抗体基础知识
免疫学中一抗和二抗的概念
免疫学中一抗和二抗的概念免疫学是研究机体如何识别、记忆和抵御外来物质（例如病菌、病毒等）的科学。
在免疫学中，一抗和二抗是两个基本概念，它们都是指免疫反应中用于检测特定抗原的抗体。
抗体是由机体免疫系统产生的一类蛋白质分子，具有高度的特异性。
抗体可以与抗原结合形成抗原抗体复合物，并通过多种途径参与到免疫反应中。
抗体通常由免疫细胞（如B细胞）产生，具有抗生成细胞宿主的外来物质（抗原）能力。
抗体的主要功能是中和病原体、沉淀抗原和激活免疫细胞等。
一抗和二抗是用于检测特定抗原的两种抗体。
一抗是指第一次与特定抗原接触后产生的抗体，也称为原抗体。
一抗可以直接与抗原结合，并标记有荧光染料或酶等，从而用于免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫组织学等实验中。
一抗通常具有较高的亲和力和较低的特异性，因此在实验过程中常常需要进行其他步骤来增强信号和减少非特异性背景。
在实验室中，一抗的使用通常需要结合二抗来完成。
二抗是指与一抗反应的抗体，也称为反人类抗体。
二抗可以与一抗结合形成复合物，从而将一抗与荧光染料或酶等标记的检测物（通常是其他抗体）连接起来。
这样，当一抗与目标抗原结合后，通过二抗的作用，可以将标记物与抗原非常特异地连接在一起，从而实现对特定抗原的准确定位和检测。
在常见的免疫组织化学实验中，通常使用的二抗是兔抗小鼠或鼠抗兔。
兔抗小鼠是指兔子产生的抗小鼠抗体，鼠抗兔是指小鼠产生的抗兔抗体。
这两种抗体与一抗结合后，可以通过二抗的反人类抗体力来增强一抗与抗原之间的结合，从而提高检测的灵敏度和准确性。
总结一下，一抗和二抗是免疫学中用于检测特定抗原的抗体。
一抗是第一次与抗原接触后产生的抗体，用于直接与抗原结合并进行标记。
二抗是与一抗反应的抗体，用于将一抗与标记物连接起来，从而实现对特定抗原的准确定位和检测。
一抗和二抗在免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫组织学等实验中广泛应用，提高了免疫反应的检测灵敏度和准确性。
【医学基础知识复习资料】免疫学-免疫球蛋白(IgG)的生物学活性
【医学基础知识复习资料】免疫学-免疫球蛋白（IgG）的生物学活性不同Ig其合成部位、合成时间、血清含量、分布、半衰期以及生物学活性有所差别。
今天医疗考试研究院总结出医学基础知识复习资料中关于免疫球蛋白(IgG)的生物学活性。
IgGIgG主要由脾、淋巴结中的浆细胞合成和分泌，以单体形式存在。
在个体发育过程中机体合成IgG的年龄要晚于IgM，在出生后第3个月开始合成，3～5岁接近成年人水平。
IgG是血清中主要的抗体成分，约占血清总Ig的75%。
根据IgG分子中链抗原性差异，人IgG有4个亚类：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4(小鼠4个亚类是IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3)。
其中IgG3 3铰链区含有62个氨基酸残基，具有4个重复1铰链区(15个氨基酸残基)的串连结构，重链间二硫键数量多，约10～15个，因此易被蛋白酶裂解，半衰期也较短。
不同IgG亚类的生物学活性有所差异。
IgG的半衰期相对较长，约为20～30天。
IgG可典型途径活化补体，其固定补体的能力依次是IgG3 IgG1 IgG2,在小鼠为IgG2b IgG2a IgG3，人的IgG4和小鼠的IgG1无固定补体的能力。
IgG 是唯一能胎盘的Ig，在自然被动免疫中起重要作用。
此外IgG还具有调理吞噬、ADCC和结合SPA等作用。
由于IgG上述特点，IgG在机体免疫防护中起着主要的作用，大多数抗菌、抗病毒、抗毒素抗体都属于IgG类抗体。
应用对麻疹、甲型肝炎等有免疫力的产妇或正常人丙种或胎盘球蛋白可进行人工被动免疫，能有效地预防相应的传染性疾病。
不少自身抗体如抗甲状腺球蛋白抗体、系统性红斑狼疮的LE因子(抗核抗体)以及引起Ⅲ型变态反应免疫复合物中的抗体大都也属于IgG。
抗体有关知识点总结
抗体有关知识点总结抗体的结构抗体是一种由两个重链和两个轻链组成的Y形结构的蛋白质，通过二聚体的复合结构来组成。
每一个抗体单体都由两个相同的轻链和两个相同的重链组成。
抗体的结构使得它具有高度的特异性和亲和性，能够识别和结合特定的抗原。
抗体的功能抗体具有多种功能，包括：1. 中和病原体：通过结合细菌或病毒的表面蛋白，阻止其进入宿主细胞，从而中和病原体的活性。
2. 促进炎症：通过激活免疫细胞来促进炎症反应，引导免疫细胞识别和清除病原体。
3. 细胞毒性：一些抗体可以直接识别并杀死肿瘤细胞或感染的细胞。
4. 沉淀和凝集：通过结合抗原分子，促使其沉淀或凝集成大片的结构，以便免疫细胞更容易识别和清除。
5. 促进吞噬作用：通过结合细菌或病毒，促进免疫细胞对其吞噬和消化。
抗体的种类在人体中，有五种主要的抗体类别，即IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
每一种抗体类别在结构和功能上都有所不同，具有不同的免疫功能。
1. IgG：在体液免疫中起主导作用，可以穿过胎盘，提供给胎儿 passively acquire 免疫力，也能识别多种外来抗原并参与清除。
2. IgM：是最早产生的抗体，其特殊结构使其能够高效地激活免疫细胞，并被用于识别未被体内其他抗体识别的病原体。
3. IgA：主要分布在黏膜表面和分泌物中，对阻止病原体从黏膜进入体内起重要作用。
4. IgD：其功能尚不完全明确，被认为作为B细胞的受体，参与体液免疫。
5. IgE：在过敏反应和对抗寄生虫感染中发挥作用，可以激活肥大细胞和嗜碱细胞释放过敏原物质。
抗体的产生抗体的产生是通过B细胞和T细胞的共同作用来实现的。
当身体遭遇病原体时，B细胞会被激活并开始分化为浆细胞，浆细胞则会产生和释放抗体。
T细胞则可以辅助B细胞产生更具特异性和亲和性的抗体。
这一过程是体内免疫系统对抗感染和疾病的重要手段。
抗体在临床医学中的应用由于抗体的高度特异性和亲和性，目前已经开发出了多种用于临床诊断和治疗的单克隆抗体，例如用于癌症治疗的免疫治疗药物，以及用于某些自体免疫疾病和传染病的免疫球蛋白预防治疗。
生物人教版高中必修3 稳态与环境《高中生物课本中“抗体”知识的梳理》
高中生物课本中“抗体”知识的梳理本专题以抗体为出发点，联系了高中教材中多个章节的知识点，如免疫、遗传的物质基础、生物膜系统及细胞工程、动物代谢知识等。
以该知识点为专题进行复习，不仅可以进一步熟知教材中的相关知识点，加强对课本知识的横纵向联系，使知识更加系统化，而且对于培养分析、综合、应用等能力有一定的帮助。
一、知识体系：二、知识解析：（一）抗体的定义：●产生：抗体是机体受到抗原刺激后产生的●特性：能与该抗原发生特异性结合●功能：具有免疫功能●化学本质：球蛋白（可用双缩脲试剂进行鉴定，产生紫色反应）（二）抗体的结构：组成抗体的基本元素是C、H、O、N等，由各种化学元素组成基本单位――氨基酸，各种氨基酸通过缩合方式形成肽链，抗体是由4条肽链构成的蛋白质，4条肽链通过一定的化学键连接，再折叠、盘曲形成的空间结构就是抗体。
（三）抗体的合成与分泌：1．抗体是分泌蛋白，其合成及分泌是在体液免疫的反应阶段进行的，合成部位是在效应B细胞内的粗面内质网上的核糖体上，与其合成及分泌相关的细胞器有核糖体、内质网、高尔基体、线粒体（注意掌握各细胞器所起的作用）；其合成及分泌的途径是：核糖体→内质网→高尔基体→细胞膜→胞外，分布到血清、组织液、外分泌液（如唾液、泪、尿、乳汁等）中；该物质出细胞的方式为外排作用。
2．抗体的合成要受到相应基因的控制，控制其合成的基因为真核细胞基因，其结构包括编码区和非编码区，非编码区对编码区的表达起调控作用，编码区包括内含子和外显子。
3．基因控制抗体的合成包括转录和翻译过程。
（场所、原料、条件、过程等）1．定义：由单个B细胞经多次无性繁殖（即克隆）形成的细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体（特点）。
2．相关技术手段：动物细胞融合、动物细胞培养3．制备过程：详见本文第一部分“知识体系”注：在单克隆抗体的制备中要涉及到两次筛选，两次筛选的目的是不同的：（1）第一次筛选：B淋巴细胞在与骨髓瘤细胞融合后可得到三种类型的融合细胞，即B淋巴细胞与B淋巴细胞融合成的融合细胞、B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合成的融合细胞，第一步筛选的目的是从三种融合细胞中把杂交瘤细胞筛选出来。
初中生物免疫知识点汇总
初中生物免疫知识点汇总免疫是人体自身防御疾病的重要系统，而初中生物课程中也涉及了一些与免疫有关的知识点。
本文将对初中生物免疫知识点进行汇总，以帮助学生更好地理解这一重要概念。
1. 免疫的基本概念免疫是指机体对抗自身外来的异质物质，如细菌、病毒和其他有害物质的一种防御响应。
它由免疫系统来完成，包括非特异性免疫和特异性免疫两种。
2. 非特异性免疫非特异性免疫是指对各种病原体的普遍防御机制，无论它们是什么样的病原体。
这种免疫通过皮肤、粘膜、胃酸、酶等方式提供屏障，以防止病原体进入机体；然后通过炎症反应、发热等方式增强抵抗力。
3. 特异性免疫特异性免疫是指对特定抗原产生特异性防御响应的免疫。
这种免疫需要时间来建立，但一旦建立，就可以产生持久的免疫记忆。
特异性免疫包括细胞免疫和体液免疫两种。
4. 细胞免疫细胞免疫是通过T细胞来进行的。
当抗原进入机体后，它会被抗原提呈细胞（如巨噬细胞）处理并呈递给T细胞。
激活的T细胞会分化为效应T细胞和记忆T细胞，效应T细胞直接杀伤感染细胞，记忆T细胞则保持对抗原的记忆，以便下一次遭遇相同抗原时作出更迅速的反应。
5. 体液免疫体液免疫是通过B细胞和抗体来进行的。
B细胞在遇到抗原后会分化为浆细胞，浆细胞能够产生大量的抗体来与抗原结合。
抗体能够识别病原体并引发一系列反应，例如中和病毒、凝集细菌、激活补体系统等。
6. 免疫记忆免疫记忆是指当机体再次遭遇相同抗原时，免疫系统对其作出更迅速、更强烈的反应。
这是由于记忆B细胞和记忆T细胞储存了先前的免疫经历，因此不需要重新建立免疫应答。
7. 疫苗接种疫苗接种是预防疾病的重要手段之一。
疫苗是经过处理的抗原，它可以激发免疫系统产生抗原特异性的免疫应答，但不会引起严重的疾病症状。
通过接种疫苗，机体可以建立起免疫记忆，以防止将来遭遇相同病原体时引发严重的感染。
8. 自免疫病自免疫病是指机体免疫系统对自身组织产生错误的免疫应答，导致对自己的组织发生损伤。
抗体偶联药物基础知识
抗体偶联药物基础知识
抗体偶联药物（antibody-drug conjugates，简称ADCs）是一种结合了单克隆抗体和载药物的复合物。
其工作原理是通过特异性识别靶向细胞表面的抗原，将药物直接传递给目标细胞，从而提高药物的靶向性和疗效。
ADCs的结构通常由三部分组成：单克隆抗体、连接剂和药物。
单克隆抗体可以特异性地结合在肿瘤细胞表面的抗原上，从而使ADCs能够选择性地识别和结合目标细胞。
连接剂则用于将药物与抗体连接起来，常见的连接方式有化学偶联、放射性标记或基因工程技术等。
药物部分则是ADCs的主要疗效成分，常见的药物包括化疗药物、毒素、放射性物质等。
ADCs的优势在于提高了药物的靶向性和疗效，并减少了对正
常细胞的毒性。
相比传统化疗药物，ADCs可以更精确地靶向
肿瘤细胞，并释放药物以发挥治疗效应。
此外，ADCs还可以
通过抗体的FC端与免疫系统相互作用，促进免疫细胞介导的
抗肿瘤效应。
然而，ADCs也面临一些挑战和限制。
制备ADCs的过程相对
复杂，需要确保抗体、连接剂和药物之间的稳定性和正确配比，以及避免抗体的免疫原性。
在临床应用方面，ADCs可能面临
药物耐受性、药物代谢和排泄问题，以及药物达到肿瘤细胞内部的难题。
尽管存在一些挑战，ADCs仍然被广泛应用于肿瘤治疗领域，
并被认为是一种有潜力的治疗方法。
随着对ADCs的进一步研究和技术改进，相信其在肿瘤治疗中的应用前景将会更加广阔。
临床医学检验基础知识讲解抗核抗体检测方法
临床医学检验基础知识讲解抗核抗体检测方法抗核抗体是一种特殊的抗体，其免疫球蛋白IgG/IgM与人体组织细胞核及核抗原结合，形成免疫复合物，参与一系列免疫反应，可在多种自身免疫疾病中产生。
抗核抗体检测是临床自身免疫病的重要辅助诊断方法之一抗核抗体检测根据机制可分为免疫荧光法和酶联免疫吸附试验（ELISA）两种类型。
免疫荧光法是常用于抗核抗体检测的方法之一、其原理是将待测血清与包含有抗人IgG的间接荧光抗体相混合，再与已知含有荧光标记的DNA 等抗原结合，形成免疫复合物，通过荧光显微镜观察荧光信号来确定有无抗核抗体。
这种方法准确性高，敏感性和特异性较好，但病原学意义不明确的成分多，存在一定误诊率。
酶联免疫吸附试验（ELISA）是另一种常用于抗核抗体检测的方法。
其原理是将待测血清与包含有抗人IgG/IgM的酶标抗体相混合，再与已知含有核抗原的试剂结合，形成免疫复合物。
之后通过加入底物，观察酶活性的变化判断是否存在抗核抗体。
ELISA法具有灵敏度高、特异性好、成本低等优势，被广泛应用于临床诊断。
抗核抗体主要是用于自身免疫性疾病的辅助诊断，如系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合征、混合性结缔组织病等。
在系统性红斑狼疮的诊断中，抗核抗体是最为重要的指标之一，其阳性率可高达70-90%。
抗核抗体与系统性红斑狼疮的病情活动度、器官损伤程度相关，故抗核抗体的检测对于系统性红斑狼疮的早期诊断、病情监测和预后评估具有重要意义。
此外，抗核抗体的检测也可用于其他自身免疫性疾病的辅助诊断。
例如，干燥综合征的抗核抗体阳性率为40-70%，混合性结缔组织病的抗核抗体阳性率为60-80%。
通过抗核抗体的检测，可以帮助医生了解疾病的类型、活动程度和预后，并指导临床治疗。
需要注意的是，抗核抗体检测结果需要综合临床症状、体征以及其他实验室检查结果来进行综合分析和判断。
因为抗核抗体的检测结果并不是特异性的，有时可能出现假阳性或假阴性结果。
抗体的名词解释微生物学
抗体的名词解释微生物学在微生物学领域，抗体是研究免疫系统的关键组成部分。
抗体，也称免疫球蛋白，是机体免疫系统中一类具有高度特异性的蛋白质。
它们由免疫细胞分泌，并在机体中起到识别、结合和中和外来病原体的作用。
一、抗体的基本结构抗体是由两个基本结构单元组成的，即重链和轻链。
其中，重链分为四种类型：IgG、IgM、IgA和IgE，轻链分为两种类型：κ链和λ链，这些基本结构单元将不同组合形成丰富多样的抗体。
抗体还具有“Y”字形的三维结构，其中“Y”字的两端为抗原结合位点，而“Y”字的顶端则是抗体的效应位点。
二、抗体的功能抗体具有多种功能，对于攻击和保护机体免受外来微生物的侵害起到了重要作用。
首先，抗体能够通过识别外来微生物表面的抗原决定簇结合到病原体上，从而标记该病原体以便免疫系统进一步处理。
其次，抗体还能激活免疫系统中的巨噬细胞、自然杀伤细胞和补体系统等，引发炎症反应和细胞毒性作用，以消灭病原体。
此外，抗体还能参与免疫记忆和免疫调节等免疫过程，对于维持机体内部的免疫平衡起到重要作用。
三、抗体的产生抗体的产生主要依赖于机体的免疫细胞，特别是淋巴细胞。
当机体受到外来病原体感染时，抗原会被呈递到淋巴组织中的抗原呈递细胞上，这些抗原呈递细胞会将抗原信息传递给免疫细胞。
免疫细胞中的B淋巴细胞随即被激活，并开始产生和分泌抗体。
这一过程被称为体液免疫应答，产生的抗体会迅速进入血液循环，通过对病原体进行中和，起到阻止病原体侵入和扩散的作用。
四、抗体的应用抗体不仅在免疫系统中起到重要作用，在医学和生物工程等领域也具有广泛应用。
例如，抗体可以用于诊断某些病原体感染，通过检测抗体水平来判断是否感染。
此外，抗体还可以用于治疗某些疾病，如恶性肿瘤。
在生物工程领域，科学家们利用重组技术生产抗体药物，以满足临床上的需求。
五、抗体研究的发展随着科学技术的不断发展，抗体研究也在不断深入。
科学家们通过对抗体结构和功能的深入了解，不断探索新的抗体工程方法，以提高抗体的亲和力和特异性。
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School of Medicine
教案首页
第 次课
授课时间 年 月 日
课程名称 免疫学检验 年 级
教师
张荣波
专业技术 职务
教案完成时间： 年 月 日
专业、层次
医学检验（本科）
授课方式 （大、小）
大 学时 4
授课题目（章、节）
第四章 单克隆抗体与基因工程抗体节 杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞后同时保持两者的主要特 征。当两个细胞紧密接触时候，其细胞膜可能融合在一起。融合细胞含有 两个不同的细胞核，称为异核体(heterokaryon)，产生具有原来两个细胞
基因信息的单个核细胞，称为杂交细胞(hybid cell)，包括 B 淋巴细胞杂 交细胞和 T 淋巴细胞杂交细胞。
3
辅助手段和时间 分配备注
基本内容
第三节 基因工程抗体技术 随着基因工程技术的崛起以及抗体分子遗传学的深入研究，应用基因 工程抗体改造现有优良的鼠单克隆抗体的基因，尽量减少抗体中的鼠源成 分，保留原有的抗体特异性，从而创造出新型抗体．基因工程抗体。 一、人源化抗体 人源化抗体以基因克隆及 DNA 重组技术改造将鼠源性单克隆抗体使其 大部分氨基酸序列为人源序列所取代，既保留了亲本鼠克隆抗体的亲合力 和特异性，又降低了鼠单克隆抗体的异源性。 (一)人一鼠嵌合抗体 人一鼠嵌合抗体是通过基因工程技术将人 IgC 区与鼠 IgV 区连接，导 入细胞内表达制备的抗体称为嵌合抗体。人一鼠嵌合抗体的特异性及亲合 力与亲本鼠单克隆抗体等同，但在人体内的半衰期可明显延长。 (二)抗体的表面修饰 通过改变 Ig 可变区表面残基使其人源化，降低鼠可变区的异源性。将 亲本鼠单克隆抗体 Fv 段表面暴露的骨架区中与人不同者改为人源性，使 Fv 的表面人源化，消除其免疫原而不影响 Fv 的整体空间构象。 二、小分子抗体 将抗体分子的抗原结合部位组建成分子量较小，但具有抗原结合功能 的分子片段，称为小分子抗蠢小分子抗体具有以下特点：可在大肠杆菌等 原核细胞表达生产成本降低；易于穿透血管或组织到脚胞部位，有利于疾 病的治疗；不含 Fc 段，副作用小；半衰期短，有利于毒素中和及清除。其 包括： （一）Fab 由一条完整的 L 链和一条约 1/2 的 H 链组成，只有一个抗原结合位点。 （二）Fv 和单链抗体（ScFv） Fv 由 VH 和 VL 构成，是抗体分子中保留抗原结合部位的最小功能片段。 把 VH 和 VL 用一段适当的寡核苷酸分子连接起来，使之表达为单一的肽链， 称为 ScFv。 （三）单区抗体及最小识别单位 单独重链可变区（VH）仍可保留相当程度抗原结合能力，其作用比 VL 大，称为单区抗体。
胞；另一方则是具有永生性的肿瘤细胞，选择同一体系的细胞可增加融合 的成功率。浓度为 40％(W／V)的聚乙二醇 PEG1000~2000)是目前最常用的 细胞融合剂。
（二）选择培养基的应用 细胞融合是一个随机的物理过程。经融合过程后细胞将有多种形式出 现，须进行特别的筛选得到融合的脾细胞与瘤细胞。
HAT 培养基应用原理：细胞的 DNA 合成一般有两条途径。主途径 是由糖和氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，进一步合成 DNA。叶酸作 为重要的辅酶参与这一合成过程。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶 核苷存在下，经次黄嘌呤磷酸核糖转化酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK) 的催化作用合成 DNA。氨基蝶呤是叶酸的拮抗剂。当氨基蝶呤存在时，能阻 断瘤细胞核酸（DNA）合成的主要途径。
二、T 淋巴细胞杂交瘤 T 淋巴细胞杂交瘤主要分为小鼠 T 细胞杂交瘤和人 T 细胞杂交瘤，由于 T 细胞功能的多样化，制备出的 T 细胞杂交瘤也各有其特性。如有可分泌各 种淋巴因子的 T 细胞杂交瘤；具有特异性杀伤功能的 T 细胞杂交瘤；能够 分泌 T 细胞抑制因子的特异性 T 细胞杂交瘤及自身反应性 T 细胞杂交瘤等。 其基本过程是将激活的 T 细胞与酶缺陷型 T 淋巴瘤细胞融合，通过有 限克隆稀释，可获得特异性表达 T 细胞受体(TCR)或其他功能的杂交瘤 T 细 胞。在技术要求上，其细胞融合、培养过程和 T 细胞胞杂交瘤的建立，基 本上与相应的 B 细胞杂交瘤技术相同。所不同的是细胞激活和阳性克隆筛 选较为复杂，T 细胞杂交瘤的稳定性不及 B 细胞杂交瘤，使其技术和应用受 到限制。主要步骤如下： 1．淋巴瘤细胞系的选择 作为融合用的瘤细胞要求有以下特性：①在体外能无限、快速生长； ②融合率高；③不分泌淋巴因子和杀伤功能；④缺乏某一特异性的 T 细胞 表面抗原或受体；⑤ HGPRT 酶缺陷型等。 2．特异性 T 细胞的制备与活化 主要有可溶性抗原诱导激活的 T 细胞、同种反应性 T 细胞和人的特异性 T 细胞等。 3．T 细胞杂交瘤的筛选 通常在含有 HAT 选择培养的基础上，亦可根据融合两亲本细胞特性选用 不同的方法。
教学重点、难点： 重点：熟悉制备单克隆抗体的基本技术；基因工程抗体的制备技术。 难点：杂交瘤技术的基本原理及 HAT 培养基的筛选机制
教研室审阅意见：
（教研室主任签名） 年月 日
基本内容
由一个仅识别一种抗原表位的 B 细胞克隆产生的同源抗体，为单克 隆抗体（McAb）。其理化性状高度均一，抗原结合部位和同种型都相同，生 物活性专一，特异性强，纯度高，有效抗体含量高，无效蛋白含量少，易 于实验标准化和大量制备。单克隆抗体在医学领域中有广泛的应用。基因 工程抗体(genetic engineering antibody)又称重组抗体，在充分认识 Ig(immunoglobulin)的基因结构和功能基础上，应用 DNA 重组和蛋白质工 程技术，按人们的意愿在基因水平上对编码 Ig 分子基因进行切割、拼接与 修饰等，并导入受体细胞，使之表达出新型抗体分子。该抗体保留了天然 抗体的特异性和主要生物学活性，减少或去除了无关结构，更接近人的 Ig， 具有更广泛的应用前景。
在细胞融合后，须经筛选去除无关细胞融合体。一是融合细胞的抗体 筛选，将融合细胞进行充分稀释，使分配到培养板的每一个孔中的细胞数 在理论上是一个，实际可能是 0 至数个，培养后取上清液以 ELISA 筛选出 特异性抗体高分泌性细胞，这一过程称为克隆化；二是将这些阳性细胞株 再克隆化，以 ELISA 重复检测，将阳性孔细胞株进行增殖，再进行冻存， 体外培养或动物腹腔接种。
（教案续页） 辅助手段和时间 分配备注
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基本内容
三、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养 为确保单克隆抗体的专一性及避免其他阴性细胞对其生长的影响，必
须将阳性的杂交瘤细胞进行单细胞分离培养，产生单克隆杂交瘤细胞，经 反复 2～3 次检测上清液均为阳性的杂交瘤单个细胞才能进行克隆化培养。
克隆化培养后的阳性杂交瘤细胞应当及时冻存，以防止这些细胞染色 体丢失、发生变异以及细胞污染。冻存时保存液中小牛血清浓度为 20％， 再加入 10％的二甲基亚砜，最好保存在-196℃液氮中。
辅助手段和时间 分配备注
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基本内容
三、抗体融合蛋白 将抗体分子片段与其他蛋白融合，可得到具有多样性生物功能的融合 蛋白，并有多种不同的构建方式。 （一）含 Fv 段的抗体融合蛋白 将 Fv 与某些毒素、酶及细胞因子等的基因拼接，通过这些抗体的引导 可将其生物活性物质导向靶细胞特定的部位，更有效地在局部发挥生物学 功能而降低毒副反应。 (二)嵌合受体 将 ScFv 与某些细胞膜蛋白分子融合，形成的融合蛋白可表达于细胞表 面，称为嵌合受体，其抗体部分与相应抗原特异性结合。 (三)含 Fc 的抗体融合蛋白 将功能性蛋白分子细胞膜外部分与 Fc 融合后用真核细胞表达，其融合 蛋白能以 Ig 类似的方式由二硫键连接成双体，分泌到细胞外。这种功能性 蛋白分子与抗体 Fc 的融合可产生两种效果：延长在血循环中的半衰期；通 过功能性蛋白与配体分子的作用，将 Fc 的生物学效应引导至特定目标。 四、双特异性抗体 通过基因工程技术构建的小分子抗体为单价，不能使抗原抗体偶联， 将特异性不同的两个小分子抗体连接在一起则可得到双特异性抗体 (BsAb)。 (一)双特异性抗体的构建 1．双特异性抗体片段的体外构建 在小分子抗体的羧基端设计半胱氨酸残基，两个不同抗体段通过此连 接可生成双特性抗体或称为双功能抗体。 2．双特异性抗体的细胞内组建 通过对小分子抗体基因的改造修饰，使细胞直接表达双抗体分子。目 前可采用几种方法：设计促进双聚体形成的结构域；在基因构建上直接将 两个抗体分子片段融合；设计两个 ScFv 的 VH 和 VL 相互配对，可产生双价 的抗体分子等。 (二)双特异性抗体的应用 1．在免疫检测中的应用 双特异性抗体的一个臂结合靶抗原，另一个臂结合酶，应用于酶免疫 检测中，操作简化，质量提高。
（教案续页） 辅助手段和时间 分配备注
1
基本内容
细胞融合的选择培养液有三种关键成分：次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)和胸 腺嘧啶核苷(T)，所以三者取前缀缩写为 HAT 培养基。而融合所用的瘤细胞 是经毒性培养基选择出来的 HGPRT 阴性细胞株，所以不能在该培养基中生 长。只有融合细胞具有亲代双方的遗传特性，可在 HAT 培养基中长期存活 与繁殖。 （三）有限稀释与抗原特异性选择
（教案续页） 辅助手段和时间 分配备注
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基本内容
2．在肿瘤放射免疫显像中的应用 双特异性抗体一个臂结合肿瘤细胞表面抗原，另一个臂结合半抗原
螯合剂，后者选择与放射性核素结合，利用二次导向系统，增加了清晰度 和灵敏度。 3．双特异性抗体介导的药物杀伤效应
第二节 单克隆抗体的制备技术 杂交瘤技术制备 McAb 的三个基本原则：淋巴细胞产生抗体的克隆选择 学说，即一种克隆产生一种抗体；杂交瘤细胞保持双方亲代细胞的特性； 利用代谢缺陷补救机制筛选出杂交瘤细胞，并进行克隆化，然后大量培养 增殖，制备所需的各种 McAb。 一、单克隆抗体的产生 （一）动物体内诱生方法 为人体治疗、体外诊断或实验研究用单克隆抗体多采用该制备方法。 先在小鼠腹腔注射液体石蜡或弗氏不完全佐剂，1 周后将杂交瘤细胞悬液注 射腹腔，1～2 周后无菌方法抽取腹水，离心取上清液即可。 （二）体外培养法 这是实验室常用的 McAb 制备方法。将杂交瘤细胞置培养瓶中培养，收 集上清液，这种方法制备的 McAb 极为有限，但可满足绝大多数的免疫学实 验要求。另一种方法是杂交瘤细胞大量培养，有两种类型，一类是悬浮培 养系统；另一类是细胞固定化培养系统。高密度培养可使单位体积 McAb 含 量明显增加，操作简便，不受动物干扰，价格便宜，有取代动物体内诱生 的趋势。 二、单克隆抗体的纯化 目前常用的纯化方法有：盐析、凝胶过滤、离子交换层析和辛酸提取 等方法达到纯化目的，也有采用较简便的酸沉淀法。最有效的纯化法为亲 合纯化法，常用葡萄球菌 A 蛋白或抗小鼠免疫球蛋白抗体与载体交联，制 备亲合层析柱将抗体结合后洗脱，回收率可超过 90％。 三、单克隆抗体的性质鉴定 单克隆抗体分离纯化后的鉴定方法可包括：夹心型的放射免疫测定、 补体介导的溶血试验、ELISA、免疫酶染色以及玫瑰花结形成试验等。亦可 用沉淀试验和凝聚试验。现以 ELISA 方法最常用。