试管苗的继代增殖培养
满天星试管苗继代培养的研究
以满 天 星 的健 壮植 株 为基 础 材料 ， 其茎 尖 经 取
初 代培 养 后 ， 成 ６ ｍ 左 右 的无 根 苗 ， 无 根 苗 在 形 ｃ 将
无 菌条 件下剪成 ｌｍ左 右带 一 个芽 的 切段 ， 为 供 ｃ 作
试材料 。
１２ 方法 ．
在生长素和细胞分裂素配合使用 的培养基上 ， 芽 的增 殖效 果好 于只加 入 细胞 分 裂 素 的 ， 因为 Ｎ Ａ Ａ 在一定浓度下可促进芽的生长分化 ， 在不同生长
和未添 加 的作 对 比 ， 析 其 对 试 管苗 增 殖 和 生 长影 分
响
收 稿 日期 ：０ ８— ５— ５ ２０ ０ ０
的培 养基 上 ， 芽在 接种后 １ｄ开始 分 化 ， ０ 分化 高峰期
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
管苗 的商业化 生 产提供 相关 的理 论依 据 。
１ １ 材 料 ．
添加分裂素可以打破顶端优势 ， 促进芽生长 ， 诱导芽
的发生 ， 促进 其丛 生 。从表 １ 据 可见 ， 数 就这 两种 细胞分 裂数 来说 ０ ５ ｇ１ ．ｒ ／６一Ｂ ａ Ａ对芽 的增 殖效 果要
略好于 １ ｇ １ Ｔ 这与 菊花 、 石 竹 、 山大枣 ａ ｒ／ Ｋ ， 香 呜 试 管苗 对植 物激 素反应 相一 致 。
湿 度 ７ ％ ， 照 （ ４ ０～１０ ） Ｘ， １ ８ 光 １０ ６ ０ Ｌ （ ０～１ ） ／ ， ２ ｈ ｓ碳
Ｂ ．ｍｇＬ， 合 对 芽 的增 殖 倍 数 为 ５ 无 显 著 差 Ａ１Ｏ ／ 组 ， 异， 但两 者从 长势 分 析 ， 一 种 组合 好 于前 一 种 ， 后 试 管苗 粗壮 ， 高为 ９ ７ ｍ。从 芽 分化 时间来 分析 （ 株 ．ｃ 见 图 １， ）不加 任何 调节 剂 的 ＭＳ培 养基 上 的试 管 苗分
试管苗的转接与继代实验报告
试管苗的转接与继代实验报告一、实验目的本实验旨在探究试管苗的转接与继代技术，了解其操作方法及注意事项，为后续植物组织培养提供基础。
二、实验材料1.试管苗：选取生长良好的试管苗作为实验材料。
2.转接液：含有适量激素和营养物质的转接液。
3.培养基：含有适量激素和营养物质的培养基。
4.器具：无菌操作室、显微镜、离心机、移液器等。
三、实验步骤1.准备工作：（1）将所需器具清洗消毒，并在无菌操作室内进行操作。
（2）将试管苗从原来的试管中取出，清洗外部残留物。
2.转接步骤：（1）将试管苗放入含有适量激素和营养物质的转接液中浸泡10-15分钟，使其吸收足够的营养物质和激素。
（2）用移液器将试管苗从转接液中取出，放入新的含有适量激素和营养物质的培养基中。
（3）将培养基离心，使试管苗紧贴于培养基上。
3.继代步骤：（1）当试管苗生长到一定程度时，需要进行继代操作，即将试管苗移植到新的培养基中。
（2）将试管苗从原来的培养基中取出，清洗外部残留物。
（3）用移液器将试管苗从旧的培养基中取出，放入新的含有适量激素和营养物质的培养基中。
四、注意事项1.操作过程需在无菌条件下进行，避免杂菌污染。
2.转接液和培养基需按照配方制备，并在操作前进行检测确认其无菌状态。
3.移液器、显微镜等器具也需进行消毒处理。
五、实验结果通过本次实验，成功地完成了试管苗的转接和继代操作。
经过一段时间的观察和培育，发现试管苗在新的培养基中生长良好，并且细胞分裂活跃。
说明本次实验操作正确、有效。
六、实验总结本次实验主要是为了探究试管苗的转接与继代技术，了解其操作方法及注意事项。
通过实验，我们深刻认识到无菌操作的重要性，以及对试管苗的培养条件的掌握，这对于后续植物组织培养具有重要意义。
同时，本次实验还需要在实验过程中注意细节和精度，保证实验结果的准确性和可靠性。
实验二 试管苗增殖与生根培养
植物组织培养过程
1
离体条件 5 2
3
4
White培养基配方（mg/L）
成份 Na2SO4 含量 200
KNO3
CaNO3.4H2O MgSO4.7H2O NaH2PO4.H2O
80
300 720 16.5
KCl
H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O MoO3 FeSO4.7H2O Na2.EDTA.2H2O 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇
② White培养基（1963） White1963设计 特点 具有较低的无机盐。 细胞分化过程中对无机盐要求较低，有利于 分化。特别适用于根的分化。
三、实验操作
无菌操作同前
增殖培养基(有标签 Z)
生根培养基
三、实验操作
(一)试管苗增殖培养
1.实验材料：文心兰 2.增殖培养基配方： MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30 mg/L pH 6.0 1L
65
1.5 7
3
0.0001 5560 7460
100
0.3 0.1 0.1 3
盐酸硫胺素
甘氨酸
①MS培养基
1962年日本的Murashige 和美国的Skoog 二人为烟草 培养设计。是最常用的，也是最基本的培养基。
特点 无机盐含量较高，配比合理，符合植物细胞生长的营 养生理需求；硝酸盐含量和氨离子浓度较高。
文心兰试管苗继代增殖
3.操作步骤 3.1 铺开无菌纸，将一丛文心兰试管苗置于无菌纸 上，分离成单株。 3.2用手术刀认真清理基部的老叶、黄叶和残留培 养基。 3.3接种至增殖培养基上，4个单株/人。 3.4标签上记录姓名、日期。
马铃薯脱毒试管苗组织培养技术概述
化。马铃薯脱毒苗组织培养技术是防治病毒病的最 酸(NAA)、多效唑(PP333)、赤霉素(GA3)、矮壮素
有效措施。
(CCC)与激动素(KT)等。不同的生长调节剂以及不
1 马铃薯组织培养技术原理
同的浓度配比对马铃薯脱毒试管苗的生长发育存在
马铃薯组织培养技术是运用植物体内病毒分布 不同程度的影响。张梅，司怀军等研究表明，在培养
光照培养[8]。
需要从以下几方面着手。
2.3 马铃薯组培苗的继代增殖培养
首先，要培育与筛选好壮苗。合适的MS培养基
继代增殖培养是利用组织培养技术将脱毒试管 有利于培育出健壮的组培苗。张丽芳等研究表明，在
料。选取较为幼嫩的侧芽及顶芽为外植体材料，将其 原材料。通过这种方式能够避免因继代培养代数过
用解剖刀切下放入烧杯中，在烧杯口附上一层纱布， 高所带来的问题。其次，以受病毒侵染的试管苗进行
用流动的自来水冲洗5～6h。之后，将这些芽上的叶 继代培养时，所扩繁的组培苗均会感染病毒，无法获 片及多余茎秆切除(切至0.6cm左右，使外植体材料 取无毒植株[9]。因此，需要在继代培养过程中结合
的不均匀性原理，以病毒含量较少或者无毒的离体 基中添加浓度为0.2～0.3mg/L的多效唑能够有利于
茎尖分生组织为材料，在无菌环境下进行组织培养 壮苗的培育及提高脱毒试管苗的继代增殖系数，而 获取脱毒试管苗的一种技术[1]。该技术相比于传统的 当多效唑浓度为1～3mg/L时，则有助于马铃薯组培 块茎繁殖，不仅能够有效地保留品种优势，延缓品种 苗的长期保存[3-4]。祝红艺等发现在MS培养基中加入
能够得到充分消毒)。用75%酒精将这些材料浸泡 PCR病毒检测技术，严格筛选脱毒试管苗作为继代
30～45s，随即用无菌水冲洗3～4遍，再用0.1%升汞 培养原材料，确保扩繁的组培苗健康无毒。
影响试管苗继代培养的因素及解决措施
影响试管苗继代培养的因素及解决措施1、影响试管苗继代培养的因素及解决措施当试管苗的瓶内长满并长到瓶塞，或培养基利用完成时就要转接，进行继代，可迅速得到大量试管苗，以便到一定数量时进行移栽。
能否保持试管苗的继代培养，是能否得到大量试管苗和能否用于生产的重要问题。
（1）驯化现象在植物组织培养的早期研究中，发现一些植物的组织经长期继代培养，发生一些变化，在开始的继代培养中需要生长调节物质的植物材料，其后加入少量或不必加入生长调节物质就可以生长，此现象就叫作“驯化”。
如在胡萝卜薄壁组织培养过程中，逐渐消耗了母体中原有器官形成有关的特殊物质。
如初代中加入10-6mol/L IAA，才能达到最大生长量，但经多次继代培养后，在不加IAA的培养基上也可达到同样生长量，一般约在一年以上，或继代培养10代以上。
但并不是出现这种所谓的驯化现象就好，有时长期的“驯化”现象会得到适得其反的结果，如卡德利亚兰实生苗在长期的加香蕉的培养基中继代，最后造成只长芽不长根，芽的增长倍数很高，但芽又细又弱，这时在加入生长素的培养基中培养，几次继代可长出较多的根。
（2）形态发生能力的保持和丧失在长时期的继代培养中，材料自身内部要发生一系列的生理变化，除了前面讲的“驯化”现象外，还会出现形态发生能力的丧失。
不同的植物其保持再生能力的时间是不同的，而且差异很大，在以腋芽或不定芽增殖继代的植物中，在培养许多代之后仍然保持着旺盛的增殖能力，一般较少出现再生能力丧失问题。
一般认为分化能力衰退主要有三个因素：第一，愈伤组织中含有从外植体启动分裂时就包括进来的成器官中心（分生组织），当重复继代会逐渐减少或丧失，这意味着不能形成维管束，只能保持无组织的细胞团。
也有人认为在继代培养过程中，逐渐消耗了原有的与器官形成有关的特殊物质。
为什么有的植物出现形态发生能力丧失的现象，而在另一些植物中，形态发生能力又能很好保持？其原因还有待进一步研究。
第二，形态发生能力的减弱和丧失，也可能与内源生长调节物质的减少或丧失有关，如胡萝卜和菘兰。
欧洲甜樱桃试管苗继代培养研究
当欧洲甜 樱桃 第二 代组 培苗 生 长 ２ ５ ｄ左 右 ， 选 择生 长健壮 、 长 势较 一致 的试 管苗 ， 在无 菌条 件
下， 将其 剪成 １ —２ ｃ ｍ 的带 茎 的茎段 ， 接种 到设 计
的继代 培养 基上 进行 继代增 殖 培养 。每瓶 接 ５个 茎段， 每一处 理接 ３ Ｏ 瓶， 试 验重 复 ３次 。
１ ． ３ 接种 、 培养 与观 察
色 泽鲜 艳 、 晶莹 美 丽 、 营养 丰 富 、 外 观 和 内在 品 质 俱佳， 备 受人 们欢 迎 。在北方 落 叶果树 中 ， 樱 桃 是 成 熟最早 的果 实 ， 故有 “ 春果 第一 枝” 的美称 ， 在 调
节 水果 淡季 ， 满 足人 民生 活 需 要方 面有 着 特 殊 的 作 用［ 】 ］ 。欧洲 甜樱 桃 （ Ｃ ｅ ｒ ａ ｓ ｕ ｓ ａ ｖ ｉ ｕ ｍ） 根系发达、 抗寒、 抗旱 、 抗病 、 分枝力强 ， 其 果 实 具 有 果 大 色
陕
西
农
业
科
学
欧洲 甜 樱 桃 试 管 苗 继 代 培 养 研 究
权燕敏 。陈 宗礼
（ １ ． 渭 南职 业技 术 学院 ， 陕西 渭 南 ７ １ ４ ０ ０ ０ ； ２ ． 延安 大 学 生命 科 学 学院 ， 陕西 延安 ７ １ ６ ０ ０ ０ ）
摘 要 ： 以 欧 洲甜 樱 桃 试 管 苗 茎 段 为 外 植 体 进 行 离体 培 养 ， 按 照 单 因 素 随 机 区组 实 验 设 计 ， 研 究 了植 物 生 长
开始 产生丛 芽 ， 培养 至 ２ ８ ｄ左 右 ， 丛 芽 可 生长 至
在 理论 和生 产实 践上 都具 有积 极意 义 。近年 国 内 有 关 欧洲 甜樱 桃 离 体培 养 的报 道 逐 渐 增 多＿ ２ ］ 。
增殖与组培继代培养
一、继代培养1.培养物再培养的或从初代培养新生长的组织或器官称为“培养物”。
在初代培养的基础上所获得的培养物如愈伤组织、芽、胚状体和原球茎等, 数量都还不太多, 它们需要进一步增殖, 使之越来越多, 从面发挥快速繁殖的优势。
2.继代培养把初代培养所获得的培养物, 移植到新的培养环境, 这种移植操作经过多次反复的培养, 就叫继代培养, 又叫连续培养。
依移植操作的次数分别称为第 1 次继代培养、第2 次继代培养…., 连续多代的培养又被称为建成培养。
其目的旨在繁殖出相当数量的无菌芽（苗）。
继代培养的后代是按几何级数量增加的过程。
3.继代培养中扩繁的方法，包括切割茎段、分离芽丛、分离愈伤组织、分离胚状体、分离原球茎等。
切割茎段常用于有伸长的茎梢、茎节较明显的培养物。
这种方法简便易行，能保持母种特性。
增殖使用的培养基对于某一种植物的培养物来说每次几乎完全相同, 由于培养物在接近最良好的环境条件, 营养供应和激素调控下, 排除了其他生物的竞争, 所以能够按几何级数增殖。
继代培养是经常性不停的进行过程。
在达到相当数量之后, 应考虑使其中大部分转入生根阶段。
从某种意义上讲, 增殖只是贮备母株, 而生根才是增殖材料的分流, 生产出成品。
二、继代方法1.固体培养有利于器官的分化。
2.液体培养以原球茎或胚状体方式增殖时，如兰花中增殖后得到的原球茎，分切后进行振荡培养（22 ℃恒温，连续光照）即可获得大量的原球茎，再切成小块转入固体培养基中，即可得到大量小苗。
在快速繁殖中, 增殖培养有时采用浅层液体静置培养, 生根阶段再采用固体培养基, 以节省成本。
三、提高增殖速度的方法1.改进培养基历来使用的培养基大多为培养细胞、愈伤组织和根等设计的, 无机盐浓度较高, 对一些植物茎尖、芽的生长不一定合适。
一方面可参考已有资料或相关的报道, 一方面进行多种实验找出最佳培养基。
GR 在增殖培养中所起的作用往往是决定性的, 但是报道差异很大。
试管苗的继代培养原理
试管苗的继代培养原理
继代培养是指将已经生长一段时间的植株组织再次转移到新的培养基中，以维持细胞的生长和增殖。
试管苗的继代培养主要通过以下原理实现：
1.组织分化和增殖：初始的试管苗组织经过培养后可以进一步分化和增殖，形成新的细胞和组织，从而实现苗期继代。
2.提供营养和生长因子：新的培养基中含有必要的营养物质和生长因子，如无机盐、糖类、氨基酸、维生素等，能够满足细胞的营养需求，促进细胞生长。
3.细胞分裂和增殖：培养基中的激素，特别是植物生长调节剂（PGRs）可以促进细胞分裂和增殖，如培养基中含有较高浓度的激素，则可以促使细胞增殖更快。
4.去除抑制因子：有时候，初始化的培养基可能含有一些抑制因子，如乙烯等，会阻碍细胞的生长和增殖，需要通过调整培养基的成分和pH值，使抑制因子的影响降到最低。
综上所述，试管苗的继代培养通过分化和增殖、提供营养和生长因子、促进细胞分裂和增殖以及去除抑制因子等原理实现。
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2、诱导不定芽的形成与生长调节物质。
诱导外植体形成不定芽时，一般使用细胞分 裂素的浓度高于生长素浓度的配比，但也经 常采用细胞分裂素和生长素浓度的比值接近 于1的配比。
常用的细胞分裂素是BA、KT和玉米素，浓度 在0.1∽10.0 mg.L-1。有的还加入低浓度的2， 4-D才能诱导不定芽的产生
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（四）胚状体发生型
从植物叶片、子房、花药、未成熟胚等诱导 体细胞发生。
其发生和成苗过程类似合子胚或种子。这种 胚状体具有数量多、结构完整、易成苗和繁 殖速度快的特点，是植物离体无性繁殖最快 的方法，
是人工种子和细胞工程的前提，受到国内外 的普遍重视。
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（五）原球茎型
原球茎是一种类胚组织，培养兰花类的茎尖 或腋芽可直接产生原球茎，可以分化成植株。
第五章 试管苗的继代增殖培养
第一节 试管苗的繁殖 一、试管苗快速繁殖的类型 二、提高增殖率的方法 第二节 继代增殖培养应注意的问题 一、分化再生能力衰退现象 二、驯化现象 三、玻璃化现象…
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第一节 试管苗的繁殖一、试来自苗快速繁殖的类型 （一）无菌短枝型：将待繁殖的材料剪成带
一叶的单芽茎段，转入成苗培养基，一定时 间后可成苗，再剪成带一叶的单芽茎段，继 代又可成苗。 （二）丛生芽增殖型：从芽到芽。 （三）器官发生型：分为直接和间接两种形 式，直接的器官发生是指较少发生或不发生 愈伤组织而直接从外植体表面再生不定芽。
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3、促进胚状体的形成和增殖与生长调节 物质。
由体细胞形成的胚状体叫体细胞胚 （Somatic embryo）。
生长素在体细胞胚胎发生中起着重要作用。 一般是在含有丰富还原氮的培养基上，加有 生长素，特别是2，4-D以诱导胚状体的发生， 然后转移到降低浓度或没有生长素的培养基 上使其成熟、萌发和生长。
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三、玻璃化现象
（一）玻璃苗的特征和发生的因素 离体繁殖中出现的玻璃化芽苗，过度含水化，
叶片肿胀，呈透明或半透明，水浸状，失绿， 脆弱易碎； 玻璃化可能是培养基渗透势不当所致。 有人发现琼脂和蔗糖浓度与玻璃化成负相关. 培养基中的植物激素也和玻璃化程度有关。 玻璃苗是培养瓶内气体与外界交换不畅造成 的，
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（二）改善培养环境条件：
1、温度。大多数植物最适的培养温度在23～ 32℃之间,常用25℃±2℃的温度。一般低于 15℃培养的组织生长出现停顿，而高于35℃ 对生长也不利。
2、光照。一般认为1 000～5 000Lx即可满足其 需要，
3、湿度。一般要求70%∽80%的相对湿度，过低 应洒水，过高应通风除湿。
2、衰退可能也与内源生长调节物质的减少 或丧失有关。
3、可能是细胞不正常染色体聚集导致形态 发生能力的丧失。
4、植物材料 5、培养基及培养条件 6、继代培养次数 7、季节：
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二、驯化现象
在植物组织培养中，发现一些植物组织经长 期继代培养，发生了一些变化。开始继代培 养要加入生长调节物质，其后加入少量或不 加入生长调节物质就可以生长、这种现象称 为“驯化”（acclimation）。
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第二节 继代增殖培养应注意的问题
一、分化再生能力衰退现象 1、经多次继代后，会逐渐减少或丧失愈伤组 织中含有从外植体启动分裂时就包括进来的 成器官中心（分生组织），导致维管束难以 形成，只能保持无组织的细胞团。
也有人认为在继代过程中，逐渐消耗了母体 中原有与器官形成有关的特殊物质。
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除细胞分裂素以外，培养基中还经常加入低 浓度的生长素，以促进腋芽的生长，但要防 止愈伤组织化。常用和生长素是NAA（萘乙 酸）、IBA（吲哚丁酸）、IAA（吲哚乙酸）， 浓度在0.1∽1.0mg.L-1。
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培养基中还经常加入低浓度的生长素，以促 进腋芽的生长，但要防止愈伤组织化。常用 的生长素是NAA、IBA、IAA，浓度在 0.1∽1.0mg.L-1。
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二、提高增殖率的方法
（一）选用最佳的培养基 1、促进腋芽形成与生长调节物质。 促进芽丛生长的培养基：加入0.1～10.0
mg·L-1的细胞分裂素，偶然也用较高浓度。 应用最多的是6-苄基氨基嘌呤（BA），其次 是激动素（6-糠基腺嘌呤，KT）和2-异戊烯 基腺嘌呤（2ip），玉米素（ZT）用的较少；
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（二）控制和克服玻璃苗的措施
1、适当提高培养基中蔗糖含量或加入渗透 剂，降低培养基中的渗透势；
2、适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉 素的浓度；
3、增加自然光照； 4、改善培养器皿的气体交换状况； 5、在培养基中加入间苯三、多效唑、矮壮
素、活性炭、对防止产生玻璃化有良好作用。
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