唾液DNA提纯试剂盒说明书(最终版)

Just-a-Tube?唾液DNA提纯试剂盒说明书

室温保存，RNase A保存在4 oC。

试剂盒组成及贮存

Just-a-Tube?唾液DNA提纯试剂盒可从Charm-Protect唾液收集和储存液中提纯gDNA，其组成如下表所示。所有的组分除了RNase A 需要保存在4 oC之外，其余组分室温保存即可。可进行50, 250 或者5次gDNA的提纯。

产品介绍

利用Just-a-Tube?唾液DNA提纯试剂盒可以简单，迅速地从Charm-Protect唾液收集和储存瓶的唾液储存液中分离到高质量的DNA。DNA样品的纯化仅在一个小管中进行。在这个过程中不需要膜或磁珠结合来DNA。昌美生物科技有限公司将固体表面可逆结合技术（SSRB）应用到Just-a-Tube系统中，离心管底侧涂有可与唾液裂解液中DNA选择性高效结合的结合剂。在结合缓冲液作用下，结合剂可特异性结合gDNA，而蛋白和其它的成分保留在溶液中。未结合的物质经涮洗后予以去除。纯化的gDNA经10 mM Tris 洗脱液或去离子水洗脱。纯化的gDNA可直接用于下游反应，如限制性酶切反应，SNP分析，PCR，序列分析，全基因组扩增（W GA）和DNA甲基化分析等。

所需的额外材料

*96-100 %乙醇，

*异丙醇，

*1.5 ml 或2.0 ml离心管，

*武汉昌美生物技术有限公司生产的唾液收集和保存瓶中的Charm-Protect唾液DNA保存液，

*移液器和吸头，

*可离1.5ml或2ml离心管的离心机,

*涡旋振荡器,

*水浴锅或恒温金属浴,

常规防范

1．该试剂盒仅用于实验。

2．实验操作时穿实验服，戴一次性手套和眼镜。避免摄取和吸入试剂，避免与试剂盒中试剂进行皮肤接触，一旦接触，用手彻底冲洗。

3．提纯核酸DNA时，避免核酸酶的污染，使用无菌新吸头避免交叉污染。

实验之前的准备工作

1.从唾液裂解液中提纯gDNA之前，需要根据提纯的样品数目制备新鲜的工作结合缓冲液。工作结合缓冲液由结合缓

冲液（KB6）与100%异丙醇以1:4体积均匀混合得到，如配制500 μl 工作结合缓冲液：将100 μl 结合缓冲液（KB6）与400 μl异丙醇混合均匀。制备的工作结合缓冲液的体积根据：(1)待提纯的样品数目；(2) 预期的损失，在悬浮过程中，一般会损失10% 。制备的工作结合缓冲液（KB6）, 每100 μl 细胞裂解液加100 μl含异丙醇的工作结合缓冲液（1:1比例）。剩余的结合缓冲液当天予以丢弃。

2.QT-275-M 试剂盒, 加22 ml 100 %乙醇到Washing Buffer I （WB1）中，充分混匀。QT-275-L 试剂盒, 加110 ml 100 %

乙醇到Washing Buffer I （W B1）,充分混匀。QT-275-S 试剂盒, 加2.2 ml 100 %乙醇到Washing Buffer I （WB1）,充分混匀。（在瓶上做好标记表示已加乙醇！）。室温保存，加乙醇的WB1在六个月之内使用。

3.QT-275-M试剂盒，加72 ml 100 % 乙醇到Washing Buffer II（WB2）中，充分混匀。QT-875-L试剂盒，加360 ml 100 %

乙醇到Washing Buffer II （WB2），充分混匀。QT-875-S试剂盒，加7.2 ml 100 % 乙醇到Washing Buffer II （W B2），充分混匀。（在瓶上做好标记表示已加乙醇！）。室温保存，加乙醇的WB2在六个月之内使用。

4.该试剂盒可从100 μl直到1000 μl唾液保存液中提纯gDNA。如果有需要，4 ml 唾液保存液也可以在一次提纯过程

中被提取。在进行gDNA提纯实验之前，为了避免gDNA降解，请遵守标准的Charm-Protect唾液DNA保存液收集和储存程序.

操作程序

制备裂解液

下列程序是从1 ml唾液保存液中提纯gDNA。可根据唾液保存液实际体积作相应调整。

1．取20 μl RNase A（RA2）到1.5 ml 或2.0 ml 离心管中。

2．将储存在Charm-Protect唾液收集瓶中的唾液样品与唾液保存液颠倒和震荡7-8次。静置3-5分钟。

3．从唾液收集瓶中吸取1 ml 唾液保存混合物到预先加了RNase A的离心管中，吸头吹打8-9次，或将离心管盖子盖上后颠倒离心管7-8次，混合均匀。（当吸取唾液混合液时，注意不要吸到收集瓶底颗粒状沉淀。）

4．将离心管置于65 oC水浴锅或金属浴中温育10分钟。期间颠倒混合离心管，也可将样品50 oC温育过夜。

5．将离心管以最大转速（13000 rpm或16000 g）离心2分钟来去除颗粒物质，如食物颗粒，未经消化的死细胞和纤维碎片。

结合程序

1．转移900 ul 澄清的唾液裂解液到一个结合管（BT3）中，注意不要吸到离心管底的碎片沉淀。注意：为避免吸到管底的碎片沉淀，吸的时候可以留150-250 μl溶液在离心管中。

2. 加900 μl 含有异丙醇的工作结合缓冲液（KB6）到结合管（BT3）中，充分混匀。（注意：将工作结合缓冲液与唾液裂解液彻底混匀这一步非常重要）

3. 将结合管（BT3）在室温下以最大转速（13000 rpm或16000 g）离心3分钟来结合DNA。（注意：在离心过程中，离心管盖朝向转子方向放置，离心后DNA大部分聚集在背对管盖的管底一侧。)

4．打开盖子，用吸头吸走结合管底中央的液体，注意在吸的过程中，吸头不要碰到管壁，因为DNA吸附在管壁上。

5、可选择操作。如果处理超过1 ml 的唾液保存混合液，重复步骤1-3直到所有的唾液混合物都被利用。（注意：加了

澄清的唾液裂解液到结合管之后，再次加唾液裂解液时，需将唾液裂解液用吸头吹打5-7次，在加入工作的结合缓冲液（KB6）之前至少温育2分钟。）

清洗程序

1.向每管中加500 l 含乙醇的Washing Buffer I （W B1）。震荡管子4-5次混匀。室温温育1分钟.

2.在室温以最大转速（≥13000 rpm或16000 g）离心结合管1分钟。在离心过程中，离心管盖朝向转子方向放置)。

3.用吸头吸走结合管（BT3）管底中央的Washing Buffer （W B1），注意在吸的过程中，吸头不要碰到管壁，因为DNA

吸附在管壁上。

4.加800 μl 含乙醇的Washing Buffer II（WB2）到结合管（BT3）中。震荡管子4-5次或盖上盖子后颠倒离心管7-8次

混匀。

5.在室温以最大转速（≥13000 rpm或16000 g）离心结合管1分钟。在离心过程中，离心管盖朝向转子方向放置。

6.用吸头去除结合管（BT3）中Washing Buffer（WB2）。

7.重复步骤4-6，即用Washing Buffer（WB2）洗两次。

8.洗完最后一遍之后，为彻底清除Washing Buffer, 在移除大部分液体后，可以再次短暂离心结合管（BT3），用200 μl

吸头吸走管底中间最后一滴液体，将结合管（BT3）在实验室通风橱晾8-10分钟来去除残余的液体。也可以将管子置于62 o C水浴锅或金属浴中晾干3-5分钟。

gDNA的洗脱

吸附在结合管壁的gDNA至少可以保存六个月。如果gDNA需要洗脱，可进行下面的程序。

1.加20 μL-100 μL 洗脱缓冲液（EB2）到每个结合管管壁（如果需要高浓度的DNA，加20 μL洗脱缓冲液（EB2），选

择1或2来洗脱gDNA。）

2.选择1（涡旋洗脱）: 盖上离心管的盖子，涡旋离心管30 秒，以最大转速短暂离心将所有的液体收集到离心管底部。

选择2（震荡洗脱）：盖上离心管的盖子，震荡离心管2分钟。选择3（移液枪洗脱）：上下吹打溶液8-10次，盖上离心管的盖子，将管子在室温放置2分钟。

3.洗脱的gDNA可直接应用于下游反应。或在4 oC 短期储存或者–20 oC 长期储存。

电泳及下游的应用

提纯的gDNA可用琼脂糖凝胶电泳进行质检，也可用分光光度计或荧光标记法测量产量。结合管中纯化的gDNA可直接用于下游反应，如限制性酶切反应，SNP分析，PCR，STR分析，DNA序列分析，全基因组扩增（WGA）及其它分子实验操作。

常见问题及解决方案

网址: https://www.360docs.net/doc/ce11228513.html,

地址：武汉高新大道666号光谷生物城C区

联系人：白芸

电话：153******** 159********

邮箱：2282048647@https://www.360docs.net/doc/ce11228513.html, baiyun@https://www.360docs.net/doc/ce11228513.html,