检测(SAT)技术应用于临床,为MP感染的早期诊断提供了新的检测方法。本研究对本院208例疑似肺炎支原体肺炎患儿分别采集呼吸道分泌物及血清同时检测患儿的MP RNA及MP-IgM,现将结果报告如下。 1资料与方法 1.1 一般资料 选择2015年6月1日~2015年12月1日在本院住院的疑似MP呼吸道感染的患儿208例,其中男性106例,女性102例,年龄1个月~13岁。根据年龄分为两组,A组(0~3岁,n=128),B组(3~12岁,n=80)。两组患者的一般资料具有可比性(P<0.05)。 1.2 仪器与试剂 杭州……………… 1.3方法 采集患静脉全血,常规分离血清后检测肺炎支原体抗体(MP-IgM),同时用灭菌棉签采集受试者咽部样本(大于1岁患儿)或痰液(小于1岁)行MP RNA检测。操作方法均严格按照试剂盒说明书进行。 1.4 肺炎支原体肺炎临床诊断标准:持续咳嗽,可伴有发热,白细胞计数正常或稍高,X线提示两肺均匀一致改变的片状阴影或大叶性肺炎改变。 1.5 统计学处理采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析,资料采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果 208例患中,MP-IgM阳性率34.1%(71/208),MP RNA检测结果阳性共率31.2%(65/208),两者比较差异无统计学意义 (P>0.05)。 3 讨论 肺炎支原体(MP)是引起儿童呼吸道感染,尤其是社区获得性肺炎的常见病原体之一,临床表现为干咳、发热,部分患儿可出现胸腔积液、肺纤维化,肺外损害,如皮肤、胃肠道、血液系统损害、骨关节肌肉、中枢神经系统、心血管系统等[2-4]。MP感染症状可持续或迁延数周或数月,常可引起慢性咳嗽和反复呼吸道感染,还可能引起喘息。MP感染患儿临床表现常不典型,常规抗生素治疗效果欠佳,因此,早期诊断对临床治疗有着重要意义。目前,多种检测方法针对MP-IgM,具有灵敏度高,特异性强,操作简便快速的特点,已作为早期诊断MP感染的客观指标而应用于临床。本研究结果显示,208例患儿中,痰液标本或咽拭子SAT法,MP RNA阳性率34.6%,ELASA法测定MP-IgM阳性率29.3%,两者比较有统计学意义(P<0.05),这可能与血清标本留取时间有关,MP感染后约7d可在血清中检测出MP-DNA抗体,疾病早期可呈假阴性[5]。同时,在组内两种检测手段也呈现了不同结果。A组中的MP RNA的阳性率高于MP-IgM的检测 (P<0.01),这可能由于婴儿免疫系统发育不完善,当MP感染后不能产生或产生效价较低的抗体而导致漏诊,提示MP RNA方法更适于年幼儿和免疫损害患儿的MP感染的早期诊断[5];而核酸检测受年龄影响较小,故阳性率较高。B组中,两种检测方法阳性率分别相比较无统计学意义(P>0.05),说明咽拭子MP RNA检测方法同样具有较高的敏感性,但同时需结合MP-IgM检测结果,以除外假阳性结果。综上所述,MP-IgM检测及MP RNA检测在诊断MP感染均有较高的价值,二者联合应用可提高检测的准确性,为临床诊断提供有力的依据。 参考文献: [1]Vervloet LA,Marguet C,Camargos PA.Infection byMycoplasma pneumoniae and its importance as an etiologicalagent in childhoodcommunity-acquired pneumonias[J].Braz J Infect Dis,2007,11(5):507—514. [2]Gaillat J,Elahault A,deBarbeyrac B,et https://www.360docs.net/doc/81864670.html,munity epidemiology of Chlamydiaand Mycoplasma pneumoniae in LRTI in France over 29 months[J].Eur JEpidemiol,2005,20(7):643-651. [3]Blasi F.Atypical pathogens and respiratory tract infee—tions[J].Eur Respir J,2004,24(1):171—181. [4]Hansbro PM,Beagley KW,Horvat JC,et a1.Role ofatypical bacterial infection of the lung in predisposition/protection ofasthma[J].Pharnlaeol Ther,2004,101(3):193-210. [5] Kim NH,Lee JA,Eun BW,et a1.Comparison of poly-merase chain reaction and the indirect particle agglutinationantibody test for

两种血沉检测方法的比较分析

两种血沉检测方法的比较分析 发表时间:2012-02-01T09:20:22.603Z 来源:《中外健康文摘》2011年第38期供稿作者:杨占甲[导读] 统计学处理将所得数值导入2003版的EXCEL,并对其进行Student-t检验和相关性分析。 杨占甲(河南省郑州人民医院河南郑州450000) 【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)38-0080-01 【摘要】目的采用传统的魏氏法和倾斜管法两种方法来测定红细胞的沉降率,并对两种血沉检测方法进行比较分析。方法随机采集100例血液标本,对这100例血液标本同时采用倾斜管法和魏氏法两种方法进行红细胞沉降率的测定,并对两种血沉检测方法进行统计比较和分析。结果对两种血沉检测方法进行比较分析,两种方法测定的红细胞沉降率差异并不显著(P>0.05),没有统计学意义,相关性很好。结论采用倾斜管法对红细胞的沉降率进行测定是一种简单、便捷的方法,可以在特点的条件下使用,具有推广价值。【关键词】魏氏法倾斜管法红细胞沉降率相关性分析 红细胞沉降率是指在一定条件下,红细胞沉降速度的指标,简称为血沉,英文表示为ESR。一个健康人红细胞沉降率通常在一个比较狭窄的范围内上下波动,不会有大幅度的升降变化,而在很多病例情况的干涉下,红细胞沉降率会表现出明显的增快。血沉检查时非特异性试验的一种,但即使如此,将血沉结果与临床资料相互对照显示,血沉检查在临床上很可以有很多应用,可以辅助判断患者机体是否有炎症,患者病变是否有活动性等等,可以为临床检查提供参数具有很重要的参考价值,临床上也常常采用血沉检测的方法来作为试验诊断的方式。在进行红细胞血沉率的测定时,一定要及时进行,只有这样才不会影响记过,所以可以理解,在医院中,采集患者血液样本进行血沉测定时,并不是有专业的医务人员在实验室进行检测和诊断,而是当护士对患者抽血后,立刻将血液移到无菌处置室来进行血沉测定的,但是不可避免的是,护士可能同时有很多工作需要去处理,便不能保证在准确的时间1h读取血沉值,可能晚些甚至将其以往,有鉴于此,本文介绍另一种测量血沉的方法:倾斜管法,并在此将倾斜管法和魏氏法进行血沉比较分析。魏氏法是国际血液学标准化委员会推荐的常规方法,将倾斜管法与魏氏法进行比较分析更具有说服力。 1 资料与方法 1.1一般资料在2006年~2011年诊科病房的患有不同性质疾病的患者中,随机抽取100例患者的血液标本,其中男53例,女47例,年龄53~81岁,平均年龄67岁。 1.2方法清晨,在患者空腹的情况下从患者身上抽取血液,抽取患者的3.2ml的血液,并将其与3.8%枸橼酸钠溶液混合,枸橼酸钠溶液的体积控制在0.8ml,与此同时向其中注入两支魏氏血沉管至“0”刻度,结束后,将其分别放置在两个魏氏血沉架上,在放置时,两支试管放置的方式不同,其中一个按照常规方法放置,即垂直放置,1h后要低于血浆段的高度进行读取并记录,另一个要放置在特定的自制的等腰直角三角形架子上,保持倾斜45°角,并于10min后将血沉值读取。 1.3统计学处理将所得数值导入2003版的EXCEL,并对其进行Student-t检验和相关性分析。 2 结果 经过1h后采用魏氏法测得的血沉值平均为33.12±32.556mm/h,而经过10min后采用倾斜管法测得的血沉值平均为33.39±32.509mm/h,用统计学方法对两组数据进行Student-t检验,结果表明两种方法检测结果没有统计学意义(t=0.59,P=0.52>0.05),对两组结果进行相关性分析,分析结果显示两种方法的检测结果呈正相关,相关系数为r=0.97,数据显示两者相关性较好。 3 讨论 测量红细胞沉降率在临床上应用很广泛,将血沉结果与临床资料相互对照显示,血沉检查在临床上很可以有很多应用,可以辅助判断患者机体是否有炎症,患者病变是否有活动性等等,可以为临床检查提供参数具有很重要的参考价值,临床上也常常采用血沉检测的方法来作为试验诊断的方式。魏氏法是最经典最传统最常规最可靠的检测血沉的方法,魏氏法也是国际血液学标准化委员会推荐的常规方法,但是在实际应用中,魏氏法的过程比较复杂,需要手工操作,而且对观察记录的时间也有比较严格的要求,人们近年来一直在寻求一种更简便、更省事的测量血沉方法,比较熟悉的是采用自动电子血沉仪,这种电子血沉仪虽然更加便捷,且检测的时间也不长,但所得的检测结果受到很多外界因素的影响,但是仪器的成本比较高,并不是所有的医院都可以普及。倾斜管法对仪器并没有新的要求,而且检测的时间短,仅需10min便可,且检测结果可以直接读出来而并不需要进行换算,从两种血沉检测方法的比较分析中,倾斜管法与魏氏法几乎没有差别,相关性较好,对于血沉增高患者结果更加明显,所以倾斜管法适用于血沉增高患者或者需要经常复查血沉的患者,可以对其进行动态检测。 参考文献 [1]陆金春,李春德,黄宇烽.临床检验报告速查手册[M].上海:上海第二军医大学出版社,2009. [2]卢雁英,赖桂凤,郑丹丹.血液标本采集对检验结果的影响[J].包头医学院学报,2011(3):14-15. [3]马翠萍,魏以壁.二级医院检验科生物安全管理现状及对策[J].医学理论与实践,2011(10):132-133. [4]李恵,高洪国,张元梅.两种红细胞沉降率检测方法的比较[J].齐齐哈尔医学院学报,2011(7):67-68.

肺炎支原体抗体

简易卡 一.【肺炎支原体抗体(IgG)检验方法】 1.将待测血清样本和试剂盒,恢复至室温(20~37℃). 2.取出反应板,于反应板孔中滴入血清二滴,静置,待血清完全吸入. 3.在20分钟内观察反应板孔中现象. 三.【单纯疱疹检验方法】 1.用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml,轻轻颠倒混匀8-10次,3000r/min 离心10-15分钟,分离血浆. 2.取出反应板,用吸管吸取样本垂直加入,2-3滴. 3.15分钟内观察反应板孔中现象. 七.【革兰氏染色的检验方法】 目的: 1.涂片:取灭过菌的载玻片于实验台上,用移液器吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央,用移液器分别吸取10ul金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌位于待检品的两侧(中间要有足够的空间),分别作为阴阳性对照。用无菌接种环将液滴涂布成均匀的薄层,涂布面不宜过大。 2.干燥:将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯火焰高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。 3.固定:固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次,共约2-3秒种,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉得烫为宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。 4.初染:在涂片薄膜上滴加革兰氏结晶紫试剂1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min。 5.水洗:斜置载玻片,用洗瓶小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。 6.媒染:取1-2滴革兰氏碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,染色约 1min。 7.水洗:斜置载玻片,用洗瓶小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。 8.脱色:斜置载玻片,滴加革兰氏脱色剂脱色,至流出的脱色剂不现紫色为止,大约需时20-30S,随即水洗。

PCR法支原体检测

PCR法支原体测定PROTOCOL 生效日期(年-月-日) 有效期至(年-月-日) 分发部门:质量部

1.目的 规范PCR法支原体检测的操作方法。 2.范围 适用于项目研发过程样品、原液、成品及中间体的分析。 3.责任 质量分析人员熟悉并遵守该标准操作规程。 4.定义 N/A 5.设备、材料和试剂 5.1设备、材料 设备名生产商型号/货号备注PCR仪Thermo ARKTIK5020 N/A VORTEX IKA GENIUS 3 N/A 小型台式冷冻离心 机Thermo HERAEUS Fresco 21 N/A 单道移液器 (10ul,20ul,100ul) Eppendorf Research plus N/A 多功能水平电泳槽Tanon HE-120 N/A 凝胶成像系统BIORAD ChemiDoc? XRS+ System N/A 5.2试剂 试剂名称生产商货号TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set TaKaRa 6601 TaKaRa Ex Taq? TaKaRa RR001A Regular Agarose G-10 Biowest N/A Goldview 国产N/A

10×Loading Buffer TaKaRa 9157 DL5000 DNA Marker TaKaRa 3428A 内毒素检查用水厦门鲎试剂实验厂有限公司 6.溶液配制 6.1 50× TAE Buffer 称取242.0g Tris,37.2g Na2EDTA·2H2O于1L烧杯中,向烧杯中加入约800ml 超纯水,充分混匀,加入57.1ml冰乙酸,充分溶解,加入超纯水定容至1L,室温保存。有效期6个月。 6.2 1× TAE Buffer 量取10ml 50× TAE Buffer,加入490ml超纯水,充分混匀。有效期6个月。 7.操作步骤 用于检测支原体的样品是接种后进行3-6天细胞培养的培养上清液。如果使用常用的细胞培养基时,培养上清可直接加入到PCR反应液中,如果使用细胞悬浊液作为样品,则需要提取DNA,再进行PCR反应。如果样品中含有PCR 反应阻碍物,需要对DNA进行抽提,再添加到PCR反应液中,为了确认样品中是否含有反应阻碍物,在样品中加入Control Template进行正对照反应。 7.1 1st PCR反应 7.1.1按下表顺序配制反应混合液(50ul体系) 试剂用量(ul) 内毒素检查用水37.75~38.75 10× PCR Buffer 5 dNTP Mixture 4 MCGp F1 Primer 0.5 MCGp R1 Primer 0.5

肺炎支原体检测方法的选择

肺炎支原体检测方法选择的几个注意点 肺炎支原体(MP ),主要引起咽炎及支气管炎,少数累及肺。以其顶端结构与宿主细胞上受体结合粘附于上皮细胞上,一般为表面感染,除穿透支原体外(艾滋病人感染)大多不侵入血液。产生有毒代谢产物如外毒素或过氧化氢等引起发热及局部细胞损伤。 选择检测方法的注意事项: 1.临床常用全血(指尖血)或血清(橘黄管)检测IgM 来判定肺炎支原体的感染,但是,抗体检测只是各种实验室方法的一种,尚有其他方法可用,如培养及DNA 检测,每种方法各有利弊,对不同病程各有针对性。 2.每一种实验结果都需要另外一种实验结果来验证,正常人咽部或支气管可携带MP ,所以不能用一种实验数据来下诊断。 3.初次感染时, IgM 、IgG 都会产生,再次感染时,有时IgM 不产生。 4.儿童由于初次感染几率大,常能产生IgM ,成人由于机体可能感染过多次,常不产生IgM 。 5. 检测方法的选择需要根据病程确定: <6个月 6-12个月 1-9岁 IgM + IgM — 年龄对IgM 抗体产生的影响

抗体 抗原 MP感染不同时段产物的比较 由此图可以看出: a.感染早期,7天之内以检测抗原为主,宜培养或DNA检测: 培养为“金标准”,据国内文献显示,快速培养法阳性率为24%;PCR--DNA检测为96%。美国一篇文献显示,培养阳性率为5%,DNA为57%。 b.早期未产生抗体,导致延误治疗,后期抗体阳性,病原体消失,导致过用抗生素。 c.7天之后可检测IgM抗体; d.IgM可持续较长时间,感染后三个月抗体浓度依然较高,有的可以终生阳性,如果短时间内检测抗体,常不能分辨是否为MP现症感染或其他感染。 e.感染早期宜病原体筛查,此时抗体尚未产生,可导致延误治疗;中后期适宜抗体检测,主要用于回顾性验证试验,此时病原体消失,可导致过用抗生素。

检测方法比较

激光散射速率法:激光散射技术是指用激光作光源,在入射光方向以外,借检测 散射光强度、频移及其角度依赖等而得到粒子重量、尺寸、分布及聚集态结构等信息的方法的统称,有着广阔的用途。就检测纳米材料而言,主要涉及频移及其角度依赖性的检测,这种散射技术又称动态光散射、准弹性光散射及光子相关光谱,分别以测定参数的性质、能量转移的大小及测定方法的原理而得名。 散射比浊法:散射比浊法是根据待验样品在凝固过程中散射光的变化来确定检测终点的。在该方法中检测通道的单色光源与光探测器呈90°直角,当向样品中加入凝血激活剂后,随样品中纤维蛋白凝块的形成过程,样品的散射光强度逐步增加。当样品完全凝固以后,散射光的强度不再变化,通常是把凝固的起始点作为0%,凝固终点作为100%,把50%作为凝固时间。光探测器接收这一光学的变化,将其转化为电信号,经过放大再被传送到监测器上进行处理,描出凝固曲线 透射比浊测定法:是测定入射光强度由于溶液中粒子的散射而降低的程度,它并不直接测定散射的光强。这一点与分光光度测定法极为类似。用这种方法时,多用聚乙二醇(PEG)作为反应增强剂。这种非离子型聚合物可以降低抗原抗体复合物的溶解度。 免疫层析法:是近几年来国外兴起的一种快速诊断技术,其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带,当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后,由于毛细管作用,样品将沿着该膜向前移动,当移动至固定有抗体的区域时,样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合,若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色,从而实现特异性的免疫诊断。 目的: 评估透射免疫比浊法和速率散射比浊法检测C反应蛋白(CRP)的灵敏度和特异性.方法: 用免疫透射比浊法和速率散射比浊法同时检测了80例各种患者血清中CRP浓度. 结果: 两种方法在8~20 mg/L 、20~40 mg/L、40~80 mg/L、80~160 mg/L、160~300 mg/L范围内测定C 反应蛋白的相关系数是0.990、0.996、0.995、0.992、0.997,说明两种方法的相关性是良好的,而在低值1~8 mg/L的测定中两方法的相关系数为0.928.结论: 速率散射免疫比浊法在低值和高值测定中可以得到较为准确的CRP检测结果.

女性泌尿生殖道解脲支原体检测及药敏分析

女性泌尿生殖道解脲支原体检测及药敏分析【摘要】目的了解解脲支原体(Uu)的感染情况及对抗菌药物的耐药性,指导临床合理用药。方法用Uu培养、鉴定和药敏一体化试剂盒,取宫颈分泌物进行检测和药敏试验。结果 258例疑为非淋菌性泌尿生殖道感染的女性患者中,共检出Uu133例,检出率为51.55%。9种抗菌药物药敏试验结果显示,Uu对强力霉素(91.73%)、交沙霉素(84.96%)、阿奇霉素(84.96%)、林可霉素(84.21%)敏感性较强,对红霉素(48.12%)、罗红霉素(27.07%)、氧氟沙星(20.30%)具有较高的耐药性。结论 Uu是非淋菌性泌尿生殖器官炎症的重要病原体,临床应重视对它的筛查,并根据药物敏感性试验结果合理选用抗生素,以达到更好的治疗效果。 【关键词】女性泌尿生殖系统疾病;解脲支原体;微生物敏感性试验 解脲支原体(Uu)是寄生在女性泌尿生殖道常见的病原体之一,常引起非淋菌性尿道炎、宫颈炎、盆腔炎等炎症,并与异位妊娠、不孕、流产等疾病密切相关。近年来,由其引起的泌尿生殖道感染呈现逐年上升的趋势。为了解本地区女性泌尿生殖道分泌物Uu的感染情况,做到早发现并指导用药,我们对258例女性患者的泌尿生殖道分泌物标本进行支原体培养和药敏试验,现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 标本来源 2006年7月~2007年3月在我院妇产科就诊疑为非淋菌性泌

尿生殖道感染的女性患者,年龄20~52岁,平均33岁。均采用无菌拭子取宫颈分泌物,且取材前1周内均未使用过抗生素。 1.2 试剂 采用Uu培养、鉴定和药敏一体化试剂盒,由上海奥普生物医药有限公司提供。 1.3 方法 操作方法、结果判断均严格按照试剂说明书进行。 2 结果 2.1 258例样本中检出Uu 133例,检出率为51.55%。其中单一Uu感染102例,占39.53%;单一人型支原体(Mh)感染7例,占2.71%;Uu+Mh混合感染24例,占9.30%。 2.2 药物敏感试验结果 133例支原体感染患者对9种抗生素的药敏试验结果表明,Uu对强力霉素、交沙霉素、阿奇霉素、林可霉素敏感性较强,敏感率>80%;对红霉素、罗红霉素、氧氟沙星耐药性较高,见表1 。 表1 Uu对9种抗生素的药敏试验结果(略) 3 讨论 Uu是一类菌体大小介于细菌与病毒之间的微生物,它寄居于人体泌尿生殖道。近年来非淋菌性泌尿生殖器官炎症的发病率逐年上升,已占性传播疾病的第三位,这其中有20%~30%是由Uu感染引起的[1]。Uu可引起女性尿道炎、阴道炎、宫颈炎、子宫内膜炎、输卵管炎和盆腔炎,孕妇被它感染了可引起自然流产、不孕症,甚至早产、死胎。进行泌尿生殖道分泌物的支原体培养、鉴定、药敏一体化检查,

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