应用PCR技术检测禽类源性成分
荧光定量PCR法检测饲料中的牛、羊成分
１１２ 引 物 及探 针 设 计 （ Ｅ公 叫的 Ｐ ｉ ｒ ｘ ｒｓＴ ．． Ｐ ｒ ｍｅ ｐｅ ｓ Ｍ Ｅ
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检测技术
１ ． 酱通 Ｐ ．１ ２ ＣＲ法 （ 合 酶 链 式 反 应 ） 聚
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般 Ｐ Ｒ反 应 条 件 Ｃ
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疯 牛 病 全 称 “ 海 绵 状 脑 病 ” 是 一 发 在 牛 牛 。 种 身 上 的 进 行 性 中枢 神 经 系统 病 变 ，｝ 前 研 究 表 明 ， ＿ Ｉ 该 病 是 由一 种 称 为 脑 病 毒 的 蛋 白 质 所 引 发 ， 其 症 状 ｊ 羊瘙 痒 症 类 似 。 人 方 面 也柯 类似 症状 的 疾 病 ， 为 在 称 “ 雅 氏症 ” 克 。医 学 发 现 人 “ 雅 氏症 ”叮能 与 携带 病 克 毒 的 动 物 性 食 品 有 关 ， 已 经 引起 了 国 内外 食 品安 全
快 速 、 有 效 的 检 测 方 法 防 Ｉ疫 Ⅸ 牛 、 羊 肉 骨 粉 的使 ｌ ：
用。
不 同物 种 都 具 有 遗 传 卜 独 特 性 ， 的 陔独 特 性 体 现 在 携 带 遗 传信 息 的 ＤＮＡ分 ｌ。换 言之 ，牛 与 千 之 ： 所 以被 认 为 足 不 同 的 、 特 的 物 种 ， 独 其最 根 本 的 原 肉 是 牛 与 羊都 具 有 自身 特 性 的 ＤＮＡ序 列 。所 谓 特 异 性 序 列 是 指 某 物 种 的 某 些 ＤＮＡ序 列 为 自然 界 其 他 物 种 所 没 有 的 。 闪 此 根 据 卜述 物 种 彳 毖 组 水 平 Ｌ的 Ｅ 不 同 ， 我 们 ＮＣＢ 上 检 索 得 到 牛 与 羊 的 特 异 性 序 Ｉ
动物源性食品PCR检测方法的应用研究
1 实验材料与实验方法1.1 实验材料本次检测实验所用的实验材料为牛肉卷，该材料从农贸市场所购买。
1.2 实验仪器和实验试剂本实验所采用的实验试剂主要包括DNA快速提取试剂盒、琼脂糖、胰蛋白胨、酵母提取物以及DNA回收试剂盒等。
并利用实验试剂配置LB液体培养基和LB固体培养基等。
本实验所采用的实验仪器包括超纯水制备装置、制冰机、分析天平、真空干燥箱、高压灭菌器、分光光度计和离心机等。
1.3 实验方法1.3.1 样品基因组DNA的提取与检测（1）将采集的牛肉卷样品进行剪碎处理，并进一步研磨至粉末状，在研磨后得到的粉末中加入一定量的Buffer GA和RNase A并进行震荡，以确保样品中的RNA得到有效去除。
（2）在反应物中加入适量的Proteinase K和Buffer GB进行震荡混匀，并在65 ℃下放置一段时间，随后对反应物进行高速离心，并吸取上清液，在上清液中加入无水乙醇再进行上下颠倒，充分混匀。
加入无水乙醇后产生的白色沉淀可忽略。
（3）将得到的混合溶液和沉淀全部转移到吸附柱中，并再次高速离心，高速离心结束后加入一定量的Buffer GW1再进行重复的高速低温离心，以平衡吸附柱，从而获得质量更好的DNA产物。
（4）将吸附柱放置于真空干燥箱中晾干后，取出，放置于已灭菌的离心管中，并加入适量的Buffer GE或灭菌水，放置数分钟后再进行高速离心，以获得DNA溶液。
对于所获得的基因组DNA质量通常采用OD260/280值进行描述，当其在1.7～1.9区间时，则证明基因组DNA质量相对较好。
1.3.2 引物设计合成与检测在引物的设计合成步骤中，应当根据NCBI Genebank所提供的牛的细胞色素基因序列，使用primer5.0软件设计相应的引物。
通常使用目标动物的线粒体基因中的细胞色素b基因进行测定，这种基因变异率较低，用于动物源性食品的物种分类鉴定更为适合[1]。
在引物设计完成后，对样品DNA进行PCR扩增。
实时荧光PCR和常规PCR方法检测饲料中鸡源性成分
进 口ｌ １ ｌ 为农业 大 国。 国必须加 强对动 物源性 饲料 。作 我 建立能 够快速 、 确鉴别 检测 饲料 中鸡 源性 成分 的方 准
法 。本 研 究 采 用 常 规 Ｐ Ｒ方 法 和 实 时 荧 光 Ｐ Ｒ方 法 Ｃ Ｃ
检 测 饲 料 巾 鸡 源 性 成 分 法 的 灵 敏 度 高 ． 用 性 强 。 方 实
宁 省
采 Ｐ 。公。 Ｍｎ Ａｕｃ ｎ 用 ｇ 司 ａｔ ＮＰｆｉ … “ ｇｉ ……ａ 。６ ’ ｅＤ ｉｔ …“ ｍａ 的 …… … ｃ …“ ｉ。
实 时荧 光 Ｐ Ｒ扩 增 反 应 具 体 条 件 ：５℃ ３ 、 Ｃ ９ ０ Ｓ
穆春、 孙屏、 刘岑杰、 徐建平， 单位及通讯地址同第一作者。 杨滴、 夏元凤， 大连标准检测技术研究中心。 收稿 日 ２ １— ２Ｏ 期：００ ０一 ｌ
引 物合成及 探针合 成 、标 记购 自Ｔ Ｋ Ｒ ａ ａ ａ大连宝
生 物 公 司 ，实 时 荧 光 Ｐ Ｒ 引 物 序 列 及 探 针 的 序 列 见 Ｃ 表 １ 常 规 Ｐ Ｒ 引 物 序 列 及 扩 增 长 度 见 表 ２ ； Ｃ 。 １ 模 板 Ｄ Ａ 的 提 取 ． ５ Ｎ
适 用 于 鸡 源 性 成 分 的检 测
《 饲髑 工 业 》 ２ １ 第 ３ 卷 第 ７期 ・０ ０年 １
实 时荧 光 Ｐ Ｒ和 常规 Ｐ Ｒ方法 Ｃ Ｃ 检测饲料 中鸡源性成分
刘 彦泓 穆 春 孙 屏 杨 滴 刘岑杰 夏元 凤 徐 建 平
摘 要
根 据 鸡 线粒体 Ｄ Ａ序 列 ， 计并 筛选 了鸡源 性特 异 引物及探 针 ， 立 了饲料 中鸡 源性 Ｎ 设 建
应试剂盒（ｒｍ ｘ ｘ ａ Ｔ 、０ Ｐ Ｒ缓 冲液／ Ｔ Ｐｅ ｉ Ｅ ｑ ）１ｘ Ｃ Ｔ Ｍ ｄ Ｐ溶液 、 Ｎ ＥＴ ｑ Ｎ ｘ ａ Ｄ Ａ聚合酶 、０ ｋ ｒ １０ｂ Ｍａｅ（ ｐ 片段大小分别为 １０ ０、
应用SYBR GreenⅠ实时荧光PCR溶解曲线检测鹌鹑源性成分
文章 编号 ：２ ８ ７ ３ （ ００ １－ ０ ０ ０ ０ ５ — ０ ３ ２ １ ）７ ０ ７ － ３
２０ ０ ４年 以来 ， 随着 数个 国家 高致病 性 禽 流感 的
术 鉴别 检测 鹌鹑源 性成 分 的方 法 。
１ 材料与 方法
１１ 材 料 ．
相继 发生 ，除鸡 以外 已波及到人 、天鹅 、猫 等 的死
业 部也将 其列 为一类传 染病 『 ２ ｌ 。
目前 ，主要 的动物源 性成 分鉴 别检 测 的方 法 有
１１１ 样 品 的采 集 及 处 理 ．．
本实验 所用鹌鹑 、 鸵
鸟、 、 鹅 鹧鸪 的肌 肉样 品和鹌 鹑 肉骨 粉样 品 由中华人 民共 和 国深 圳 检验 检 疫 局 提供 ； 、 、 、 、 、 鸽 鸡 鸭 马 牛
亡， 因感染 禽流感 而致死 的人数 不断增 加 ， 禽类 肉食 品及 饲 料 的安 全性 已关 系 到人 类 的安危 。 禽 流 感
（ Ｉ 被 国 际兽 疫局 （ Ｉ 定 为 Ａ类 传染 病 ， 被 列 Ａ） ＯＥ） 并 入 国际生 物武 器公 约 动物 类传 染病 名 单＿。我 国农 １ １
摘 要 ： 据 ＧｅＢ ｎ 根 ｎ ａｋ中的鹌 鹑 线粒 体 Ｄ ＮＡ（ ＤＮＡ）２ ｍｔ １ＳＲＮＡ基 因保 守序 列， Ｐｉ ｒ． 用 ｒ ５ ０软件设计 了 １对针 ｍｅ
对鹌 鹑 的特 异 性 扩 增 引物 ， 立 了一 种 检 测 鹌 鹑 动 物 源 性 成 分 的 Ｓ Ｂ Ｇｒ ｎＩ实 时 荧光 Ｐ 建 Ｙ Ｒ ｅ ｅ ＣＲ 方 法 。 过 Ｓ Ｂ 通 Ｙ Ｒ
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PCR技术在食品动物源性检测中的应用
Ｎ Ｃ 某些肉类的同源性特点， 肉制品进行搀假 ， 对 损害广大 近年来 ，以 Ｄ Ａ为基础 的 Ｐ Ｒ技 术广泛地 被用来 鉴 消费者 的利 益 。尤其 上个 世 纪疯 牛 病 （ａ Ｏ ｉ 定食 品中 的动物 源性 ， ｍ ｄＣＷｄｓ — 由于 Ｐ Ｒ方法 比较 简便 ， 异 Ｃ 特 性和灵敏度都很高 ，国内外已经运用该技术和其他技 ｅ ｅ 羊瘙痒病的发现和流行 ， ａ） ｓ、 使得美味成为“ 死亡菜 谱 ”食 品、 品、 ， 药 饲料 中的牛源成分 和羊源 成分受到严 格限制 。这就要求 对食品 的动物源性进行严 格的品质
摘
要 ：简述 了 Ｐ Ｒ技术检测食品动物源性的基本原理和方法 ，并对近年来国 内外专门用来检 测食品动物 源性 的 Ｃ
Ｐ Ｒ 术作 了简介 ， Ｃ 技 主要 包括常规 Ｐ Ｒ 多重 Ｐ Ｒ 实时荧光定量 Ｐ Ｒ 定量竞争 Ｐ Ｒ和 Ｒ Ｐ — Ｃ Ｃ、 Ｃ、 Ｃ、 Ｃ Ａ Ｄ Ｐ Ｒ等。
关键词 ．Ｃ 动物 源性 ； 测 Ｐ Ｒ； 检
术结合建立了多种鉴别动物源性成分的方法㈣。 １ Ｐ Ｒ技术鉴定食品动物源性的方法原理 Ｃ
聚合酶链式 反应 （ｏ ｍ ｒｓ ｈｉ ａｔｎ Ｐ Ｒ） ｐｌ ｅａｅ ａ ｒ ｃｉ ，Ｃ ｙ ｃ ｎｅ ｏ
检验和鉴定， 也对我们的检测技术提出了更高的要求。
对 食品 、药 品以及饲料 产品成分进行动 物源性鉴
Ａ Ｐ ＩＡ Ｉ ＮＯ Ｃ Ｅ Ｈ Ｉ Ｕ ＯＤ Ｔ Ｃ Ｉ ＮＯ Ｈ Ｎ Ｍ ＬＯ Ｉ Ｉ ＦＦ Ｏ Ｐ ＬＣ ＴＯ Ｆ ＲＴ Ｃ Ｎ Ｑ ＥＴ Ｅ Ｅ ＴＯ ＦＴ ＥＡ Ｉ Ａ Ｒ Ｇ ＮＯ Ｏ Ｄ Ｐ
Ｇ ｎ ｄ ｎ Ｃ ｕ ｓ ｅ ｇ， ＡＮ ｎ － ｕ ＡＯ Ｄａ － ａ ， ＡＯ Ｙ － ｈ ｎ ＂Ｗ Ｇ Ｙｉｇ ｈ ａ
实时荧光PCR检测食品肉类种源的方法探讨
分析与检测1 PCR检测技术概述1.1 PCR技术简介PCR技术始于1985年，其用于特定的DNA片段的快速检测，与传统的检测方法相比，能够对特定的成分进行快速检测，并能够快速检测出目标物质中的不同成分，因此，该技术在目前的食品成分检测和致病菌检测等多方面均得到了越来越广泛的 应用[1]。
1.2 PCR技术的优势传统的成分检测环节往往需要大量的人力物力，且操作的复杂程度高，由于各种成分的生物特性和化学性质都有着一定的区别，对各个成分进行分别鉴定时，经常需要多次调整环境的pH、温度等参数，任何一个环节的失误都可能导致前功尽弃，而PCR技术的应用，有效解决了上述问题[2]。
具体来看，PCR技术主要表现出以下两方面的优点：①便利性好，与传统方法相比，PCR技术只需使用较少的设备和常规的操作步骤即可实现检测，整个过程更加便捷；②速度快，可以短期进行大量的检测[3-4]。
2 食品中肉类种源的实时荧光PCR检测2.1 实验材料2.1.1 实验试剂实验试剂包括琼脂糖、GelRed染色剂、50 bp DNA Ladder、无水乙醇、DNA提取试剂盒、DreamTaq PCR Master Mix，以及市售的牛肉卷样品和牛肉。
2.1.2 实验仪器实验仪器包括高速冷冻离心机、恒温水浴槽、涡旋振荡器、电子天平、生物分光光度计、制冰机和实时荧光PCR仪。
2.2 实验方法2.2.1 样品处理及基因组模板制备首先，采用剪刀和研钵，将所购买的样品剪碎和研磨，以进行匀质处理，其中，牛肉样品需要先在105 ℃下烘干，而后再进行均质处理。
两种样品的均质处理，应当保持一定距离，分开进行，避免交叉污染。
在均质处理步骤完成后，按照DNA试剂盒上的说明进行后续操作，以获取OD260/OD280比值处于1.7～2.0区间内的动物组织DNA。
2.2.2 引物与探针的合成及有效性验证根据Genbank所公布的基因序列，并通过Meglign软件进行对比分析，选取匹配度低和差异大的序列片段，并使用primer express2.0软件，在引物探针设计原则指导下，设计牛源成分的特异性引物和探针。
肉制品中鸭源性成分的荧光定量PCR检测研究
肉类掺假是我国食品行业的突出问题之一。近期据媒体报道，一些不法企业使用廉价的鸭肉代替 价格较高的牛肉、羊肉等肉类生产食品进行销售，严重损害了消费者的利益。相比于猪肉，鸭肉的纹 理与牛羊肉更为相似，因此使得相应的掺假具有更大的隐蔽性。对食品监管部门而言，建立快速有效 的食品中鸭源性成分检验方法，从而对此类不法行为进行监管已十分必要。 以 PCR 技术为基础的种属检测技术已是食品中肉类成分鉴别的主流技术。自从 Tartaglia 等首先
摘
要：动物源性检测技术是对肉制品掺假进行监管的有效手段，但国内尚未有基于荧光定量PCR技术的
食品中鸭源性成分检测方法的报道。 本研究根据鸭线粒体基因组细胞色素b基因中的保守序列设计了鸭特异 性引物和Taqman探针，建立了肉制品中鸭源性成分定性和定量检测的荧光定量PCR技术。经验证，引物与 探针对于鸭源性成分的特异性良好，检测灵敏度达到1.78 pg/反应。对模板的绝对定量分析证明了该方法可 对鸭肌肉组织DNA进行准确定量。使用该技术对市售肉制品的检测发现了大量使用鸭肉假冒的牛羊肉制 品。总之，本研究建立了鸭源性成分检测的荧光定量PCR方法，为肉制品质量控制提供了有效的技术手段。 关键词：鸭源性成分；荧光定量 PCR；肉类掺假；检测方法 中图分类号：TS207.3 文献标识码：A 文章编号：
2012-12-05
肉制品中鸭源性成分的荧光定量PCR检 测研究
张驰 1, 2*，邱皓璞 2，张筠 3
(1. 东南大学生物电子学国家重点实验室，江苏 南京 3. 先声再康江苏药业有限公司，江苏 南京 210018； 210028； 2. 国家农副产品质量监督检验中心，南京市产品质量监督检验院，江苏 南京 210042 )
报道了用 PCR 方法检测饲料中的牛、羊源性成分至今[1]，大量研究报道了应用 PCR 及多重 PCR 技 术对食品中不同肉类种属的鉴别方法[2-6]。近年来，荧光定量 PCR 技术的迅速发展又将种属鉴定技术 发展到了新的高度。相比于普通 PCR，荧光定量 PCR 具备特异性好、检测自动化程度高等优势，并 使得 DNA 模板的定量检测成为可能[7-10]。然而，在鸭源性检测方面，目前国内仅有张娟等针对鸭线 粒体基因组中的特异性序列，使用 PCR 扩增、电泳检测的流程对食品中的鸭源性成分进行检测 道。 本研究设计了用于肉制品中鸭源性成分鉴定的 Taqman 荧光定量 PCR 引物与探针， 验证了方法的 特异性与灵敏度，建立了鸭源性成分的定性、定量检测方法，并对大量市售食品样本进行了鸭源性成 分的检测。 1 1.1 材料与方法 材料与试剂 TIANNamp Geromic DNA Kit 血液/细胞/组织基因组 DNA 提取试剂盒（离心柱型） 北京天根公 司；Taqman Real Time PCR 预混液 日本 TaKaRa 公司；电泳级琼脂糖 南京生兴公司；引物与荧光探 针均委托南京金斯瑞生物公司合成。 1.2 仪器与设备 7500 Fast Real-Time PCR 仪 美国 ABI 公司；Viti 96 Well PCR 仪 美国 ABI 公司；凝胶成像系统 加拿大 Bio-rad 公司；紫外分光光度计 美国 Lambda 公司。 1.3 样本总 DNA 的提取 使用离心柱式血液/细胞/组织基因组 DNA 提取试剂盒提取 50 mg 肉制品中的总 DNA。操作过程 遵照试剂盒说明书进行。将样品剪碎后于含蛋白酶 K 的细胞裂解液中消化，使用吸附柱对总 DNA 进 行吸附、洗涤和洗脱，得到纯化的样品总 DNA 溶液。测定其 OD260 数值，计算 DNA 浓度。 1.4 荧光定量 PCR 引物与 Taqman 探针设计 购置市售肉鸭 2 种、麻鸭 1 种、野鸭 1 种，根据 Genbank 已发表的鸭（Anas platyrhynchos）线粒 体基因组序列（HM010684.1）设计用于扩增鸭细胞色素 b 基因 813 bp 部分序列（61-873）的通用引 物 ， 正 向 引 物 序 列 为 ATCAACAACTCCCTAATCGA （ 5’-3’ ）， 反 向 引 物 序 列 为 GATTGACCGCAGGATGGCGTAG（5’-3’） 。分别提取不同品种鸭肉的总 DNA 作为模板，于 ABI Viti 96 Well PCR 仪上对目标序列进行扩增。反应体系为 20 μL，包含 Takara PCR Master Mix（2×）10 μL、 通用引物（10 μM）各 1μL、模板（10 μg/μL）1μL。反应条件为：95 ºC 预变性 3 min；30 个循环的 95 ºC 30 s、50 ºC 30 s、72 ºC 1 min；72 ºC 7 min。反应产物全部进行 1%琼脂糖凝胶电泳，使用胶 回收试剂盒对 813 bp 处的条带进行回收纯化并委托测序。 分别将各品种鸭肉的测序结果进行比对，选择各个品种间完全一致的约 700 bp 序列，使用 ABI Primer Express 软件设计 Taqman 荧光定量 PCR 引物和探针。将设计的各组引物所扩增的目标序列分 别与牛、猪、绵羊、山羊等常见畜肉以及鸡、鹅、鸽等常见禽肉已发表的细胞色素 b 同源序列进行比 较，选取目标序列的关键位点（引物近 3’端结合位点、探针近 5’端结合位点）在鸭和各对照物种 间均存在 3 个以上不同碱基的一组引物与探针作为鸭源性检测的特异性引物和探针（图 1） 。正向引 物 D1 序 列 为 GGCCTCCTACTGGCTATGCA （ 5’-3’ ）， 反 向 引 物 （ 5’-3’ ） ， 探 针 序 列 D2 序 列 为 DP 为 GAGTCAGCCATATTGGACGTTT
《利用PCR和电泳技术检测食品中的动物源性成分》说课稿(全国实验说课大赛获奖案例)
《利用PCR和电泳技术检测食品中的动物源性成分》说课稿一、使用教材：本实验选自人教版高三生物选修一生物技术实践模块专题5：DNA与蛋白质技术课题2：多聚酶链式反应扩增DNA片段以及课题3：血红蛋白的提取和分离二、实验器材：仪器：离心机、水浴锅、PCR仪、电泳仪、微波炉、凝胶成像仪、微量可调移液器、冰箱耗材：1.5ml小指管、PCR管、枪头试剂：组织DNA提取试剂盒、无水乙醇、引物、PCR Mix（包含DNA复制的原料、Taq酶、缓冲液等）、DNA Marker、SYBR核酸染料、琼脂糖、TAE电泳缓冲液三、实验创新要点/实验改进（一）材料改进1. 选取肉类做实验材料，可选择的种类丰富、容易获取且易于提取DNA (即使是高温加工过的熟肉都能提取得到完整的DNA)。
2. 本实验所选取的5对引物特异性较好，扩增效果稳定。
（二）方案改进1. 将PCR实验与DNA电泳实验整合到一起，让PCR结果的检测更加准确和直观。
2. 本实验以问题串的形式提出各种可能的实验结果，引导学生分析如何设置对照来解决实验过程中遇到的这些问题，从而明白设置阴性、阳性和空白对照的必要性，排除假阳性和假阴性的干扰，让实验结果更加准确有说服力。
3. 实验最初设想来自于学生，学生亲历“发现问题→提出假说→设计实验→实施实验→得出结论”的整个过程，体会并学会用生物学原理解决实际生活问题。
四、实验原理利用引物与模板特异性结合的原理，通过设计特异性引物可以对特定的DNA片段进行扩增。
生物大分子带负电，在电场中会迁移，在琼脂糖凝胶中迁移的速度与分子量的大小成正相关，所以可以将不同大小的DNA片段进行区分，再与标准DNA进行比对，大致估测出待测DNA的片段长度。
五、实验教学目标1. 学生结合生物体中DNA复制过程以及生物大分子的特性说出PCR技术和电泳技术的基本原理，进一步加深结构与功能密切联系的生命观念。
2. 学生从引物与模板的特异性结合角度分析，得出利用PCR和电泳技术对生活中未知来源肉类进行分子鉴定的机理，培养科学思维。
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收稿 日期 ：０ ６ １— ６； 回 日期 ：０ ７ Ｏ — ６ ２０ 一 ０ １ 修 ２ ０ 一 Байду номын сангаас ２ 基 金项 目： 科技 部重 要技术 标准 专项 （０ ２ Ａ ０ Ａ ５ ０ ） 甘肃省 ２０ Ｂ ９ ６ ２ — ８ ； 人事厅 ５５人 才科研项 目（ ３ ３ ２ １ ５ ０ ３０ ６ ０ ）
针 对禽 类动物的特异性扩增 引物 。通过聚合酶链 式反应从禽类样品 中得到 大约 ２０ｂ ０ ｐ的特异条带 ，而参考物 种
牛、 、 、 、 羊 马 驴 鱼和 空白对照则无此条 带 ， 明该 引物只 对禽类有特 异性， 说 能将禽 类与牛 、 、 驴 、 羊 马、 鱼区分开来 。
通 过 测 序 对 扩 增 产 物 进 行 验 证 ， 果 表 明 ： 类 组 织 的 Ｐ Ｒ 产 物 序 列 与 基 因库 中检 索 到 的 相 应 序 列 相 吻 合 。建 立 结 禽 Ｃ
急 促 、 播 迅 速 、 染 谱 广 、 行 范 围 大 ， 些 情 况 传 感 流 某
下 可 引起禽 类 的大 批死 亡 。２ ０ ０ ４年 以来 ， 随着数 个
工作 ， 强和研究监控 畜禽类 肉食 品及其饲料 动物源 加 性产 品安全 监测技术在世界各 国越来越受到重视Ｉ ４ ］ 。 针对 目前我 国畜 禽类 肉食 品 和饲料 市场 贸易 中 畜 禽 源性 成 分 检 验 检 疫 中的 迫 切 需 要 和 关 键 性 技 术， 本试 验开 展 了 Ｐ Ｒ技 术检 测饲 料 中禽 类源 性成 Ｃ 分 的研究 。为鉴 别 饲料 中禽类 源 性 成分 提供 实 用 、
２深 圳检验检 疫局 动植 食 中心 ， 东 深圳 ５ ８ １） ． 广 １０ ０
摘 要 ：据 禽 类 （ 子 、 、 、 、 鹑 、 鸟 、 鸪 ） 粒 体 Ｄ ２ＲＮＡ 基 因 中 的 保 守序 列 ， Ｐｉ ｒ． 计 鸽 鸡 鸭 鹅 鹌 鸵 鹧 线 ＮＡ １ｓ 用 ｒ ５ ｍｅ ０设
境 和 市 场 的 畜 禽 类 肉食 品 、 料 及 其 商 品 的检 验 检 疫 饲
是 由 Ａ型 流感 病毒 所 引起 的禽 类 一种 急性 、热 性 、 高度 接触 性传 染 病…， 临床 特征 为 高热 、 吸 困难 以 呼 及 其它 各 系统程度 不 同的症状 。其 流行特 点 为发病
ｏ Ｂ— ８ ｃ ｌ ｍｎ ｗｉ ％ ａ ｅｉ ｃｄ ａ ｕ ｏ ｓ ｓ ｌ ｔ ｎ ：ｍｅｈ ｎ ｌ ｆ６ ４ １ａ ｈ ｂ ｌ ｈ ｓ ．Ｕｎ ｅ ｐｉ ｍ ｎ Ｓ Ｃｌ ｏｕ ｔ ｌ ｈ ｃ ｔ ａ ｉ ｑ ｅ ｕ ｏｕ ｉ ｃ ｏ ｔ ａ ｏ ０：０ ｓ ｔｅ ｍｏ ｉｅ ｐ ａ ｅ ｄ ｒｏ ｔ ｍｕ
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２０ ０ ８讧 弱 ４ ４卷 第 １麟 １
应 用 Ｐ Ｒ技术检 测禽类源 性成分 Ｃ
张慧 霞 ， 建平 ， 卉 ， 利平 吴 宗 张 （ ． 肃农 业 大学动物 科 学技 术 学 院， 肃 兰州 ７ ０７ ； １ 甘 甘 ３ ００
了 一种 检 测 禽 类 动 物 源 性 成 分 的 Ｐ Ｒ 方 法 ， 方 法检 测 的 灵敏 度 为 ０１ Ｃ 该 ． ％。
关 键 词 ： 测 ； 类 源 性 成 分 ； 合 酶 链 式 反 应 ； 粒 体 ＤＮＡ 检 禽 聚 线 中 图 分 类 号 ： ８ ３１ ￥ １． 文 献 标 识 码 ：Ｂ 文 章 编 号 ：２ ８ ７ ３ （ ０ ８ １ — ０ ６ ０ ０ ５ — ０ ３ ２ ０ ）１ ０ ４ — ３
作 者 简 介 ： 慧霞 （９ ５ ）女 ， 肃 Ｉ 人 ， 牧 师 ， 读 博 士研 究 生 张 １６ 一 ， 甘 临洮 畜 在
通讯作者
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有 效 的分子 生物学 方法 。 １ 材 料与 方法
１１ 材 ． 料
国家 高致 病性禽 流感 的相 继发生 ，除鸡 以外 已波及
到人 、 天鹅 、 等 ， 猫 因感染禽 流感而致 死 的人数 不断增
加 ，禽 类 肉食品及 饲料 的安 全性 已关 系到 人类 的安
危 。 禽 流感（Ｉ 国际兽疫局（ Ｉ） Ａ） 被 ０ Ｅ定为 Ａ类传染 病 ，
禽 流行 性感 冒简称 禽流 感 ｆ ｉ ｆ ｅｚ， Ｉ， ａ ａ ｉ ｌ ｎａ Ａ ） ｖ ｎ ｎｕ
并 被列入 国际生物 武器公约动物类 传染病名单 Ｉ ２ 】 。我 国农 业 部也将 其列 为一类 传染 病Ｉ ３ Ｊ 。 世界各 国政府 大多将食 品安 全 、 饲料安 全视 为 国 家公 共 安全 ， 并纷 纷加 大监管力 度 ， 特别 是加强 出入