姜黄素的抗氧化及抗肿瘤活性研究_陈建平
姜黄素药理活性的研究进展
姜黄素药理活性的研究进展关键词：姜黄素 活性姜黄素(curcumin ，二阿魏酰基甲烷) 是从姜科姜黄属植物姜黄、莪术、郁金等的块根或根茎中提取精制得到的一种酚类色素，是一种天然的食品添加剂，是姜黄发挥作用的主要活性成分。
姜黄素可溶于甲醇、乙醇、碱、醋酸、丙酮和氯仿等有机溶剂，微溶于苯和乙醚，不溶于水，是一种光敏性很强的物质, 需避光保存。
其分子式为C 21H 20O 6, 结构见图1 。
图1 姜黄素结构式近年的研究表明，姜黄素在抗肿瘤、抗炎、抗氧化、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗HIV 、抗菌等方面有很好的药理作用, 而且姜黄素毒性低, 具有良好的临床应用潜力。
本文就姜黄素主要作用的研究进展作一综述。
1．抗肿瘤作用1985年印度的Kuttan 等[1]首次提出姜黄和姜黄素具有抗肿瘤作用的可能性。
自此以后, 众多学者对姜黄素抗肿瘤作用及其机制做了大量的研究, 证实了姜黄素可以抑制多种肿瘤细胞系的生长。
美国国立肿瘤研究所已经将姜黄素列为第3 代癌化学预防药物，且已进入临床试验阶段[2]。
1．1 抗肝癌的作用实验证实姜黄素具有体外抑制肝癌细胞的作用，孙军[3]通过姜黄素作用于人肝癌细胞株BEL- 7402 的实验研究证实，姜黄素可通过蛋白酶体途径减少人肝癌细胞HIF- 1α蛋白的表达。
并且有学者根据姜黄素的药理特性及各种剂型的药代动力学特点，提出将较大剂量姜黄素与碘化油混合进行肝脏肿瘤的介入治疗[4]。
厉红元等[5]报道了姜黄素可抑制肝癌细胞QGY 的生长。
其抑瘤率与药物浓度和作用时间呈依赖关系。
72h 的中效浓度（IC50）为49.50μmol/L ，流式细胞仪分析证实姜黄素能使QGY 细胞聚积在S 期，电镜观察发现姜黄素可导致细胞变性，坏死，诱导细胞凋亡。
Chen 等[6]发现它可以抑制某些与入侵相关的基因的表达，包括基质金属蛋白酶14 (MMP14)，神经元细胞结合分子，以及整合素Alpha 6 和Alpha 4；且可在mRNA 和蛋白水平上降低MMP14 的表达和MMP12 的活性。
姜黄素的功能主治是什么
姜黄素的功能主治是什么简介姜黄素（Curcumin），又称为二酮二磺基甲烷（diferuloylmethane），是姜黄中的一种黄色素，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性。
近年来，关于姜黄素的研究逐渐增多，证实了它在多个疾病治疗中的潜在作用。
本文将介绍姜黄素的主要功能和主治。
功能姜黄素具有以下主要功能：1.抗氧化作用：姜黄素是一种较强的自由基清除剂，能够减少细胞中的氧化应激，保护细胞免受损伤。
研究表明，姜黄素能够提高人体的抗氧化能力，减少氧自由基的产生，从而减缓衰老进程，并降低多种慢性疾病的发病风险。
2.抗炎作用：姜黄素具有抗炎作用，能够抑制多种炎症反应。
它通过干扰炎症信号通路的传递，抑制炎症因子的产生，从而减轻炎症反应和组织损伤。
临床研究发现，姜黄素在治疗风湿性关节炎、炎症性肠病等疾病中具有显著的疗效。
3.抗肿瘤作用：姜黄素对于多种实体瘤和血液肿瘤具有抗肿瘤作用。
它能够通过多种机制干扰肿瘤细胞的增殖、分化和侵袭能力，促使肿瘤细胞凋亡和周期性停滞，并抑制肿瘤血管的生成，从而起到抑制肿瘤生长和转移的作用。
诸多临床研究证实，姜黄素在肿瘤治疗中具有潜在的应用价值。
4.促进消化：姜黄素可以通过刺激胃液分泌，增加胆汁分泌，改善胃肠道蠕动，从而促进消化和吸收。
它对于缓解胃肠道疾病和增加食欲有一定的效果。
5.保护心血管：姜黄素具有降低血脂、抗凝血和抗血小板聚集等作用，可以预防心血管疾病的发生。
研究发现，姜黄素可以减少血管内皮细胞的炎症反应、抑制血管平滑肌细胞的增殖，并改善血管内皮功能，降低动脉粥样硬化的风险。
主治基于姜黄素的主要功能，它在以下疾病的治疗中具有潜在的作用：1.慢性炎症性疾病：姜黄素能够抑制多种炎症反应，对于治疗风湿性关节炎、炎症性肠病、慢性鼻窦炎等慢性炎症性疾病有一定的疗效。
2.肿瘤：姜黄素对于多种实体瘤和血液肿瘤具有抗肿瘤作用，它可以干扰肿瘤细胞的增殖、分化和侵袭能力，从而抑制肿瘤的生长和转移。
从中药姜黄抗癌研的究的新结论谈起
从中药姜黄抗癌研究的新结论谈起(2012-05-14 09:11:53)近来，国外有研究显示咖喱或对癌症有积极作用。
素来对天然药物兴趣一般的英国研究人员在实验室发现：咖喱中的姜黄素有助于增强化疗药物杀灭肠癌细胞的效果，他们要计划进行为期两年的临床试验。
其实，早在先前研究结果就已经显示：中药中普遍存在的姜黄素对人体有多种益处。
笔者在70年代末中医学院读书期间，一位从日本回来的老科学家成了我的病人，他很喜欢我，然后多次告诉我，日本方面重点在研究郁金中的抗癌等保健效果，而且是悄悄地。
建议我们要关注！当时，我只是个快毕业的学生，没有能力关注，但却有兴趣。
此后，我一直留意姜黄素的作用，临床上也习惯运用，效果的确可以。
姜黄素广泛存在于姜科植物中。
如姜科植物郁金块根、姜黄根茎、莪术根茎、天南星科植物菖蒲根茎中，而这些药物则成了我临床习惯运用的常见药物之一。
先前研究结果显示：姜黄素对人体有多种益处。
它具有强效消炎作用，也可以用作抗氧化剂。
传统上，国外也有人将姜黄素用于肝病、消化紊乱、过敏症、痤疮等一系列疾病的替代疗法。
还有一些研究结果显示，姜黄素或能延缓癌细胞扩散，增强化疗效果，保护健康细胞免受放疗之害。
不过，这一效果欠缺有力的科学数据支持。
近来，英国研究人员在实验室发现，咖喱中的姜黄素有助增强化疗药物杀灭肠癌细胞的效果，便着手征募志愿者，开展临床测试。
英国癌症研究会和莱斯特大学研究人员计划在莱斯特皇家医院和莱斯特综合医院进行为期两年的临床试验。
项目负责人斯图尔德说，动物测试结果显示，使用化疗药加上姜黄素，杀灭癌细胞效果比只使用化疗药或者姜黄素“强100倍”。
他说，姜黄素可能增强癌细胞对化疗药物的敏感性，“这一点振奋人心，因为这意味着可以只给患者小剂量化疗药，这样副作用较小，患者能够承受更长时间化疗”。
台湾科学家对此也进行了研究。
初步结果发现它有辅助化学治疗、打击前列腺癌细胞的功效。
台大医院泌尿部主治医师蒲永孝发现，姜黄素可以打破癌细胞的防火墙，帮助化学药物长驱直入癌细胞，迎头痛击。
姜黄素具有抑制血管生成与诱导肿瘤细胞凋亡双重作用
"! ( %"
中国药理学通报 "! ! " # " # $ % & %’ " ( ) * ( + , , # + ( -/ 0 % 1 # $"% " " 5P , Q ! ; % .
再用 先用 IUD "JT! ! % " " ! " # ! $! ] 配制成 ) "// 8 培养液稀释至所需浓度 # IU.U 恒 温 培 养 箱! 德国 !6 4" 主 要 仪 器 " 细 胞 培 养 箱 ! 苏州安泰空气技 H , ; 0 , @ =公司产 品 # 超 净 工 作 台 ! 术有限公司 # 流式细胞仪为 E 8 @ < , ;公司产品 # 4" 方法 模型的建立"白色种 46 !" 鸡胚绒毛尿囊膜 ! 0 8L" 鸡蛋 $ 受精率 ## 于恒温培养箱中$ )b % 5 *i" B %% k 培养 ! 每天转动鸡蛋 5#$ 次 # 孵育 4)! 用牙科钻在 蛋壳表面划刻出凹 痕 ! 用三棱针在蛋气室处扎一小 孔! 置培养箱中稳定 % 用刀片轻揭凹痕处 蛋 壳! $:! 轻轻 撕 掉 蛋 壳 下 的 白 色 内 壳 膜 ! 此时 E CU 连 同 鸡 胚下陷 ! 形成假气 室 ! 然 后 用 透 明 胶 带 封 贴! 形成透 明观察窗 ! 供观察和加药操作 # 46 4" 姜黄 素 对 0 8L 血 管 生 成 的 影 响 " 选 择 定 性 滤纸为载体 ! 用打孔器制成直径 )// 的 小 圆 片 ! 双 蒸水浸泡 5 次 ! 晾 干 备 用 # 制 备 假 气 室 4%$ 鸡胚胎 发育 4( % ! 将鸡胚 随 机 分 成 姜 黄 素 高 & 中& 低剂量组 $ "JT! 姜黄素用 IU.U 培养液 ! "倍& ! 5 " B )// 8 倍& 倍稀释 % 与 对 照 组 ! 各 加 ! 组 ! ’ IU.U ! ") -$ ! 每组 * 个鸡胚 ! 轻轻撕掉透明胶带纸 ! 将定性滤纸载 体置 于 正 对 观 察 窗 的 E 然后将生理盐水 CU 表 面 ! 及不同浓度姜黄素 滴 加 于 载 体 上 ! 用透明胶带纸封 贴! 继续孵育 # 加药 45! 撕开透明胶带纸 ! 由观察窗 加入甲醛与丙酮 $ 的固定液预固定! 取 !j!% )/ 1 >! 下E 将其平铺于滤 纸 上 ! 干燥后用扫描仪扫描 CU! 成图像 ! 计数载体周围 )// 内大 & 中& 小血管数目! 分析姜黄素对血管生成的影响 # 46 9" 培养细胞加药 " 取 状 态 良 好 的 处 于 对 数 生 长 期的 D UUE & ( ( % ! 细 胞 接 种 于 培 养 瓶 中 !置 于 5 (k & )b E ] % $: 后 % 及饱和湿度的培养箱中培养 ! 加入 % "JT! 姜黄素 ’ 对照组不加姜黄素#分 ") / 8 别培养 ! 进行观测 # %& % $& 5 ’: 后 ! 46 <" 观测指标 " 收集经姜黄素 作 用 ! %& % $& 5 ’: 及 对照组的细胞 ! 进行流式细胞仪分析 ’ 电子显微镜与 详细方法见文 H. 染色 光 镜 直 接 观 察 凋 亡 形 态 ’ ( %) 献 #
中草药抗肿瘤作用的研究
中草药抗肿瘤作用的研究随着现代医学的发展，对于肿瘤的治疗方法也在不断地更新迭代。
虽然一些传统的治疗方式，如手术、化疗和放疗，依然广泛地应用于临床，但是一些新的治疗方法，如免疫治疗和靶向治疗也越来越受到关注。
除此之外，中草药作为中医的核心药物，也一直被认为具有广泛的抗肿瘤作用。
关于中草药抗肿瘤的作用，目前已经有不少的研究成果。
其中一些药物的抗肿瘤作用已经被证实，如姜黄素、白术、山楂、桂枝、灵芝等。
这些中药的抗肿瘤作用，主要是通过调节免疫系统、直接抑制肿瘤细胞增殖、促进细胞凋亡等多种机制来发挥作用的。
姜黄素，是姜黄中最具有生物活性的成分，具有广泛的药理活性，其抗肿瘤作用已经被广泛地研究。
研究表明，姜黄素在体内具有显著的抗肿瘤作用，可以抑制细胞凋亡、促进细胞凋亡，从而达到抗肿瘤的目的。
此外，姜黄素还可以通过调节调节细胞周期进程、抑制肿瘤细胞侵袭和骨转移等多种方式发挥作用。
白术，是一种常见的中草药，拥有益气健脾、除湿通络、清热利湿等药效，在中医上用于治疗脾胃不和、浮肿肺肿等病症。
研究表明，白术具有多种抗肿瘤活性，可以抑制肿瘤细胞的增殖和转移，促进肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞等。
此外，白术还可以增强免疫系统的功能，从而对一些恶性肿瘤有一定的预防和治疗作用。
灵芝，是一种具有独特药理作用的中草药，常被用于治疗肝脏疾病、咳嗽、哮喘等疾病。
近年来，对于灵芝的抗肿瘤作用也越来越受到关注。
研究表明，灵芝具有显著的抗肿瘤活性，可以抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭，促进肿瘤细胞的凋亡和细胞周期阻滞等。
此外，灵芝还可以增强人体免疫系统的功能，从而对肿瘤细胞具有很强的杀伤作用。
虽然目前对于中药的抗肿瘤作用已经有了很多的研究成果，但是其中的课题仍然很多。
一方面，关于中药的抗肿瘤作用机制，还需要进一步地探究。
另一方面，中药作为复方药物，在其抗肿瘤作用中各个成分的药效如何协同作用，也需要进一步地研究。
除此之外，关于中药的剂量、用药方式等问题也需要进一步地研究和论证。
姜黄素抗肿瘤作用及其机制研究最新进展
2 朱玉娟,周爱玲,茅家慧,等.苦参素对实验性肝癌PCN、cyclinD1、CDK4表达的影响.中国临床药理学与治疗学,2005;10(1)∶52～563 杨志伟,周娅,曹秀琴.苦豆子生物碱体外抗柯萨奇B3病毒的作用.四川中医,2003;21(3)∶144 李继强,陈萦 ,曾民德,等.氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒的体外实验研究.中华消化杂志,2001;21(9)∶5505 陈小松,王国俊,蔡雄,等.氧化苦参碱对乙型肝炎病毒转基因小鼠乙肝抗原表达的影响.第二军医大学学报,1999;20(10)∶7466 焦霞,沈其昀,王利民,等.氧化苦参碱对哮喘小鼠抗炎作用的研究.上海第二医科大学学报,2002;22(4)∶3037 郑萍,牛凤丽,刘文忠,等.氧化苦参碱对葡聚糖硫酸钠诱导大鼠结肠炎的抗炎作用机制研究.中华消化杂志,2003;23(4)∶2078 田晓华,丛建波,孙存善,等.氧化苦参碱清除2OH自由基作用及对胸腺嘧啶核苷酸辐射防护作用的ESR研究.解放军预防医学杂志, 1996;14(6)∶4129 林明华,高艳华,姚海涛,等.苦参素对大鼠肝星状细胞形态的影响.黑龙江医药科学,2003;26(5)∶2210 甘乐文,王国俊,李玉莉.氧化苦参碱对大鼠肝纤维化的影响.第二军医大学学报,1999;20(7)∶44511 宋健,张兴荣,朱粱,等.苦参素对成纤维细胞增殖及Ⅲ型原胶原mRNA表达的影响.第二军医大学学报,1999;20(6)∶35612 王会贤,章灵华,黄艺,等.氧化苦参碱对LAK细胞活性的影响.免疫学杂志,1994;10(1)∶17～1913 王会贤,章灵华,杜守英,等.氧化苦参碱对淋巴细胞增殖的影响.中草药,1994;25(7)∶36214 徐广伟,满世军,王志生,等.氧化苦参碱对荷瘤小鼠免疫功能的影响.中国肿瘤临床与康复,2001;8(5)∶1015 曾建新,曹宏宇,李青,等.氧苦参碱对心肌梗死犬心律失常的作用.中国药理学报,1996;17(4)∶37916 王子骥,等.中华医学会全国第六次传染病与寄生虫病学术会议论文汇编,1999∶7817 于岩岩,斯崇文,曾争.苦参素制剂治疗慢性乙型肝炎的临床实验.中华内科杂志,2001;40(12)∶84318 李继强,李超群,曾民德,等.氧化苦参碱治疗慢性丙型病毒性肝炎的初步研究.中国中西医结合杂志,1998;18(4)∶22719 王健生,张海,牛瑞云.苦参素注射液治疗肝纤维化临床探讨.实用中西医结合临床,2003;3(4)∶2920 乌庆超,王朝晖,洪青,等.苦参素注射液治疗白细胞减少症的临床观察.临床内科杂志,2004;21(5)∶35521 黄瑛,尹学艳,王晓.苦参素治疗α干扰素致白细胞降低的疗效观察.大理医学院学报,2001;10(3)∶5622 沈志鸿,吴伊旋,毛维翰.苦参素注射液治疗各型湿疹.中国新药与临床杂志,2000;19(6)∶47323 陈瑞丰,丁跃武,黄玉璞.氧化苦参碱治疗心律失常60例近期临床疗效观察.吉林医学情报,1990;(2)∶824 徐慧珍,张春兰.苦参素穴位注射治疗带状疱疹.中华皮肤科杂志, 2001;34(6)∶46125 高作文,张瑞祺,,缪晓辉.苦参素注射液致慢性乙肝患者肝功能损害加重2例.药物不良反应杂志,2002;(2)∶12026 顾正平,陆惠平.苦参素注射液致过敏性休克1例.医药导报, 2003;22(10)∶734姜黄素抗肿瘤作用及其机制研究最新进展潘国凤1,张晓东1,朱晓新2(1中国中医科学院,北京 100700;2国家食品药品监督管理局药品审评中心,北京 100038) 姜黄素(curcu m in)是从姜黄中提取的一种植物多酚,广泛用于食品上色和佐味。
姜黄色素抗肿瘤作用的研究
姜黄色素抗肿瘤作用的研究【摘要】姜黄素(curcumin)具有抗肿瘤的作用，近年来已有很多报道，对不同的肿瘤可能有不同的作用机理。
大多数是从信号传导途径、阻滞细胞周期及通过不同途径抑制肿瘤血管生成来达到抗肿瘤的作用，对这些机制的综述可以为今后对姜黄色素进行更深入的探索和研究提供参考。
【关键词】姜黄色素；抗肿瘤；机制姜黄素是从姜黄属植物姜黄、郁金、莪术等的根或茎中提取的一种有效成分，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、降血脂等多种作用［1］，有关研究表明，姜黄素是一种安全并且有效的具有多种药理活性、很有开发前景的天然化合物，近年来国内外对姜黄素在抗肿瘤方面的研究日益增多，现仅将姜黄色素在抗肿瘤方面的研究结果综述如下。
1抗肿瘤作用机制1.1多途径诱导肿瘤细胞凋亡诱导肿瘤细胞凋亡是治疗肿瘤的一条有效途径。
细胞凋亡通路一条是受体介导的通过细胞内外的凋亡信号活化启始的Caspase－8，引起Caspase的级联反应，最终激活下游的Caspase－3使细胞凋亡，另一条途径是依赖线粒体的，活化的Caspase－8作用于Bcl－2家族成员Bid，使其催化断裂，其端部分活化并转位至线粒体膜，导致通透性改变，释放出细胞色素C，后者与结合分子Apaf－1结合后，再与proCaspase－9结合，形成凋亡复合体，活化Caspase－9及下游的Caspase－3引发凋亡。
姜黄素诱导凋亡大致可有以下几个方面。
①Fans与Fasl系统研究发现CA46表达少量Fas蛋白，经姜黄素诱导后CA46细胞内c－myc,bcl－2，突变型p53蛋白和mRNA表达水平显著下降，而Fas蛋白和mRNA表达水平上升［2］;②Caspases蛋白酶家族姜黄素通过诱导肺癌细胞caspase－8高表达(阳性率可达80％)促其凋亡［3］，诱导人卵巢细胞株A2780,肺腺癌A549细胞和Hela细胞的凋亡的试验研究中，Caspase－3、Caspase－8、Caspase－9表达明显高于对照组［1,4］;③抗转录因子NF－KB 是调控多种细胞因子、化学因素、生长因子、细胞黏附因子和某些急性期蛋白基因表达所必需的转录因子;在TNFR1诱导的细胞凋亡过程中，姜黄素能够抑制NF－KB的表达来促使细胞凋亡［3］，能够下调egr－1、c－myc、bcl－XL、NF －KB和p53的基因表达，抑制B细胞淋巴瘤细胞的生长和促进细胞凋亡［5］；④调控凋亡基因在细胞凋亡的基因调控的研究中发现Bcl－2家族而不是lAP家族(至少不是Survivin)参与了姜黄素诱导的肿瘤细胞的凋亡，姜黄素处理组肿瘤细胞Bcl－2和BakRNA表达水平显著下降，Cox2，BaxmRNA表达水平显著升高，而SurvivinmRNA的表达水平没有变化［6］;但是关于姜黄素是不是通过诱导所有肿瘤细胞Bcl－2家族来诱导凋亡还有待证实;⑤诱导DNA裂解药物诱导凋亡产生的DNA降解可分为两个阶段，第一是激活不依赖钙离子的核酸内切酶，产生50-300kb的大分子片段，第二是激活依赖钙离子的核酸内切酶，在核小体部位切断DNA,产生小分子的梯状电泳条带;用Cur对细胞作用后，提取细胞DNA 进行琼脂糖凝胶电泳，可见DNA的降解但尚未见明显的梯状条带，如果预先用钙离子螯合剂处理细胞，可阻断DNA降解和细胞凋亡，说明姜黄素可引起细胞内钙库的动员和钙离子的释放［7］;⑥失巢凋亡细胞与细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)脱离黏附接触或者是接触不完全后出现的凋亡现象，被称为失巢凋亡(Anoikis)。
姜黄素的抗肿瘤作用研究进展
进一步的研究表明，姜黄素可以抑制多种肿瘤细胞的 生长，预防化学性和放射性诱导的大鼠皮肤癌、胃癌、十二 指肠癌、结肠癌及乳腺癌等的发生，使肿瘤数目显著减少， 并缩小瘤体［１ ］。姜黄素的抗肿瘤可能涉及的机制主要包 括：诱发肿瘤细胞凋亡、阻断肿瘤细胞的生长信号传导通 路、抗氧化和抑制肿瘤血管生成 ４ 个方面。 １ 诱发肿瘤细胞凋亡
细胞的氧化反应及状态在肿瘤的发展过程中起重要的 作用。肿瘤基因启动子能使细胞产生过多的被激活的氧或 者使细胞缺乏清除氧的能力，氧造成的 ＤＮＡ 分子的氧化损 伤是产生突变和癌的始发原因。姜黄素的酚性羟基可以捕 获或清除自由基。多项研究报道姜黄素不仅能抑制超氧阴 离子、过氧化氢、一氧化氮等多种自由基的产生，而且有很 强的清除能力，能抑制过氧化氢等自由基对机体多种组织、 细胞的损伤，从而减低肿瘤的发生。
５ 结语 姜黄素的毒性低、副作用小、药源广、价廉、服用方便，因
此在临床上具有广阔的应用价值及发展前景。姜黄素的药理
作用广泛，尤其在抗肿瘤方面有较明显作用。但其作用机制
复杂，有待进一步深入研究。由于姜黄素水溶性差，在机体内
难吸收，易代谢，因此需要进一步研制开发姜黄素的新剂型，
以提高其溶解度，增强其药理作用及方便给药途径。
实验人员采用 ＭＴＴ 法观察姜黄素对肝癌细胞株生长的 影响，通过透射电镜观察显示，姜黄素能对肝癌细胞株产生 生长抑制作用，并且有剂量依赖性；姜黄素通过改变肿瘤细 胞的超微结构，导致其大量凋亡来实现该抑制作用［２ ］。核 因子 ＮＦκＢ 在许多癌细胞中起到操控细胞反凋亡生长的作 用。最近研究人员发现，姜黄素及其类似物可以靶向性地抑 制 ＮＦκＢ 的诱导活化作用，阻碍细胞株抗凋亡机制的运行， 促使癌细胞凋亡［３ ］。ＮＦκＢ 和 ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 的高度表达在人大 脑皮质瘤（ＭＣＬ）的存活和增殖方面扮演着不可或缺的角色。 因为 ＭＣＬ 对化学治疗的抵抗性，姜黄素对 ＮＦκＢ 和 ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 表达的抑制作用使其有望成为新的治疗手段。实验证明， 姜黄素不仅能明显抑制 ＮＦκＢ 的基因表达和生物活性，一系 列 由 ＮＦκＢ 诱 导 的 肿 瘤 活 性 生 长 因 子 ＴＮＦ，ＩκＢα，Ｂｃｌ－２， Ｂｃｌ－ｘｌ，ＣＯＸ－２ 和 ＩＬ－６ 的基因表达均由此受到抑制。通过 此机制，姜黄素起到抑制肿瘤细胞增殖和促使其凋亡的作 用［４－７ ］。Ｓｈｉｓｈｏｄｉａ 等［４ ］的研究表明，姜黄素能抑制胃癌和 结 肠 癌 细 胞 株 增 殖 并 诱 导 其 凋 亡 ，使 其 细 胞 周 期 停 止 于 Ｇ２／Ｍ。免疫印迹检测结果显示，２ 种细胞的 ｃｙｃｌｉｎＤ、Ｅ 水平 下降，其诱导凋亡的机理是，姜黄素通过激活 ｃａｓｐａｓｅ－８ 蛋 白，启动细胞凋亡程序的一系列级联反应，从而启动 Ｆａｓ 死 亡受体（外源性）凋亡途径，导致细胞凋亡。激活蛋白 －１
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
姜黄素的抗氧化及抗肿瘤活性研究陈建平，李琳，苏健裕（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640）摘要：本文采用分光光度法测定姜黄素对ABTS和DPPH自由基的清除能力；运用AAPH诱导红细胞氧化性溶血考察姜黄素对AAPH诱导人血红细胞损伤的抑制作用。
通过MTT方法考察姜黄素对A375恶性黑色素瘤生长状态的影响，并用流式细胞仪检测细胞凋亡数量；运用Western blot测定姜黄素对JNK和Akt蛋白表达的影响。
结果表明，姜黄素对DPPH和ABTS自由基具有较好的清除能力，呈浓度和时间依赖性；同时，姜黄素能有效抑制AAPH诱导红细胞溶血，当姜黄素为40 μM时，溶血抑制率达到52.78±1.03%。
MTT结果表明，随着姜黄素浓度的升高，A375细胞存活率逐渐下降，当姜黄素为40 μM，A375的细胞存活率仅为21.50±1.60%。
流式分析发现，随着姜黄素浓度的提高，细胞凋亡峰（SubG1）的含量逐渐增加。
当姜黄素为40 μM时，细胞内SubG1峰的含量达到了63.30%。
进一步Western blot分析发现姜黄素诱导A375细胞凋亡与上调JNK磷酸化的水平和下调AKt磷酸化的水平有关。
关键词：姜黄素；抗氧化；抗肿瘤文章篇号：1673-9078(2014)12-11-15 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2014.12.003 Antioxidant and Antitumor Activities of CurcuminCHEN Jian-ping, LI Lin, SU Jian-yu(College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology,Guangzhou 510640, China) Abstract: In this paper, spectrophotometric method was employed to determine the ability of curcumin to scavenge 2,2-azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) and 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radicals, and the oxidative hemolysis of erythrocytes induced by 2, 2′-azobis (2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH) was used to investigate the inhibitory effect of curcumin on AAPH-induced damage to human erythrocytes. The effect of curcumin on the viability of A375 malignant melanoma cells was measured by MTT assay, and the population of the apoptotic cells was detected by a flow cytometer. The effect of curcumin on the expression levels phosphorylated JNK and Akt was analyzed via Western blot assay. These results showed that curcumin exhibited strong scavenging effects on ABTS and DPPH free radicals in a dose- and time-dependent manner. Meanwhile, curcumin also effectively inhibited the AAPH-induced hemolysis of erythrocytes. The hemolysis inhibition rate of curcumin increased to 52.78 ± 1.03% at a concentration of 40 µM. The MTT assay showed that an increasing concentration of curcumin decreased the viability of A375 cells gradually. The cell viability after treatment with curcumin (40 µM) was only 21.50 ± 1.60%. Further flow cytometric studies showed that the SubG1 peak (apoptotic cells) increased in response to increasing curcumin concentrations. The SubG1 peak (apoptotic cells) reached 63.30% when the curcumin concentration was 40 μM. Further studies by Western blot assay demonstrated that the curcumin-induced apoptosis in A375 cells was related to upregulation of JNK phosphorylation and downregulation of Akt phosphorylation.Key words: curcumin; antioxidant activity; antitumor activity近年来，越来越多的研究表明，细胞内自由基产生的损伤可以导致癌症、动脉粥样硬化、心血管疾病、收稿日期：2014-05-31基金项目：高等学校博士点基金新教师项目（20110172120033）；国家自然科学基金青年基金项目（31101278）；广东省产学研结合项目（2012B091100075）；“扬帆计划”引进创新创业团队专项资助（201312 H05）；华南理工大学中央高校基本科研业务费（2013ZZ0069）资助作者简介：陈建平（1986-），男，博士研究生，研究方向为糖类物质及其药物制备与生物利用通讯作者：苏健裕（1979-），男，博士，副研究员，研究方向为糖类物质及其药物制备与生物利用 免疫系统衰退和细胞衰老等多种疾病[1,2]，摄入外源性的抗氧化剂能有效地预防或抑制这些疾病的发生。
目前由于人工合成的抗氧化剂有一定的毒副作用，可能会导致癌症或损伤肝脏，因此寻找天然有效的抗氧化剂成为目前研究的热点问题[3~4]。
姜黄素（curcumin）是从姜科姜黄属植物姜黄根茎中提取的一种脂溶性酚类物质[5]。
研究表明，姜黄素的结构中含有酚羟基，在细胞膜发生脂质过氧化反应时，其酚羟基可以发生氧化反应，能有效终止自由基反应，因而其表现出诸多生理活性，比如抗氧化、抗肿瘤、防止衰老等诸多功效[6]，成为近年来天然药物中的研究热点。
尤其是姜黄11素的抗氧化和抗癌功能受到越来越多的关注。
从本世纪80年代开始，国际上对姜黄属中药及姜黄素的药理学作用己有概述，而抗癌则是姜黄素的主要药理活性之一，其抑制肿瘤的作用已在许多动物实验中得到反复证实，其具体抗癌机制已成为近期研究热点。
目前，美国国立肿瘤研究所将其列为第3 代肿瘤治疗药[7]。
然而，目前国内采用溶血实验和ABTS、DPPH法研究姜黄素的抗氧化活性还未见报道，且暂未见对A375黑色素瘤细胞生长状态影响的相关研究报道。
因此，本文通过分光光度法考察姜黄素对ABTS自由基和DPPH自由基的清除能力及其对红细胞溶血的抑制能力，并对其抗肿瘤活性进行分析。
从而探讨姜黄素的抗氧化和抗肿瘤性能，以期为产业化开发姜黄素成为天然的抗氧化剂和潜在的化疗预防剂提供数据参考。
1 材料与方法1.1 材料与试剂姜黄素，3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)，2,2'-偶氮二(2-脒基丙烷)二盐酸盐(AAPH)，1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2'-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)，均购自Sigma公司；DMEM，胎牛血清，青霉素和链霉素，均购于美国Hyclone公司；红细胞取自正常成人静脉血；人黑色素瘤A375细胞购自美国A TCC公司。
1.2 仪器与设备BP301S 电子天平，德国Sartorius公司；VERSAmax 酶标仪，美国Molecular Devices公司；TS100倒置显微镜，日本Nikon公司。
1.3 ABTS自由基清除能力的测定参考Chen等[8]方法。
用pH 7.4的PBS配制 5 mM ABTS储备液，与过量的二氧化锰(MnO2)反应后经0.2 μm的PVDF微孔滤膜，再用pH 7.4的PBS稀释到734 nm处吸光值为0.70±0.02，得到ABTS 工作液。
在96孔板的200 μL反应体系中，加入20 μL不同浓度的姜黄素溶液，然后加入180 μL的ABTS工作液，震荡混合后在734 nm处用酶标仪（SpectaMax 250）测定，每隔5 min测一次，持续30 min。
以上操作均在室温下避光进行。
反应体系中混合液在734 nm处的吸光值代表ABTS自由基的含量。
1.4 DPPH自由基清除能力的测定参考Chen等[8]方法。
取一定量的DPPH粉末，用甲醇溶解，配成6 mM的DPPH储备液。
将DPPH储备液用甲醇稀释为60 μM的DPPH工作液。
在96孔板中200 μL反应体系中，加入20 μL不同浓度的姜黄素溶液，然后加入180 μL的DPPH工作液，震荡混合后在515 nm处用酶标仪（SpectaMax 250）进行测定，每隔5 min测一次，持续30 min。
以上操作均在室温下避光进行。
反应体系中混合液在515 nm处的吸光值代表DPPH自由基的含量。
1.5 AAPH诱导红细胞氧化性溶血[9]1.5.1 20%红细胞悬液的制备将添加有肝素抗凝剂的新鲜健康成人血用离心机在4 ℃，1500 g下离心10 min，将血红细胞和血浆分离，血红细胞用PBS（pH=7.4）反复清洗2~3次，直至上清不显红色为止，吸取0.2 mL分离出的红细胞倒于EP管中，加入0.98 mL的PBS，配成浓度为20%红细胞悬液；血浆则置于4 ℃冰箱中备用。