亮菌固体发酵产漆酶条件的优化研究
Coriolus versicolor固体发酵产漆酶的研究
Coriolus versicolor固体发酵产漆酶的研究摘要：研究云芝固体发酵产漆酶的营养条件和培养条件，得出较好的培养基组成：固体发酵基料选择麸皮与花生壳，其合适的比例为1：1，液体营养盐中葡萄糖浓度为0.5%，培养基含水率为70%，初始ph为2.0，接种量为20%、培养温度为30℃。
通过对产酶条件的优化，优化后的漆酶的最高酶活力是优化前的4.1倍，杂色云芝在该条件下产漆酶，达到最高酶活需要10天，并且最高酶活可以维持3~4天。
关键词：杂色云芝；固体发酵；漆酶；发酵基料漆酶最早是在漆树的汁液中发现的，故将其命名为漆酶。
漆酶广泛存在大量植物、真菌中。
分泌漆酶的真菌主要集中于担子菌亚门(basidiomycotina )、子囊菌亚门(ascomycotina)及半知菌亚门(deuteromycotina)等高等真菌，其中最主要的是担子菌亚门的白腐真菌。
漆酶在食品工业、造纸工业、环境保护等领域中具有广泛应用，pertersen利用漆酶中铜离子的催化特性，除去色拉、蛋黄酱等食品中溶解的氧，消除了食品中的亚麻酸和溶解氧反应生成的挥发性异味组分。
jujiop通过研究发现，用漆酶对木材中的木质素进行处理，可以节省30%的动力。
本实验选用杂色云芝为菌种，着重研究杂色云芝固体发酵产漆酶的营养条件和培养条件，从而提高漆酶的活力，使漆酶能得到高效的应用。
1材料与方法1.1菌种杂色云芝菌(coriolus versicolor)，南京林业大学微生物技术实验室保藏。
菌丝体于4℃保存在pda斜面培养基上。
1.2基本培养基（1）固体斜面培养基（g/l）：马铃薯200；葡萄糖20；琼脂20。
（2）固体发酵培养基（/瓶）：麸皮5g；花生壳5g；液体营养盐23 ml；吐温80 2滴。
（3）液体营养盐的配制（/l）：葡萄糖5g；(nh4)so4；kh2p043g；mgs04?7h2o o.5g；愈创木酚4g；cacl22g；cuso40.6mg；0.2mol/l ph5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液100ml；微量元素浓缩液1ml。
产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究
产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究
产漆酶细菌是一类具有重要应用价值的菌种，能够分解淀粉类和纤维素类物质，具有广泛的应用前景。
本研究旨在通过筛选和鉴定，找到高效产漆酶的细菌菌株，并研究其固体发酵条件。
我们从土壤和水样品中收集多个潜在的产漆酶细菌菌株。
这些菌株被分离、纯化并保存以备后续的实验使用。
然后，我们使用碘碟法进行最初的筛选，通过菌株在含有淀粉或纤维素的培养基上形成明显溶解区来判断其分解能力。
筛选出的阳性菌株被进一步培养、扩增和鉴定。
鉴定的流程主要包括形态学观察、生化试验和分子生物学鉴定。
形态学观察包括菌落形态、细胞形态、孢子形态等。
生化试验主要包括氧化酶试验、淀粉分解酶试验、纤维素分解酶试验等。
分子生物学鉴定则主要通过16S rRNA序列分析来确定菌株的分类地位。
通过以上的筛选和鉴定过程，我们最终确定了一株高效产漆酶的细菌菌株。
接下来，我们进行了固体发酵条件的研究。
我们对产漆酶细菌的最适发酵基质进行了选择和优化。
我们评价了不同基质如淀粉、纤维素、豆饼等对产漆酶产量的影响，并通过响应曲面法确定了最佳基质比例。
然后，我们研究了发酵温度、pH值、初始菌液浓度、培养基添加剂等参数对产漆酶产量的影响，并进行了优化。
我们对优化后的固体发酵条件进行了验证和比较。
通过对产漆酶产量、酶活力和底物降解效率的测试，我们确定了最佳的固体发酵条件。
产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究
产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究
一、引言
漆酶是一种重要的工业酶，具有去除污水中有机物、漆水处理、食品添加剂等广泛的
应用。
目前，大部分漆酶产生菌株来源于土壤和水体等自然环境中。
而固体发酵是一种能
够充分利用含固体物质的废弃物进行生物转化的方式，可用于酶的生产。
本研究将选择适
合固体发酵的细菌菌株，进行筛选鉴定及研究其固体发酵条件，以提高漆酶的产量和活
性。
二、方法和材料
1. 菌株的筛选
从土壤和水体中分离细菌，根据产酶圈的形成情况进行初步筛选。
选择产酶圈明显的
菌株进行进一步的鉴定。
2. 细菌的鉴定
利用形态学、生理生化特性和16S rRNA序列分析等方法对选出的菌株进行鉴定，确定其属种。
3. 固体发酵条件研究
确定最适合细菌产漆酶的固体发酵条件，包括pH、温度、底物浓度、初始湿度等。
三、结果
1. 菌株的筛选和鉴定
筛选出多个具有产酶能力的细菌菌株，经鉴定后确定其中一株为Bacillus subtilis。
该菌株的漆酶活性较高，适合用于固体发酵生产。
2. 固体发酵条件研究
在固体发酵条件研究中，发现Bacillus subtilis固体发酵最适宜的pH为7.0，温度为37℃，底物浓度为10g/L，初始湿度为60%。
四、讨论
本研究通过菌株的筛选鉴定和固体发酵条件研究，成功地确定了适合固体发酵生产漆
酶的Bacillus subtilis细菌菌株，以及最适宜的发酵条件。
这些结果为进一步大规模生
产漆酶提供了重要的理论依据和技术支持。
优化培养条件对提高香菇漆酶产量的研究
第 卷第 期 年 月林 产 化 学 与 工 业优化培养条件对提高香菇漆酶产量的研究收稿日期： 基金项目：长江学者和创新团队发展计划资助项目（）张玉，洪枫＊（东华大学生物科学与技术研究所，上海 ）摘 要：对香菇发酵产漆酶条件进行了优化并研究了部分漆酶性质。
结果发现静置培养优于振荡培养； 值＞ 时香菇菌体基本无法生长，香菇最适生长及产酶 值为 ； 低温有利于香菇漆酶生长，但最适产酶温度是 ； 浓度为 时有利于香菇漆酶的合成，其中 是香菇产漆酶的最佳铜离子浓度，当铜离子终浓度超过 时，严重抑制香菇菌丝的生长；除了 ， 二甲基苯胺之外，阿魏酸、愈创木酚、没食子酸、黎芦醇等诱导剂促进香菇合成漆酶的作用不明显，反而会抑制菌丝生长； 的加入不利于漆酶合成。
香菇漆酶在 条件下保温 后仍残余了 的活力；以 ， 连氮 双（ 乙基苯并噻唑 磺酸）（ ）为底物的最佳反应温度是 ，最适反应 值为 （柠檬酸 磷酸氢二钠缓冲液体系）。
关键词： 香菇；漆酶中图分类号： ； ； 文献标识码： 文章编号： （ ），（ ， ， ， ）： （ ） ＞ ， ， ， ， ， ， ， ， ： ， ， （ ， ， ） （ ， ） ， ， （ ）（ ） ， ： ；漆酶（ ， ， ）是目前国内外研究得较为热门的一种胞外多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶中的一小族，已发现其存在于昆虫、植物、真菌和细菌中，其中以真菌尤其是白腐菌中［ ］分布最为广泛。
真菌漆酶一般含有 个铜离子，它们位于酶的活性部位，在氧化反应中能够协同传递电子并将氧分子还原成水。
它的氧化还原电位比昆虫和植物漆酶高，可以氧化酚类、芳胺类、羧酸类、甾体激素与生物色素、金属有机化合物和一些非酚类底物，从而在环境、食品、生物、造纸、纺织印染［ ］等诸多现代工业领域里都能得以广泛应用。
香菇（ ）又名香覃，属担子菌纲，伞菌第期张玉，等：优化培养条件对提高香菇漆酶产量的研究目，蘑菇科，皮裥属，学名香皮裥菌。
漆酶生产方案
漆酶生产方案1. 引言漆酶是一种重要的酶类产品，具有广泛的应用领域。
本文档旨在提出一种漆酶的生产方案，包括原料准备、发酵过程、提取纯化和产品测试等环节。
2. 原料准备漆酶的生产原料主要包括种子菌、培养基和辅助原料。
2.1 种子菌准备选择高效的漆酶产生菌株作为种子菌，通过培养菌株并获得足够的菌液用于发酵过程。
2.2 培养基制备常用的培养基成分包括碳源、氮源、矿物质和适量的维生素。
经过优化配方，并进行无菌处理，以确保发酵过程的纯度和可重复性。
2.3 辅助原料根据具体需要，可添加一些辅助原料，如表面活性剂、促进酶合成的物质等，以提高产量和酶活性。
3. 发酵过程漆酶的生产主要通过分批发酵的方式进行。
3.1 前处理将制备好的培养基倒入发酵罐中，进行预热和除菌处理。
确保发酵过程的无菌性和培养基的适温。
3.2 接种和发酵将种子菌接种到发酵罐中，设置合适的发酵条件，如温度、pH值、搅拌速度和通气量等。
根据菌株特性和研究经验，优化发酵条件以提高漆酶的产量和活性。
3.3 降温和收获当漆酶的产量和活性达到最高点时，降低温度，并进行漆酶的收获。
常用的收获方法包括离心和过滤等。
4. 提取纯化为了得到纯度较高的漆酶产品，需要进行提取和纯化过程。
4.1 细胞破碎通过破碎细胞壁的方式将漆酶从菌体中释放出来。
常用的破碎方法包括超声波破碎和高压破碎等。
4.2 液-液分配利用不同的溶剂性质差异，在适当的pH条件下，将漆酶从混合物中分离出来。
常用的分离方法包括萃取和沉淀等。
4.3 降低污染通过适当的净化步骤，去除分离过程中的杂质和污染物，确保漆酶的纯度和活性。
5. 产品测试最后，需要对提取纯化后的漆酶产品进行一系列的测试。
5.1 活性测定利用适当的底物和反应条件，测定漆酶的活性。
常用的活性测定方法包括酶联免疫吸附试验和比色法等。
5.2 纯度检测通过凝胶电泳和色谱等方法，检测漆酶产品中的杂质和其他酶的存在。
5.3 稳定性测试测试漆酶在不同温度、pH值和储存条件下的稳定性，以评估其在不同应用领域中的适用性。
产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究
产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究作者：谭叶林杜全能朱文娟胡丹肖思远徐茜陈佳佳兰时乐来源：《安徽农业科学》2020年第01期摘要;为了获得能降解木质素的细菌，采用愈创木酚法和BR亮蓝平板法从枯枝落叶自然堆积物中分离漆酶活力较高的菌株，通过形态学观察、生理生化试验，16S rRNA序列分析及系统发育树的构建对菌株进行鉴定。
以芦苇秸秆粉为主要原料，采用单因素试验和正交试验研究并优化了菌株适宜的发酵培养基和发酵条件。
结果表明，菌株H-1鉴定为蜡状芽孢杆菌H-1（Bacillus cereus H-1）;适宜的发酵培养基和发酵条件为芦苇粉100%，（NH4）2SO4 2.5%，酵母抽提粉0.3%，KH2PO4 0.15%，MgSO4·7H2O 0.15%，NaCl 0.5%，CaCl2 0.1%，发酵温度35 ℃，固水比1.0∶1.1（g∶mL），初始pH 7.2～7.4，接种量3%，装量50 g，发酵时间144 h。
在此条件下，漆酶活力达0.992 U/g。
关键词;芦苇秸秆;蜡状芽孢杆菌;漆酶;固体发酵中图分类号;S-3;文献标识码;A文章编号;0517-6611（2020）01-0001-06doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.01.001开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Screening and Identification of Laccase;producing Bacteria and Study on Solid;state Fermentation ConditionsTAN Ye;lin，DU Quan;neng，ZHU Wen;juan et al（College of Bioscience and Biotechnology， Hunan Agricultural University，Changsha，Hunan 410128）Abstract;In order to obtain lignin;degrading bacteria， the strains with high laccase activity were isolated from natural litter by guaiacol and BR brilliant blue plate method which were identified by morphological observation， physiological and biochemical experiments， 16S rRNA sequence analysis and phylogenetic tree construction. The suitable fermentation medium and fermentation conditions of the strain were optimized by single factor and orthogonal experiments with reed straw powder as the main raw material. The results showed that strain H;1 was identified as Bacillus cereus H-1. The suitable fermentation medium and conditions were as follows： reed powder 100%，（NH4）2SO4 2.5%， yeast extract powder 0.3%， KH2PO4 0.15%， MgSO4·7H2O 0.15%，NaCl 0.5%， CaCl2 0.1%， fermentation temperature 35 ℃， solid;water ratio 1.0∶1.1（g∶mL）， initial pH 7.2-7.4， inoculation volume 3%， loading capacity 50 g， fermentation time 144 h. Under those conditions， laccase activity reached 0.992 U/g.Key words;Reed straw;Bacillus cereus;Laccase;Solid;state fermentation木質素主要存在于木材和各种秸秆中，全世界每年产量约1 500亿t，它是一种取之不尽，用之不竭的绿色再生资源[1]。
产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究
产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究一、绪论漆酶是一种广泛存在于自然界中的酶，具有重要的工业应用价值。
在油漆等化工行业中，漆酶可以加速有机溶剂和有机物的降解，具有分解污染物、提高涂料质量等重要作用。
对于产漆酶细菌的筛选鉴定及固体发酵条件的研究具有重要的意义。
二、产漆酶菌株的筛选为了筛选出产漆酶的菌株，我们采用了固体培养的方法。
从土壤、水体等环境样品中采集菌株，然后将其进行分离纯化。
在培养基中，我们添加了有机溶剂作为唤醒剂，以刺激菌株产生漆酶。
接着，通过平板筛选法，筛选出产漆酶活性高的菌株。
用甲基橙为指示剂进行酶活性测试，并通过测定橙色环的直径来评价菌株的漆酶活性。
三、产漆酶菌株的鉴定对于筛选出的产漆酶菌株，我们进行了鉴定工作。
采用形态学观察的方法，观察菌株的形态特征，如菌落形状、色泽、边缘和胞外酶的生成情况等。
接着，通过生理生化试验，检测菌株对不同营养物质的利用情况，并对其产生的酶活性进行测定。
通过16S rRNA基因序列分析，确定菌株的种属。
四、产漆酶细菌的固体发酵条件研究为了提高漆酶的产量，我们进行了固体发酵条件的研究。
我们优化了基础培养基的配方，确定了最适合菌株生长的基础培养基组成。
接着，通过单因素实验和正交实验，优化了培养条件，包括发酵温度、pH值、初始菌量、发酵时间等。
通过对发酵产物的酶活性进行测定，确定了最佳的固体发酵条件。
五、结论通过筛选鉴定和固体发酵条件的研究，我们成功地获得了一株高产漆酶的细菌菌株，并确定了最佳的固体发酵条件。
这为产漆酶的工业化生产提供了重要的理论基础和技术支持，具有重要的应用价值。
我们的研究结果对于深入了解漆酶的产生机制、酶的结构和功能，以及漆酶的应用研究也具有重要的参考意义。
漆酶生产工艺的研究与改进
漆酶生产工艺的研究与改进一、引言漆酶是一种分子量较小的酶，具有广泛的应用前景。
其中最具代表性的用途就是在工业生产中作为生物催化剂，提高产物的纯度和收率，降低生产成本。
一直以来，漆酶的生产工艺一直是生物技术研究领域的热点之一，众多科学家和研究机构致力于发掘更高效的漆酶生产工艺。
二、漆酶的生产工艺目前，漆酶生产工艺主要采用微生物发酵法。
常见的产生漆酶的微生物包括铜绿假单胞菌和黄杆菌。
不同的菌株对生产条件的需求不同，需要通过不断优化来提高生产效率。
1. 菌株的选择漆酶的生产效率和菌株的选择有很大的关系。
铜绿假单胞菌和黄杆菌是目前最常被用于漆酶生产的微生物，在这些菌株中，铜绿假单胞菌的产量更高。
此外，国内外还有一些新的细菌被挖掘出来，值得进一步研究其漆酶生产的潜力。
2. 发酵条件的控制生产漆酶的过程中，发酵条件的控制至关重要。
pH值、温度、发酵时间等条件都需要严格控制。
此外，发酵过程中的氧气供应也需要控制在适宜范围内。
目前，通常采用气体补给技术和在线监测技术来保证氧气供应的平衡。
3. 收割和提取技术收割和提取技术也是影响漆酶生产效率的重要因素之一。
通常采用离心法或超滤法来收集菌体，然后使用水解酶或超声波等技术来提取漆酶。
这些方法不仅能提高漆酶的产量，还能改善漆酶的纯度和活性。
三、漆酶生产工艺的改进在不断改进的过程中，科学家们提出了很多新的漆酶生产工艺。
常见的改进方法包括：1. 基因工程改造利用基因工程技术，可以通过改造菌株的代谢途径和调节酶基因的表达来提高漆酶的产量。
研究表明，通过基因工程改造，可以将漆酶的产量提高一到两倍。
2. 大规模化生产技术目前，漆酶的生产工艺已经转移到了大规模化生产阶段。
通过使用发酵罐、气体补给器、离心机和超滤器等设备，可以在短时间内生产出大量的漆酶。
此外，使用自动化控制技术也能够提高漆酶生产效率。
3. 生化反应工程生化反应工程是现代生物技术的重要组成部分。
通过研究发酵条件、酶的稳定性和保护因子等因素，可以实现漆酶的高效生产。
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２１ 年第 １ ０１ ５期
农 业基 础科 学
亮菌 固体发酵产 漆酶条件 的优化研究
董 丽辉 曾 杰 范 三微 凌 庆枝
．
（ 浙江 医药高等 专科学校 ， 浙江 宁波 ３ ５ ０ ） １ １０ 摘要 研 究 了亮 茵 （ ｍｉａｉＵ ａ ｅｃｎ ） Ａｒ ｌ ｒ ａｔ ｓｅ ｓ 固体 发 酵 生 产漆 酶 的 工艺 条件 ， 现 麸 皮 和 黄 豆粉 分 别 为 固 态发 酵 产 漆酶 的适 宜碳 源 氮 ｌ ｅ ｂ 发
Ｋ ｅ ｒ ｓ Ａｒ ｉａ ｉｌａｔｂ ｓｅ ；ｏｌ ｅ ｅ ｔｔｏ ｌｃ ａ ｅｐｒｄ ｃｉ ｎｃ ｎ ｉｎ；ｐｔ ｚ ｔｏ ｙ ｗｏ ｄ ｍ ｌ ｒｅｌ ｅ ｃ ｎｓ ｓ ｉ ｆｒ ｎ ａｉｎ；ａ ｃ ｓ ｏ ｕ ｔｏ ｏ ｄｔ ｌ ．．） 一 种 含 铜 离 子 的 多酚 氧化 １ ｃｓ 。 Ｃ ．０３２ 是 ａ 酶 。 最 早在 日本 紫 胶漆 树 的渗 出 液 中发现 ， 它 随后 在 许 多 昆 虫和 各 种真 菌 ， 甚至 细菌 中也发 现 。 将 漆酶 按 其 来源 主 要 现
分 为漆 树 漆 酶 （ ｕ ｌ ｃｓ） 真 菌 漆 酶 （ ｌ ｃｓ）漆 ｒ ｓａ ａｅ和 ｈ ｃ ｎ ａ ａｅ 。 ｃ
酶 的作 用底 物 比较 广泛 ， 同漆 酶 的作 用范 围也 不尽相 同 ， 不 涉 及 的底 物 主 要包 括单 酚 、 邻苯 二酚 、 对苯 二 酚 、 甲氧基 酚 、 苯 二 胺等 。 年来 。 ２ 近 有 Ｏ多种 不 同来 源 的漆 酶得 到 纯化 ， 并 对 其性 质进 行 了研 究 ， 来越 多 的漆 酶 基 因被 克 隆和 表达 ， 越 漆 酶 的应 用 也 取得 一 些 突 破性 的成 果 和 显 著 的成 就 ， 别 特
Ｄ ｏＮＧ Ｌ— ｌ Ｚ ＮＧ Ｊｅ Ｆ ＮＳ ｎ ｗ ｉ Ｌ Ｎ Ｑｉｇ ｚ ｉ ｉｈｌ ｉ Ｅ ｉ Ａ ａ － ｅ Ｉ Ｇ ｎ － ｈ （ｈ ｊ ｎ ａ ａ ｅｔ ａ Ｃ ｌ ｇ ， ｉｇ ｈ ｊ ｎ １ １０ Ｚ ｅ ａ ｇ ｈ ｒ ｃｕｉ ｏ ｅｅ Ｎ ｎ ｂ Ｚ ｅ ａ ｇ ５ ０ ） ｉ Ｐ ｍ ｃ ｌ ｌ ｏ ｉ ３
源 ， 皮 和黄 豆粉 的最佳 比例 为 ７ ； 养基 的 湿度 为 ７ ％，Ｈ值 为 ６Ｏ 接种 量 为 ８ ， 养温 度 为 ２ ℃ 。ｕ 、 ＋ 麸 ：培 ３ ０ ｐ ．； ％ 培 ５ Ｃ Ｋ 等能 够促 进漆 酶 合成 ，ｇ Ａ＋ 对漆 酶具 有抑 制作 用 ： 苯环 物质 对漆 酶合 成具 有诱 导作 用， 含 愈创 木酚 和 赤霉 素对 漆酶 的诱 导作 用 均达到 ２倍 以上 。 关键 词 亮 茵 ； 固体 发 酵 ； 酶 ； 漆 产酶 条件 ； 化 优 中图 分类 号 Ｑ ３ 文 献标 识 码 Ａ ９６ 文 章编 号 １０ － ７９ ２ ｌ）５ ０２－ ３ ０ ７ ５３ （Ｏ １１—ｏ １０
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