CytoFLEX流式细胞分析仪快速入门
beckman cytoflex流式细胞仪基本原理
beckman cytoflex流式细胞仪基本原理
Beckman Coulter CytoFLEX流式细胞仪是一种基于流式细胞术原理的仪器，用于分析和计数细胞悬浮液中的细胞。
其基本原理包括以下几个步骤：
1. 流体流动：细胞悬浮液被注入到仪器中，并通过液体系统被送入流动腔室。
流体的流动会使细胞在一个个单独的微小流速中依次通过腔室。
2. 光源激发：流过流动腔室的细胞会经过一束高能、单色的激光光束的照射。
光束能够激发细胞中存在的特定荧光分子或染料。
3. 荧光检测：被激发后，细胞会发射特定波长的荧光信号。
仪器会使用一套光学元件来收集并分离不同波长的荧光光子，然后传送到光电增强器中进行放大。
4. 光电转换：光电增强器将收到的荧光信号转化为电信号，并经过调制和放大。
5. 数据采集：经过光电转换后的信号会通过数据采集系统，数字化并存储。
这些数据会被分析软件解读并生成相关的结果和图形。
通过以上步骤，CytoFLEX流式细胞仪可以提供细胞的计数、表型分析、蛋白质表达分析以及细胞周期等信息。
同时，它还
可以通过设定门控条件来筛选出特定的细胞亚群，实现更精确的细胞分析。
流式细胞仪的使用程序
流式细胞仪的使用程序------血液病实验诊断中心一.开机程序1.检查稳压器电源,打开电源,稳定5分钟。
2.打开储液箱,倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS 或FACSFlow),合上压力阀。
确实盖紧桶盖,检查所有管路是否妥善安置。
3.将FACSCalibur开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5-10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印,打开打印机电源。
5.打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器PRIME功能一次,以排除Flow cell中的气泡。
7.分析样品时,先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后,每次开机后需冲洗管道:向分选装置上装上两个50ml离心管,不接通浓缩系统,摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置,同上法冲洗一次。
二.预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1.从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗,可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot,绘出一个或多个Dot Plots(点图)。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源,并确定适当的x 轴和y轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的Histogram,同上法可绘出Histogram(直方图)。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中,下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件:ACQ和EXP,储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中,ACQ用于细胞DNA检测, EXP用于细胞表面标志分析。
贝克曼cytoflex参数
贝克曼cytoflex参数摘要：1.贝克曼cytoflex 简介2.贝克曼cytoflex 参数详解3.贝克曼cytoflex 参数的应用领域4.贝克曼cytoflex 参数的优缺点分析5.总结正文：【贝克曼cytoflex 简介】贝克曼cytoflex 是一款流式细胞仪，广泛应用于细胞生物学、免疫学、生物医学等领域。
其独特的设计理念和高精度的测量技术，使得它在科研和临床检测中具有重要的作用。
【贝克曼cytoflex 参数详解】贝克曼cytoflex 的参数主要包括以下几个方面：1.激光器参数：贝克曼cytoflex 使用的是空气冷却式激光器，具有高效率、低噪声的优点。
其激光波长范围覆盖了350-800 nm，可以满足大部分细胞测量的需求。
2.检测器参数：贝克曼cytoflex 采用的是光电二极管阵列检测器，具有高灵敏度和快速响应的特点。
其检测范围覆盖了280-850 nm，可以实现对细胞各个通道的精确测量。
3.细胞分类参数：贝克曼cytoflex 具有多种细胞分类模式，可以根据细胞大小、形状、荧光强度等特征对细胞进行分类。
4.数据处理参数：贝克曼cytoflex 具有强大的数据处理功能，可以对测量得到的数据进行实时分析和处理，提供各种统计报表和图形。
【贝克曼cytoflex 参数的应用领域】贝克曼cytoflex 的参数在多个领域都有广泛的应用，包括：1.基础科研：用于研究细胞的生长、分化、凋亡等过程。
2.临床检测：用于检测血液、淋巴液等体液中的细胞数量和功能状态。
3.药物研发：用于评估药物对细胞的影响和药物筛选。
【贝克曼cytoflex 参数的优缺点分析】贝克曼cytoflex 的参数具有以下优点：1.高精度：贝克曼cytoflex 使用的是高精度的激光器和检测器，可以提供准确的测量结果。
2.高效率：贝克曼cytoflex 具有多种细胞分类模式，可以快速对细胞进行分类和分析。
3.高灵活性：贝克曼cytoflex 的参数可以根据实际需求进行调整，满足不同场景的需求。
cytoflex操作规程
cytoflex操作规程CytoFLEX流式细胞分析仪是一种高性能、多参数流式细胞仪，广泛应用于细胞分析、免疫学研究、荧光染色等领域。
为了保证操作安全和数据准确性，以下是CytoFLEX 操作规程。
1. 开机准备a. 检查仪器电源是否插入正确，打开电源开关。
b. 检查电脑是否连接到CytoFLEX流式细胞分析仪。
c. 启动分析软件，如CytExpert。
d. 检查流式细胞分析仪的滤光片配置是否正确。
2. 设定仪器参数a. 在主界面上选择“Acquisition”进行实验参数设置。
b. 选择合适的波长和功率来激发和检测样品中的荧光染料。
c. 根据样品类型和实验要求，设置正确的流速和取样量。
3. 样品制备a. 根据实验要求，选择合适的细胞悬液和染色方法。
b. 遵循标准的样品制备过程，包括细胞计数、离心和悬浮液的制备。
c. 样品处理过程中要保持无菌条件，避免污染和细胞损伤。
4. 样品加载a. 在样品管中加入合适的染料和细胞悬液。
注意避免气泡的产生。
b. 将样品管放入样品架中，确保样品管与固定夹密封紧密。
5. 调节仪器设置a. 使用设置好的仪器参数进行样品调试。
b. 如有需要，调整观察点、光强和阈值，以获得最佳的数据。
6. 开始实验a. 点击软件界面上的“Acquisition”按钮，开始采集样品数据。
b. 实时监控样品流速和染料发光情况，如有异常情况要及时停止实验检查。
7. 数据保存和分析a. 实验完成后，保存数据文件到指定的位置。
b. 使用分析软件对采集到的数据进行后续分析和图表绘制。
8. 清洁和关机a. 关闭采集软件和电脑。
b. 使用清洁剂和纸巾擦拭仪器外壳、玻璃仪器件和样品台面。
c. 关闭CytoFLEX流式细胞分析仪的电源开关。
以上是CytoFLEX操作的基本规程，用户在使用时要按照操作要求仔细操作，确保数据的准确性和仪器的正常运行，同时在实验过程中遵循实验安全规范，确保操作的安全性。
流式细胞仪操作流程(单标)
流式细胞仪操作流程(单标)一、开机(务必按照此顺序开机)1、打开下面的小门，推上电源2、打开插线板电源开关3、开电脑4、打开流式细胞仪开关二、软件准备1、打开软件2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。
（等待5～6min startup 完成后再继续）2、在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen——new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes 编号。
3、在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方图。
以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。
4、点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。
三、上机操作1、将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data，此时流式细胞仪开始工作。
2、根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。
3、点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中出现P1，并且其中的细胞变成红色。
4、选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。
CytoFLEX流式细胞分析仪快速入门
1. 每隔一个月清洁一次流动室。 a. 机器待机时，选择“细胞分析仪”菜单中的深度 清洁，然后等待至过程结束。
注意
可能会出现仪器损坏。请勿将清洁溶液放置在流动室中超过 24 个小时。 b. 等待半个小时，然后选择充注以清除剩余清洁溶液。 c. 等待至充注循环完成，然后运行“日常清洁”。
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显示并保存。
• 结果部分的绿色图标 • 结果部分的红色图标
表明通过。 表明失败。
6. 若 QC 失败，请充注仪器、初始化并重复操作 QC。
注释 若 QC 同一天连续失败两次，请联络 Beckman Coulter 代表。
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 数据采集
数据采集
创建实验
重要 对于每个新批次编号，下载对应的目标值文件，并参考步骤 2.
4. 使用屏幕左侧的批次编号-下拉列表 球对应的批次编号。
，选择与 QC 荧光微
5. 选择 始 QC。
，将已准备的 QC 样品试管插入样品试管托架，然后选择
以开
注释 QC 可能需要数分钟。QC 荧光微球的最低流速为 100 事件/秒。一旦完成，结果就会自动
4. 请熟悉工具栏。
图形 统计资
料 层级
5. 利用“图表”工具
门 缩放 标尺
增益 阈值 撤消/恢复
新建所需直方图或点状图。
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 数据采集
6. 设置所需样品流速，然后选择“采集”面板上的
，以起动激光器和流体。
7. 将样品管装入样品端口，然后选择
以开始采集和显示数据。
关闭
1. 从“文件”菜单打开任一实验，并初始化仪器。 2. 在“细胞分析仪”菜单中选择日常清洁。
FACAria 流式细胞仪操作程序
一、准备工作1，清洗偏转板，防止盐离子影响电荷加载，电流偏转。
1）用超纯水沾湿医用棉签，擦拭偏转板所有金属物件。
再用干棉签擦干。
2）5ml注射器吸超纯水，清洗缝隙。
用滤纸先吸水，再用干棉签擦干。
2，鞘液桶加液3，喷嘴超声，喷嘴放入超纯水中，超声2min。
用滤纸吸干水分，晾干。
二、开机启动1，启动电脑，密码BDIS，点开软件，无密码2，机箱侧面依次打开总机开关，蓝色、红色激光。
3，液流启动：Cytometer----Fiuid Setup1）气路（透明管）、液路（蓝色管），从乙醇桶上拔下，插到鞘液桶2）闭合喷嘴从侧面放入到喷嘴位置，旋转至12点方向3）取下闭合喷嘴4）将超声过的喷嘴放入喷嘴位置。
4，喷嘴压力切换：菜单栏中Sort---Sort Setup----70um（选择当前使用的喷嘴大小）5，液流调整：点开电脑界面中70um图标栏里的Stream，从打叉状态变为打勾。
查看是否都处于正常状态：1）打开仪器机箱，查看液流是否流到废液槽。
如果偏离，拧开两边的螺丝，左右推动使液流到达槽内，拧好螺丝。
2）查看电脑界面，液流图像是否稳定，如果有黑白灰图片变化，用棉签擦拭偏转板上方3）查看电脑界面，液流是否在中央，如果不是，可以手动调整仪器摄像头，或者重新插好喷嘴。
4）机箱中查看激光束是否完好通过，用干棉签挡住通过位置，如果看到激光射出，则正常。
然后关闭主机箱外盖。
调整液流：通过调整振幅来实现。
1）振幅Ampl，数值调大，使液流断滴在上1/3处，即2滴连续液流。
2）频率Freg，一般不动。
3）Gap：当喷嘴为70um时，数值一般为7、8、9。
100um时，为10,、11、12。
4）当Ampl和Gap都稳定时，把实际值（后面）手动输入到确定值的框内（前面）。
5）点击Stream Spot，锁死数值，保持液流稳定。
Drop1：实际值和确定值，变化幅度保持在10以内。
Gap：实际值和确定值，变化幅度保持3以内。
Partec CyFlow Space标准化操作规程
CyFlow Space流式细胞仪操作规程一、开机前检查1.确认所有线缆连接正常。
2.确认废液瓶已被清空，鞘液瓶装入2/3鞘液。
3.确认废液瓶内已加入消毒剂。
二、开机顺序1.按住UPS开关按钮2秒钟，至绿色指示灯亮起。
2.打开流式细胞仪主机电源开关及激光开关。
3.打开计算机主机及显示器开关。
4.打开打印机开关。
三、软件使用步骤1.双击计算机桌面上的“FloMax” 图标，显示欢迎使用界面，点击“确定”（如下图）进入软件，仪器自动初始化。
2.点击软件界面中底部按钮行中的“仪器设臵”按钮，随后软件将弹出仪器设臵相关的菜单。
3.选择“读取”按钮，在“C:\ FloMax”文件夹中选择“*.ist”4.在软件界面中的右上角有两个“关闭”按钮，点击下方的灰色“关闭”按钮，并确认软件初次打开时的默认模板被关闭。
5.读取模板：在软件界面中的左上角“文件”菜单中点击“打开”，选择“C：\FloMax”文件夹中的“*.fcs”。
6.此时仪器处于待机状态，可以上样检测标本。
四、样本处理及检测操作步骤1.标本处理：取约0.5cm2样品放于平面塑料培养皿内，加500ul DNA 1 Step试剂，使用尖锐的刀片切割样品，之后再加入1500ul的DNA 1 Step试剂，将样本及液体用滤网过滤到样品管中，避光染色1min。
2.将样品管插入仪器后，自动开始样品测试，采集的数据达到实验要求后，可以直接拔下样品管，终止测试。
仪器会执行一次自动清洗，结束之后，可以进行下一个测试。
五、保存检测结果1.待每个测试结束并自动清洗完成后，可对检测结果进行保存。
点击“FloMax”软件中“文件”菜单中的“保存”按钮,选择“本地磁盘(D:)”并将检测结果保存在“检测结果”文件夹中，名称可按需输入。
六、生成并打印中文报告1.所有检测结束后需要关闭所有结果或模板。
2.将已经保存并需要生成报告的结果调入FloMax软件，调入方式和“读取模板”的方式相同。
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3. 验证 USB 配置密钥已连接至 USB 端口。
注意
可能会出现仪器损坏。从流体容器托架取下鞘液容器，并且远离仪器进行充 注，以防止鞘液溢出损坏仪器电路。
4. 从流体容器托架取下鞘液容器，并用提供的鞘液填充鞘液容器。 5. 如有必要，拆下右侧盖子，并填充带有 1 部分 Contrad 70 和 1 部分 DI 水混合的深度清
CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 启动
2. 请确保所有管线和电缆根据颜色代码连接至仪器。
b
c
d 1. 废液液位传感。与废液传感器电 缆相连。 2. 流动室废液排出。与流动室废液 导管相连。 3. 鞘液液位传感。与鞘液传感器电 缆相连。 4. 废液排出。与废液导管相连。 5. 鞘液回流。与鞘液导管相连。 6. 鞘液流入。与鞘液导管相连。
洁溶液。
警告
漂白剂具有化学伤害危险。为避免接触漂白剂，请使用包括防护眼镜、手套和 适当的实验室服装在内的屏障保护。使用化学药品前，请参阅有关化学品暴露 的安全数据表以了解详细信息。
6. 如有必要，清空废液容器。将 400 mL 5% 至 6% 的漂白剂添加至废液容器。
仪器启动
1. 打开仪器后盖上的电源开关，它位于电源电缆正上方。
8. 使用“阈值”工具 ，或选择
9. 使用“标尺”和“增益”工具 至所需位置。
设置辨别以消除图上不需要的细胞群。
，或选择
以将图上显示的细胞群移动
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 调节设置和补偿
调节设置和补偿
“图表”、“门控”和“统计资料”管理
1. 若要修改图表、门控、统计表或细胞群层级属性，请选择该图表并右击以选择属性 选项。参见以下示例。 • 图表属性 （右击门控）
4. 请熟悉工具栏。
图形 统计资
料 层级
5. 利用“图表”工具
门 缩放 标尺
增益 阈值 撤消/恢复
新建所需直方图或点状图。
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 数据采集
6. 设置所需样品流速，然后选择“采集”面板上的
，以起动激光器和流体。
7. 将样品管装入样品端口，然后选择
以开始采集和显示数据。
重要 对于每个新批次编号，下载对应的目标值文件，并参考步骤 2.
4. 使用屏幕左侧的批次编号-下拉列表 球对应的批次编号。
，选择与 QC 荧光微
5. 选择 始 QC。
，将已准备的 QC 样品试管插入样品试管托架，然后选择
以开
注释 QC 可能需要数分钟。QC 荧光微球的最低流速为 100 事件/秒。一旦完成，结果就会自动
仪器 QC
重要 验证检测仪配置。确保已为 QC 实验进行正确的仪器设置。若选择了错误设置，则 QC 实验
不能完成或会出现错误结果。Beckman Coulter 建议您使用出厂配置，并确保滤光片放在适当 位置。
1. 选择 QC 菜单中的启动 QC。“采集”屏幕现在换成了 QC 屏幕。
注意
可能会出现错误的 QC 结果。不同的批次编号对应不同的目标值信息。选择错 误的批次编号会导致错误的 QC 结果。
2. 确保可在“批次编号”下拉菜单中选择“QC 荧光微球批次编号”。如果批次编号不可选， 输入特定批次的目标值文件。参见第 4 章“CytoFLEX 流式细胞分析仪使用说明”中的“导 入特定批次-的目标值”。
3. 在 75-mm 的试管中添加 3 滴 Beckman Coulter 公司提供的 QC 荧光微球和 1 mL DI 水以制 备 QC 样品。
• 门控属性 （右击门控）
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• 统计表 （右击统计表）
CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 调节设置和补偿
• 细胞群层级
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 调节设置和补偿
2. 若要修改图表上的标尺范围，请利用“放大/缩小”工具或平移工具以确定图表上显示 细胞群的区域，或在图表轴附近双-击以查看“图表属性”对话框。
显示并保存。
• 结果部分的绿色图标 • 结果部分的红色图标
表明通过。 表明失败。
6. 若 QC 失败，请充注仪器、初始化并重复操作 QC。
注释 若 QC 同一天连续失败两次，请联络 Beckman Coulter 代表。
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 数据采集
数据采集
创建实验
1. 选择 CytExpert 桌面图标
以打开软件。
2. 在“开始”页面，选择新实验或模板中的新实验以开始新实验，或选择打开实验以继续现 有实验。
注释 模板包含有关硬件和软件设置 （包括使用的通道、增益设置、流速和停止标准）的信
息。
或者，从“文件”菜单选择新实验，模板中的新实验或打开实验。
3. 若未新建试管，请利用“试管工具栏”按钮创建新试管。若要修改试管属性，请高亮试 管名称，然后选择位于“采集”屏幕底部左侧的 。
)XVH$WLPHGHOD\7$/9$&3RZHU9$ SN
1. 显示器 2. 鼠标 3. 键盘 4. 计算机 5. 细胞分析仪 6. 流体容器托架
S W haesatteh
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Sheath
© 2015 Beckman Coulter, Inc.
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2. 登录计算机，双-击 以启动 CytExpert。 a. 确保靠近显示器左下方的状态栏上的连接图标为绿色。
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b. 若图标不是绿色，确保仪器 USB 牢固地连接至计算机，并重新启动计算机。 3. 从“细胞分析仪”菜单中选择系统启动程序，并遵循软件提示。
CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 仪器 QC
B49009AC 2015 年 2 月
CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门
有关详细说明，请参阅 CytoFLEX 流式细胞分析仪使用说明。 仅限研究用。不用于诊断程序。
工作流程
启动
Ô
QC
Ô
创建实验
Ô
调节仪器设置和 补偿
Ô
记录数据 Ô
关闭
启动
仪器准备
1. 确保所有系统连接正确连接。
bcde Nhomakorabeaf
CLASS 1 LASER PRODUCT COMPLIES WITH 21 CFR 1040.10 AND 1040.11 EXCEPT FOR DEVIATIONS PURSUANT TO LASER NOTICE NO. 50 DATED JUNE 24, 2007 MANUFACTURED