waters色谱讲座01
Waters高效液相色谱系统操作
02
Alliance系统基本操作
开机流程
准备试剂
打开电脑
Alliance开机
检测器开机
电脑登陆软 件
注意事项： a.需先开电脑，再开Alliance系统，仪器，最后登录软 件。b.带制冷功能的柱温箱有单独电源开关，需将其打 开。
alliance
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高效液相色谱系统 如何工作？
流动相 泵
进样器 色谱柱 检测器 色谱数据系统
色谱柱
色谱图溶剂瓶 （流ຫໍສະໝຸດ 相）自动进样器样品
泵 溶剂输送系统
检测器
数据 系统
废液
仪器 介绍：
Alliance e2695 分
离单元
溶剂托盘及 容器
前面板显示 屏和键盘
样品室
泵-溶剂输 送单元
检测器 进样器
柱温箱
溶剂配比单 元
单击此处添加副标题
起始点
流动相
流动相 X分钟后
色谱柱 固相
液相色谱法的分类：
按流动相和固定相的相对极性分 正相色谱（Normal Phase Chromatography） ＊固定相的极性大于流动相 反相色谱（Reversed Phase Chromatography） ＊固定相的极性小于流动相
极性 水 甲醇
异丙醇 乙腈 THF 乙酸乙酯 CH2Cl2 CHCl3 己烷
Waters高效液相色谱标准操作 Alliance 系列
目录
Contents
01 液相色谱原理及系统硬件介绍 02 Alliance系统基本操作 03 数据采集 04 数据处理 05 报告输出
01
液相色谱原理及系统硬件 介绍
液相色谱法原理：
是利用混合物中各组分在不同的两相中溶解、分配、吸附等化学作用性能的差异，当两相作相对运动时，使 各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离。
Waters高效液相色谱维护与保养ppt课件
.
10
第二部分HPLC的组成
输液系统 泵以及流 动相
进样系统 进样阀
分离系统 -色谱柱
.
4
术语
• 8、色谱峰：色谱柱流出组分通过检测器时产 生的响应信号的微分曲线。
• 9、峰底：峰的起点与终点间的直线
• 10、峰高：在峰的两侧拐点处所作切线与峰底 相交两点之间的距离。 11、半峰宽（W1/2）：通过峰高的中点做平 行与峰底的直线，与其峰两侧相交两点间的距 离。 12、峰面积（A）：峰与峰底间的面积，又称 作响应值。
• 13、拖尾峰：后沿较前沿平缓的不对称峰。
• 14、前伸峰：前沿较后沿平缓的不对称峰
.
5
术语
• 15、死时间（t0）:不被固定相滞留的组分， 从进样到出峰最大之所需的时间
• 16、保留时间（tR）：组分从进样到出峰最 大之所需的时间。
• 17、死体积（V0）：不被固定相滞留的组分， 从进样到出峰最大之所需的流动相的体积
.
2
第一部分术语
• 1、液相色谱法：就是用液体作为流动相的 色谱法。
• 2、固定相：在色谱法中，静止不动的一相 （固体或液体）称为固定相
• 3、流动相：能运动的一相（一般是气体或 液体）称为流动相
• 4、色谱图：色谱柱流出物通过检测器时所
产生的响应信号对时间的曲线图。纵坐标
为信号强度（通常我们所说的样品浓度），
.
8
第一部分术语
22、面积归一法：将所有峰的面积总和定 为1，测量各峰的面积和色谱图上除溶剂 峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积 占总峰面积的百分率。是包含水分在内 的一个计算结果。
Waters LC MS培训讲义
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
碰撞压力 3×10-3mbar
定性实验 调谐仪器
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
定性实验 调谐仪器
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
50
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
2. 在质量分析器页面（Analyzer）设定以下的数值，括 号内的数值即为设定值：
• LM Resolution 1（15.0） HM Resolution 1（15.0） Ion Energy 1（0.5） • Entrance（50） Collision（2） Exit（50） • LM Resolution 2（15.0） HM Resolution 2（15.0） Ion Energy 2（0.5）
:609 (CV=45)
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
定性实验 调谐仪器
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
2．子离子扫描 daughter scan
Argon gas
Collision
MS1
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
5. 从下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯，从 下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯校正质 量范围两千以内可选择 Naics2 。确认后按开始键。
waters液相色谱质谱联用的原理应用课件ppt
影响分子量测定的因素
1）pH的影响：正离子方式 pH要低些，负离子方式pH要高些，
除对离子化有影响外，还影响LC的峰形。 2）气流和温度：当水含量高及流量大时要相应增加。 3）溶剂和缓冲液流量：流速适当高可以提高出峰的灵敏度。 4）溶剂和缓冲液的类型：通常正离子用甲醇好，负离子乙腈 好些 5）选择合适的液相色谱类型：正相、反相、选择合适的色谱 柱 6）合适的电压：DP电压高时，样品在源内分解或碎裂；高 DP 电压时回使多电荷离子比例低，多聚体也减少 7）样品结构和性质 8）杂质的影响：溶剂的纯度、水的纯净程度等。当成分复杂， 杂质太多时，竞争使被测物离子化不好，同时使LC分离不好 9）样品浓度不够，有时需要浓缩
m/z149, 管路中邻苯二甲酸酯的酸酐, C8H4O3H+,149.0233 m/z 288, 2mm 离心管的产生的特征离子
m/z 279, 管路中邻苯二甲酸二丁酯 C16H22O4H+, 279.1591
m/z 316, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 384, 瓶的光稳定剂产生的离子
d) 样品浓度不够
e）pH值不合适 f）样品在源内分解或碎裂
目标化合物分析
（1）选择离子监测（SIM）
SIM 用于检测已知或目标化合物，比全扫 描方式能得到更高的灵敏度。这种数据采集的 方式一般用在定量目标化合物之前，而且往往 需要已知化合物的性质。 若几种目标化合物用同样的数据采集方式 监测，那么可以同时测定几种离子.
m/z391, 管路中邻苯二甲酸二辛酯, C24H38O4H+, 391.2843
m/z413, 邻苯二甲酸二辛酯+钠, C24H38O4Na+, 413.2668 m/z 538, 乙酸+氧 +铁（喷雾管）, Fe3O(O2CCH3)6,
Waters Empower色谱工作站操作教程(agilent版)
Agilent LC方法设定1.此选项卡中需要设定流速及流动相比例。
2.此选项卡中输入进样体积，一般设定为与样品表中的进样体积相同，如需要洗针勾选enable needle wash，并在Location中选择洗针小瓶的位置。
3.此选项卡中需要设定柱温，在temperature中left中选择带摄氏度的选项，并输入温度，right中选择combined即可。
4.VWD此选项卡在wavelength中设定波长，peakwidth中输入合适的采集率。
DAD检测器中signals输入需要的检测波长其余默认，或根据客户方法选择。
如需采集光谱图spectrum中store选择all，range from中选择波长范围，setp 输入波长每次变化的步进，请他默认即可。
waters色谱柱相关知识
流动相方面 除去微粒 纯度的要求 超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 缓冲液（盐）的浓度 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量 流动相对样品的溶解度 有机溶剂或水的比例
Good Column
Inject
用“5”法计算柱效
色谱柱的正确使用及操作
流动相的转换 特别是GPC柱 流速(压力)的变化幅度 温度的变化幅度 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求
正确使用色谱柱（一）
样品方面 除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度 如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用
对HPLC柱填料的了解(五)
填料的端基封口 封口残余硅羟基 减少不可逆吸附或拖尾 增加碳含量（0.1% - 1%）
残基处理的效果
NovaPak C18
未封口 C18
① 抗坏血酸 ② 烟酰胺 ③ 对氨基苯甲酸 ④ 哌咯西叮 ⑤ 核黄素 ⑥ 苯酚 ⑦ 盐酸硫胺
对HPLC柱填料的了解（六）
硅胶的活性 主要影响碱性化合物的保留行为：k' 生产硅胶时处理温度不同，硅胶活性也不同 是选择性差异的主要来源 硅胶的杂质含量 重金属含量低，硅羟基活性小，拖尾减小 是色谱柱质量好坏的重要标志
加速色谱柱寿命试验： (pH 10 ，50 °C)
寿命 (小时)
Xterra: 快梯度分析
AU
0.00
0.10
0.20
Minutes
0.20
0.40
0.60
0.80
1.00
1.20
1.40
1.60
1.80
2.00
液相色谱讲座
1
• 但20世纪60年代以来，大量有机化合物相对分子质量 大，而且熔点、沸点高，在高温下易分解的物质，用 气相色谱作为分析方法已不能满足分析测试的要求。
• 于是，人们重新考虑采用液相色谱，并进一步提高传 统的液相色谱的分离效率。因此，液相色谱成为一种 分析工具即高效液相色谱（HPLC）。由于高效液相色 谱采用紫外可见光度检测，而大多数有机物均有紫外 可见吸收，因此HPLC可以对大量有机化合物进行分析。 它在有机分析中得到广泛应用，
校正归一化法
¾推导：
Ci %
=
mi m
× 100
=
m1
+
mi m2 + ⋅ ⋅ ⋅ +
mn
× 100
=
Ai fi
× 100
A1 f1 + A2 f 2 + ⋅ ⋅ ⋅ + An f n
Ci%
=
fi Ai ∑ fi Ai
× 100
%
¾应用范围：当试样中各组分都能流出色谱柱，
且在检测器上均有响应，各组分峰没有重叠 时，可用此法。
• 死时间，t0 － Dead time
– 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所 需的时间
• 保留时间，tR － Retention time
– 组分从进样到出现峰最大值所需的时间
• 死体积，V0 － Dead volume
– 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所 需的流动相体积
• 保留体积，VR － Retention volume
¾优点：简便、准确，当操作条件如进样量等
变化时，对定量结果影响很小，该法适合于 常量物质的定量。
¾缺点：对该法的苛刻要求限制了它的使用。
waters高效液相色谱[资料]
![waters高效液相色谱[资料]](https://img.taocdn.com/s3/m/fdf95fc3b8f3f90f76c66137ee06eff9aff8495e.png)
Waters高效液相色谱操作说明0一．简介0本高效液相色谱实验包括：waters1525泵+waters2487双波长检测器+色谱柱+电脑（breeze 图谱处理软件）+流动相0二．操作流程00.准备工作0确定色谱实验方法，处理好流动相1，换好流动相，确定色谱柱选择无误01.开机0打开泵开关，听到两声“嘀”的响声之后，再打开波长检测器。
检测器进入预热阶段（此时检测器面板进入5min倒计时）这期间打开电脑，进入英文windows操作系统2，待检测器自检完毕（整个自检过程约6~7min），打开电脑桌面的（Breeze软件）。
待程序完全启动，整个开机过程结束。
系统默认进入上次使用的方案。
2.建立新方法和新方案02.1新建方案0方案主要用来储存你的各个实验方法，数据等内容，你可以把它理解为一个文件夹。
2.1.1创建步骤0选择→单击→单击"next"→在"project name"中输入方案名称（如abc），"comments"中可填注释，也可不填。
→单击"finish"02.1.2打开创建的方案0在界面下→单击→在"project"中找到你创建的方案（如abc）→点击"OK",即进入到我们自己的方案中了02.2新建方法0在新建的方案中，需要建立不同的试验方法。
试验方法主要设定的包括洗脱方式，检测波长等参数。
02.2.1新建方法步骤0单击→单击→单击（Flow选项卡）→在programmed flow中设定你的洗脱方式（此步在2.2.2详述）→单击→单击（channel 1选项卡）→在"wavelength"框内设定你的检测波长（如265nm,280nm,215nm等等）→（设定结束，保存）：单击→输入方法名称如（abc 1）→单击"save"3 02.2.2洗脱方式的设定（重要）0在programmed flow中可看到。
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p o w e r 基本概
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简介
关系型数据库
I n s t r u m e n t M e t h o d
D a t e & T i m e
C u s t o m F i e l d I n f o
R e s u l t # 1
R e s u l t # 2
P r o c e s s i n g M e t h o d # 1
O r a c l e I D #
P r o c e s s i n g M e t h o d # 2
O r a c l e D a t a b a s e & C h r o m a t o g r a m
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O r a c l e 关系型数据库带来的...
保障数据安全性
方便数据再现及查询
灵活的用户自定义字段与计算
全面审计追踪
固有的数据信息关联性
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用
其
中
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链
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按
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说
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找
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参
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功
能
可
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许
多
相
应
或
相
关
的
内
容。
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查看（R e v i e w ）窗口中的所有图形（色谱图、光谱图、三维图、标准曲线图等）都可以用点右键的方式直接复制粘贴到W o r d 文档
中
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表
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中
，
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从
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x
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中
复
制
到
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d
中
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Empower
简介
Empower
不可删除
注意事项
BUSLACE.*
SYSTEM.*
USER.*
*.INI
\EMPOWER\*.*
\WINDOWS\*.*
\PROGRAM FILE\*.*
简介
Empower
不可运行
注意事项
\EMPOWER\SCRIPT\*.*
\ EMPOWER \*.BAT
\ EMPOWER \所有快捷键
除\ EMPOWER \BIN\Empower.exe之外的所有可 执行文件
注册表编辑器
*.REG
简介
Empower
不可更改
注意事项
系统配置 (WINDOWS, EMPOWER)
用户类型及权限
HPLC 仪器地址
注册表
简介
Empower
注意事项
经常作
数据备份
原始数据
方法
简介
Empower
Waters公司英文网址：
简介
Empower
Waters公司中文网址：
简介
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