血红素氧合酶-1对慢性移植物血管病保护作用的实验探究

堂主型垫查堂旦塑堕堂堕壁主！：垡堡苎ＨＯ．１ＣＯ球Ｎ．ｖＴＮＦ．ｎＩＣＡＭ－ｌＮＦ．ＫＢＥＣＡｄＰＦＵＭＨＣＭＨＣＨＬＡ—ＤＲＲｒ－ＰＣＲＰＣＲＢｐＫｂＡＰＣＴｈＴＣＲＲｐｍＬＢＰＢＳＳＤＳＯＤ全文缩略语表Ｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ・ｌＣａｒｂｏｎｍｏｎｏｘｉｄｅ工ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ—ｙＴｕｒｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－ａＩｎｔｍｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ－１ＮｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｏｆｋａｐｐａＢＥｎｄｏｔｈｅｌｉａＩｅｅｌｌＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓＰｌａｑｕｅｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔＭａｊｏｒｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｃｏｍｐｌｅｘｍｉｎｏｒｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｃｏｍｐｌｅｘＨｕｍａｎＩｅｕｋｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎ－ＤＲＲｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰｏｔｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＢａｓｅｐａｉｒｓＫｉｌｏ—ｂａｓｅｐａｉｒｓＡｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌＴｈｅｌｐｅｒｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅＴｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒＴＲｅｖｏｌｕｔｉｏｎｓｐｅｒｍｉｎｕｔｅＬｕｒｉａｂｅｒｔａｎｉｍｅｄｉｕｍＰｈｏｓｐｈａｔｅ・ｂｕｆｆｅｒｅｄｓａｌｉｎｅＳｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅＯｐｉｔｃｄｅｎｓｉｔｙ血红素氧合酶一ｌ一氧化碳Ｙ一干扰素肿瘤坏死因子一ｎ细胞间粘附分子一ｌ核因子一ＫＢ内皮细胞重组腺病毒斑点形成单位主要组织相容性复合体次要组织相容性复合体人自细胞抗原一ＤＲ逆转录多聚酶链反应多聚酶链反应碱基对千碱基对抗原递呈细胞辅助性Ｔ淋巴细胞细胞受体每分种转数ＬＢ培养基磷酸能缓冲液十二烷基磺酸钠光密度华中科控大学同济医学院博士学位论文血红素氧合酶一１对慢性移植物血管病保护作用的实验研究华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院博士研究生：杜敦峰导师：陈忠华教授摘要第一部分血红素氧合酶．Ｉ基因重组腺病毒载体的构建及表达目的：克隆血红素氧合酶．Ｉ（Ｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ—ｌ，ＨＯ—１）基因，并构建含ＨＯ一１基因的重组腺病毒载体，在血管内皮细胞中进行蛋白表达鉴定。

方法：利用ＲＴ．ＰＣＲ扩增出大鼠ＨＯ一１全部编码蛋白的基因，并对该基因片段进行Ｔ载体克隆、酶切鉴定和测序分析；然后将Ｈ０．１的ｃＤＮＡ插入到腺病毒穿梭质粒ｐＡｄＳｈｕｔｔｌｅ—ＣＭＶ，线性化后与腺病毒骨架载体ｐＡｄＥａｓｙ．１电穿孑Ｌ共转染大肠杆菌，使之同源重组，产生腺病毒基因组质粒（ｐＡｄ．ＨＯ．１），然后经ＰａｃＩ酶切线性化，脂质体介导ｐＡｄ—ＨＯ—ｌ转染２９３细胞，包装出具有感染力的复制缺陷型的重组腺病毒载体Ａｄ－ＨＯ＇－Ｉ。

扩增后收获病毒，氯化铯密度梯度离心纯化，检测病毒滴度。

重组腺病毒感染入血管肉皮细胞系（ＥＣＶ３０４），对感染细胞进行间接免疫荧光和ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，观察ＨＯ，ｌ蛋白表达情况。

结果：ＤＮＡ澳ｒＪ序分析表明克隆的ＨＯ—ｌ基因与文献报道一致，酶切鉴定证实ＨＯ—ｌ罄因正确地插入表达载体中。

挑选同源重组阳性克隆，重组腺病毒纯化后病毒滴度达到４×１０…ｐｆｕ／ｍｌ。

经间接免疫荧光分析表明重组ＨＯ．１蛋白在血管内皮细胞中获得高效表达。

华中科技大学同济医学院博士学位论文结论：成功克隆了ＨＯ—ｌ基因，并构建了含有ＨＯ—ｌ基因的重组腺墒毒载体，重组腺病毒能有效介导ＨＯ—ｌ基因在血管内皮细胞中表达，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

关键词ＨＯ．【基因；克隆与鉴定；腺病毒载体：基因表达第二部分血红素氧合酶．１基因转染人血管内皮细胞对淋巴细胞粘附和增殖的影晌目的：探讨血红素氧合酶一ｌ（Ｉ－－［ｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ．１，ｔｔＯ．ｔ）基因转染人血管内皮细胞对淋巴细胞粘附和增殖的影响。

方法：脂质体介导ＰｅＤＮＡ３一ＨＯ，ｌ转染人血管内皮细胞系（ＥＣＶ３０４），并经Ｇ４１８加压筛选，用间接免疫荧光技术检测ＨＯ．１在血管内皮细胞上的表达：用ＣＦＳＥ标记ＰＨＡ活化的ＪｕｒｋａｔＴ细胞，采用秸附阻断实验观察转染ＨＯ．１的血管内皮细胞和ＪｕｒｋａｔＴ细胞间的粘附功能的改变：分别用ＴＮＦ—ｎ和ＩＮＦ．ｖ刺激血管内皮细胞表达［ＣＡＭ．１和ＨＬＡ－ＤＲ，观察转染ＨＯ．Ｉ基因对两者表达的影响；用流式细胞术检测转染ＨＯ一１内皮细胞对ｌｕｒｋａｔＴ增殖的影响。

结果：ＨＯ—ｌ可在人血管内皮细胞系中稳定表达：与对照组相比，转染ＨＯ—Ｉ的血管内皮细胞对ＪｕｒｋａｔＴ粘附作用显著下降（１９．０６％ＶＳ３Ｌ．４２％，Ｐ＜０．０５），但是抑制作用可以被ＨＯ—ｔ抑制剂ＺｎＰＰ所逆转（ｔ９．０６％ＶＳ２９．０８％，Ｐ＜０，０５）：同时转染ＨＯ．Ｉ对活化的内皮细胞的ＩＣＡＭ．１的表达并无明显影响（Ｐ＞０．０５），但是可以减少ＨＬＡ—ＤＲ的表达（Ｐ＜０．０５）；转染ＨＯ—ｌ对活化的内皮细胞可以显著抑制ＪｕｒｋａｔＴ细胞的增殖（Ｐ＜０，０５），使６４％ＪｕｒｋａｔＴ细胞处于Ｇ０／Ｇ１期。

结论：ＨＯ．１可以明显抑制淋巴细胞对人血管内皮细胞的粘附作用，这种抑制作用可能与减少ＨＬＡ．ＤＲ的表达，ＨＯ．Ｉ可以抑制淋巴细胞的增值。

关键词ＨＯ一１；血管内皮；Ｔ细胞；转基因：ＩＣＡＭ—Ｌ；ＨＬＡ．ＤＲ；细胞周期华中科技大学同济医学院博士学位论文第三部分重组腺病毒载体介导血红素氧合酶．１基因转染对慢性移植物血管病的影晌目的：研究重组腺病毒载体介导血红素氧合酶一１（Ｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ・Ｉ，ＨＯ—Ｉ）表达对慢性移植物血管病的影响，并探讨ＨＯ．Ｉ基因对移植物动脉保护的可能机制。

方法：建立ＢＮ．Ｌｅｗｉｓ大鼠胸腹主动脉移植模型，实验分为四组：ＧｒｏｕｐＡ：同系实验组Ｌｅｗｉｓ鼠．Ｌｅｗｉｓ鼠（ｎ＝６）：无特殊处理：ＧｒｏｕｐＢ：异系实验组ＢＮ鼠一Ｌｅｗｉｓ鼠（ｎ＝６）：无特殊处理；ＧｒｏｕｐＣ：异系实验组ＢＮ鼠．Ｌｅｗｉｓ鼠（ｎ＝６）：移植段动脉转染Ａｄ—Ｎｕｌｌ（空病毒不含基因）：ＧｒｏｕｐＤ：异系实验组Ｂｍｗｎ．Ｎｏｒｗａｙ，Ｌｅｗｉｓ鼠（ｎ＝６）：移植段动脉４×１０ｍｐｆｕＡｄ．ＨＯ．１。

于移植后６０天取移植段主动脉进行组织形态学观察移植段动脉内膜变化；免疫组化和ＲＴ．ＰＣＲ检测ＨＯ—ｌ在移植动脉中的表达：免疫组化和组织原位Ｔｕｎｅｌ分析ＮＦ—ＫＢ和移植动脉凋亡改变。

结果：（Ｉ）至移植后６０ｄ，ＧｒｏｕｐＡ移植动脉形态正常，ＧｒｏｕｐＢ、ＧｒｏｕｐＣ呈移植物血管病表现，血管内膜显著增厚，ＧｒｏｕｐＤ移植动脉血管呈内膜炎改变，内膜厚度与ＧｒｏｕｐＢ、ＧｒｏｕｐＣ相比，具有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）；（２）ＨＯ—Ｉ免疫组化及ＲＴ．ＰＣＲ显示，与ＧｒｏｕｐＡ、ＧｒｏｕｐＢ和ＧｒｏｕｐＣ相比，Ａｄ．ＨＯ．Ｉ转染动脉可以检测到ＨＯ．１基因及蛋白表达；（３）免疫组化ＳｔｌＴｔｔｎｅ［原位凋亡检测显示，ＧｒｏｕｐＢ、ＧｒｏｕｐＣ移植动脉ＮＦ．ＫＢ的表达和凋亡细胞显著高于Ａｄｖ—ＨＯ．１实验组（Ｐ＜Ｏ．０１、。

结论：ＨＯ．１在慢性排斥所致血管病变中具有显著的保护作用，可以抑制慢性排斥反应所致移植物血管病，这种保护作用可能与抑制ＮＦ．ＫＢ的表达和减少移植物细胞凋亡有关。

关键词移植物血管病；基因转染；ＨＯ．１基因；ＮＦ．ＫＢ；凋亡兰！！型丝查兰曼叠堕堂堕壁：！！！堡堕苎ＴｈｅＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｉｅｓＯｉｌＨｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ一１ＩｎｔｈｅＲｏｌｅｏｆＰｒｅｖｅｎｔｉｎｇＧｒａｆｔＡｒｔｅｒｉｏｓｃＩｅｒｏｓｉｓＤｏｃｔｏｒａｌＣａｎｄｉｄａｔｅＤｕＤｕｎｆｅｎｇＤｏｃｔｏｒａｌＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒＰｍｆ．ＺｈｏｎｇｈｕａＫｌａｕｓＣｈｅｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＯｒｇａｎＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ＴｏｎｇｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＡｂｓｔｒａｃｔｓＰａｒｔＩＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ・ｌｇｅｎｅＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｃｌｏｎｅｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ・１（Ｈｅ—１）ｇｅｎｅａｎｄｃｏｎｓｔｒｕｃｔｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＨｅ一１ｇｅｎｅ，ａｎｄｅｘｐｒｅｓｓＨｅ—ｌｐｒｏｔｅｉｎｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ．ＡｎｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＨｅ—Ｉａｎｄｃｈｒｏｎｉｃｒｅｊｅｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＦｕｌｌｌｅｎｇｔｈｅＤＮＡｏｆｅｎｃｏｄｉｎｇＨｅ—１ｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＰＣＲｆｒｏｍｒａｔｓｐｌｅｅｎ，ａｎｄｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｐＭＤＴ１８ｖｅｃｔｏｒｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＨｅ一１．ＴｈｅｎＨＯ—ｌｇｅｎｅ，ｅｘｏｇｅｎｏｕｓｇｅｎｅ，ｗａｓｓｕｂｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｓｈｎｔｔｌｅｐｌａｓｍｉｄｏｆｔｈｅＡｄＥａｓｙａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｓｙｓｔｅｍ．ＴｈｅｎｔｈｅｒｅｓｕｌｔａｎｔｐｌａｓｍｉｄＷａｓｌｉｎｅａｔｅｄａｎｄｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙＣＯ—ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａＣｅｌｌＢＪ５１８３ｂｙｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎｔｏｇｅｔｈｅｒｗｉｔｈｔｈｅｂａｃｋｂｏｎｅｐｔａｓｍｉｄｐＡｄＥａｓｙ・１．Ａｆｔｅｒｔｈｅｉｒｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，ｔｈｅｃｌｏｎｅｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｇｅｎｏｍｅｐｌａｓｍｉｄＤＮＡｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ．ｄｉｇｅｓｔｅｄｗｉｔｈＲｚｃ【ｔｏｒｅｔｅａｓｅ［ＴＲａｎｄｔｒａｎｓｌｅｔｔｅｄｉｎｔｏｐａｃｋａｇｅ２９３ｃｅｉｌｓｗｉｔｈｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅｔｏｇｅｔｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｉｒｕｓ，ｆｏｌｌｏｗｉｎｇｗｈｉｃｈＴｈｅｎｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｉｒｕｓｗａｓｐｒｏｐａｇａｔｅｄＡｆｔｅｒａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ，ｉｔｗａｓｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｃｈｌｏｒｉｎａｔｅｄｃｅｓｉｕｍ（ＣｓＣＩ）ｄｅｎｓｉｔｙｇｒａｄｉｅｎｔ堡生型垫奎堂旦堕堕堂堕．．壁主堂垡丝茎．ｕｌｔｒａ．ｃｅｎｔｎｆｎｇａｔｉｏｎ．ＩｔｓｔｉｔｅｒｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＯＤ２６０．ＴｈｅＨＯ—ｌｅｘｐｒｅｓｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄＯｎｅｎｄｏｔｈｅＩｉａｌｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈｉｎｄｉｒｅｃｔｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ４８ｈｐｏｓｔｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅＨＯ・ｌｇｅｎｅｈａｓｂｅｅｎｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ．ＡｎｄＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｖｅｒｉｆｉｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｏｆｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｅｃｔｏｒｗａｓｃｏｒｒｅｃｔ．Ａｆｔｅｒｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｃｌｏｎｅｄａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｇｅｎｏｍｅｐｌａｓｍｉｄｐＡｄ—ＨＯ・１ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄａｎｄｔｈｅｎｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏ２９３ｃｅｌｌｓ，ｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｔｈｅｔｉｔｅｒｏｆｖｉｒｕｓｓｔｏｃｋｓｗａｓｕｐｔｏ４×１０ｍｐｌａｑｕｅｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔｓ（ｐｆｕ）／ｍｌａｆｔｅｒｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ．ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄＨＯ一１ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｓｅｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｅｒｃｏｕｌｄｅｘｐｒｅｓｓＨＯ・ｌｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ．ＴｈｉｓｒｅｓｕｌｔｌａｙｓｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｏｎｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＨＯ—ｌａｎｄｉｔｓｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｃｈｒｏｎｉｃｒｅｊｅｃｔｉｏｎ．ａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ＧｅｎｅＫｅｙｗｏｒｄｓＨＯ－Ｉｇｅｎｅ；Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒ；ＣｌｏｎｉｎｇｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＰａｒｔⅡＨＯ一１ｉｎｈｉｂｉｔｓＪｕｒｋａｔＴｃｅｌｌｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｔｓａｄｈｅｓｉｏｎｏｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａＩｃｅｉｌｓＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ一１ｏｎｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａ［ｃｅｌｌｓａｎｄｉｔｓｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｒｏｌｅｉｎａｄｈｅｓｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓａｎｄ／ｕｒｋａｔＴｃｅｌｌｓ，ａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｌｕｒｋａｔＴｃｅｌｌｓＭｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｐｃＤＮＡ３・ＨＯ—１ｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｔｌｓ，ａｎｄｐｃＤＮＡ３－ＨＯ—ｌＷａｄｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｔｉａｌｃｅｌｌｓｕｎｄｅｒＧ４１８ｓｅｔｅｃｔｉｏｎ．［ｎｄｉｒｅｃｔｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓｅｍｐｌｏｙｅｄｔｏｅｘａｍｉｎｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ一１ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｈｅｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｐｒｉｍｅｄｂｙｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ—ＹｗｅｒｅｍｉｘｅｄｃｕｌｔｕｒｅｄｗｉｔｈＪｕｒｋａｔＴｃｅｌｌｓｌａｂｅｌｅｄｂｙＣＦＳＥ．ＴｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆａｄｈｅｓｉｖｅＪｕｒｋａｔＴｃｅｌｌｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＦＣＭｔＯ６华中科技大学同济医学院博士学位论文ｅｖａＬｕａｔｅｔｈｅａｄｈｅｓｉｏｎｅｆｆｅｃｔ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｇｕｔｆａｃｅｈｕｍａｎｌｅｕｋｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎ—ＤＲ（ＨＬＡ・ＤＲ）ａｎｄｉｎｔｅｒｃｅｔｌｔｔｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ—Ｉ（ＩＣＡＭ—Ｉ）ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ａｆｔｅｒｔｈｏｓｅｃｅｌｌｓｃｕｌｔｕｒｅｄｗｉｔｈｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ｔｈｅｃｅｉｌｃｙｃｌｅｏｆＪｕｒｋａｔＴｃｅｉｌｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＦＣＭｔｈｅＴｃｅｌｌｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ一【ｏｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｃｏｎｆｅｒｒｅｄａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔＪｕｒｋａｔＴｃｅｌｌｓｍｅｄｉｃａｔｅｄａｄｈｅｓｉｏｎｓ，ａｎｄｔｈｅｒａｔｅｏｆ５ｕｒｋａｔＴｃｅｌｌｓａｄｈｅｓｉｏｎｓｗａｓｒｅｄｕｃｅｄｔｏ１．９．０６％ｉｔｔｃｏｎｔｒａｓｔｔｏ３１．４２％ｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｆＰ＜Ｏ，０５）．ＡｆｔｅｒｕｓｉｎｇＺｒｄ？Ｐ，ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒＨＯ・１，ｔｈｅｒａｔｅｏｆＪｔｉｒｋａｔＴｃｅｌｌｓａｄｈｅｓｉｏｎｓｗａｓｒｅｃｏｖｅｒｅｄｔｏ２９．０８％．ＴｈｅｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｂｅｔｗｅｅｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓａｎｄＪｕｒｋａｔＴｃｅｌｌｓｃｏｕｌｄｂｅｂｌｏｃｋｅｄｂｙｔｈｅＨＯ—ｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＣＡＭ－Ｉｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｉｌｓｄｉｄｎ’ｔｃｈａｎｇｅａｆｔｅｒＨＯ・１ｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ．ＷｈｉｌｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＬＡ—ＤＲｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒＨＯ一１ｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ．ＴｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＪｕｒｋａｔＴｃｅｉｌｓｗａｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄａｆｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅｄｗｉｔｈｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＨＯ．Ｉ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＨＯ－１ｃａｎｄｉｒｅｃｔｌｙｐｒｏｔｅｃｔｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｐｒｉｍｅｄｂｙｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ—ＹｆｒｏｍＪｕｒｋａｔＴｃｅｌｌｓａｄｈｅｓｉｏｎｓａｎｄｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＬＡ－ＤＲｏｎｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．ＴｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ一１ｍａｙｂｅｕｓｅｆｕｌｔｏｐｒｅｖｅｎｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｆｒｏｍｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｔｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｉｌｓ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＨＯ－１；Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ；Ｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ；Ｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ；［ＣＡＭ一１；ＨＬＡ—ＤＲ；ＣｅｌｌｃｙｃｌｅＰａｒｔｒｒｒＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓｍｅｄｉａｔｅｄＨＯ一１ｔｒａｎｓｆｅｒｉｎｈｉｂｉｔｓｇｒａｆｔａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓｉｎｒａｔａｏｒｔｉｃｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｍｅｄｉａｔｅｄＨＯ．１ｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒｉｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆ盯ａｆｔａｒｔｅｒｉｏｓｃＩｅｒｏｓｉｓｉｎｒａｔａｏｒｔａｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｍｏｄｅｌａｎｄｅｓｔｉｍａｔｅｗｈｅｔｈｅｒｉｔｓｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｒｏｌｅｃｏｒｒｅｌａｔｅｓｗｉｔｈＮＦ—ＫＢａｎｄｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｇｒａｆｔａｏｒｔａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｍｔｅｄｕｓｉｎｇｉｎｂｒｅｄｍａｌｅＢｒｏｗｎ—ＮｏｒｗａｙｒａｔｓａｓｄｏｎｏｒｓａｎｄｍａｌｅＬｅｗｉｓｒａｔｓａｓｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇｔｈｏｒａｃｉｃａｏｒｔａｏｆｄｏｎｏｒｗａｓ７华中科技大学同济医学院博士学位论文ｈａｒｖｅｓｔｅｄ，ａｎｄａｎａｓｔｏｍｏｓｅｄｔｏｔｈｅｒｅｃｉｐｉｅｎｔ’ＳａｂｄｏｍｉｎａｌａｏｒｔａｂｅｌｏｗｔｈｅｒｅｎａＩａｒｔｅｒｉｅｓａｎｄａｂｏｖｅｔｈｅａｏｒｔｉｃｂｉｆｕｒｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｅ）ｌ：ｐｅｒｉｍｅｎｔｓＷａｓｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ４ｇｒｏｕｐｓ：ＧｒｏｕｐＡ．－Ｌｅｗｉｓ—Ｌｅｗｉｓ（ｎ＝６）．ｎｏｔｒｅａｔｍｅｎｔ；ＧｒｏｕｐＢ：ＢＮ—Ｌｅｗｉｓ（ｎ＝６），ｎｏｔｒｅａｔｍｅｎｔ；ＧｍｔｔｐＣ：ＢＮ．Ｌｅｗｉｓ（ｎ＝６）．ｔｈｅａｏｒｔａｏｆｄｏｎｏｒｗａｓｐｅｒｈｌｓｅｄｗｉｔｈｂｕｆｆｅｒｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ４×ｌＯ‘ｏｐｆｕＡｄ・ＮｕｌｈＧｒｏｕｐＤ：ＢＮ—Ｌｅｗｉｓ（ｎ２６）．ｔｈｅａｏｒｔａｏｆｄｏｎｏｒｗａｓｐｅｒｆｆｔｓｅｄｗｉｔｈｂ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