右旋磷霉素手性转化产物检测方法的建立
手性生物催化磷霉
手性生物催化提高东北制药总厂磷霉素生产率一、项目的目的和意义磷霉素是一种新型广谱抗菌素，具有理化特性稳定、安全低毒、无抗原性（无需试敏）等优点，现已广泛用于临床治疗，被国际医学界和药学界称为二十一世纪的新抗生素。
东北制药总厂是我国生产磷霉素的特大型企业，2001年产磷霉素粉针1.84亿余支，销售额逾七亿元。
为世界最大磷霉素生产厂，产品的国内市场占有率为95%在国际市场也占有相当份额。
东北制药总厂磷霉素生产采用的是化学合成法，即以丙炔醇为原料，经脂化、环氧化、拆分而成，工艺先进，但收率不高，约为20%主要原因是在环氧化过程中形成的磷酸胺盐只有50%为具疗效的左旋物，另50%为无疗效的右旋物，被分离并弃之。
本项研究将应用现代生物技术，筛选、遗传构造高效菌；分离、生化修饰专性酶；科学固型化后，以最适条件用于磷霉素生产中的手性生物催化，将现工艺生产中产生的50%的右旋废弃物改型为具疗效的左旋物，实现产量、销售和税收翻番，利润翻三番。
同时使废弃物排放量减至原工艺的20%二、课题研究的国内外发展概况及市场需求分析磷霉素自90年代问世后即广受青睐。
1997年美国FDA批准在美国市场应用，1999年欧洲药典增补版收载了该药。
随其身价提高和良好的临床实践，其市场前景越来越被看好。
据推测，到2010年世界粉针需求量将超过100亿支/年，口服剂型需求量则将数倍于针剂。
新建和扩建工厂是解决磷霉素巨大市场需求的一条途径，但改造传统工艺、大幅提高而成为重点关注技术。
国内外不少科学家已先后从不同角度开展了相关研究。
如：美国巴里等人采用化学法开发出用于环氧化反应和二羟基化反应的催化剂，将环氧化左旋率从58.1%提高到70%亨利等人应用微生物将顺丙烯磷酸直接环氧化得到左旋磷霉素。
上述虽因收率和周期等故，尚未在大规模生产中应用，但人们已看到：通过手性生物催化反应，将现生产工艺中产生的废弃物一右旋磷霉素定向转化为左旋磷霉素是完全可行的。
手性药物的拆分技术
O
CH3 * OH
HO
NO 2
CH3 O
O NO2
NO2
• 应用较少
(固) （液 ） NO2
对映异构体和消旋体晶体
RS R
S
RRR RRR RRR SSS SSS SSS RSRS SRSR RSRS RSSR SSRR RSRS
RRR RRR RRR
SSS SSS SSS
聚集体(conglomerate)
– 20世纪50年代 氯霉素中间体的拆分 – 20世纪60~70年代，工业用丙烯腈拆分制备L-谷氨酸(1.3吨/年) – 氨基酸的拆分
OH OH O2N NHR HO2C NH2 CO2H
R=COCHCl2, chloramphenicol R= H
L-glutamic acid
循环优先结晶法
• 操作：
采用优先结晶拆分法拆分规律
外消旋体的盐(如盐酸盐、硫酸盐等)比形成共价外消旋体更容易 通过优先结晶法拆分。 溶解度比(ax= SR/SA，SR和SA分别为外消旋体和一种对映异构体 的溶解度)<2时比>2更有利于优先结晶法拆分 适当的搅拌速度对促进晶体的生长有利 所使用晶种的颗粒大小和组成必须均一 尽可能减少溶液中存在的其它粒子和颗粒，以免成为所不期望的 晶核影解度存在差异， 假设d A· d B/l A· l B对映体溶解度较小，则可以加入d A· d B(或l A· lB)晶种，使其中一种 同构型的盐优先析出。 此时在溶液中还存在着一个溶解度较小的盐和另一对溶解度较大对映体盐，采用上述 加入晶种的结晶方法就可以得到四个光学活性化合物。 不需光学纯的拆分剂，拆分方法更加经济实用。 前提条件是使用拆分剂的逆向拆分必须是可行的。
O
手性化合物的微生物转化 终..
不需要进行酶的提纯、添加辅酶等
通过微生物整细胞内的酶系 进行转化，不需要对酶进行提纯， 也不需额外添加昂贵的辅酶， 因而减少工序并降低成本。
氧化还原酶辅酶再生的解决办法
羰基还原酶
用糖作为能量供体保持辅酶再生循环
利于产物的分离和提取
底物抑制与溶解度问题
O H OH
Cl
COOEt
Cl
COOEt
5.生物催化不对称合成研究的问题
缺少高立体选择性的生物催化剂
反应类型有限，底物结构有限 反应的对映选择性不尽理想 对生物催化反应过程缺乏了解
★ ★ 应用不够 缺少技术平台
6.生产单一对映体 手性化合物的方法
生物催化与手性技术
技 术 路 线
生物催化
生物转化
●
手性源 不对称合成 消旋体拆分
2.研究历史
1815 年布劳特发现樟 脑、月桂油等具有旋 光性，建立liotsavart 定律。第一个 研究旋光性的人 Fischer发明了氢氰酸和糖的反 应，得到了不同比例的氢羟化物 异构体。
1848年巴斯德通过缓 慢蒸发结晶外消旋酒 石酸钾氨溶液得到两 种对映体。后来，通 过化学法和微生物拆 分了对映异构体。 4
手性化合物的微生物转化
报告人：张 楠 王佳宁 杨广磊
01
一、手性分子及手性化合物的合成Fra bibliotek一、手性分子及手性化合物的合成
1.概念 手性（chirality）是三维物 体的基本特性。如果一个物体 不能与其镜像重合，该物体就 称为手性物体，这两种互成镜 像的形态被称为对映体。 手性分子(chiral molecules) 的立体构型即为对映体结构。 手性是自然界的本质属性之一 ，分子手性识别在研究生命活 动和生命物质产生中都起着极 为重要的作用。
细胞内分子手性的研究方法和应用
细胞内分子手性的研究方法和应用细胞是生命体系中的基本单位，其中包含了各种生物大分子，如蛋白质、核酸等。
在分子层面上，手性是一个重要的概念。
生物大分子的手性对于它们的结构和功能有着决定性的影响。
因此，研究细胞内分子手性对于理解细胞内生化过程和开发新药具有重要意义。
目前，研究细胞内分子手性的方法主要包括1）催化剂选择性剖面质谱（CSS-MS）2）化学方法3）计算方法。
一、催化剂选择性剖面质谱（CSS-MS）催化剂选择性剖面质谱技术是一种利用手性选择性催化剂鉴定混合物中手性分子的方法。
这种技术包括两个步骤：将混合物与一些催化剂反应，然后将反应产物进行质谱分析。
在这种技术中，手性选择性催化剂扮演着重要的角色。
催化剂能够特异性识别并催化产生同一对映异构体的手性底物。
因此，在催化过程中，手性底物会被选择性地转变为具有一定手性的产物。
通过对不同手性底物的不同催化反应进行MS检测，可以对样品中的手性混合物进行分析。
利用CSS-MS技术可以研究各种生物大分子的手性，包括蛋白质、核酸等。
通过这种方法可以解析复杂的样品，得到各种手性配体的相对含量。
与其他技术相比，这种方法具有快速、灵敏、高效和准确的优点。
二、化学方法化学方法是研究细胞内分子手性的另一种重要方法。
这种技术主要通过化学反应来探究手性分子的结构和活性。
其中一种常见的化学方法是利用手性分子的反应速率差异进行分析。
手性分子在互相反应时会形成两种异构体，具有不同的反应速率。
利用这种分子间速率差异的特性，可以将手性分子分为对映异构体，并对它们进行分析。
这种方法主要应用于小分子的手性分析。
另外，化学方法还可以通过反应产物的手性、手性接触等方面来研究细胞内大分子的手性。
例如，利用酶的手性催化性质来研究蛋白质、核酸等大分子的手性。
三、计算方法计算方法是一种基于计算机的技术，用于模拟生长在三维空间中的手性分子的结构和活性。
计算方法能够预测同分异构体的相对结构稳定性，从而判断手性分子的可能构型。
手性药物的检测方法研究进展
２０１９ 年 第 ３ 期
分析仪器 Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ
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综 述
Ｎｏ．３ Ｍａｙ．２０１９ １
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手性药物的检测方法研究进展
李周敏＊ 曾 韬 姚开安 李心爱 宣 婕
（南京大学金陵学院，南京 ２１００８９）
摘 要：对手性药物的分析一直是药学领域的一个 研 究 热 点，近 年 来 各 种 检 测 新 方 法 也 不 断 应 用 于 手 性 药 物 的分析中。本文主要介绍了近十年来手性药物的检测方法。比较目前已有的手性 药 物 检 测 方 法 的 优 势 与 不 足 ，并 对手性药物检测方法的发展趋势进行了展望。
ＲＯＡ）、质谱 法 （ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｕｍ，ＭＳ）、核 磁 共 振 法 （ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ，ＮＭＲ），电 化 学 法 （Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ）、光 学 传 感 器 等 。 ２．１ 旋 光 法 和 旋 光 色 散 法
旋光法（ｐｏｌａｒｉｍｅｔｒｙ）一直是人们最常用来 检测 手性分子的 方 法，以 其 操 作 简 单、检 测 价 格 低 而 极 受欢迎，也 是 现 在 《中 国 药 典 》中 广 泛 使 用 的 方 法。 虽然影响因素较多，包 括 温 度、检 测 光 波 长、样 本 杂 质等，但其 在 一 定 条 件 下 满 足 手 性 分 析 基 本 需 求。 在实验中 通 常 以 光 学 纯 度 来 对 样 品 进 行 分 析。 通 常将供试品在钠光谱 Ｄ 线处的旋光度与相同条件 下同种纯品旋 光 度 的 比 值 定 义 为 光 学 纯 度 （ｏｐｔｉｃａｌ ｐｕｒｉｔｙ，Ｏ．Ｐ），其值某种意义 上反 映了 供 试 品 纯 度。 戴月华等人 用 ［１］ 旋光法测定硫酸西索米星氯化钠 注 射液中西索米星的含量。郝玲花等人 用 ［２］ 旋光度 法 测定布洛芬注射液 中 精 氨 酸 的 含 量，主 药 布 洛 芬 不 干扰精氨酸测定。杨振林等人 用 ［３］ 旋光法测定氯 霉 素滴耳液中氯霉素的含量。董杰 用 ［４］ 旋光法测定 盐
由右旋磷霉素制备左旋磷霉素的合成方法[发明专利]
![由右旋磷霉素制备左旋磷霉素的合成方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1ca0a03d53ea551810a6f524ccbff121dd36c5a3.png)
[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公开说明书[11]公开号CN 1854146A [43]公开日2006年11月1日[21]申请号200510066959.6[22]申请日2005.04.25[21]申请号200510066959.6[71]申请人北京科莱博医药开发有限责任公司地址102600北京市大兴工业开发区金苑路26号[72]发明人张猛 李继军 余錚 尹大力 [74]专利代理机构中国国际贸易促进委员会专利商标事务所代理人李华英[51]Int.CI.C07F 9/6536 (2006.01)权利要求书 6 页 说明书 21 页[54]发明名称由右旋磷霉素制备左旋磷霉素的合成方法[57]摘要本发明涉及一种由右旋磷霉素制备左旋磷霉素的新的合成方法。
本发明克服了原有方法的不足，设计了一条安全、高效、适合工业化生产的磷霉素构型转化的合成方法。
以右旋磷霉素((+)－[1S，2R]－cis－环氧丙基磷酸)或右旋磷霉素的盐为原料，高收率的转化为左旋磷霉素((－)－[1R，2S]－cis－环氧丙基磷酸)或左旋磷霉素的盐。
200510066959.6权 利 要 求 书第1/6页1.一种由右旋磷霉素或其盐制备左旋磷霉素或其盐的新的合成方法，其特征在于本方法包括下列步骤：步骤1：式P-1化合物，即(+)-[1S，2R]-c i s-环氧丙基磷酸或其碱金属盐或其碱土金属盐，在酸性条件下，与水加成，开环氧环，得到式P-2化合物，即[1S，2S]-二羟基丙基磷酸；或者式P-1化合物为(+)-[1S，2R]-cis-环氧丙基磷酸与有机胺形成的铵盐，首先将铵盐与无机碱水溶液反应，反应液经有机溶剂萃取，得到的水相再在酸催化下与水加成，开环氧环，得到式P-2化合物，即[1S，2S]-二羟基丙基磷酸；步骤2：式P-2化合物在有机溶剂中或无溶剂条件下与式(I)化合物，即N，N’-二环己基-O-R2基异脲或N，N’-二异丙基-O-R2基异脲，反应制备式P-3化合物，所述有机溶剂为非质子性溶剂或醇R2-OH；步骤3：将式P-3化合物合环并脱保护制备左旋磷霉素或其盐； 反应流程如下：其中式(I)化合物为：上述反应流程中：M和M’分别选自氢、碱金属阳离子(L i+、N a+、K+等)、碱土金属阳离子(Mg2+、Ca2+等)或含氮阳离子，所述含氮阳离子选自NH4+、(+)右旋或(-)左旋或消旋的α-甲基苄胺的酸式阳离子(PhCH(CH3)NH3+)、环己胺的酸式阳离子、苯乙胺的酸式阳离子、苯胺的酸式阳离子、四氢吡咯的酸式阳离子、吡啶的酸式阳离子、乙胺的酸式阳离子、二乙胺的酸式阳离子、三乙胺的酸式阳离子等；R2选自C1-C4烷基或烯基，如乙基、异丙基、叔丁基、烯丙基等；芳香基甲基(即)，其中X和Y分别独立地为氢、卤素(氟、氯、溴、碘)、硝基、羟基、C1-C4烷基、烷氧基(O R’)、C1-C4烷氧酰基(OCOR’)、C1-C4烷酰基(COR’)，其中R’为C1-C4烷基或烯基，或R’为苯基，其条件是X、Y不在同一碳上；A为氢、C1-C4烷基或烯基、苯基、含1-3个取代基的苯基，所述苯基的取代基选自卤素、硝基、羟基、C1-C4烷基；或者R2为取代的乙基(Z n C H(3-n)C H2-)，其中n＝1-3，Z为氰基、卤素(氟、氯、溴、碘)、磺酰基(如，苯磺酰基等)、4-硝基苯基、三苯基硅基等；或者R2为苯基或含1-3个取代基的苯基，所述取代基选自卤素、硝基、羟基、C1-C4烷基等；R1为环己基或异丙基。
手性高效液相色谱法测定酒石酸阿福特罗中对映异构体
手性高效液相色谱法测定酒石酸阿福特罗中对映异构体摘要：建立了一种测定酒石酸阿福特罗对映异构体的手性高效液相色谱法，用于R,R-构型阿福特罗光学纯度的分析研究。
采用α1-酸性糖蛋白键合手性柱（CHIRALPAK®AGP，4.0 mm×100 mm，5 μm）为色谱柱，以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠2.34 g和磷酸氢二钠4.33 g，加1000 ml水使溶解）-10%异丙醇（95：5）为流动相，流速为1.0 ml/min，检测波长为210 nm，柱温为25℃。
该方法下S,S-阿福特罗与R,R-阿福特罗之间的分离度大于3.0；S,S-阿福特罗质量浓度在0.10~2.52 μg/ml范围内线性关系良好，线性方程为y=1.3587x+0.0146，r=0.999；S,S-阿福特罗的定量限和检测限浓度分别为0.10 μg/ml和0.05μg/ml；低、中、高3个浓度的S,S-阿福特罗回收率（n=3）分别为92.2%、95.5%、100.0%，RSD（n=9）为3.7%；供试溶液在室温放置24小时内稳定性良好。
经检测，四批酒石酸阿福特罗中仅一批检出S,S-阿福特罗0.02%，其余三批均未检出。
结果表明，所建立的方法经方法验证可准确可靠地测定酒石酸阿福特罗中的对映异构体。
关键词：酒石酸阿福特罗；对映异构体；手性高效液相色谱法中图分类号：文献标识码：A文章编号：The determination of Arformoterol Tartrate by Chiral HPLCCHEN Su-jie1*，SUN Jing-long，SHAN Bing-bing 1.Nanjing Caremo Biomedical Co. Ltd., Nanjing 210046,China)ABSTRACT：To establish a chiral HPLC method to determination Arformoterol Tartrate enantiomers for optical purity analysis researchof R,R- Arformoterol. The detection method is α 1-acid glycoprotein bonded chiral column CHIRALPAK®AGP(4.0mm×100mm，5μm) as a chromatographic column.The mobile phase was phosphate buffersolution(2.34g sodium dihydrogen phosphate and 4.33g sodium dihydrogen phosphate, dissolved with 1000ml water) –10%(v/v)isopropanol (95:5)at a flow rate of 1.0 ml/min.The column temperature was 25℃ and the detection wavelength was 210 nm. The resolution between the peaks of S,S- Arformoterol and R,R- Arformoterol was more than 3.0. The method was found to show good linearity over the concentration of S,S- Arformoterol range of 0.10~2.52 μg/ml. The linear equation wasy=1.3587x+0.0146, and the regression coefficient was 0.999. The limit content of quantification and limit content of detection of S,S- Arformoterol were 0.10 μg/ml and 0.05 μg/ml, respectively. The recoveries of S,S- Arformoterol (n=3)were 92.2%, 95.5% and 100.0% respectively at the concentration level of low, medium and high, with the RSD(n=9)of 3.7%.The test solution was stable for at least 24h at 25℃. After testing, only one of the four batches of Arformoterol Tartrate was detected, S,S-Arformoterol was 0.02%, and the other three batches were not detected.Results show that the method by the methods validation, the method can be accurately and reliably used for determination arformoterol tartrate enantiomers.KEY WORDS： arformoterol tartrate; enantiomer; chiral HPLC酒石酸阿福特罗（arformoterol tartrate）适用于慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者支气管收缩的长期维持治疗，包括慢性支气管炎和肺气肿。
右旋磷霉素手性转化产物检测方法的建立
右旋磷霉素手性转化产物检测方法的建立孙东阳;孙杨;姜平;张怡轩【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2010(0)4【摘要】建立以右旋磷霉素为底物生物转化产生左旋磷霉素的检测方法.通过考察藤黄微球菌与大肠埃希菌对左旋磷霉素的最小押菌浓度,确定检定菌种类;优化薄层色谱展开剂系统,将薄层色谱与生物显影相结合对转化产物进行定性;利用含量标准曲线,使用生物活性检测法对转化产物进行定量.藤黄微球菌对左旋磷霉素的最小抑菌浓度比大肠埃希菌小100倍,因此作为本实验的检定菌;薄层色谱的最佳展开剂确定为正丁醇/甲醇/水(4:3:2,体积比),此时左旋磷霉素在生物检定板上呈现边缘清晰的抑茼圈,且Rf值为0.51;在1.43～5.0 mg/mL范围内,押菌(圈)直径与磷霉素浓度的对数值成正比.以藤黄微球菌作为检定菌,不需要对转化产物进行分离纯化和精制,可利用薄层色谱与生物显影相结合的方法对产物进行定性,利用生物活性检测法对产物进行定量,达到简便快速地对转化产物进行定性和定量的目的.【总页数】4页(P44-47)【作者】孙东阳;孙杨;姜平;张怡轩【作者单位】沈阳药科大学,生命科学与生物制药学院,辽宁,沈阳,110016;沈阳药科大学,生命科学与生物制药学院,辽宁,沈阳,110016;沈阳药科大学,生命科学与生物制药学院,辽宁,沈阳,110016;沈阳药科大学,生命科学与生物制药学院,辽宁,沈阳,110016【正文语种】中文【中图分类】Q939【相关文献】1.手性磷霉素转化菌株的筛选 [J], 王笑颖;雷白时2.右旋磷霉素手性转化菌株的筛选与鉴定 [J], 孙杨;姜平;孙东阳;张怡轩3.应用混合菌系实现右旋磷霉素手性生物转化的初步研究 [J], 周丽沙;安海英;李慧;杨伟超;徐慧;史荣久4.右旋磷霉素生物转化菌株的筛选和鉴定 [J], 胡芳欣;胡江春;徐慧;潘华奇;徐杨5.固定化酶法手性转化右旋磷霉素的初步研究 [J], 姜平;孙杨;孙东阳;张怡轩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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ｃ ａ ｏ ｐｓｄａ ｎｂ ｔ ｏ ｍ ｔａｏ ｗ ｔ ４ ： ２ ｖ ｖｖ ，ｈ ｄ ｅ ｏ ｔｅｉ ｉ ｔｙｚｎ ｆｅｏｆ ｆｍ — ｉ ｗ ｓ ｍ ｏｅ ｓ ・ｕ ｎｌ ｅ ｎｌ ａ ｒ（ ３： ， ／／ ） ｔｅ ｇｓ ｆｈ ｈｂ ｏ ｏｅｏ ｌ ・ ｓ ｙ ｎ ｃ ａ ／ ｈ ／ ｅ ｅ ｎ ｉｒ ｖ ｏｏ
转 化产 物 进 行 分 离纯 化 和精 制 ， 利 用薄 层 色谱 与 生 物 显 影 相 结 合 的方 法 对 产 物 进 行 定性 ， 用 生 物 活 性 检 可 利
测 法对 产 物 进 行 定 量 ， 到 简 便 快 速地 对 转 化 产 物进 行 定性 和 定 量 的 目的 。 达
关键 词 左 旋 磷 霉 素 ； 旋 磷 霉 素 ； 测 右 检
中 国分 类 号 Ｑ ３ ９９ 文献 标 识 码 Ａ 文章 编 号 １ ０ ７ ２ （ ０ ０ ｏ ０ ４ ０ ０ ５— ０ １ ２ １ ） ４— ０ ４— ４
Ｄｅ ｅ ｔｏ ｅ ｈ ｄ ｆ ｒ Ｃｈｉａ ａ ｓ ｏ ｍ ａ ｉ ｎ Ｐｒ ｄ ｃ ｆ Ｄｅ ｔ ａ － ｓ ｏ ｙ ｉ ｔｃ ｉｎ Ｍ ｔ ｏ ｏ ｒ ｌＴｒ ｎ ｆ ｒ ｔｏ ｏ ｕ ｔ ｏ ｘ ｒ ｌＦｏ ｆ ｍ ｃ ｎ
４ ４
微 生物 学 杂 志 ２１ 年 ７ ００ 月第 ３ 卷 第 ４ ｏ 期
Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ ＩＲ ＢＯ Ｏ ＹＪｌ２ １ Ｖ １ ０Ｎ． Ｏ Ｒ Ａ ＦＭＣ Ｏ ＩＬ Ｇ ｙ ００ ｏ ３ ｏ４ ｕ ．
右 旋 磷 霉 素 手性 转化 产 物检 测方 法 的建 立
孙 东阳 ，孙 杨 ， 姜 平 ，张 怡轩
Ａ ｂｓｒ ｃ Ｉ ｒ ｅ ｏｅ ｔ ｂｉｈ ａ ｄ ｔｃ ｉｎ ｍｅｈ ｄ ｆ ｒｌ ｖ ｆ ｓ ｍ ｙ ｉ ｎ ｂｏ—ｒ ｎ ｆｒ ｔｏ ｉ ｕｄ ｅ ｘｔａ— ｓ — ｔａ ｔ ｎ ｏｄ ｒｔ ｓａ ｌｓ ｅｅ ｔｏ ｔｏ ｏ ｅ ｏ－ ｆ ｏ ｏ ｃｎ ｉ ｉ ｔａ ｓｏｍａ ｉｎ ｌｑ ｉ ｗｈ ｎ ｄｅ ｒｌｆ ｆ ｏ ｏ
对 转化 产 物 进 行 定 性 ； 用 含 量 标 准 曲线 ， 用 生物 活 性 检 测 法 对 转 化 产 物 进 行 定 量 。 藤 黄 微 球 茵 对 左 旋 磷 利 使
霉 素 的 最 小抑 茵浓 度 比 大肠 埃 希 茵小 １０倍 ， ０ 因此 作 为 本 实验 的 检 定 茵 ； 层 色谱 的 最 佳展 开 剂 确 定 为 正 丁 薄
（ 阳 药科 大学 生 命 科 学 与生 物 制 药 学 院 ， 宁 沈 阳 沈 辽 １０ １ １０６）
摘 要 建 立 以右 旋 磷 霉 素 为底 物 生物 转 化 产 生左 旋磷 霉 素 的 检 测 方 法 。通 过 考 察藤 Leabharlann 微 球 茵 与 大 肠 埃 希
茵对 左 旋 磷 霉 素 的 最 小抑 茵 浓度 ， 定 检 定 菌 种 类 ； 化 薄层 色谱 展 开 剂 系统 ， 薄层 色谱 与 生 物 显 影 相 结 合 确 优 将
Ｓ １ｗａ ｅ ｅｍ ｉｅ ｓ ｔｅ ｔ ｓ ｒ ａ ｉｍ ｎ ｔ ｅ ｆｌｏ ｎｇｄｅｅ ｔｏ ． Ｔｈ ｐ ｉ ｌｄ ｖ ｌｐｉｇ ｓ ｓｅ ｆｒｌｖ — ｓｏ — Ｏ Ｍ ｓｄ ｔ ｒ ｎ ｄ ａ ｈ ｅ ｔｏ ｇ ｎｓ ｉ ｈ ｏｌｗｉ ｔｃｉ ｎ ｅ ｏ ｔｍａ ｅ ｅ ｏ ｎ ｙ ｔ ｍ ｅ ｏ ｆ ｆ ｍｙ ｏ ｏ
醇／ 甲醇／ （ ３： ， 积 比 ） 此 时左 旋 磷 霉 素在 生 物栓 定板 上 呈 现 边 缘 清 晰 的抑 茵 圈 ， Ｒ 值 为 Ｏ ５ ； 水 ４： ２ 体 ， 且 ｆ ． ｌ在
１４ ～ ５ ０ ｍ ／ ．３ ． ｇ ｍＬ范 围 内 。 茵 圈 直径 与磷 霉 素 浓度 的对 数 值 成 正 比 。以藤 黄 微 球 茵 作 为 检 定 茵 ， 需要 对 抑 不
Ｓ ｎ — ａ ｇ，Ｓ ｎ ，Ｊ ＡＮＧ Ｐ ｎ ，Ｚ ＮＧ Ｙｉ ｕ ｎ ＵＮ Ｄｏ ｇ ｙ ｎ ＵＮ Ｙａ ｇ Ｉ ｉｇ ＨＡ — ａ ｘ
（ ｃ．ｏ ｆ ｃ Ｓｈ ｆｕｅ ｉ Ｂｏｈ ｒ ， ｈｎａ ｇＰ ａｍ ｎ． ｈｎ ａｇ １０ ６ Ｓ ．＆ ｉ ａｍ． Ｓ ｅｙｎ ｈ ｒ．Ｕ ｉ，Ｓｅｙｎ ，１０ １ ） ｐ
ｍ ｃ ａ ｅ ｐｏ ｅ ｓ ｕ ｓ ａ ， ｈ Ｉ ａ ｅ ｆ ｏｆｍ ｃ ｇ ｉｓ Ｍｉ ｏｏ ｃｓ ｕ ｕ Ｍ１ ｎ ．ｃｌ （ ｃ ｙｉ ｗ ｓ ｍ ｌ ｄ ａ ａｓ ｂｔ ｔ ｔｅＭ Ｃ ｖ ｕ ｓ ｓ ｙ ｉ ａａｎｔ ｃ ｃｃｕ ｌｔ ｓ（ ）ａ ｄＥ ｏｉ Ｅ ） ｎ ｙ ｒｅ ｌ ｏｆ ｏ ｎ ｒ ｅ