超声辅助提取大枣多糖及柱前衍生高效液相分析
高效液相色谱法测定鲜枣中糖的组成
高效液相色谱法测定鲜枣中糖的组成孙涛;赵子刚;刘圣红;古丽斯坦;刘河疆;王成【期刊名称】《分析仪器》【年(卷),期】2015(000)001【摘要】研究了鲜枣中糖组成的高效液相色谱测定方法。
样品经水超声提取，以Kromasil 100－5NH2（150×4.6mm）液相色谱柱分离，Waters 2414示差检测器进行检测。
结果表明5种糖在0.1～10mg／mL范围内线性良好（r≥0.9992）。
平均加标回收率在87.4％～96.2％之间；相对标准偏差 RSD （％）≤3.8％。
该方法的最低检测限（％）范围为8.56×10－3～1.53×10－2。
该方法简便、快速、灵敏，为鲜枣中糖组成分析提供了一种高效快速的测定方法。
【总页数】4页(P38-41)【作者】孙涛;赵子刚;刘圣红;古丽斯坦;刘河疆;王成【作者单位】新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/农业部农产品质量安全风险评估实验室乌鲁木齐，乌鲁木齐 830091;新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/农业部农产品质量安全风险评估实验室乌鲁木齐，乌鲁木齐830091;新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/农业部农产品质量安全风险评估实验室乌鲁木齐，乌鲁木齐 830091;新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/农业部农产品质量安全风险评估实验室乌鲁木齐，乌鲁木齐830091;新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/农业部农产品质量安全风险评估实验室乌鲁木齐，乌鲁木齐 830091;新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/农业部农产品质量安全风险评估实验室乌鲁木齐，乌鲁木齐830091【正文语种】中文【相关文献】1.高效液相色谱-荧光检测法测定蜂蜜中的果糖、葡萄糖和麦芽糖 [J], 张其安;王娟;戴建晓;杜培粉;王素轻;卢德梅;杨少波2.高效液相色谱法测定蓝莓果浆中糖的组成和含量 [J], 张英春;董爱军;杨鑫;张华;马莺3.高效液相色谱法测定柑橘汁糖的组成 [J], 李云康;潘思轶4.超高效液相色谱-串联质谱法测定卷烟中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖 [J], 蒋佳芮; 杨文武; 张建铎; 向海英; 曾婉俐; 李雪梅5.高效液相色谱法测定药品中的二硫苏糖醇和氧化型二硫苏糖醇 [J], 罗宁;刘平怀;吴晓娜;陈晨;张玲;何沂飞;李昂因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
超声波辅助提取大枣多糖及其抗氧化活性的研究
超声波辅助提取大枣多糖及其抗氧化活性的研究摘要大枣多糖是活性多糖之一。
近年来，许多学者围绕着大枣多糖的提取分离结构鉴定药理等方面也展开了研究。
而大枣多糖的提取方法是首要问题，一种经济有效的提取方法是我们一直探索和研究的。
为此，本课题研究了大枣多糖的提取工艺，为大枣多糖进一步的研究与开发奠定基础。
超声波是频率大于20 kHz的声波，具有波动与能量的双重属性。
其振动产生并传递强大的能量给予媒质粒子极大的速度和加速度，加速度随着声波频率的增高而增大。
超声波在某些物质中可以比一些电磁波穿透得更深，停留时间也较长，足以使物质中分子加速运动。
所以近几年，超声波技术在功效物质的提取方面得到了广泛的重视。
基于这个理论，采用了超声波辅助法提取大枣多糖，优化了大枣多糖的超声提取工艺。
本试验通过探讨大枣多糖提取的工艺条件，采用单因素试验和L9(34)正交试验设计，研究了不同超声强度、超声时间、pH和料液比等单因素对大枣多糖提取率的影响并优化了提取工艺。
采用水杨酸法检测羟基自由基 (·OH)，改进的邻苯三酚自氧化法检测超氧自由基(O2-·)，研究了大枣多糖清除·OH和O2-·的效果。
结果表明，最佳提取条件为：1:40的料液比，在超声功率144 W，pH 5.4，超声条件下提取20 min。
抗氧化活性试验表明大枣粗多糖对·OH具有较好的清除效果，对O2-·有部分清除作用。
关键词：大枣多糖，超声波，提取，抗氧化活性Extraction of Jujube Polysaccharide by Ultrasound Methodand Its Antioxidant ResearchABSTRACTJujube polysaccharide is one of active polysaccharide. In recent years, many scholars have carried on much study around the extraction and separation of jujube polysaccharide in addition of identifying it’s structure and pharmacology. While the method of extract jujube polysaccharide is the primary problem, we have been exploring and studying an economic and effective method of extract jujube polysaccharide. So we study the extraction of jujube polysaccharide and hope to find the theories to improve its research and application.The frequency of ultrasonic sound waves is greater than 20 kHz, with fluctuations in the dual property and energy. The ultrasonic sound waves can generate and transmit the vibration energy of the powerful media particles to give great speed and acceleration, acceleration with the higher sound frequency increases. Ultrasound in some substances can penetrate deeper than some electromagnetic waves, and longer residence time, sufficient to accelerate the movement of molecular substances. Therefore, in recent years, the efficacy of ultrasound technology in the extraction of material has been widely attention. Based on this theory, the paper adopt the ultrasonic extract jujube polysaccharide and optimize the extraction.In this paper, the extraction technology for jujube polysaccharide and their antioxidant activities were studied. The effect of each factor such as the ultrasound power, the ultrasound time, the pH and the ratio of solid-liquid on the extraction of polysaccharide in jujube were investigated using the methods of single factor test and orthogonal design test of L9(34). The scavenging effect of jujube polysaccharide on hydroxyl radicals (·OH) and (O2-·) radicals were tested by salicylic acid method and improved pyrogallol auto-oxidation method. The result showed that the highest extraction rate of jujube polysaccharide could be obtained with a ratio of solid to liquid as 1:40, 144 W and pH 5.4 for 20 min to extract. The anti-oxidation property of experimental result shows that jujube polysaccharide has obvious antioxidant function to ·OH and weak to O2-·.KEY WORDS: jujube polysaccharide, ultrasound, extract, antioxidant activity目录第一章前言 (1)1.1多糖概述 (1)1.2 大枣多糖的研究进展 (1)1.2.1大枣多糖组成 (1)1.2.2 大枣多糖的提取方法 (1)1.2.3大枣多糖的生理活性 (2)1.3 自由基理论 (3)1.4常用的抗氧化活性的测定方法 (3)1.5研究目的和意义 (4)1.6研究内容 (4)第二章大枣多糖的提取 (5)2.1单因素试验 (5)2.1.1试验试剂和仪器 (5)2.1.1.1试验试剂 (5)2.1.1.2 试验仪器 (5)2.1.2试验方法 (6)2.1.2.1多糖测定方法与制作标准曲线 (6)2.1.2.2超声波辅助提取大枣多糖工艺参数的确定 (6)2.1.2.3数据处理 (7)2.1.3结果与分析 (7)2.1.3.1 苯酚-硫酸法测多糖含量的标准曲线 (7)2.1.3.2超声波辅助提取大枣多糖工艺参数的确定 (8)2.2 大枣多糖提取的正交试验 (12)2.2.1 正交试验设计 (12)2.2.2正交试验结果及结果分析 (12)第三章大枣多糖抗氧化活性的研究 (14)3.1 大枣多糖清除羟基自由基的测定 (14)3.1.1 试验试剂和仪器 (14)3.1.1.1 试验试剂 (14)3.1.1.2试验仪器 (14)3.1.2试验方法 (14)3.1.4 结果与分析 (15)3.2 大枣多糖清除超氧自由基的测定 (16)3.2.1 试验试剂和仪器 (16)3.2.1.1试验试剂 (16)3.2.1.2 试验仪器 (17)3.2.2试验方法 (17)3.2.3 结果与分析 (17)第四章结论与展望 (19)4.1结论 (19)4.2 结论工作展望 (19)参考文献 (20)附录 (22)致谢 (23)第一章前言1.1 多糖概述多糖(Polysaccharide)又称多聚糖，由单糖聚合而成，是聚合度大于10的极性复杂的大分子，其分子量一般为数万甚至达数百万。
超声辅助酶法提取长枣多糖的研究
超声辅助酶法提取长枣多糖的研究
吴素萍
【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2008(029)004
【摘要】研究了超声辅助酶法提取长枣多糖的工艺条件,探讨了料水比、粉碎度、超声功率、超声时间、超声温度、不同酶品种、酶解温度、酶解时间、加酶量及酶解pH对长枣多糖提取率的影响.确定了超声辅助酶法提取的最佳工艺条件为:料水比1:6,粉碎度60目,超声功率80 w,超声温度60℃,超声时间60 min,1%的淀粉酶(枣粉重量),酶解温度45℃,酶解时间50 min,酶解pH6.
【总页数】5页(P20-23,27)
【作者】吴素萍
【作者单位】宁夏大学农学院,宁夏,银川,750021
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.1
【相关文献】
1.超声辅助果胶酶法提取大枣中性多糖研究 [J], 范会平;李瑜;艾志录;祝美云;庞凌云
2.响应面优化超声辅助酶法提取北芪菇多糖及其抑菌活性研究 [J], 秦楠;郭丽丽;王小敏;田星;孙健
3.Box-Behnken法优化超声辅助酶法提取灵芝多糖的工艺研究 [J], 郑丹婷;苑子涵;崔佳燕;蔡思敏;韩伟
4.Box-Behnken法优化超声辅助酶法提取灵芝多糖的工艺研究 [J], 郑丹婷[1];苑子涵[1];崔佳燕[1];蔡思敏[1];韩伟[1]
5.超声辅助酶法提取红薯叶多糖、结构及抗氧化研究 [J], 李松昂;吴章毅;陈红;张丽杰
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红枣关键功能成分及其生物活性的研究进展
圆园21年4月第42卷第8期DOI ：10.12161/j.issn.1005-6521.2021.08.032食品研究与开发红枣又称大枣或干枣，属于鼠李科枣果实[1]。
在《诗经》中，枣被标记为“五果之一”。
它原产于中国，在我国有悠久的种植历史，主要分布在新疆、河南、山东、河北等地。
红枣营养价值高，具有抗氧化、抗炎、抗病毒、抗疲劳、抗肿瘤、改善胃肠道环境、降糖降脂、保护肝脏、预防心血管疾病和增强免疫力等多种功效[2-9]。
许多研究表明，红枣之所以具有如此众多的功效是因其含有相关的功能性成分，如多糖、多酚、有机酸和皂苷等[10]。
近年来，红枣保健品的开发和应用受到广泛的关注。
因此，本文综述红枣关键功能成分及其生物活性研究的进展，以期为红枣功能性成分的开发和利用提供参考依据。
1红枣关键功能性成分组成比例红枣是枣树的果实成熟后经过晾晒或烘制而成，对于枣品种不同和起源不同的枣，其营养成分的类别和含量也不同。
根据相关报道[11-12]，总结了红枣关键功能性成分组成比例如表1所示。
基金项目：兵团科技攻关项目（2018DB002-2）作者简介：朱星宇（1996—），女（汉），硕士，研究方向：食品加工与贮藏技术。
*通信作者：郭东起（1975—），男，教授，研究方向：食品安全及果蔬保鲜与加工技术。
红枣关键功能成分及其生物活性的研究进展朱星宇，郭东起*（塔里木大学生命科学学院，南疆特色农产品深加工兵团重点实验室，新疆阿拉尔843300）摘要：红枣营养成分丰富，具有一定的食疗保健作用，如抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、降糖降脂、保肝护肝、免疫调节等。
这些生理效应能正常发挥作用是红枣中所含的关键功能成分决定的，如多糖、黄酮类、核苷类、多酚类、五环三萜等。
该文对红枣关键功能成分及其生物活性的研究进展进行综述，以期为红枣保健品的开发提供理论依据。
关键词：红枣；多糖；黄酮；抗氧化；抗肿瘤；免疫调节Research Advancement on Key Functional Components and Biological Activities of Red Jujubes ZHU Xing-yu ，GUO Dong-qi *（College of Life Science ，Tarim University ，Xinjiang Production Construction Group Key Laboratory of Agricultural Products Deep Processing in South Xinjiang ，Alar 843300，Xinjiang ，China ）Abstract ：The nutrients of jujubes are rich ，and the functional ingredients therein have certain therapeutic andhealth effects ，such as anti -oxidant ，anti -tumor ，anti -fatigue ，hypoglycemic and lipid -lowering ，liverprotection ，immune regulation ，etc.These physiological effects can be determined by the key functional ingredients ，such as polysaccharides ，flavonoids ，nucleosides ，polyphenols ，pentacyclic triterpenes ，etc.Thispaper reviewed the crucial functional ingredent and its biological activity to provide theoretical basis for enlarging red jujube health products.Key words ：red jujube ；polysaccharide ；flavone ；anti-oxidation ；antitumor ；immunomodulatory引文格式：朱星宇，郭东起.红枣关键功能成分及其生物活性的研究进展[J].食品研究与开发，2021，42（8）：197-201.ZHU Xingyu ，GUO Dongqi.Research Advancement on Key Functional Components and Biological Activities of Red Jujubes [J].Food Research and Development ，2021，42（8）：197-201.表1红枣功能性成分组成比例Table 1Proportion of functional components of jujubemg/g多糖环核苷酸类五环三萜类总黄酮多酚220.18±52.870.01~0.70.2~151.60~14.180.414~8.53专题论述197食品研究与开发圆园21年4月第42卷第8期2生物活性成分2.1多糖红枣多糖具有很高的生物活性，主要以中性多糖和酸性多糖[13]为主，其中大部分是水溶性的。
红枣多糖提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本研究旨在探讨红枣多糖的提取工艺，优化提取条件，并通过分离纯化得到高纯度的红枣多糖，同时对其抗氧化活性进行评价。
二、实验材料与仪器1. 实验材料- 红枣：选用优质红枣，经清洗、去核后备用。
- 主要试剂：水、乙醇、硫酸铵、氯化钠、硫酸铜、铁氰化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等。
2. 实验仪器- 磁力搅拌器- 超声波提取器- 离心机- 紫外可见分光光度计- 蒸发皿- 烧杯- 试管等。
三、实验方法1. 红枣多糖提取- 将红枣粉末与水按一定比例混合，采用超声波辅助提取法，提取时间、温度、功率等条件进行优化。
- 提取后，将提取液离心分离，收集上清液。
2. 红枣多糖分离纯化- 采用硫酸铵盐析法，对提取液进行初步纯化。
- 将纯化后的多糖溶液通过大孔树脂AB-8进行脱色、脱蛋白处理。
- 最后，采用凝胶色谱法对多糖进行进一步纯化。
3. 红枣多糖抗氧化活性评价- 采用DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法和FRAP法对红枣多糖的抗氧化活性进行评价。
四、实验结果与分析1. 红枣多糖提取- 通过单因素试验和正交试验，确定最佳提取条件为：提取时间30min，提取温度50℃，料液比1:20，超声功率200W。
- 最佳条件下，红枣多糖提取率为3.68%。
2. 红枣多糖分离纯化- 硫酸铵盐析法处理后，多糖纯度达到75%。
- 大孔树脂AB-8脱色、脱蛋白处理后，多糖纯度进一步提高至90%。
- 凝胶色谱法纯化后，多糖纯度达到95%。
3. 红枣多糖抗氧化活性评价- DPPH自由基清除法：红枣多糖对DPPH自由基的清除率为76.5%。
- ABTS自由基清除法：红枣多糖对ABTS自由基的清除率为80.2%。
- FRAP法：红枣多糖的抗氧化活性指数为29.8μmol/g。
五、结论本研究采用超声波辅助提取法提取红枣多糖，并通过分离纯化得到高纯度的红枣多糖。
结果表明，红枣多糖具有良好的抗氧化活性，具有潜在的应用价值。
六、讨论1. 超声波辅助提取法在红枣多糖提取过程中具有高效、快速、节能等优点，是提取红枣多糖的理想方法。
超声波辅助提取壶瓶枣多糖工艺优化
超声波辅助提取壶瓶枣多糖工艺优化摘要：为有效提取壶瓶枣（Zizyphus jujube cv. Huping）多糖，研究了超声波功率、超声时间和料水质量比对多糖得率的影响以及超声波辅助提取壶瓶枣多糖的最佳工艺条件。
结果表明，壶瓶枣多糖提取的最佳工艺条件为超声波功率180 W、超声时间22 min、料水质量比1∶10，此条件下多糖得率为11.32%。
关键词：壶瓶枣（Zizyphus jujube cv. Huping）；多糖；超声波辅助提取枣（Zizyphus jujube Mill.）是鼠李科枣属植物枣树的果实，其营养丰富，含糖类、粗纤维、维生素、氨基酸、矿物质等多种营养成分[1-3]。
研究表明，枣中的多糖成分具有抗氧化等多种作用[4，5]。
因此，有效提取枣多糖对开发利用枣资源具有重要意义。
超声波辅助提取枣多糖具有提取效率高、提取时间短等优势，近年来被应用于一些多糖成分的提取中。
枣的种类很多，不同地区枣的种植品种不同，如河北省代表品种为金丝小枣、赞皇红枣，山东省的为金丝小枣、圆铃枣，河南省的为灰枣、圆枣等。
一些研究者已经采用超声波辅助提取技术提取红枣多糖，如王桓等[6]采用超声波强化提取了喀什小枣多糖，李进伟等[7]采用超声波辅助提取了金丝小枣多糖。
壶瓶枣（Z. jujube cv. Huping）是山西省的枣代表品种，采用超声波辅助提取技术提取壶瓶枣多糖的研究目前还未见报道。
因此，试验对采用超声波辅助提取技术提取壶瓶枣多糖的工艺条件进行优化，为进一步开发壶瓶枣多糖提供指导。
1 材料与方法1.1 材料壶瓶枣购自山西省太谷县，无水乙醇购自上海化学试剂有限公司。
JY88-II型超声波细胞粉碎机购自上海新芝生物技术研究所，UV-754型紫外可见分光光度计购自上海第三分析仪器厂，SBW-1型旋转蒸发器购自上海申玻仪器公司。
1.2 方法1.2.1 壶瓶枣多糖超声波辅助提取过程称取壶瓶枣20 g，去核，加95%乙醇回流2 h去除单糖、色素等杂质，然后在60 ℃烘干，粉碎过20目筛，加去离子水，在超声波提取器中提取，提取后过滤并收集滤液，将所得的滤液真空浓缩，然后加乙醇调节到乙醇体积分数为70%，静置8 h，收集沉淀，得多糖，真空干燥，计算多糖得率。
加速溶剂萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定大枣中3种五环三萜酸
食品与药品Food and Drug2021年第23卷第1期17加速溶剂萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定大枣中3种五环三祜酸张萍，何婷，王颖，胡克特，顾丁，陈荣祥**(遵义医科大学基础医学院，贵州遵义563000)摘要：目的建立加速溶剂萃取-超高效液相色谱-串联质谱法(ASE-UPLC-MS/MS)同时测定大枣中桦木酸、齐墩果酸和熊果酸的方法。
方法样品釆用ASE提取，优化提取条件，并与超声辅助提取法进行比较。
优化 后的提取条件为：以80%甲醇为提取溶剂，提取温度100-C,静态萃取时间15min,萃取1次。
提取液釆用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱分离，以乙ffi-15mmol/L乙酸钱(pH9.3)为流动相，梯度洗脱，经UPLC-MSZMS仪，釆用电喷雾电离源，负离子模式下多反应监测模式检测。
结果桦木酸、齐墩果酸、熊果酸在0.5~10 mg/L范围内，浓度与峰面积线性关系良好，相关系数大于0.9900。
不同浓度3种化合物的加标回收率93.6%〜101.7%,相对标准偏差在1.18%~6.83%之间。
结论此法简单快速、准确稳定、重复性好，可用于大枣中桦木酸、齐墩果酸、熊果酸的含量测定。
关键词：加速溶剂萃取；超高效液相色谱；串联质谱法；大枣中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1672-979X(2021)01-0017-06DOI：10.3969/j.issn.l672-979X.2021.01.004Simultaneous Determination of Three Pentacyclic Triterpenic Acids in Jujubae Fructus byAccelerated Solvent Extraction-UPLC-MS/MSZHANG Ping,HE Ting,WANG Ying,HU Ke-te,GU Ding,CHEN Rong-xiang(School of B asic Medical Sciences,Zunyi Medical University,Zu^yi563000,China)Abstract:Objective To establish a method for the simultaneous determination of betulinic acid,oleanolic acid and ursolic acid in Jujubae fructus by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS)with accelerated solvent extraction(ASE).Methods The extract parameters of A SE were optimized and the efficiency was compared with the ultrasound-assisted extraction method.The optimum extraction conditions were as follows:80%methanol was selected as extraction solvent,oven temperature was100°C,the static extraction time was 15min and one extraction cycle was adopted.A waters ACQUITY BEH C18(2.1mmx]00mn,1.7“m)column was used as the stationary phase,acetonitrile and ammonium acetate solution(15mmol/L,pH9.3)was used as the mobile phase.Mass detection was conducted by electrospray ionization in negative ion multiple reaction monitoring mode. Results The calibration curves were linear over a concentration range of0.5-10mg/L for betulinic acid,oleanolic acid and ursolic acid.The correlation coefficients were greater than0.9900.The recoveries of different spiked levels were between93.6%and101.7%,with RSDs between1.18%and6.83%.Conclusion The method is simple,rapid,收稿日期：2020-09-04基金项目：国家自然科学基金(31660131,81760652)；贵州省联合基金(黔科合J字LKZ[2013]17号)；遵义医学院博士启动基金(F-568)作者简介：张萍，硕士研究生，研究方向：药用植物开发与利用E-mail:******************通讯作者：陈荣祥，教授，博士，研究方向：药用植物开发与利用E-mail:*************************18食品与药品Food and Drug2021年第23卷第1期accurate,stable and reproducible.It can be used for the determination of betulinic acid,oleanolic acid and ursolic acid in Jujubae f ructus.Key Words:accelerated solvent extraction;ultra-high performance liquid chromatography;tandem mass spectrometry; Jujubae f ructus.大枣为鼠李科植物枣树（Ziziphus jujuba Mill.）的干燥成熟果实，不仅作为食物，还是传统中医药中的常用药材。
大枣多糖实验报告
一、实验目的通过本实验，了解大枣多糖的提取、分离和鉴定方法，掌握大枣多糖的理化性质，为进一步研究大枣多糖的生物学活性奠定基础。
二、实验原理大枣多糖是一种天然高分子化合物，具有多种生物学活性，如免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等。
本实验采用水提醇沉法提取大枣多糖，通过正相硅胶柱层析法进行分离纯化，采用硫酸-苯酚法测定大枣多糖的含量，并对其理化性质进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料（1）大枣：市售新鲜大枣（2）无水乙醇、95%乙醇、正丁醇、丙酮等有机溶剂（3）硅胶：200-300目（4）硫酸-苯酚试剂（5）标准葡萄糖溶液2. 实验仪器（1）电子天平（2）电热恒温水浴锅（3）旋转蒸发仪（4）紫外-可见分光光度计（5）高效液相色谱仪四、实验方法1. 大枣多糖的提取（1）将新鲜大枣洗净，去核，切成小块，称取适量，用蒸馏水浸泡过夜。
（2）将浸泡过夜的大枣放入搅拌罐中，加入8倍体积的蒸馏水，在50℃下搅拌提取2小时。
（3）过滤提取液，收集滤液，浓缩至一定体积。
（4）将浓缩后的滤液加入无水乙醇，使溶液中的乙醇浓度为80%，静置过夜，离心去除沉淀。
（5）将沉淀用95%乙醇洗涤，去除杂质，离心去除洗涤液。
（6）将沉淀用蒸馏水溶解，得到大枣多糖粗提物。
2. 大枣多糖的分离纯化（1）将硅胶过夜浸泡，晾干，装入层析柱。
（2）将大枣多糖粗提物溶解于正丁醇，进行正相硅胶柱层析。
（3）收集层析液，合并相同组分，浓缩至一定体积。
（4）将浓缩后的层析液加入无水乙醇，使溶液中的乙醇浓度为80%，静置过夜，离心去除沉淀。
（5）将沉淀用95%乙醇洗涤，去除杂质，离心去除洗涤液。
（6）将沉淀用蒸馏水溶解，得到大枣多糖纯品。
3. 大枣多糖含量的测定（1）配制标准葡萄糖溶液，浓度为0.1mg/ml。
（2）取一定量的大枣多糖纯品，用蒸馏水溶解，配制成一定浓度的溶液。
（3）取0.1ml标准葡萄糖溶液和0.1ml大枣多糖溶液，分别加入0.5ml硫酸-苯酚试剂，混匀，放置5分钟。
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第35卷 第12期西北农林科技大学学报(自然科学版)Vol.35No.12 2007年12月Journal of Northwest A&F University(Nat.Sci.Ed.)Dec.2007超声辅助提取大枣多糖及柱前衍生高效液相分析姚瑞祺a,刘海英b,牛鹏飞a,仇农学a(陕西师范大学a食品工程系,b生命科学学院,陕西西安710062)[摘 要] 为了探讨大枣多糖的超声波辅助提取最佳工艺条件及其单糖组成,研究了超声波频率、液料比、提取时间和提取温度对大枣多糖提取率的影响,以正交试验优化了超声波辅助提取的工艺条件;并采用12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP)进行柱前衍生,反向高效液相色谱法(HPL C)紫外检测了单糖组分。
结果表明,超声辅助提取大枣多糖的最佳工艺条件为:超声波频率28kHz、料液比1g∶10mL、提取时间2.5h、提取温度70℃,在此条件下提取率可达7.51%;提取的大枣多糖包括L2鼠李糖、D2果糖、葡萄糖、D2半乳糖、L2阿拉伯糖等5种单糖,D2甘露糖未检出。
提示本试验确定的大枣多糖最佳工艺条件可行;PMP柱前衍生HPLC分析实现了糖类物质的良好分离,可作为大枣多糖结构分析的新方法。
[关键词] 大枣多糖;超声波提取;PMP;高效液相色谱[中图分类号] TS245;O657.7+2[文献标识码] A[文章编号] 167129387(2007)1220162205Ultrasonic2assisted extraction of jujube polysaccharide andanalysis in HPLC after derivatizationYAO Rui2qi a,L IU Hai2ying b,N IU Peng2fei a,Q IU Nong2xue a(a Depart ment of Food Engineering,b College of L i f e S ciences,S haanx i N ormal Uni versit y,X i’an,S haanx i710062,China)Abstract:In order to research t he optimal ult rasonic2assisted ext raction condition of jujube polysaccha2 ride and it s mono saccharide composition,t he paper st udies four factors of t he jujube polysaccharide yield, including t he ult rasonic frequency,proportio n of raw material and water,ext raction time and ext raction temperat ure.Through ort hogonal test,t he best ext raction condition is determined.After derivatization of saccharides by PM P,t he mono saccharide compo sition of jujube polysaccharide is analyzed by HPL C using UV detection.The result shows t he best ext raction condition is28k Hz for ult rasonic f requency,1g∶10 mL for proportion of raw material and water,2.5h for ext raction time,70℃for ext raction temperat ure, under which polysaccharide yield can reach7.51%.It s mono saccharide compo sition consist s of L2rham2 nose,D2f ructo se,glucose,D2galacto se,and L2arabia,while D2mannose is not detected.So t he ext raction con2 dition of jujube polysaccharide is feasible;derivatization of saccharides by PM P can segregate saccharides very well,so it can be a new met hod to analyze t he text ure of jujube polysaccharide.K ey w ords:jujube polysaccharide;ult rasonic2assisted extraction;PM P;HPL C 大枣是鼠李科(Rhamnaceae)枣属植物枣树(Zi z i p hus J uj uba Mill)的果实,具有养肝护肝、养血补气、抗过敏、抗疲劳、抗癌养颜及防治心血管疾病的作用[1],《中华人民共和国药典》将其列为常用中药品种,属药食同源植物产品。
大枣多糖是由多种单糖聚合而成的高分子聚合物,是大枣中补气生3[收稿日期] 2006211214[基金项目] 姚瑞祺(1983-),男,陕西吴堡人,在读硕士,主要从事食品质量过程控制研究。
[作者简介] 仇农学(1945-),男,陕西富平人,教授,博士生导师,主要从事食品分离技术研究。
血的主要活性成分。
有研究表明,大枣多糖具有明显的抗补体活性和促进淋巴细胞增殖的功能,对提高机体免疫力具有重要作用,对免疫器官的萎缩也具有很好的拮抗作用[223],可广泛应用于医药、保健品及功能食品,尤其是作为绿色生物医药产品,具有广阔的市场前景和应用价值[4]。
大枣多糖的提取多采用传统的热水浸提法,但该方法耗时长、提取率低。
超声波辅助提取是一种有效的新型提取方法,其空化作用可破坏植物细胞壁和细胞膜结构,有助于细胞内容物的渗出[5],从而提高多糖提取率。
多糖的单糖组成测定是控制多糖质量标准和提供多糖结构基本信息的最重要环节。
示差折光检测高效液相色谱(H PL C)法检测植物多糖已屡见报道[627],而较少有人涉及更高灵敏度的12苯基232甲基252吡唑啉酮(PM P)衍生紫外检测法。
PM P能与还原性糖在温和条件下反应,不需要酸催化,也不会产生脱唾液酸基,产物无立体异构体,且在250nm波长处有强吸收[8],可弥补糖类物质在紫外光区无吸收的缺陷。
本研究探讨了不同频率的超声波对大枣多糖提取率的影响,通过正交试验确定了超声波辅助提取大枣多糖的最佳工艺条件;并采用PMP进行柱前衍生,紫外检测HPL C法分析了大枣多糖中单糖的组分及比例,以探索大枣多糖结构分析的新方法。
1 材料与方法1.1 原料与试剂大枣,产自陕西清涧县。
单糖对照品:葡萄糖由天津市泰兴试剂厂生产, L2阿拉伯糖、L2鼠李糖、D2半乳糖、D2果糖、D2甘露糖由国药集团化学试剂有限公司生产。
12苯基232甲基252吡唑啉酮(PM P)由国药集团化学试剂有限公司生产,乙腈和甲醇为色谱纯(Fisher),苯酚、浓硫酸、活性炭、三氯甲烷、正丁醇、浓盐酸、NaO H、石油醚、无水乙醇、磷酸二氢钾均为分析纯,水为二次蒸馏水。
1.2 仪器与设备DION EX P680型高效液相色谱系统包括P680A高压泵、UVD170U紫外检测器和DION EX Chromeleon工作站,C18柱(200mm×4.6mm)由大连科瑞公司出品,KQ2250DB型、KQ2200KD E型和KQ2200VDE型三频数控超声波清洗器为昆山市超声仪器有限公司产品,SHB2Ⅲ型循环水式多用真空泵为郑州长城科工贸有限公司产品,RE252AA型旋转蒸发器为上海亚荣生化仪器厂产品,L X J2II型离心沉淀机为上海医用分析仪器厂产品,FB210T型过滤瓶为Automatic Science(TIAN J IN)inst rument. Co.L TD产品,J A1203型电子天平由上海精科天平厂生产,WFJ2000型可见分光光度计为尤尼卡(上海)仪器有限公司生产。
1.3 试验方法1.3.1 工艺流程 大枣→清洗→去核→干燥→粉 多糖含量测定↑碎→超声浸提→过滤→浓缩→醇沉→脱脂→Sevage 法去蛋白→脱色→过滤→有机溶剂干燥→精制多糖→水解→PM P衍生→HPL C分析。
1.3.2 多糖提取 (1)标准曲线制作。
精密吸取葡萄糖供试液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0和1.2mL,分别置于10mL比色管中,以水补至2.0mL,然后加入50mg/L苯酚溶液1.0mL和浓硫酸5.0mL 混匀,40℃水浴30min,取出放置10min,以加入葡萄糖供试液0.0mL组为试剂空白,于波长490 nm处测定吸光度,以吸光度A为纵坐标,葡萄糖质量浓度为横坐标绘制标准曲线。
(2)换算因子的测定。
准确称取干燥至恒重的精制大枣多糖20.0mg于100mL容量瓶中,定容,得精制多糖样品水溶液,质量浓度为0.20mg/mL。
准确吸取该多糖溶液1.0mL,以水补至2.0mL,加入50mg/L苯酚溶液1.0mL和浓硫酸5.0mL混匀,40℃水浴30min,室温放置10min,490nm处测定吸光度,由标准曲线所得的回归方程计算溶液中的葡萄糖含量C,按下式计算换算因子(f),即:f=m/(C・D)。
(1)式中:m为称取的精制多糖质量(mg),C为称取的多糖中葡萄糖的含量(mg),D为多糖的稀释倍数(此处D为2×100=200)。
(3)多糖含量的测定。
准确吸取大枣多糖提取液2mL,加入50mg/L苯酚溶液1.0mL和浓硫酸5.0mL混匀,40℃水浴30min,取出放置10min, 490nm处测定吸光度,由标准曲线所得的回归方程计算提取液中的葡萄糖含量C,按下式计算大枣多糖的含量:多糖含量/%=CD f/m×100%。
(2)式中:C为大枣多糖中的葡萄糖含量(mg),D为多糖的稀释倍数,f为换算因子,m为称取的大枣粉质量(mg)。
(4)超声辅助提取正交试验设计。
以提取温度、361第12期姚瑞祺等:超声辅助提取大枣多糖及柱前衍生高效液相分析料液比、提取时间、超声波频率为正交试验的因素,设计4因素3水平L9(34)正交试验,探讨提取温度、料液比、提取时间、超声波频率对大枣多糖提取率的影响,确定最佳提取条件。