UPLC_MS_MS测定降糖类中药制剂及保健品中8种化学药的研究_杨钊 (1)

r
0.997 8 0.997 6 0.998 4 0.997 1 0.999 2 0.999 8 0.998 2 0.999 7
27 27 32 32 37 37 32 32 30 30 32 32 31 31 32 32
Collision energy/eV
13 17 16 24 20 17 45 28 14 13 25 13 37 13 30 12
图 1 混合对照品溶液总离子流色谱图 Fig.1 Total ion chromatograms for mixture of reference standards
1 实验材料 1.1 实验样品
降糖类中成药 20 批，为青岛市食品药品监督
管理局监督抽检的正规药厂产品；降糖类医院中药 制剂 10 批，抽样自青岛市各医院；其他降糖类产 品 10 批，为个人送检的保健品、食品或非法医疗 机构的产品。1 号样品：降糖胶囊，批号 070811； 2 号样品：平糖安胶囊，批号 060427；3 号样品： 平糖安胶囊，批号 050302；4 号样品：百合胶囊， 批号 070226；5 号样品：益仁胶囊，批号 070302； 6 号样品：金菊胶囊，批号 070301；7 号样品：康 泰胶囊，批号 20060805；8 号样品：参芪胰康灵胶 囊，无批号；9 号样品：鲍翅精华素胶囊，批号 061210；10 号样品：蚁福康胶囊，无批号。 1.2 仪器
根据盐酸二甲双胍等 8 种对照品 S/N=3 时的溶 液浓度，计算出测定方法的检出限（LOD）；根据 S/N=10 时的对照品溶液浓度，计算出测定方法的定 量限（LOQ）。结果见表 2。
表 1 质谱参数 Tab.1 MS parameters
Compund
[M+H]+
Methformin hydrochloride 130.10
糖尿病是一种以糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱为 特征的内分泌代谢性疾病，它发病率高，并发症多， 已成为威胁人类健康的一大元凶[1]。中药治疗糖尿 病及其并发症有悠久的历史和不可替代的优势，因 此降糖类中药制剂价格昂贵。但中药作用温和、起 效较慢，部分厂家违规向中药制剂中添加化学药以 加快其疗效。目前利用高效液相-质谱仪检测降糖类 中药制剂中添加的化学药多采用比较对照品和样 品的一级、二级质谱图来判定[2-3]检验结果，这种方 法偏重于定性检测，其灵敏度不高，选择性相对较 差，操作较繁琐。本实验建立了用超高效液相-串联 四极杆质谱仪定性和定量检测降糖类中药制剂及 保健品中添加 8 种化学药的方法，是一种选择性强、 灵敏度高、准确、快速的检测方法。
Acquity 超高效液相色谱仪（UPLC），Quattro Premier XE 串联四极杆质谱仪（美国 Waters 公司）。 1.3 对照品
盐酸二甲双胍（批号 100664-200401），格列奇 特 （ 批 号 0269-9701 ）， 盐 酸 吡 格 列 酮 （ 批 号 100634-200401），格列吡嗪（批号 100281-200001），
Fragmentions
85.11 71.161) 164.18 105.131) 110.15 127.161) 119.14 134.161) 347.32 321.361) 126.15 352.371) 169.14 369.331) 167.14 403.361)
Cone voltage/V
将混合对照品使用液用甲醇-10 mmol·L-1 醋酸 铵溶液（1∶1）逐级稀释，得标准系列，质量浓度 分别为 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，50.0，100.0， 200.0 µg·L-1 。 每 个 浓 度 平 行 3 份 ， 在 拟 定 的 UPLC-MS/MS 条件下测定，各对照品定量离子的峰 面积（Y）对各组分浓度（X）经回归处理，得标准 曲线。盐酸二甲双胍等 8 种对照品在 0.5~200.0 µg·L-1 内线性良好，回归方程、相关系数等参数详 见表 2。其中 50 µg·L-1 的混合对照品溶液的总离子 流色谱图（TIC）见图 1。 2.5 检出限和定量限的测定
YANG Zhao，CHEN An-zhen，WU Ai-ying，LI Xin-rong（Qingdao Institute for Drug Control, Qingdao 266071, China）
ABSTRACT：OBJECTIVE To establish a method for the determination of 8 anti-iabetic medicines in traditional Chinese medicines and health foods by UPLC triple-quadrupole tandem mass spectrometer. METHODS Using UPLC-MS/MS to determinate by multi-reactions monitoring(MRM) technology. RESULTS The standard curves of the 8 chemical compounds showed good linearity over the concentration range of 0.5-200 µg·L-1 and the r between 0.997 1 and 0.999 8 respectively.The detection limits of the methformin hydrochloride, phenformin hydrochloride, gliclazide, pioglitazone hydrochloride, glipzide, glimepiride, glibenclamide and gliquidone were 5.2, 1.1, 5.4, 0.2, 5.1, 0.2, 0.7, 3.1 µg·kg-1 separately. The average recoveries were 84.3%-121.1% at three levels. CONCLUSION The method had the advantages of rapidness, higher precision and higher sensitivity, was suitable for the determination of 8 anti-iabetic medicines in traditional Chinese medicines and health foods. KEY WORDS：anti-iabetic；traditional Chinese medicines；health foods；UPLC；triple-quadrupole tandem mass spectrometer
Phenformin hydrochloride 206.27
Gliclazide
324.47
Pioglitazone hydrochloride 357.45
Glipzide
446.53
Glimepiride
491.62
Glibenclamide
494.56
Gliquidone
528.51
注：1)标注代表定量离子 Note：1)means quantification ion
Gliclazide
Y＝210.6X-19.6
Pioglitazone hydrochloride Y＝2 903.4X+1168.5
Glipzide
Y＝334.0X+61.2
Glimepiride
Y＝450.4X+45.4
Glibenclamide
Y＝355.4X+147.1
Gliquidone
Y＝576.9X+37.5
取盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、格列奇特、 盐酸吡格列酮、格列吡嗪、格列美脲、格列苯脲和 格列喹酮 8 种对照品 14.88，15.80，15.55，15.43， 13.45，12.05，14.13 和 14.20 mg，精密称定，分别
置 8 个 10 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成对 照品储备液并保存于冰箱中。分别精密量取上述 8 种对照品储备液适量，置 50 mL 量瓶中，加甲醇定 容至刻度，得每 1 mL 含 100 µg 的混合对照品储备 液并保存于冰箱中。将上述混合对照品储备液用甲 醇-10 mmol·L-1 醋酸铵溶液（1∶1）稀释得每 1 mL 含 1 µg 的混合对照品使用液。 2.4 标准曲线的制备
间，r 分别在 0.997 1~0.999 8 之间；盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、格列奇特、盐酸吡格列酮、格列吡嗪、格列美脲、格列
苯脲和格列喹酮的检出限分别为 5.2，1.1，5.4，0.2，5.1，0.2，0.7 和 3.1 µg·kg-1；3 个水平的回收率分别在 84.3%~121.1 %
间。结论 该方法快速、准确、灵敏，可用于降糖类中药制剂及保健品中违禁添加 8 种化学药的测定。
甲醇（色谱纯）；醋酸铵（分析纯）；所用水为 Millipore 纯水。
2 方法与结果 2.1 色谱条件
色谱柱：Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 （2.1 mm×50 mm，1.7 µm）；柱温：35 ℃；流速： 0.4 mL·min-1；流动相：甲醇-10 mmol·L-1 醋酸铵溶 液（1∶1）梯度洗脱，0→3.0 min，55%~70%（甲 醇），3.1→4.0 min，70%~100%（甲醇），4.1→6.0 min， 100%~55%（甲醇）；进样量：10 µL。 2.2 质谱条件
UPLC-MS/MS 测定降糖类中药制剂及保健品中 8 种化学药的研究
杨钊，陈安珍，吴爱英，李欣荣（山东省青岛市药品检验所，山东 青岛 266071）
摘要：目的 建立一种测定降糖类中药制剂及保健品中违禁添加 8 种化学药的超高效液相-串联四级杆质谱方法。方法 使