Transwell实验 超详细之欧阳歌谷创作
(完整版)transwell实验原理与步骤
一、Transwell小室制备1. 无基质胶Transwell小室制备①包被基底膜：用50 mg/LMatrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4 ℃风干。
如果需要在下室面铺FN的话，可将200 ul枪头的尖端剪掉,吸取FN均匀涂抹在小室的下面。
用胶原（collagen）的话，一般配成0.5 mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上。
②水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37 ℃，30min。
另有tianjin_glioma战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9 ug/ul) 60-80 µl (注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好)，置37 ℃30 min 使Matrigel聚合成凝胶。
2. 有基质胶的Transwell小室制备Chemicon公司的ECM550系列说明书要求，将小室放入培养板中，在上室加入300 µl 预温的无血清培养基，室温下静置15－30 min，使基质胶再水化。
再吸去剩余培养液。
二、制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24 h，进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1－2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至1-10×105，个人认为不要超过5×105。
具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。
个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。
个人认为，对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。
如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。
Transwell实验
Transwell实验Transwell是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放臵在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B 分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
（2）趋化性实验可用5.0、8.0、12.0µm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。
①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。
(完整版)transwell实验原理与步骤
一、Transwell小室制备1。
无基质胶Transwell小室制备①包被基底膜：用50 mg/LMatrigel 1：8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4 ℃风干。
如果需要在下室面铺FN 的话，可将200 ul枪头的尖端剪掉,吸取FN均匀涂抹在小室的下面。
用胶原（collagen）的话，一般配成0.5 mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上.②水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37 ℃，30min。
另有tianjin_glioma 战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9 ug/ul) 60—80 µl （注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好），置37 ℃ 30 min使Matrigel聚合成凝胶。
2. 有基质胶的Transwell小室制备Chemicon公司的ECM550系列说明书要求，将小室放入培养板中,在上室加入300 µl预温的无血清培养基，室温下静置15－30 min，使基质胶再水化.再吸去剩余培养液。
二、制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24 h,进一步去除血清的影响.但这一步并不是必须的。
②消化细胞,终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1－2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至1-10×105，个人认为不要超过5×105.具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。
个人经验,细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话,可能还没到检测的时间点,所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候,上室内还要有一定量的细胞存在.个人认为,对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。
如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。
高中生物课本19个实验归纳与整理之欧阳数创编
实验一：观察DNA 、RNA 在细胞中的分布（必修一P26）一．实验目的：初步掌握观察DNA 和RNA 在细胞中分布的方法 二．实验原理1． 甲基绿+DNA 绿色两种试剂不是单独使用，应混合使用吡罗红+RNA 红色2． 8%盐酸：改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色休中的DNA 和蛋白质分离，有利于DNA 与染色剂结合。
0.9%NaCl 溶液：保持口腔上皮细胞正常形态蒸馏水：配制染色剂，冲冼载玻片 三．方法步骤几种液体 的作用实验二：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质（必修一P18）一．实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质二．实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。
1．还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）+ 斐林试剂 砖红色沉淀。
甲液：0.1g/ml NaOH 溶液 乙液：0.05g/ml CuSO 4 溶液Cu ( OH ) 2反应生成砖红色氧化亚铜（Cu水浴加热斐林试剂使用时：甲乙液等量混匀后立即使用2O。
（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。
）A液：0.1g/ml NaOH 溶液B液：0.01g/ml CuSO4 溶液肽键结构与铜离子反生络合反4.淀粉遇碘变蓝色。
三．实验材料1．做还原糖鉴定实验：应选含糖高，颜色为白色或近白色的植物组织，如苹果、梨。
（因为组织的颜色较浅，最好无色，防止颜色干扰且易于观察。
）2．做脂肪的鉴定实验：应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。
3．做蛋白质的鉴定实验：可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清等。
四、实验试剂斐林试剂、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。
五、方法步骤（一）可还原糖的鉴定双缩脲试使用时：先加A液后加B3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡（此时呈现斐林试剂的颜色：浅蓝色）。
transwell细胞迁移实验
Transwell细胞迁移实验引言细胞迁移是生物学研究中的重要内容之一，也是许多疾病研究的关键环节。
在许多生物学实验中，研究人员需要测量和评估细胞的迁移能力。
而Transwell细胞迁移实验就是其中一种常用的方法。
本文将介绍Transwell细胞迁移实验的原理、实验步骤以及数据分析。
原理Transwell细胞迁移实验是通过将细胞悬浮液放置在Transwell膜上，然后观察和测量细胞通过膜的能力来评估细胞迁移能力。
该实验通常使用腔体作为细胞迁移的模拟环境，而Transwell膜则起到筛选和隔离细胞的作用。
Transwell膜由许多孔隙组成，孔隙的直径可以根据实验需求设置。
当细胞悬浮液被加入到Transwell膜的上腔时，由于细胞迁移能力，部分细胞将穿过膜孔和底腔进入下方。
通过对底腔中的细胞数量进行计数或测量，可以确定细胞的迁移能力。
实验步骤1.准备细胞悬浮液：将需要研究的细胞培养至对数生长期，用PBS缓冲液洗涤细胞，然后用适当的培养基保持细胞的活力。
2.调整细胞浓度：将细胞用培养基稀释至适当的细胞数目，一般为10000-50000个细胞/mL。
3.准备Transwell膜：将Transwell膜放入装有培养基的96孔板中，静置30分钟使其和培养基充分接触。
4.加入细胞悬浮液：将步骤2中的细胞悬浮液加入到Transwell膜的上腔中，确保每个孔都有足够的细胞数量。
5.添加诱导剂：如需研究细胞对特定诱导剂的迁移能力，可以在底腔中加入含有诱导剂的培养基。
6.孵育细胞：将装有Transwell膜的培养板放入培养箱中，根据实验需求进行孵育。
通常孵育时间为6-24小时。
7.细胞固定和染色：孵育结束后，用PBS缓冲液轻轻地洗涤Transwell膜上的细胞，然后用适当的方法固定细胞并染色。
8.细胞计数：使用显微镜观察并计数Transwell膜底部的细胞数量。
可以根据需要选择不同的显微镜放大倍数。
数据分析通过Transwell细胞迁移实验得到的数据可以用于评估细胞的迁移能力，并进行相关的统计分析。
transwell实验原理与步骤
一、Tran swell 小室制备1. 无基质胶Tran swell 小室制备①包被基底膜：用50 mg/LMatrigel 1:8 稀释液包被Tran swell小室底部膜的上室面， 4 C风干。
如果需要在下室面铺FN的话，可将200 ul枪头的尖端剪掉，吸取FN均匀涂抹在小室的下面。
用胶原(collagen )的话，一般配成0.5 mg/ml ，直接用枪吸了涂在膜上。
②水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37 C, 30min。
另有tianjin_glioma 战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9 ug/ul) 60- 80卩l (注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好)，置37 C 30 min使Matrigel聚合成凝胶。
2. 有基质胶的Tran swell 小室制备Chemicon 公司的ECM550系列说明书要求，将小室放入培养板中，在上室加入300卩1预温的无血清培养基，室温下静置15 - 30 min，使基质胶再水化。
再吸去剩余培养液。
二、制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12 - 24 h ,进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1 - 2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至1-10 X10 5,个人认为不要超过 5 X105。
具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。
个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。
个人认为，对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。
如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。
transwell细胞迁移实验
transwell细胞迁移实验标题：Transwell细胞迁移实验引言：细胞迁移是细胞生物学研究中的重要领域，可以帮助我们理解细胞的移动机制、组织发育过程、肿瘤转移以及免疫细胞迁移等现象。
在细胞迁移实验中，Transwell细胞迁移实验是一个常用的方法，通过Transwell装置模拟体内细胞迁移的过程，在了解其原理和操作方法后能够为我们的研究提供重要的实验数据。
本文将对Transwell细胞迁移实验进行详细介绍。
一、原理Transwell细胞迁移实验是一种通过毛细管的孔隙性筛网（porous membrane）来模拟体内细胞迁移的实验方法。
该装置由上下两个腔室组成，通过孔隙性筛网分隔开上下两个腔室。
在实验过程中，我们将待测细胞悬浮液放置在上腔室中，下腔室中则加入足够的培养基作为吸引物。
此时，细胞能够感受到培养基中存在的趋化因子，并通过孔隙性筛网向下腔室迁移，完成细胞迁移的模拟实验。
二、实验操作步骤详解1. 预处理Transwell装置：将Transwell装置放入含有适宜培养基的96孔板中，保持一段时间以使筛网预先渗透。
之后将装置置入无菌工作台中进行接下来的操作步骤。
2. 细胞处理：将待测细胞进行消化和悬浮，然后通过离心将细胞沉淀，去除上清液。
使用适宜的培养基对细胞进行洗涤和悬浮，得到一定浓度的细胞悬浮液。
3. 装配Transwell装置：将处理好的细胞悬浮液加入上腔室中，注意避免气泡的产生。
将上腔室与下腔室组装在一起，并及时加入足够的培养基至下腔室。
4. 培养与迁移：将装配好的Transwell装置置入培养箱或细胞培养箱中，以适当的温度和CO2浓度进行培养。
根据实验需要，培养时间可以有所不同，一般为12至48小时。
在培养过程中，细胞会通过筛网向下腔室迁移。
5. 终止迁移：根据实验需要，可通过两种不同的方式来终止细胞迁移。
一种是将Transwell装置沉入冰冷的PBS中，切断细胞迁移的通道；另一种是通过含有趋化因子解析溶液直接加入下腔室，将细胞迁移到下腔室中。
Transwell-侵袭实验总结超详细
T r a n s w e l l-侵袭实验总结超详细(总18页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除Transwell-侵袭实验总结第一节概念这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是一个Transwell装置的纵切面将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
欧阳歌谷创编 2021年2月1 欧阳歌谷创编 2021年2月1 Transwell侵袭实验总结
欧阳歌谷（2021.02.01） 第一节 概念
这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1.Transwell 关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一欧阳歌谷创编 2021年2月1 欧阳歌谷创编 2021年2月1 样。这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是一个Transwell装置的纵切面 将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验：
（1）共培养体系： 小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。常用0.4、3.0µm。我们实验室用的是0.4µm。 欧阳歌谷创编 2021年2月1 欧阳歌谷创编 2021年2月1 将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
（2）趋化性实验 可用5.0、8.0、12.0µm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。
①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。
②趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。
（3）肿瘤细胞迁移实验 常用8.0、12.0µm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。
（4）肿瘤细胞侵袭实验 常用8.0、12.0µm膜，原理与肿瘤细胞迁移实验类似。 上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿欧阳歌谷创编 2021年2月1 欧阳歌谷创编 2021年2月1 瘤细胞会向营养成分高的下室跑，但与肿瘤细胞迁移实验不同的是，聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶，用以模仿体内细胞外基质，细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。
2.肿瘤细胞侵袭模型 用于研究肿瘤细胞侵袭能力的肿瘤细胞侵袭模型有如下几种（引自司徒镇强《细胞培养》）：
2.1 体内癌细胞侵袭模型 2.1.1 皮下移植侵袭模型 2.1.2 肌肉内移植侵袭模型 2.1.3 腹腔内移植侵袭模型 2.1.4 小鼠肾包膜下移植侵袭模型 2.1.5 鼠睾丸包膜下移植侵袭模型 2.1.6 小鼠耳廓皮下移植侵袭模型 2.1.7 鼠爪垫皮下移植侵袭模型 2.1.8 视网内界膜侵袭模型 欧阳歌谷创编 2021年2月1 欧阳歌谷创编 2021年2月1 2.2 体外癌细胞侵袭模型
2.2.1 体外静止器官培养法 2.2.1.1 半固体培养基单细胞器官培养法 2.2.1.2 液体培养基单细胞器官培养法 2.2.2 半体外半体内器官培养法 2.2.3 单层细胞器官培养法 2.2.4 瘤细胞球体器官培养法 2.2.4.1 静止球体器官培养法 2.2.4.2 旋转摇动球体器官培养法 2.2.5 单层细胞侵袭实验模型 2.2.6 Transwell侵袭小室测定法 可见，Transwell与侵袭实验之间并不能划等号，Transwell有多种应用，侵袭实验也有多种方法。所谓Transwell侵袭实验，其实是指将Transwell这一技术应用于肿瘤细胞侵袭研究的一种实验。由于其简单易行、重复性好，因而得到了越来越广泛的应用，但不能认为研究肿瘤侵袭只有Transwell一种方法。
第二节 Transwell侵袭实验 欧阳歌谷创编 2021年2月1 欧阳歌谷创编 2021年2月1 我的课题涉及Transwell侵袭实验和Transwell迁移实验，其他方面的Transwell应用我不太清楚，因此这里主要谈谈Transwell侵袭实验。
1.实验用品： ① Transwell小室： 多种厂家可提供，论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室，我们实验室用的是Chemicon公司的ECM550系列，另有Boyden chamber、Millipore公司的millicell和雕弓满月射天狼战友介绍的Thincert。
这些厂家提供的小室，有的已铺好基质胶，买来就可以用，很方便，但也比较贵，我们实验室用的Chemicon公司的ECM550系列是已经铺好胶的，质量很好，但是非常贵，24孔板配套的小室，每个价格约130元，不推荐给大家。BD也有已包被好的，价格不清楚。Coster和Corning公司生产的小室，是论坛里比较常用的，好像是要自己铺胶，但据说每个小室成本只有40左右，应该比较适合中国国情。
下面是一些战友提供的价格，具体建议大家联系代理商咨询。linanping1979战友提供的价格：coster的24孔板的transwell的价格是456元RMB,8µm，用于肿瘤的侵袭实验。iceyxy战友提供的价格：Millipore的8µm的50个1760RMB,0.4µm的2000多,是一次性欧阳歌谷创编 2021年2月1 欧阳歌谷创编 2021年2月1 的。梅林战友提供的BD价格： 240RMB一块（6.5um,24孔,12instert），好像是没胶的。liguofan说国产的boyden30块一个。jjyy提供的价格是：corning cat No.3422. 6.5mm transwell with 8.0um prore polycarbonate membrane insert, Qty 48,950人民币不到。平均每个20元不到。
Transwell小室按照公司的要求，都是一次性使用的。不过其实洗洗泡泡还是可以重复用的。我用的Chemicon公司的ECM554，用完后擦去基质胶，再用胰酶和75%酒精泡，可以把膜洗得很干净，用前用紫外里外都照30min。sword01战友提供的处理方法：用棉签轻轻擦去胶和反面细胞，清水冲洗，超声清洗，低挡，30min，清水3×5min，蒸馏水3×5min，室温凉干，用前紫外线小室正面3h，反面6h，微波，低火10min×2。
因为我买的是铺好胶的，所以没买Matrigel，二次利用的小室只用来做不需要铺胶的迁移实验。以前的Chemicon ECM550系列，膜很结实，擦不坏，可以反复用很多次，但现在的膜已经改用一种很薄很脆的材料，一般只能重复用一次，真黑啊！很多战友说Costar和Corning也是可以重复用的，大家可以试试。
victoh战友对Millipore公司的millicell有比较详细的讲解，链接如下： http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2082166_1.html
本人没见过，有兴趣的可以自己研究一下。 欧阳歌谷创编 2021年2月1 欧阳歌谷创编 2021年2月1 另外，根据论坛战友提供的信息，osmonic公司有专用的膜出售，鼎国生物代理。Transwell小室用过后，可把原来的膜切下，贴上osmonic公司的膜，这样又可以用了，不过我没用过，有兴趣的可以试试。maojianwen战友的使用方法： trasnwell小室做一次后，将原来的膜去掉，重新泡酸，泡酒精，使用前照紫外，然后用女士用指甲油（注意用无色较稀的）将osmonic公司的膜贴上，剪掉多余的边缘。再照紫外。
② 上层培养液： 上层培养液采用无血清培养基，为维持渗透压，需加入0.05%0.2% BSA。
③ 细胞： 值得注意的是，有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。建议实验前先用酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP2的表达。如果不清楚细胞MMPs的表达情况，就盲目进行Transwell侵袭实验，可能会造成不必要的浪费，一次Transwell侵袭实验花钱少则数百，多则数千，并不是笔小数目，还是小心为妙。
另外，为了让实验结果更明显，可先撤血清让细胞饥饿12－24h，再进行实验。
④ 基质胶：