白色茶树菇生长发育中漆酶与纤维素酶活力的测定
菌株产纤维素酶的活力
菌株产纤维素酶的活力纤维素酶是一种能够降解纤维素的酶类，具有广泛的应用价值。
菌株产纤维素酶的活力是评价菌株纤维素降解能力的重要指标之一。
本文将探讨菌株产纤维素酶活力的相关内容。
一、菌株的筛选与培养菌株的筛选是寻找具有高纤维素酶活力的菌株的过程。
常用的筛选方法包括土壤样品的采集和分离、菌株的纤维素酶活力测定等。
通过这些方法，可以获得具有较高纤维素酶活力的菌株。
在菌株的培养过程中，培养基的选择和培养条件的优化对于提高菌株产纤维素酶活力至关重要。
常用的培养基包括纤维素、木质素等。
同时，适宜的温度、pH值和培养时间等因素也会对菌株产纤维素酶活力产生影响。
二、菌株产纤维素酶活力的测定菌株产纤维素酶活力的测定是评价菌株纤维素降解能力的重要手段。
常用的测定方法包括滤纸酶活力测定法、纤维素酶活力测定法等。
这些方法通过测定菌株产生的纤维素酶对底物的降解能力，来评估菌株的纤维素酶活力水平。
三、影响菌株产纤维素酶活力的因素菌株产纤维素酶活力受到多种因素的影响。
其中，培养条件是影响菌株产纤维素酶活力的重要因素之一。
适宜的温度、pH值和培养时间等条件可以提高菌株产纤维素酶活力。
此外，底物浓度、氮源和碳源等也会对菌株产纤维素酶活力产生影响。
四、提高菌株产纤维素酶活力的方法为了提高菌株产纤维素酶活力，可以采取多种方法。
一种常用的方法是通过菌株的遗传改良来提高其产酶能力。
通过选择和诱变等手段，可以获得具有较高纤维素酶活力的菌株。
此外，优化培养条件和添加适当的辅助物质也可以提高菌株产纤维素酶活力。
五、菌株产纤维素酶活力的应用菌株产纤维素酶活力的应用广泛。
纤维素酶可以用于纤维素的降解和转化，从而产生生物燃料、生物质材料等。
此外，纤维素酶还可以应用于食品工业、饲料工业和纺织工业等领域。
六、结论菌株产纤维素酶的活力是评价菌株纤维素降解能力的重要指标。
通过筛选合适的菌株、优化培养条件和提高菌株产纤维素酶活力的方法，可以获得具有较高纤维素酶活力的菌株。
纤维素酶酶活测定可编辑全文
纤维素酶酶活测定纤维素酶活测定方法一、原理纤维素酶能将纤维素降解成纤维二糖和葡萄糖，具有还原性末端的纤维二糖糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可与DNS试剂发生显色反应。
反应颜色强度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖量又与反应液中的纤维素酶的活力成正比。
酶活定义纤维素酶活力单位是指55℃、pH5.0的条件下，以每分钟催化羧甲基纤维素钠水解生成1μmol还原糖所需的酶量定义为一个酶活力单位U。
二、实验试剂羧甲基纤维素钠（聚合度1700-2000），内切纤维素酶（苏柯汉）50mmol NaAC-HAC、DNS试剂三、实验仪器容量瓶（1000ml ×2、500 ml×3、100 ml ×4、50ml×4 ml）、移液器、烧杯（500ml×3、50ml×3）、具塞试管、电热套、水浴锅、分光光度计、pH计、电子天平四、标准曲线的绘制五、酶活测定由于苏柯汉给定的pH范围为4.8-5.2，故选用pH 5.0的50mmol NaAC-HAC缓冲液测定纤维素酶酶活。
1、样品的制备CMC-Na溶液的制备：用pH 5.0的50mmol NaAC-HAC缓冲液配置0.5%的CMC-Na （羧甲基纤维素钠）溶液，准确称量CMC-Na0.05g，精确至0.001g，溶于蒸馏水中，45℃水浴锅中搅拌溶解，冷却后定容至100ml。
纤维素酶液的制备：准确称取纤维素酶，精确到0.001g。
用50mmol NaAC-HAC pH5.0的缓冲液配置成适当的浓度10000倍，保证吸光度在0.2-0.6之间。
2、DNS法测酶活：取1.8ml 0.5% CMC-Na的溶液于25ml 具塞刻度试管中，55℃预热10min左右，加入0.2ml 适当稀释的酶液，于55℃水浴锅中保温30min后，然后加2ml DNS，混匀，沸水浴5min，冷却至室温，定容到25ml。
混匀测OD540nm。
漆酶活性测定方法(精)
一、测 O法2漆酶是一种多酚氧化酶,它所催化的反应过程中有O z 的介入。
测量反应的耗氧量既可间接地推知漆酶的活性。
较早建立的瓦氏呼吸器检测法便是基于这一原理。
这一方法后来改进为利用氧电极来测量耗氧量,如弗罗纳等以愈创木酚为底物,利用氧电极测定了漆酶催化反应过程中的耗氧量,并将 1个漆酶活性单位定义为PH6 . o 及2 5 ℃条件下以愈刨木酚作为电子供体时消耗1. 0 μmo lO2所需要的酶量。
亦可取醌醇作底物.利用氧电极测定漆酶的活性。
郭明高提出了测定生漆漆酶活性的吸氧法。
即将生漆溶于甲苯,测定酶促吸氧速度和累计酶促吸氧量,同时利用碱促吸氧法测定反应前后漆酚浓度的变化,从而可以求得漆酚浓度衰减的规律及漆酶促吸氧的克分子比。
此法的特点是反应时漆酶处于其天然存l 在的状态而反应底物又恰为漆酶的天然底物漆酚,这在漆酶测活研究中尚属首倒 [ 2 1 。
漆树酶活力检测用0..1m ol·L-1磷酸盐缓冲液与有机溶剂配成一定体积的底物,其浓度为1.35×10 m ol·L-1。
分别移取3mL于1cm测量池和参比池中,恒温水浴中预热10min.注入20μL漆树酶溶液(含酶2~3 μg于测量池中,立即搅匀,测定350nm 处吸光度A 随时间的变化值.漆酶比活力定义为一定温度下,单位酶量催化反应的初速度,单位记为△A(mg·min-1.将漆树酶在不同溶剂体系中的比活力350mm与漆树酶在纯水体系中的比活力相比,其比值称活力比(212 漆酶活性的定量测定方法21211 分光光度计法测定漆酶活性对苯二胺(λmax495 、愈创木酚(λmax 485 、邻苯二酚(λmax 400和漆酚(λmax 420都可用做漆酶活力测定的底物。
不同来源(植物、细菌、昆虫、真菌的漆酶与底物反应的亲和力不同 ,酶活性测定方法中所用的反应底物、反应条件以及酶活性单位定义对漆酶活性的测定结果有很大的影响。
纤维素酶活力的测定
纤维素酶液中各种酶的作用方式图
2.2 纤维素酶水解纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原
糖能将碱性条件下的3,5-二硝基水杨酸（DNS）还原，生成 红棕色的氨基化合物，在540nm波长处有最大光吸收，在一 定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利 用比色法测定其还原糖生成的量就可测定纤维素酶的活力。
3.器材和试剂
3.1器材：
水浴锅、 分光光度计、 记时器、 比色管（4支+6支）、 移液管（5支）、 吸耳球
3.2试剂（公用）： 如下
1 ） D N S试剂
称取3 , 5 一 二硝基水杨酸( 1 0 10 . 1 ) g，置于约6 0 0 m L水中，逐渐 加入氢氧化钠l o g ，在5 0 ℃水浴中( 磁力)搅拌溶解，再依次加入酒石酸 甲钠2 0 0 g 、苯酚( 重蒸) 2 g 和无水亚硫酸钠5 g ，待全部溶解并澄清后， 冷却至室温，用水定容至 I O O O m L ，过滤。贮存于棕色试剂瓶中，于 暗处放置7 d 后使用。
性回归系数应在0 . 9 9 9ห้องสมุดไป่ตู้0以上时方可使用( 否则须重做) 。
4 . 2 样 品的测定
4 . 2 . 1 待测酶液的制备 称取酶样1 g , 精确至0 . 1 m g ( 或吸取液体酶样1 mL ， 精
确至0 . 0 1 m L ) ， 用水（柠檬酸缓冲液，0.05 mol/LpH4.8） 溶解100ml(100倍），之后分别做200倍、400倍、600倍、800 倍稀释， 磁力搅拌混匀， 准确稀释定容 放置1 0 m i n ， 待测。 4 . 2 . 2 滤纸条的准备
有最大光吸收，由此，可根据测得的吸光值与葡萄糖浓度的关
系来计算纤维素酶的活力（FPA）。
5个姬菇菌株不同生长阶段漆酶及纤维素酶活力测定
5个姬菇菌株不同生长阶段漆酶及纤维素酶活力测定
姜性坚;王春晖;彭运祥;黄晓辉
【期刊名称】《食用菌》
【年(卷),期】2010(000)006
【摘要】通过对添加45%稻草适栽筛选出的5个姬菇菌株进行不同生长方式下漆酶及纤维素酶活力测定,结合栽培农艺性状研究,以探明姬菇各个生长阶段漆酶及纤维素酶活力的变化趋势及范围,分解木质素、纤维素能力与品种特性之同的关联.实验结果表明:漆酶活力最高的是以发酵液方式培养下的姬菇31号菌株,菌袋堵养阶段漆酶活力各菌株问无显著性差异,予实体阶段漆酶活力下降两个数量级;纤维素酶活力最高的是以发酵液方式培养下的姬菇31号菌株及其子实体,分别达到了28.75 IU/mL和35.37 IU/g.菌袋培养阶段各菌株间纤维素酶活力无显著性差异.通过对姬菇31号和姬菇王两菌株田间栽培农艺性状比较无显著性差异.
【总页数】2页(P9-10)
【作者】姜性坚;王春晖;彭运祥;黄晓辉
【作者单位】湖南省食用菌研究所,湖南长沙,410014;湖南省食用菌研究所,湖南长沙,410014;湖南省食用菌研究所,湖南长沙,410014;湖南省食用菌研究所,湖南长沙,410014
【正文语种】中文
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4.旧报纸纤维素酶/半纤维素酶与漆酶协同脱墨工艺 [J], 徐清华;秦梦华;石淑兰;张爱萍;徐谦
5.废新闻纸纤维素酶、半纤维素酶与漆酶/介体协同脱墨作用 [J], 徐清华;秦梦华;傅英娟
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纤维素酶活力测定
纤维素酶活力测定
原理：纤维素是植物细胞壁的主要组成成分,在多种纤维素酶的协同作用下，植物细胞壁纤维素多糖被逐步降解为葡萄糖等还原糖。
在碱性环境下，3，5—二硝基水杨酸试剂与还原糖溶液共热后被还原成棕红色氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，棕红色氨基化合物在540nm波长下具有最大吸收。
利用此原理测定540 nm处吸光度来测定酶活力。
试剂：
1mg/mL葡萄糖标准溶液:无水葡萄糖于80 °C烘至恒重，准确称取0.100g于烧杯中,加适量蒸馏水溶解,转入容量瓶中并蒸馏水定容至100 mL。
DNS溶液：酒石酸钾钠182 g，溶于500mL蒸馏水中，加热，于热溶液中依次加入3，5-二硝基水杨酸6.3 g，NaOH 21g，苯酚5 g，搅拌至全溶，冷却后用蒸馏水定容至1000 mL，贮于棕色瓶中，室温保存。
方法：
标准曲线的绘制：取6支20mL的试管按下表顺序依次加入各试剂
沸水中煮沸5min,流水冷却2min,各管中加12.5mL蒸馏水，定容到16mL，摇匀，放置20min 后，测定540nm处吸光度。
茶树不同组织结构中纤维素酶的活性差异研究
￥ ５ ７ １ ． １ 文献 标 识 码 Ａ 中图 分 类 号
Ａｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ Ｄｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｃｅ ｌ ｌ ｕ ｌ ａ ｓ ｅ ｉ ｎ Ｄｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ Ｏｒ ｇ ａ ｎ ｓ ａ ｎ ｄ Ｓ ｕ ｂ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ｌ ａ ｒ Ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｕ ｒ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｃａ ｍｅ ｌ ｌ ｉ ａ ｓ ｉ ｎ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ
糖酶和 Ｂ 一 葡 萄 糖 苷 酶 都 是 在 第 四 叶 活 性 最 低 。 内切 葡 聚 糖 酶 在 茶 树 花 朵 中 活 性 最 高 ， 而外 切 葡 聚糖 酶 和 Ｂ 一 葡 萄 糖 苷 酶 分 别 在 叶 片 、果 皮 中活 性 最 高 。 胞 质 蛋 白中 内 切 葡 聚糖 酶 和 Ｂ 一 葡 萄 糖 苷 酶 活 性 显 著 高 于 膜 蛋 白 中 的 酶 活 性 ，但 胞 质 蛋 白 、膜 蛋 白 中都 未 检 测 到 外 切 葡 聚 糖 酶 活性 。
安徽 省农 业科 学 院茶 叶研 究所 ．安徽 黄 山 ２ ４ ５ ０ ０ ０
摘 要 纤 维 素 酶 是 重 要 的 水 解 酶 ，对 植 物 的生 长发 育及 新 陈 代 谢 发 挥 着 重 要 作 用 。为 了解 茶 树 中纤 维 素 酶 的
活 性 变 化 特 征 ， 以 茶树 品 种 ‘ 凫 早 ２号 ’为 研 究 对 象 ，测 定 其 不 同组 织 结 构 中 纤 维 素 酶 ３种 主 要 组 分 内切 葡 聚
糖 酶 、外 切 葡 聚 糖 酶 和 ｐ 一 葡 萄 糖 苷 酶 的 活 性 。结 果 显 示 ， 内切 葡 聚 糖 酶 在 茶 树 一 芽 四 叶 中 随 着 叶 片 成 熟 度 增
纤维素酶活的测定(优选.)
纤维素酶活的测定一纤维素酶活力单位定义在37℃、pH值为5.50的条件下，每分钟从浓度为4mg/ml的羧甲基纤维素钠溶液中降解1umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。
二测定原理纤维素酶能将羧甲基纤维素降解成寡糖和单糖。
具有还原性末端的寡糖和有还原集团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应，反应颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中的纤维素酶的活力成正比。
因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中的纤维素酶的活力。
三试剂与溶液除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯，水均为符合GB/T6682中规定的三级水。
3.1 葡萄糖溶液，c（C6H12O6）=10.0mg/ml称取无水葡萄糖1.000g，加水溶解，定容至100ml。
3.2 乙酸溶液，c(CH3COOH)=0.1mol/L吸取冰乙酸0.60ml，加水溶解，定容至100ml。
3.3 乙酸钠溶液，c（CH3COONa）=0.1 mol/L称取三水乙酸钠1.36g，加水溶解，定容至100ml。
3.4 氢氧化钠溶液，c（NaOH）=200g/L称取氢氧化钠20.0g，加水溶解，定容至100ml。
3.5 乙酸-乙酸钠缓冲溶液，c（CH3COOH-CH3COONa）称取三水乙酸钠11.57g，加入冰醋酸0.85ml，加水溶解，定容至1000ml，测定溶液的pH值，如果pH偏离5.50，用乙酸溶液（3.2）或乙酸钠溶液（3.3）调至5.50.3.6 羧甲基纤维素钠溶液，0.8%（w/v）称取羧甲基纤维素钠（Sigma C5678）0.40g，加入到盛有30ml3.5缓冲溶液的烧杯中，磁力搅拌，同时缓慢加热，直至羧甲基纤维素钠完全溶解（在搅拌加热过程中可以补加适量的缓冲液，但是溶液的总体积不能超过50ml），停止搅拌，用3.5缓溶将其定容至50ml，羧甲基纤维素钠溶液能立即使用，使用前适当摇匀。
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第 ６天达到最高峰值 ， 之后酶活性 又逐 渐下 降， 最后 趋 于缓 和。 出菇培 养阶段 ， 茵丝 长满半 袋和
满袋时 ， 漆酶 活性处 于很低的水平 ， １潮菇原基 时 ， 酶 活峰值 急速升至较 高水平 ， 幼菇 时达到 最高 峰值 ， 之后 又急剧下降 ， 在 ２潮菇的几个阶段 ， 漆 酶活性 均处于较低水平 ； Ｃ Ｉ Ｖ Ｉ Ｃ酶 活性在 茵丝长满 半袋和满袋时处于一般水平 ， 而在 １ 潮菇 原基 时期 ， 酶 活峰 值 急速升 至最 高峰 值 ， 在 幼菇 时期 又
一
育 的关系 ， 以期 了解不 同发 育 阶段 ， 茶树 菇对 液体 培养
基及基质成分 的利用能力 。
１ 材料 与方 法
１ ． １ 试 验 材 料
种菌盖细 嫩 、 柄脆 、 味纯香 、 鲜美 可 口的食 用菌 ， 并 且
含多种药用成分 ， 具有抗氧化 、 抗肿瘤 、 清热 、 平肝 、 明 目、 利尿 、 健脾的功效 ， 因此也 具有 一定 的药用 功效 和 开发
２ ５ ℃振荡培养箱 中 １ ３ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ条 件下振 荡培 养若 干天 ， 待用 。栽 培种 培养基配方 ： 棉籽壳 ４ Ｏ ， 木屑 ３ ５ ， 麸皮 ｌ ５ ， 玉米粉 ５ ， 豆饼 粉 ３ ， 白糖 １ ， 石膏 １ ， 含 水 量６ ０ 。菌丝生 长与 出菇条件参照黄年来等 方法 。
鉴定 、 营养生理研究及高产菌株筛选 提供依据［ ５ ］ 。 现通过测定 白色茶树 菇液 体培养 和基 质栽 培 阶段
１ ． ２ ． ２ 样品制备
在液体 培养 阶段 ， 过滤液体培养不同
培养影 响木质 素 降解的漆 酶含 量及影 响纤 维素 降解 的 羧 甲基纤维素 （ Ｃ ＭＣ ） 酶含 量 ， 从酶 学 、 有机 物质分 解 角
木质素矿 化 降解 、 腐 殖质 形 成等 过 程 中发 挥着 重 要 作
用， 在制浆造纸 、 废物 处理 、 环境 污染 物降解等方 面具有
研究价值和应用潜力 ， 所 以对漆 酶的研究具 有十分 重要 的意义ｌ ４ ］ 。纤维 素酶是 一种在 分解 纤维 素起 生 物催 化 作用的酶类 ， 在食 品和环境 行业 中广泛应 用 。漆酶及 纤 维素酶是食用菌产生 的 ２ 种 典型 的胞 外酶 ， 可 以为 品种
急 剧 下 降 至 一般 水平 ， 在 １ 潮 菇 子 实体 成 熟期 和 二 潮 菇 的 几 个 阶 段 ， Ｃ ＭＣ 酶 活 性 变 化 不 大 ， 均 处
于较低 水 平 。
关键词 ： 茶树菇 ； 漆酶 ； 羧 甲基纤维素酶 ； 酶活性 中图分类号 ： Ｓ ６ ４ ６ ． １ ９ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ １ －０ ０ ０ ９ （ ２ ０ １ ３ ） １ １ —０ ｌ ４ ９ 一Ｏ ３ 茶树菇 （ Ａｇ ｒ ｏ ｃ ｙ ｂ ｅ ｃ ｙ ｌ ｉ ｎ ｄ ｒ ａ ｃ ｅ ａ （ Ｄ Ｃ ． ）Ｇ ｉ ｌ ｌ ｅ ｔ ） 隶 属担
天数 （ 第２ 、 ４ 、 ６ 、 ８ 、 １ ０ 、 １ ２ 、 １ ４和 １ ６天） 的菌丝体 ， 收集发酵
滤液 ， 以１ ２ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ转速离心 ５ ｍ ｉ ｎ ， 取上 清作为待测 粗酶液 。在 出菇原基形成 ， ｌ 潮菇幼菇形 成 ， １ 潮菇子实 体成熟 ， ２ 潮菇原基形成 ， ２潮菇幼菇形成 ， ２潮菇子实体 成熟 ８个 时期 取 样 ， 取样 ２ ０ ｇ 。粗 酶 液制 备 参 照初 洋
摘
要： 以“ 湘茶 １ ５ ８ ” 白色茶树菇为试材 ， 分 别采 用 Ａ Ｉ Ｓ法和 Ｄ Ｎ Ｓ法对其进行 了液体发 酵
和 出菇培养 ２个阶段 的漆酶 与羧 甲基 纤维素 酶活性 的测定 ， 以探 讨 菌丝体对培 养基质 中纤 维素 的分解能力。结果表 明： 液体发酵培养阶段 ， 前６ ｄ 漆 酶活性较低 ， ６ ｄ 之后迅速上升 ， 第 ８天达到
北 方 园艺 ２ ０ １ ３ （ １ １ ） ： １ ４ ９ ～ １ ５ １
・ 食 用菌 ・
白色 茶树 菇 生长 发 育 中漆 酶 与 纤 维 素 酶活 力 的测 定
姜 性 坚 ，王 春 晖，彭 运 祥 ，胡 汝 晓 ，施 枝 军 ，尹 永 刚
（ 湖 南省 食用 菌 研究 所 ， 湖南 长沙 ４ １ ０ ０ １ ３ ）
子菌 亚 门 （ Ｂ ａ ｓ ｉ ｄ ｏ ｍｙ ｃ ｏ ｔ ｉ ｎ ａ ） 层 菌纲 （ Ｈｙ ｍｅ ｎ ｏ ｍｙ ｃ ｅ —
度研究菌 株 的特 性 ， 旨在 揭 示 茶树 菇 生 长发 育 不 同 阶
段， 与基质利用相关 的 ２ 种 酶活力 的变化与菌株 生长发
ｔ ｅ ｓ ） 伞 菌 目（ Ａｇ ａ ｒ ｉ ｃ ａ ｌ ｅ ｓ ） 粪锈 伞 科 （ Ｂ ｏ ｌ ｂ ｉ ｔ ｉ ａ ｃ ｅ ａ ｅ ） 田头 菇属 （ Ａｇ ｒ ｏ ｃ ｙ ｂ ｅ ） ¨ 】 食用菌 ， 又名 柱状 田头菇 、 杨树 菇 ， 因 野生 于油茶树 的枯干上 ， 也得名茶树 菇 。柱状 田头菇是
１ ． ２ ． １ 菌株培养
液体培养基配方 ： 马铃薯 ２ ０ ０ ｇ ， 葡萄
糖２ ０ ｇ ， 磷酸二氢钾 ３ ｇ ， 硫酸镁 １ ． ５ ｇ ， 蛋 白胨 ５ ｇ ， 维生 素Ｂ ｌ １ ０ ｍｇ ， 水１ ． ０ Ｉ 。接种供试菌株 于液体 培养基 中，
供试菌株“ 湘茶 １ ５ ８ ” 是 由湖南省食用菌研究 所最新
选育的 １ 株 白色茶树菇 （ Ａｇ ｒ ｏ ｃ ｙ ｂ ｅ ｃ ｙ ｌ ｉ ｎ ｄ ｒ ａ ｃ ｅ ａ ） 品种 。
１ ． ２ 试 验 方 法
价值［ ２ 。 ］ 。漆酶 （ Ｌ ａ ｃ ｃ ａ ｓ ｅ ） 是 一种 含铜 的多 酚氧 化 酶 ， 广 泛存在于担子 菌 、 半知 菌和子 囊菌 中 ， 自然 界 中漆酶 在