肠道门诊大便三线培养

可治愈；


⑷
肠出血型（EHEC）：它的代表菌为O157:H7血清型，引起的症状较严重，由并发症
所导致的死亡率在3%～10%，经粪-口传播，形成爆发流行，1996年在日本大阪地区就 有上万人感染，死亡11人，我国有散发病例的报告，应引起重视；

⑸ 肠凝聚型（EaggEC）:引起慢性腹泻，可治愈；
*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）
采样（湿润的10CM棉签、肛拭） S.F增菌液10ml（37℃、18～24小时） GN增菌液10ml（37℃、4～6小时）
S.S平板划线分离培养（37℃、18～24小时） 无可疑菌落报告 观察、挑选可疑菌落接种KIA或双糖铁 （37℃、18～24小时） 初步鉴定，根据结果做氧化酶试验等
有关配制培养基的补充:
从业人员体检大便三线培养基本要求
***相关物品的准备***

1、仪器设备 ①恒温培养箱 ②干燥箱 ③高压灭菌器 ④显微镜 ⑤接种环

2、培养基 ①SS琼脂 ④碱性胨水 ②4号琼脂(必须用9cm玻离平皿) ⑤KIA或双糖铁 ②志贺氏多价 ③霍乱多价 ③SF和GN增菌液

3、诊断血清 ①沙门氏多价
层均产酸产气、H2S阴性，结果为A A + -；动力-吲哚-尿酶试验（MIU）结 果为+ + -；迟缓发酵山梨醇（ ≥48小时 ），用SMAC平板纯培养；
全面生化反应实验
血清学鉴定（多价诊断血清）
报告结果
*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）
*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）

沙门氏菌在KIA或双糖铁上的生长情况：
斜面产碱鲜红色/底层产酸黄色，有少量产气或不产气， H2S阳性有显黑色（A K + +）,动力阳性（沿穿刺线蔓延 生长）

志贺氏菌在KIA或双糖铁上的生长情况： 斜面产碱鲜红色/底层产酸黄色，不产气， H2S阴性无显黑色（A K - -） ，动力阴性 （只沿穿刺线生长）
*肠杆菌科*

抗原构造：
⑴ O抗原：是细胞壁的成分，为脂多糖（LPS），具有属、种特异性，以核心多 糖为分子的中心，内侧是类脂A，为内毒素的毒性处，外侧是由重复的低聚 糖组成的多糖链，决定O抗原的特异性；
⑵ H抗原：是不耐热的蛋白质抗原，由鞭毛蛋白多肽链上的氨基酸序列和空间 构型决定H抗原的特异性； ⑶ 表面抗原：是包绕在O抗原外侧的不耐热的多糖抗原，由黏液或荚膜多糖的 结构决定表面抗原的特异性，在不同的菌属中表面抗原有不同的专有名称，

卫生健康体检中大便三线培养：
与上面相比，检测范围比较小，属于预防性体检，一般主要针 对：⑴霍乱弧菌；⑵沙门菌；⑶志贺菌；⑷大肠埃希氏菌（o157血清 型）
*肠杆菌科*

是一大群寄居在人和动物肠道中的生物学性状相似的G-无芽胞的短小杆菌， 其中4类常引起腹泻和肠道感染（埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森 菌属）；8类常导致院内感染的条件致病菌（枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、 肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属）
有关配制培养基的补充:

检验要求及报告
1. 检验标本必须增菌或直接接种平板进行，增菌后再次 接种平板，碱性胨水增菌液必须保存到阴性报告发出 后。 2. 疑似霍乱菌株必须在18-24h内报县疾控中心。
3. 其他疑似菌株就近送县级医院或县疾控中心。
有关配制培养基的补充:

1、配制S.F和GN增菌液时，玻璃试管分装量一般为10ml／支，否则增菌效果不明显； 2、由于S.F中的主要成分为亚硒酸，遇高温会还原成硒酸，失去抑制杂菌的作用，故 采用先把干净的玻璃空试管加硅胶塞，高压灭菌，121℃，15～20分钟，再把S.F增菌 液干粉培养基按比例要求加热彻底溶解，后采用无菌手法分装；贴上配制时间的标签， 放冰箱冷藏，一般为2～8℃ ，可以保质1个月左右；但是要随时观察，如果发现试管 底部有红色沉淀，说明增菌液长杂菌变质，需重新配制新的增菌液；同时，干粉培养 基也应放冰箱储存；


凡患有痢疾、伤寒、病毒性肝炎等消化道传染病（包括病 原携带者）是不得参加接触直接入口食品的工作，或者治 愈前不得直接从事公共场所的服务工作。
概念

大便三线培养：
一般来说，广义的大便三线培养是指在医疗机构的肠道门诊中， 日常进行的一些肠道致病菌的常规检测。主要包括：⑴霍乱弧菌； ⑵沙门菌、志贺菌、（大肠埃希氏菌o157血清型）；⑶副溶血弧菌；
杆菌。可分为4个群，痢疾志贺氏（A群），福氏志贺氏（B群），鲍氏志贺 氏（C群），宋内氏志贺氏（D群），我国以B群最多见，占70%以上，其次为 D群和A群。

形态和培养特性：
1、G-短小杆菌，无鞭毛，有菌毛，一般无荚膜，均无芽胞，胞质内有两 种质粒，与侵袭力和耐药性相关。
2、需氧或兼性厌氧，最适温度37℃，PH7.2～7.4，对营养要求不高， 在普通培养基生长良好，37 ℃，24h，能形成菌落中等大小，表面光滑湿润， 无色半透明，边缘整齐的菌落。

*大肠埃希菌（O157:H7血清型）*

一般在人体肠道内，存在正常的大肠埃希菌，但是也有一些大肠埃 希菌具有一定的毒力，感染肠道后即可致病引起腹泻，称为致病性大 肠埃希菌，包括5种：
⑴
⑵ ⑶

肠产毒型（ETEC）：主要在发展中国家引起儿童腹泻和旅行者腹泻，症状较轻，
肠致病型（EPEC）：主要引起婴幼儿肠道感染，血清型有O55、O111等，可治愈； 肠侵袭型（EIEC）：引起类似志贺菌属的菌痢症状，可治愈；
3、在液体培养基中，呈均匀混浊性生长，无菌膜。
*志贺菌*
*志贺菌*

生化特征： 1、发酵GLU，产酸不产气，分解甘露醇（除A群外） 2 、不发酵乳糖，（宋内氏迟缓发酵， >48 小时），
不发酵蔗糖
3 、不产生 H2S （ - ），不产靛基质（ - ），不分解尿 素（-），不产生乙酰甲基甲醇（V—P）（-）

3、最好用直径9cm的玻璃平皿配制SS平板，厚度为2～3 mm，估计400ml的培养基倾倒 23个平皿，贴上配制时间的标签，放冰箱储存，一般为2～8℃； 4、KIA或双糖铁配制时，干粉培养基应彻底充分溶解，否则分装后每支斜面高层内含 琼脂量不均匀；由于其中含糖成分，高压灭菌温度不能太高， 110℃，10～15分钟； 所制成的高层斜面应该规范，保留1cm的垂直高度；
3、免疫性：是细菌胞内寄生微生物，人体仅主要靠细胞免疫
4、抵抗力：对湿热敏感，65℃，15～20分钟灭活，水中存活2～ 3周，粪便中存活1～2个月，在冰冻土壤中越冬，5%石炭酸5分钟可杀 死，对某些染料有一定耐受（SS平板）。
*志贺菌*

定义：是肠道中主要的病原菌之一，导致人类细菌性痢疾的革兰氏阴性短小
*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）

三糖铁斜面高层培养现象
2－志贺氏菌 3－沙门氏菌 4－大肠杆菌
*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）

半固体琼脂培养现象
*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）

沙门氏菌血清学分型：
1、先A-F多价混合诊断血清进行玻片凝集; 2、再单价抗O因子诊断血清进行玻片凝集; O4因子血清 O3因子血清 B群 E群 O9因子血清 O11因子血清 D群 F群
B群─ O4
E群─ O3
D群─ O9
F群─ O11
E3亚群─O3、O15
E2亚群─ O3、O10族
E4亚群─ O1、O3、O19
*沙门菌*
2、H（鞭毛）抗原
为蛋白质，性质不稳定，不耐热，湿热60℃15分钟或酒精处理即破坏。 可分为Ⅰ相和Ⅱ相。其中Ⅰ相特异性高，故又称特异相，以a、b、c、d…… 表示； Ⅱ相特意性低,故又称为非特意相,以1、2、3、4……表示。同时有 Ⅰ相和Ⅱ相H抗原的称为双相菌，仅有一相者为单相菌。
*志贺氏菌*

临床意义：
1、致病物质：侵袭力、内毒素、外毒素（痢疾志贺氏产生，包
括肠毒素、细胞毒素和神经毒素） 2、所致疾病：急性菌痢、慢性菌痢（治疗不彻底造成的反复发 作）、无症状带菌者 3、免役性：人体主要靠肠道局部免疫 4、抵抗力：对理化因素的抵抗力较弱，对酸敏感，对湿热敏感， 50～60℃，10分钟灭活，日光照射30分钟灭活，1%石炭酸15～30分 钟可杀死，容易发生S～R和耐药性变异，耐药性主要由R质粒决定， 可在细菌间传播。
*沙门菌*

生化特征：
1、发酵GLU，甘露醇，山梨醇产酸产气（伤寒鸡伤 寒沙门氏菌少数不产气）
2、不发酵乳糖，蔗糖，侧金黄花醇 3 、多数产生 H2S （ + ），不产靛基质（ - ），不分解 尿素（-），不产生乙酰甲基甲醇（V—P）（-） 4、能还原硝酸盐为亚硝酸盐（+），动力阳性（+） 5 、在 KCN 培养基中生长（ - ），苯丙氨酸脱羧酶（ - ）
O2因子血清
A群
O6因子血清
C群
3、最后H单价抗原血清进行玻片凝集;
*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）

志贺氏菌血清学分型：
1、用4种志贺氏菌多价血清，如果由于表面抗原的存在而不出
现凝集，应将菌液煮沸后再进行玻片凝集试验;
2、用A1，A2，B群多价，C群多价，D群诊断血清分别试验; 3、依次选用型因子血清分别进行试验;
Байду номын сангаас
*大肠埃希菌（O157:H7血清型）*

生物学特性和生化特点：
⑴ G-直短杆菌，无芽胞，多数有鞭毛，能运动； ⑵ 营养要求不高，兼性厌氧，普通琼脂上生长良好；液体培养基中混浊生长； 在血平板上产生β溶血菌落；在SS平板上由于发酵乳糖形成粉红色、光滑、 湿润菌落；
⑶ 吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验（IMVC）结果为+ + - -；KIA斜面高