Fas、FasL蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达和其临床意义

中国医科大学硕士学位论文Fas、FasL蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其临床意义姓名：王欣彦申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：王敏2002.2.1摘要目的探讨Ｆａｓ、ＦａｓＬ蛋白在正常卵巢和卵巢浆液性肿瘤中的表达及其临床意义。

方法应用免疫组化法检测Ｆａｓ、ＦａｓＬ蛋白在５６例卵巢浆液性肿瘤（其中良性９例，交界性９例，癌３８例）及８例正常卵巢组织新鲜标本中的表达。

—一弋结果Ｆａｓ蛋白在卵巢浆液性癌（ｏｖａｒｉａｎｓｅｒｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＯＳＣ）中的阳性表达率为３９．５％，明显低于交界性瘤（７７．８％）、良性瘤组织（７７．８％）及正常组织（７５．０％），差异有显著性（Ｐ＜ｏ．０５）。

ＦａｓＬ蛋白在ＯＳＣ中的阳性表达率为７８．９％，明显高于交界性瘤（４４．４％）、良性瘤组织（３３．３％）及正常组织（３７．５％），差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。

交界性瘤、良性瘤组织及正常组织中Ｆａｓ、ＦａｓＬ蛋白阳性表达率比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。

卵巢浆液性癌中，Ｆａｓ、ＦａｓＬ蛋白表达与临床分期相关（Ｐ＜０．０５），与其它生物学特征无关（Ｐ＞０．０５）。

ｒ结论Ｆａｓ蛋白在卵巢浆液性癌中表达下调，ＦａｓＬ蛋白在卵巢浆液性癌中过表达。

它们与卵巢浆液性肿瘤发生发展密切相关，可能为卵巢浆液性癌提示预后。

关键词Ｆａｓ；ＦａｓＬ；卵巢浆液性肿瘤；免疫组化ＡＢＳＴＲＡＣＴＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦａｓａｎｄＦａｓＬｉｎｎｏｒｍａｌｏｖａｒｉａｎｔｉｓｓｕｅｓ，ｏｖａｒｉａｎｓｅｒｏｕｓｔｕｍｏｒｓａｎｄｉｔｓｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄ５６ｆｌｅｓｈｓａｍｐｌｅｓｗｉｔｈｂｅｎｉｇｎ（９ｓａｍｐｌｅｓ），ｂｏｒｄｅｒｌｉｎｅ（９ｓａｍｐｌｅｓ）ａｎｄｍａｌｉｇｎａｎｔ（３８ｓａｍｐｌｅｓ）ｏｖａｒｉａｎｓｅｒｏｕｓｔｕｍｏｒｓａｎｄ８ｓａｍｐｌｅｏｆｎｏｒｍａｌｏｖａｒｉａｎｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｆｏｒｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦａｓａｎｄＦａｓＬｂｙＳＰｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒａｔｅｏｆＦａｓｉｎｔｈｅｏｖａｒｉａｎｓｅｒｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＯＳＣ）ｗｅｒｅ３９．５％．ｗｈｉｃｈｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｂｏｒｄｅｒｌｉｎｅＲｗｎｏｒ（７７．８％），ｂｅｎｉｇｎ（７７．８％）ａｎｄｎｏｒｍａｌｏｖａｒｉａｎｔｉｓｓｕｅｓ（７５％），Ｐ＜０．０５．ＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒａｔｅｏｆＦａｓＬｉｎｔｈｅｏｖａｒｉａｎｓｅｒｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＯＳＣ）ｗｅｒｅ７８．９％．ｗｈｉｃｈｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｂｏｒｄｅｒｌｉｎｅｔｕｍｏｒ（４４．４％），ｂｅｎｉｇｎ（３３．３％）ａｎｄｎｏｒｍａｌｏｖａｒｉａｎｔｉｓｓｕｅｓ（３７．５％），Ｐ＜０．０５．ＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅａｎｄＦａｓＬｉｎｔｈｅｂｏｒｄｅｒｌｉｎｅ，ｂｅｎｉｇｎａｎｄｎｏｒｍａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒａｔｅｓｏｆＦａｓｏｖａｒｉａｎｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｎｏｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦａｓａｎｄＦａｓＬｗａｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｌａｔｅｓｔａｇｅ，ａｎｄｎｏａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐｏｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｓｃｉｔｅｓａｎｄｌｙｍｐｈｎｏｄｅｓｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＦａｓｉｓｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｔｈｅＯＳＣ，ａｎｄＦａｓＬｉｓｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｔｈｅＯＳＣ．Ｔｈｅｙａｒｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｏｖａｒｉａｎｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒ．ＴｈｅｙｍａｙｂｅｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｆａｃｔｏｒｓｏｆＯＳＣ．ＫｅｙｗｏｒｄＦａｓ；ＦａｓＬ；ｏｖａｒｉａｎｓｅｒｏｕｓｔｕｍｏｒ；ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅ２日Ｕ茜卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，其五年存活率仅为２５０／０－－３０％。

因其缺乏早期症状，至今仍无有效的早期诊断方法，是严重威胁妇女生命的肿瘤。

目前对卵巢癌发生发展的分子生物学机制仍知之甚少。

但普遍研究认为，细胞增殖、发育与凋亡的失衡，包括细胞生长的增加和／或死亡的减少之问的失衡可引起器官组织内环境的紊乱，进而促进了肿瘤的发生发展【１ｌ。

细胞凋亡是细胞的一种不同于坏死的死亡方式，是细胞内在固有规律的自我消亡，它和细胞的增殖、分化一样是一系列基因调控的主动的细胞学过程。

凋亡在正常卵巢中也发挥着重要的作用，它参与上皮细胞在排卵期的破坏，颗粒细胞在月经周期和妊娠末期的消亡，卵泡被吸收等生理过程。

只有卵巢细胞生长与凋亡之间保持精细平衡才能使卵巢发挥其正常功能【２】。

卵巢上皮细胞增殖、发育与凋亡之间的平衡遭到破坏，细胞凋亡减少，在卵巢癌的发生发展过程中起重要作用。

卵巢浆液性癌是最常见且恶性度最高的卵巢上皮性肿瘤，来源于卵巢表面的生发上皮。

故认为凋亡的异常与其关系密切。

Ｆａｓ／Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）系统是重要的调节细胞凋亡的基因。

它们在维持组织正常发育，调节免疫反应，保持机体自身稳定等诸多方面发挥着重要作用。

Ｆａｓ和ＦａｓＬ、及其可溶性Ｆａｓ和ＦａｓＬ、凋亡信号传导通路和相关调节因子共同组成极为精细复杂的细胞凋亡调控机制。

其中任何环节存在缺陷最终都将导致凋亡异常，Ｆａｓ、ＦａｓＬ是此信号途径的始动因子，它们的表达异常将导致下游信号的异常，从而为肿瘤发生发展创造条件。

有研究发现，Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统在多种肿瘤组织中表达及功能异常，而其表达情况与卵巢癌的关系目前研究结果不一，尚需进一步研究。

其与卵巢浆液性肿瘤的关系尚未见报道。

为此我们用免疫组化方法对５６例卵巢浆液性肿瘤组织和８例正常卵巢组织新鲜标本进行Ｆａｓ和ＦａｓＬ蛋白检测，以探讨Ｆａｓ和ＦａｓＬ蛋白表达与卵巢浆液性肿瘤发生、发展的关系及其临床意义。

材料与方法一、标本与来源收集中国医科大学第一、第二临床学院２０００年３月—２００１年１月间手术切取的新鲜组织标本６４例。

其中５６例卵巢浆液性肿瘤（良性９例，交界性９例，癌３８例），８例正常卵巢组织。

卵巢浆液性癌（ｏｖａｒｉａｎｓｅｒｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＯＳＣ）均有完整的病理资料。

按ＦＩＧＯ１９８５年标准，其中Ｉ期７例、ＩＩ期３例、Ｉｌｌ期２６例、Ⅳ期２例。

组织学分级Ｉ级５例、ＩＩ级１４例、ＩＩＩ级１４例。

行淋巴结清扫２６例，伴有淋巴结转移者１６例，伴有腹水者２８例。

二、主要试剂与方法所有新鲜组织标本均经常规福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚５ＩＸｍ，进行ＨＥ染色，以供病理学检查。

免疫组化采用ｓＰ法。

ＳＰ试剂盒和Ｆａｓ及ＦａｓＬ多克隆抗体均为美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ生物技术公司产品。

其抗体的免疫产物用ＤＡＢ显色，抗体效价均为１：１００。

均进行抗原修复。

免疫染色阴性对照采用ＰＢＳ代替一抗，选择２例结肠癌已知阳性的石蜡切片作为Ｆａｓ及ＦａｓＬ蛋白阳性对照。

三、结果判定及统计学处理阳性染色为棕黄色颗粒，特异性位于细胞膜及细胞浆内。

综合染色强度和分布范围进行半定量处理，染色强度按下列标准评分：阴性为０分；染色弱，但明显强于阴性对照者为１分；染色清晰者为２分；染色强者为３分。

分布范围按下列标准评分：阳性细胞数为零者记为０分；＜３０％者为１分；３０％。

６０％者为２分；＞６０％者为３分。

上述两种评分相加，０．１分为阴性，２分为（＋），３．４分为（＋＋），５－６分为（卅）。

率的比较采用卡方检验或四格表精切概率法。

结果一、Ｆａｓ、ＦａｓＬ蛋白在卵巢浆液性肿瘤及正常卵巢组织中的表达Ｆａｓ、ＦａｓＬ蛋白阳性部位均主要在细胞膜及细胞浆中分布。

Ｆａｓ蛋白在ＯＳＣ中表阳性达率为３９．５％，明显低于交界性瘤组织（７７．８％）、良性瘤组织（７７．８％）及正常组织（７５％），差异有显著性（Ｐ＜ｏ．０５）。

而后三组之间比较，差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。

ＦａｓＬ蛋白在ＯＳＣ中阳性表达率为７８．９％，明显高于交界性瘤组织（４４．４％）、良性瘤组织（３３．３％）及正常组织（３７．５％），差异有显著性（Ｐ＜Ｏ．０５）。

而后三组之间比较，差异无显著性（Ｐ＞Ｏ．０５）。

见表１。

Ｆａｓ、ＦａｓＬ蛋白表达的免疫形态学图像参见图ｌ一８。

表１Ｆａｓ、ＦａｓＬ蛋白在卵巢浆液性肿瘤及正常卵巢组织中的表达注：癌ＶＳ交界瘤、良性瘤及正常卵巢，＋Ｐ＜０．０５二、Ｆａｓ、ＦａｓＬ蛋白表达与ＯＳＣ生物学特征的关系将３８例ＯＳＣＦａｓ、ＦａｓＬ蛋白表达情况分别与其ｌ临床分期、组织学分级、腹水、淋巴结转移进行比较分析。

见表２。

从表２可见，Ｆａｓ蛋白在ＨＩ＋ＩＶ期卵巢癌组织中的阳性表达率为３２．１％，低于在Ｉ＋ＩＩ期卵巢癌组织中的６０．０％，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。

ＦａｓＬ蛋白在ＩＩＩ＋ＩＶ期卵巢癌组织中的阳性表达率为８９．３％，明显高于在Ｉ＋ＩＩ期卵巢癌组织中５０．０％，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。

其它各组间比较，差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。

表２Ｆａｓ、ＦａｓＬ蛋白表达与ＯＳＣ临床分期、病理分级、腹水、淋巴结转移的关系注：Ｉ＋ＩＩ期ＶＳＩＩＩ＋Ⅳ期比较，￥Ｐ＜Ｏ．０５；其它各组比较，差异均无显著性（Ｐ＞ｏ．０５）７讨论Ｆａｓ又称ＡＰＯ－】或ＣＤ９５，于１９８９年被两个研究组分别在各自的实验室同时发现【圳。

它是分子量约４５ｋＤ的Ｉ型膜蛋白，属于肿瘤坏死因子，神经生长因子受体超家族。

ＦａｓＬ是分子量为４０ｋＤ的ＩＩ型跨膜蛋白，由３２５个氨基酸组成，属于肿瘤坏死因子家族蛋白。

Ｆａｓ蛋白是细胞表面死亡受体，含有细胞外区、跨膜区和胞浆区，接受外界传递的信号。

当Ｆａｓ蛋白同其抗体或天然配体ＦａｓＬ结合后，可启动Ｆａｓ介导的细胞凋亡途径，不需补体，可直接导致细胞凋亡。

在Ｆａｓ胞浆区有６８个氨基酸序列高度保守，称为死亡区域，此区域被认为是传递死亡信号所必需的。

Ｆａｓ蛋白在生理状态下广泛表达于各种类型的细剧５１，如肝、脾、心脏、小肠等，并多见于免疫细胞如Ｔ细胞、Ｂ细胞等，也持续表达于正常卵巢组织中。

ＦａｓＬ蛋白持续表达于淋巴细胞，也持续表达于睾丸基质、视网膜等免疫特赦组织，使被激活的淋巴细胞进入这些组织后发生凋亡。

Ｆａｓ、ＦａｓＬ系统作为主要凋亡介质参与众多生理过程，其中一些生理作用已被研究的较清楚，包括被激活的Ｔ型淋巴细胞在参与免疫应答后的消亡，肿瘤细胞和被病毒感染的细胞被毒性Ｔ淋巴细胞和自然杀伤细胞杀死以及炎性细胞在免疫特赦器官如眼前房，睾丸等中的清除等过程。