提RNA方法-20160325终版
RNA提取步骤
RNA提取步骤RNA（Ribonucleic Acid，核糖核酸）是细胞中一类重要的生物大分子，承担着重要的遗传信息传递和蛋白质合成的功能。
RNA提取是研究RNA生物学功能的基础，下面是RNA提取的基本步骤。
1.样本选择和收集：样本的选择和收集是RNA提取的第一步。
样本可以是任何含有RNA的细胞、组织或体液，如细菌、真菌、动物和植物组织。
在选择样本时，应注意保持样本的完整性和纯度，以最大限度地保留RNA的完整性。
2.细胞或组织破碎：细胞或组织破碎是RNA提取的关键步骤。
破碎细胞可以释放细胞质中的RNA，并使其易于提取。
通常有以下方式实现细胞或组织的破碎：-机械破碎：使用搅拌器或超声波浸没仪等设备将细胞或组织破碎。
-化学破碎：使用化学溶解剂如含有离子的缓冲液等破碎细胞。
-酶解：使用蛋白酶等酶类分解细胞或组织。
3.细胞或组织的裂解：细胞或组织裂解是破裂细胞膜和核膜，使RNA释放出来的步骤。
细胞或组织的裂解可以采取以下方法：-物理方法：如超声波、高温或高压等。
-化学方法：如使用制备裂解液溶解膜。
-酶解法：如使用蛋白酶等酶类裂解细胞膜。
4.RNA的纯化：在RNA提取过程中，纯化RNA以消除DNA、蛋白质和其他杂质是非常重要的。
以下是常见的纯化步骤：- DNase处理：用于降解DNA并消除其对RNA的干扰。
-蛋白酶处理：用于降解蛋白质并消除其对RNA的干扰。
-异丙醇沉淀：用来沉淀RNA，将其分离出其他溶液中的杂质。
-高盐沉淀：用来消除RNA的杂质。
5. 经过上述步骤后，可以使用RNA作为后续实验的模板，如逆转录PCR（Reverse Transcription PCR）进行mRNA的合成和扩增、Northern blotting进行RNA的检测等。
在RNA提取过程中，需要注意以下几点：-提取操作应注意消除污染源，严格遵守无菌技术，避免RNA的降解和污染。
- 所有操作和提取溶液都应严格遵守操作规范，使用无RNase的耗材和试剂。
提取rna实验步骤
提取rna实验步骤嘿，咱今儿个就来聊聊提取 RNA 的那些事儿！这可真是个精细活儿呢！你得先准备好各种家伙什儿，离心管啦、移液枪啦，就像战士上战场得有称手的兵器一样。
然后呢，把你要研究的样本弄到手，这就好比是找到战斗的目标。
接下来，开始破碎细胞。
你就想象成是给细胞来个“大拆迁”，把它们的外壳啥的都给弄破，让里面的 RNA 能跑出来。
这一步可得小心点儿，别太粗暴了，不然 RNA 也会被你不小心弄伤的哟！然后，加入各种试剂，就像是给 RNA 搭个小窝，让它们能舒舒服服地待着。
这里面的门道可多啦，每种试剂都有它的作用，就像不同的调料能做出不同味道的菜一样。
再之后就是离心啦！这就像是把好的和坏的分离开来，让 RNA 能聚集到一块儿。
离心的时候那机器嗡嗡响，就好像在说：“嘿，我在努力工作呢！”经过一番折腾，你就能看到那一点点珍贵的 RNA 沉淀啦！这就像是在一堆沙子里找到了金子，那叫一个高兴啊！提取 RNA 可不比做饭简单多少啊，每一步都得仔仔细细的，稍有差错可能就前功尽弃啦！你想想，要是好不容易做到最后发现 RNA 没了，那得多郁闷呀！所以呀，做这个实验的时候得打起十二分的精神。
这实验就像是一场冒险，你得小心翼翼地前进，遇到问题就得想办法解决。
就好像你在森林里迷路了，得靠着自己的智慧和勇气找到出路。
而且，这可不是一次就能成功的事儿，有时候得反复尝试好多次呢！咱再说说这 RNA 啊，它可重要啦！它就像是生命的密码，藏着好多好多的秘密。
通过提取它，我们就能解开这些秘密，了解生命的奥秘。
这多神奇呀！总之呢，提取 RNA 实验是个既有趣又有挑战性的事儿。
它需要你的耐心和细心，也需要你对科学的热爱和执着。
如果你能做好这个实验，那你可就是个小科学家啦！加油吧，朋友们，去探索 RNA 的奇妙世界吧！。
提取rna的方法
提取rna的方法RNA（核酸）是一种由核苷酸构成的高分子，有多种类型，诸如mRNA、rRNA、tRNA等，比较常见的是 mRNA 和 rRNA，是细胞生物学中最重要的两种类型。
提取 RNA 是细胞和分子生物学方面的重要实验步骤，可以用于基因表达和基因组学研究，其重要性不言而喻。
提取 RNA 的方法有很多种，具体而言，包括三种主要类型：一是病理化学的方法，主要是通过破碎细胞，并利用琼脂糖或氯化钠中和病理性酶来抑制除特定 RNA 外的其他核酸类型，从而提取所需的 RNA；二、利用分子生物学的技术，主要是采用逆转录PCR（RT-PCR）技术，利用逆转录酶将 RNA 转化为 DNA，然后扩增 DNA，从而提取 RNA；三、生物学分离技术，主要是利用乙醇分离技术、酰胺衍生法等技术，从样品中提取 RNA。
第一种技术首先需要将细胞分解成一种适合于提取技术的状态，实现这一目标可以使用一种适当的细胞毒性剂和破碎分解剂，以及一系列化学试剂。
病理化学方法试图通过机体的物理过程和化学反应来分离出特定的 RNA，其核心就是中和病理性酶，并使用琼脂糖或氯化钠之类的物质来吸收其他核酸，实现纯化 RNA 的目的。
第二种技术是利用分子生物学技术来提取 RNA，具体步骤是将样品中的 RNA 放入实验室内，利用逆转录酶将其转化为 DNA，再进行 PCR 扩增，利用酶切手段提取所需的RNA。
这种技术易于操作，能够直接提取 RNA，是一个比较好的技术。
最后一种技术是利用生物学分离技术，具体方法有乙醇分离技术和酰胺衍生法等，由于它们有不同的分子量、电荷和氨基酸残基，因此可以使用不同的材料来做抑制，从而提纯出特定的 RNA 前体分子，实现提取特定 RNA 的目的。
总rna的提取方法
总rna的提取方法
总RNA（total RNA）是指从细胞或组织中提取出来的包含所有类型的RNA的混合物。
下面是一种常见的总RNA提取方法：
1. 细胞/组织样品准备：收集足够数量的细胞或组织样品，并将其保存在适当的缓冲液中（如RIPA缓冲液）。
2. 细胞破碎：将细胞样品经过离心等步骤，去除缓冲液，然后加入细胞破裂缓冲液（常见的破裂缓冲液成分包括TRIzol、RLT缓冲液等），使用搅拌器或超声波进行细胞破碎。
3. RNA提取：加入氯仿或类似的有机物，进行混匀，离心，使得混合液分为上清液（含有DNA和RNA）和有机相（含有脂质和蛋白质）。
4. 上清液沉淀：将上清液转移至新的管中，加入同等体积的异丙醇，轻轻混匀，离心15分钟以使RNA沉淀。
5. RNA洗涤：轻轻倒掉上清液，用70%乙醇洗涤RNA沉淀，再次离心。
6. RNA溶解：将RNA沉淀干燥，加入适当的RNase-free水溶解RNA。
7. RNA质量检测：使用比色法或荧光法测定RNA浓度和纯度（如比例计算
A260/A280）。
这些步骤是总RNA提取的一般流程，具体的操作步骤可能会因实验目的、样品类型和提取试剂盒等因素而有所不同。
同时，为了确保RNA的完整性和减少污染，实验操作中还应遵循严格的无RNase和无DNA污染的条件。
提rna步骤及原理
提rna步骤及原理RNA是一种重要的生物大分子，它参与了许多基因表达和调控过程。
研究RNA的结构和功能对于理解生物体内的生物学过程至关重要。
下面将介绍RNA的提取步骤以及其原理。
1. 细胞破碎：首先需要破碎细胞壁，使RNA释放出来。
可以通过机械破碎、酶解或超声波破碎等方法，将待提取的细胞或组织进行处理，使其细胞壁破裂。
2. 蛋白质消化：为了去除细胞中的蛋白质，需要进行蛋白酶处理，将蛋白质分解释放RNA。
常用的蛋白酶有蛋白酶K、蛋白酶ase等。
3. RNA沉淀：利用盐溶液将RNA沉淀下来。
常用的盐溶液有醋酸钠、氯化钠等。
加入盐溶液后，RNA会形成带负电荷的物质，与阳离子结合形成沉淀。
4. RNA纯化：通过将RNA溶解于适当的缓冲液中，并加入醇类或其他试剂，去除干扰物质如DNA、蛋白质和多余的盐等。
这里主要利用了RNA在不同条件下的溶解性差异，从而将RNA纯化。
5. RNA沉淀及洗涤：使用无水乙醚、异丙醇等有机溶剂，将纯化后的RNA沉淀下来。
然后进行洗涤以去除残留的盐和其他杂质。
6. RNA溶解：将RNA沉淀融于适当的溶液中，如去离子水或缓冲液，以便后续实验的进行。
RNA提取的原理主要基于RNA具有独特的化学结构和物理性质。
RNA是由核苷酸组成的，与DNA相似，但其具有URACIL（U）碱基而非胸腺嘧啶（T）碱基。
RNA在细胞内参与转录和翻译过程，是转录过程产生的物质，通过提取RNA可以获得物种特异性的RNA序列，进而进行RNA测序、定量PCR等分子生物学实验。
在RNA提取过程中，细胞破碎、蛋白质消化、RNA沉淀、纯化及溶解等步骤的设计，使得RNA能够被高效地提取出来，并且不受到外界干扰物质的影响，确保获取纯净的RNA样品，用于后续的实验分析。
rna提取方法
rna提取方法RNA提取方法。
RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，其质量和纯度直接影响后续实验结果的准确性和可靠性。
在进行RNA提取时，我们需要选择合适的提取方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保提取到高质量的RNA样品。
本文将介绍常用的RNA提取方法及其操作步骤，希望能对您的实验工作有所帮助。
1. 常用的RNA提取方法。
（1）酚/氯仿法，这是最常用的RNA提取方法之一，通过酚和氯仿的相分离，将RNA从细胞裂解液中提取出来。
该方法操作简单，适用于大多数样品类型，但需要注意的是酚/氯仿对操作者和环境有一定的危害性，需要在安全通风下进行操作。
（2）硅基柱法，该方法利用硅基柱上的硅胶膜吸附RNA，通过洗脱的方式提取RNA。
该方法操作简便，提取效率高，且对DNA和蛋白质有较好的去除效果，适用于高质量RNA的提取。
（3）磁珠法，磁珠法利用磁珠载体对RNA进行特异性结合，通过磁场的作用实现RNA的分离和提取。
该方法操作简单，易于自动化，且对样品量要求较低，适用于高通量样品的提取。
2. RNA提取操作步骤。
（1）样品裂解，将待提取RNA的样品进行裂解，一般使用细胞裂解液或组织裂解液进行细胞破碎，释放RNA。
（2）酚/氯仿提取，将裂解液与酚/氯仿按比例混合，离心分离出上清液中的RNA。
（3）酒精沉淀，向上清液中加入等体积的异丙醇或乙醇，使RNA沉淀出来，再经过洗涤和干燥步骤得到RNA沉淀物。
（4）溶解RNA，用无DEPC的水或TE缓冲液溶解RNA沉淀物，得到可用于后续实验的RNA样品。
3. 注意事项。
（1）操作环境，在进行RNA提取时，需要在RNase-free的环境下进行操作，避免RNA受到RNase的污染。
（2）样品保存，裂解后的样品需要在-80℃的环境下保存，以避免RNA的降解。
（3）避免污染，在操作过程中需要避免外源RNA的污染，使用RNase-free的试剂和耗材，并注意操作规范。
（4）质量检测，提取得到的RNA样品需要进行质量检测，包括浓度、纯度和完整性的检测，以确保提取到高质量的RNA。
rna提取实验步骤
RNA提取实验步骤如下：
●匀浆处理：
●组织：将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆
仪进行匀浆处理。
●单层培养细胞：直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积（即
3.5cm直径的培养板）加1ml，用移液器吸打几次。
●细胞悬液：离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107
细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。
加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。
一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。
每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
2-8℃10000×g离心15分钟。
收集上清液。
使用酒精洗涤RNA，以去除离心管内残留的试剂和盐。
最后利用2-甲基硫氰酸盐（MECT）溶液进行脱水，使RNA干燥而不影响RNA的完整性。
此外，如果是从动物组织中提取RNA，还需要使用DNase I处理RNA，以去除残留的DNA。
如果是从细菌中提取RNA，需要先进行细菌的裂解和细胞壁的破碎。
同时需要注意，整个提取过程需要严格控制RNA酶的污染。
RNA提取详细步骤及注意事项
2、主要提取流程
磨 样
室温晾 干
溶解 RNA
加
Trizol
去杂
加氯
质
仿
加乙
胶状
醇
物
测浓
保
度
存
转移水 相
3、详细步骤
1、剪取新鲜幼嫩叶片，置于液氮中慢慢反复研磨， 直至其成为合格粉末为止。
2、加入1ml Trizol，晃动3-5下，再用枪吹打2-3下， 确保全部裂解。
3、室温放置5分钟，使样品充分裂解。 12,000g、 4℃离心10分钟。
3、提取RNA整个过程中，尽量在低温下操作。
4、在操作中当加入变性剂氯仿后，须剧烈震荡， 这样才能彻底使两相混匀。
5、在提取核酸时，如样品浓度低，则应增加有 机溶剂沉淀时间，－80℃下>30min或－20℃过
夜将有助于增加核酸的沉淀量。
6、切勿让RNA过分干燥，否则将难溶解。
谢谢老师的 评阅！
9、 7,500g 、4℃离心5分钟，弃上清。再用离心机甩
4、注意事项
1、所有离心管，枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。 耐高温器物可放置于150℃烘烤4小时以去除RNA酶， 其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过
夜，然后灭菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。
2、必须戴一次性口罩和一次性手套操作。尽量不要对 着RNA样品呼气或说话，以防RNA酶污染。
4、每毫升 Trizol加入0.2ml氯仿，猛烈晃动15秒，室
6、按1ml最初的Trizol加入0.5ml异丙醇，颠倒数次混 匀，室温沉淀10分钟。
7、12,000g、 4℃离心10分钟，弃上清，在管底可见 RNA沉淀（透明胶）。
8、每毫升最初的Trizol加入1ml 75%乙醇（DEPC水 配制），剧烈震荡。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
CTAB+试剂盒法
①CTAB
1)将5ml提取液（CTAB）与β-巯基乙醇（5ml体系加150ul）加入离心管中，65℃水浴
10-20min。
（因为β-巯基乙醇具有挥发性，加入样品前加入离心管中即可，不需太早加入）。
2)研磨样品（加适量PVP），加入到上述离心管中，65℃水浴10-20min（在水浴过程中
需适时拿出摇晃，放气，使充分反应）。
3)离心，12000rpm，4℃，10min，取上清。
4)加入等体积氯仿/异戊醇（24：1）混匀，12000rpm，4℃，10min离心，取上清。
（溶
液分三层，取最上层液体，中间为蛋白质层膜，取时应保持离心管坚直，用小枪头吸以防吸入下层和膜层物体）。
5)重复步骤④。
6)加入等体积异丙醇，冰箱冷冻30min，12000rpm，4℃离心10min，取沉淀（异丙醇事
先放至冰箱冷冻）。
②试剂盒
1)粗提物400uL DEPC 水溶体，合并。
2)加入500uL Buffer RL+10uL DTT solution （混匀，12000rpm，4℃，5min）。
3)取上清液加入450ul无水乙醇，混匀，加入RNA分离柱，每次体积<600ul，12000rpm，
1min，弃滤液。
4)加入500ul Buffer RW A到RNA 分离柱，12000rpm，30sec，弃滤液。
5)加600ul Buffer RWB到RNA 分离柱，12000rpm，30sec，弃滤液。
（沿管壁加入）。
6)重复⑤。
7)再次离心，12000rpm，2min。
8)RNA 分离柱安置新1.5ml吸集管，于柱膜中央加入50-200ul RNAse-Free 水，静置5min
9)12000rpm，2min，洗脱。
10)检验。
CTAB配方：500ml
用DEPC水配，需按顺序加
1)CTAB: 10g
2)EDTA.Na2.H2O ：0.7445g*5=3.7225g
3)Tris: 6.057g
4)PVP: 10g
5)NaCl: 40.95g
SSTE配方：500ml
1)NaCl：29.22g
2)Feis-Hcl: 0.788g
3)SDS: 2.512—2.513g
4)EDTA: 0.146g
纯试剂盒法
1)新鲜组织加液氮研磨，研磨成粉末状，样品（20-50mg）加入到含有450ul Buffer PE
的1.5ml灭菌管中，用移液枪反复1吹打直至崩裂，液中无明显沉淀
2)12000rpm 4℃5min
3)将上清液小心吸取到心得1.5ml灭菌管，加入上清液1/10 体积的Buffer NB（此时会
出现沉淀）振荡混匀
4)12000rpm 4℃5min
5)将上清液小心吸取到心得1.5ml灭菌管中，加入450Buffer RL（使用前确认已加入
50xDTT solution）加入9ul 50xDTT ，1ml Buffer RL 加20ul 50 xDTT ，用移液枪将溶液混合均匀。
6)加入样品体积1/2的无水乙醇（此时方能出现沉淀）移液枪将溶液混匀
7)立即将混合液（含沉淀）全部转移到RNA Spin Column 中（600ul 若>600ul 分批加
入）。
8)12000rpm 1min 弃滤液
9)加500ul Buffer RWA 12000rpm 30sec 弃滤液
10)加600ul Buffer RWA 12000rpm 30sec 弃滤液（沿管壁加入）
11)Dnase I 消化（可选择）
a. Dnase I 反应液配制
5ul 10x Dnase I Buffer+4ul Recombinant+Dnase I+41ul Rnase free d H20 到新
1.5ml Rnase Free 管混合均匀。
b.向RNA Spin Column 膜中央加入50ul Dnase I 反应液，室温静置15min
C.向RNA Spin Column 膜中央加入350ul 的Buffer RWB,12000rpm,离心30sec，弃滤液
12)加600ul Buffer RWB ,12000rpm,离心30sec,弃滤液
13)将RNA Spin Column重新安置安置于2ml collection Tube 12000rpm 2min
14)将RNA Spin Column安置于1.5ml 离心管（干净）在RNA Spin Column膜中央加入
50-200ul Rnase Free d H20 OR 0.1% DEPC 处理水，室温静置5min。
15)12000rpm 2min
16)若想提高RNA收量—膜中央加50-200ul Rnase Free d H20 OR 0.1 0.1% DEPC 水洗脱。
若想得到高浓度RNA-将洗脱液重新加回膜中央。