水体总细菌计数
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
细菌总数名词解释
细菌总数名词解释细菌总数是指在特定环境下，全部细菌的数量总和。
细菌是一类微生物，其大小较小，通常只有几微米到几十微米，有些甚至更小。
它们存在于自然界的各个角落，包括土壤、水体、空气、植物、动物以及人体内等。
细菌总数的测量通常通过两种方法来进行，一种是直接计数法，另一种是间接计数法。
直接计数法是指将样品中的细菌使用显微镜进行观察和计数。
这种方法能够提供准确的细菌总数，但需要消耗大量的时间和劳动力，因此一般用于研究实验室中的小样本。
间接计数法则是通过测量细菌在培养基上形成的可见生长区域或者培养液中的细菌生长所产生的代表性产物来估算细菌总数。
常用的方法有营养琼脂培养法、白卡氏计数法等。
这种方法的优点是快速、便捷，但精度相对较低。
细菌总数是影响生物环境和人类健康的一个重要指标。
在生物环境中，细菌对循环物质、生态平衡等都起着重要作用，因此了解细菌总数对于环境保护和生态恢复具有重要意义。
在水体和土壤中，过高的细菌总数可能表明水质或土壤质量的恶化，例如可能存在污染物或者有害物质。
因此，细菌总数的监测可以帮助评估环境的卫生状况，并及时采取相应的措施进行处理和治理。
在医学领域，细菌总数可以用于诊断和监测感染。
不同的细菌会引起不同的感染性疾病，因此对细菌总数的测定有助于确定感染的类型和程度，并指导治疗和预防措施的制定。
细菌总数的监测也对于评估感染控制措施的效果以及防控策略的制定具有重要意义。
细菌总数的变化受到多种因素的影响，包括温度、湿度、氧气含量、营养物质等。
不同的细菌对于生长条件有着不同的适应性，因此在不同的环境中，细菌总数可能会有很大的差异。
细菌总数是微生物学领域的一个重要参数，对于了解细菌种群结构、生长动力学以及微生物生态学等具有重要意义。
通过对细菌总数的研究，可以揭示微生物在自然界中的角色和功能，为人类提供更好的环境和健康服务。
(仅供参考)水体总细菌计数
水体总细菌计数方法：AODC计数最早由Francisco等采用该方法计数自然水体中的细菌总数，从而确定了该方法的基本程序（Francisco et al., 1973），后经由Hobbie等人（Hobbie et al., 1977 ）改进形成经典的计数方式而推广。
国内目前主要用于水生环境中细菌的计数，有外文文献报道用该法富集硝化细菌的富集（Ågot Aakrå et al., 1999），尚未发现将该法用于硝化细菌分离的实验。
郑忠辉1992年在《亚硝酸氧化细菌分离方法的比较》一文中提到稀释法成功分离到硝化细菌，参照该实验方法，利用AODC 技术方法取代传统的细菌计数进行硝化细菌的分离。
本实验主要依据chwinghamer的操作,采用0.22µm的纤维素微孔滤膜拦截细菌，截留率可以达到90%以上（chwinghamer, 1988 ）。
实验中将低压真空泵更换成手动的玻璃过滤器，操作更方便。
具体实验参数由预实验操作确定，最终确定的操作步骤如下：（1）取样：无菌操作条件下，准确吸取4mL的富集培养液于灭菌烘干的7mL离心管内，盖紧盖子。
（2）振荡：将离心管固定在振荡器上，振荡10min,使菌体充分打散。
（3）固定：加入40%甲醛0.160mL，混合均匀，固定1-2min。
（4）梯度稀释：9mL无菌水进行10倍数梯度稀释，确定稀释后液体量为9mL。
（5）染色：加入1g/L的吖啶橙0.9mL，控制吖啶橙的终浓度约0.01%，染色时间7min。
（6）过滤：旋开无菌的一次性过滤器（直径25mm），在过滤器滤层上加盖一片直径25mm，孔径0.45μm的微孔滤膜（保证0.22μm膜的平整性），再在膜上放置一片直径25mm，孔径0.22μm经2g/L苏丹黑4℃浸泡16-24h的微孔滤膜（苏丹黑浸泡以去除微孔滤膜本身的自发荧光），旋紧后，标记，用过滤器吸取染色后液体，微孔过滤，使菌体截留在0.22μm的苏丹黑溶液处理的膜上，蒸馏水3mL洗涤染色液PA瓶，洗涤液依然微孔过滤。
水质监测项目和检测方法
水质监测项目和检测方法水质监测是为了保护水资源和人类健康而进行的活动，主要目的是分析和评估水体中的化学、物理和生物参数。
水质监测项目包括但不限于以下几个方面：水体中的有毒有害物质、微生物与寄生虫、重金属、营养物质以及水体的pH值、溶解氧、浊度等指标。
本文将详细介绍水质监测项目及其检测方法。
1.有毒有害物质：-化学物质：如重金属（铅、汞、镉等）和有机污染物（农药、工业废物等），可通过高效液相色谱仪、气相色谱仪等检测设备进行分析。
-环境激素：如内分泌干扰物和药物残留物，可通过液质联用仪（LC-MS/MS）等设备进行检测。
-毒性评估：可以通过短期急性毒性试验（LC50试验）、长期慢性毒性试验等生物学方法进行评估。
2.微生物与寄生虫：-总菌落计数：采用平板计数法，将水样在特定培养基上培养并计数。
-大肠杆菌群：通过内部、外部指标（如总大肠菌群和大肠杆菌）的检测，可以评估水体受粪便污染的程度。
-寄生虫卵囊：通过膜过滤法、浓缩法和染色识别法等进行检测。
3.重金属：-铅、汞、镉、铬等重金属：可以使用原子吸收光谱（AAS）、电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）等仪器进行检测。
4.营养物质：-氨氮、硝酸盐、亚硝酸盐等：可通过分光光度计、荧光分析仪等设备进行监测。
5.水体的pH值、溶解氧、浊度等指标：-pH值：可通过玻璃电极或化学试剂进行测定。
-溶解氧：可以使用溶解氧仪、滴定法等进行测定。
-浊度：利用涡旋式浊度计等设备进行测定。
除了上述项目外，还可以进行水中特定物质的检测，如有机磷农药、氨、铜等。
此外，还有一些辅助项目，如水体温度、电导率、氧化还原电位等指标的监测。
水质监测方法的选择取决于具体的监测项目和目的。
常用的水质检测方法包括物理测定法、化学测定法和生物学测定法。
物理测定法：通过仪器测量水体的温度、pH值、溶解氧、浊度等物理参数。
采用这些方法可以快速、准确地获取水体的基本信息。
化学测定法：通过对水样进行化学反应，使用分光光度计、荧光分析仪、原子吸收光谱仪等仪器对特定化学物质进行测定。
实验十细菌菌落总数(CFU)的测定(精)
三、仪器和材料
无菌培养皿、无菌试管、无菌水，无菌吸管、
接种环、酒精灯、牛肉膏蛋白胨固体培养基、
水样、培养箱、微波炉。
四、实验内容和操作方法
（一）采集水样：取校园内河水，用无菌取水器， 在距岸边5m处，取距水面10~15cm的深层水样。 如果不能在2h内检测的，需放入冰箱中保存。 （二）细菌总数的测定： 1）水样稀释：按无菌操作法，将水样作10倍系列 稀释。 2）选取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度。稀释度 的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平 皿上菌落总数介于30和300之间。 3）吸取由高倍至低倍的稀释液，每个稀释液分别 注入两个培养皿，每皿1mL。
(二) 稀释度的选择 l、首先选择平均菌落数在30～300者进行计算，当 只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可 用它作为平均值乘其稀释倍数。 2、若有两个稀释度的平均菌落数都在30～300之 间，则应按两者的比值来决定。若其比值小于2， 应报告两者的平均数；若大于2则报告其中较小 的菌落数。 3、如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则 应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告 之。
4）注入彻底融化，然后冷却到45℃的营养琼脂培 养基（用于河水样）立即旋摇培养皿，充分混匀。 方法是握住平皿，先往ห้องสมุดไป่ตู้个方向画圆，再朝相反 方向回转；或一面画圆，一面适当倾斜。小心勿 使这个混合液体溅到培养皿的边缘。让平皿基于 水平位置放置至固化。 5）接种河水样的培养皿，倒置于37℃培养箱中培 养24h。
一、实验目的和要求
1、学会细菌菌落总数的测定。 2、了解水质与细菌菌落数之间的相关 性。
二、实验原理
细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用 适合它们生长的培养基才能将它们培养出来。 然而，在实际工作中不易做到，所以通常用 一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生 性细菌，以它的菌落总数表明有机物污染程 度。水中细菌总数与水体受有机污染的程度 成下相关，因此细菌总数常作为评价水体污 染程度的一个重要指标。细菌总数越大，说 明水体被污染得越严重。
测定细菌数量的方法
测定细菌数量的方法细菌是一种微生物，它们广泛存在于自然界中的各种环境中，包括土壤、水体、空气以及人和动物的体内。
测定细菌数量在许多领域中都具有重要的应用，例如医学诊断、食品安全、环境监测等。
本文将介绍几种常见的测定细菌数量的方法。
1.直接计数法直接计数法是最基本的测定细菌数量的方法之一、该方法利用显微镜观察细菌悬液中的细菌数量，并通过数学方法计算出相应的浓度。
直接计数法需要专业的显微镜和显微镜计数室，比较繁琐且耗时，但是结果较为准确。
2.厌氧培养法厌氧条件下的细菌繁殖速度较慢，通常需要较长时间才能形成可见的菌落。
利用厌氧培养法可以通过观察培养基上细菌形成的菌落数量来测定细菌数量。
该方法适用于对厌氧条件下的细菌进行测定。
3.过滤法过滤法是利用特定的滤膜或滤片来筛选细菌，并将细菌附着在滤膜上。
通过将滤膜放置在含有营养成分的培养基上，细菌可以在培养基上生长。
最后，可以通过观察滤膜上的菌落数量来测定细菌数量。
过滤法适用于水样、空气样以及其他液体样品。
4.光密度法光密度法是利用细菌悬液的浑浊程度来测定细菌数量的一种方法。
当细菌繁殖增多时，细菌悬液的浑浊度也会增加。
可以使用光密度计来测量细菌悬液的浑浊度，然后通过校正曲线来计算细菌数量。
5.蛋白质测定法细菌在生长过程中会合成蛋白质。
通过检测培养液中的蛋白质含量，可以间接测定细菌数量。
该方法适用于较大规模的细菌培养，可以通过常规的蛋白质测定方法来进行测定。
6.PCR方法PCR（聚合酶链反应）是一种利用DNA复制技术来测定细菌数量的方法。
通过选择特异性的引物和荧光探针，可以选择性扩增目标细菌的DNA 并进行测定。
PCR方法具有高度的灵敏性和特异性，适用于检测特定种类的细菌。
综上所述，测定细菌数量的方法有很多种，选择合适的方法取决于实际应用的要求、样品特性以及实验条件等因素。
不同的方法各有优缺点，研究人员需要根据具体情况选择适当的方法来进行细菌数量的测定。
饮用水中几种细菌计数方法的比较
ႂႨඣᇏࠫᇕ༥ऩ࠹ඔٚم֥бࢠ鲁巍,王云,张晓健(清华大学环境科学与工程系,北京 100084)ᅋေ:比较采用不同培养基的平板计数(Plate Counts ,PC )方法,以及不同荧光染色剂的显微镜直接计数方法与常规计数方法的差别.研究认为,常规平板计数方法并不能准确反映饮用水中实际存活的细菌数量;吖啶橙直接计数(Acridine Orange DirectCounts ,AODC )的结果最高,较常规平板计数方法高出3～4个量级;活细菌直接计数(Direct Viable Counts ,DVC )中,DVC 2N.A.、DVC 2CTC 和DVC 2BacLight 等计数方法的结果较常规平板计数结果高出2～3个量级.以地表水为水源的水厂出水中活细菌数占总细菌数的比例在10%左右.ܱՍ:饮用水;直接计数;平板计数;活细菌直接计数;细菌ᇏٳোݼ:X832;TU991125 ໓ངѓ്:A ໓ᅣщݼ:025023301(2004)0420167203൬۠ರ௹:2003208207;ྩרರ௹:2003209225ࠎࣁཛଢ:国家自然科学基金资助项目(50238020);国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2002AA601140)ቔᆀࡥࢺ:鲁巍(1978～),男,博士研究生,主要从事水污染防治技术研究.Methods of Enumeration of B acteria in Drinking W aterL U Wei ,WAN G Yun ,ZHAN G Xiao 2jian(Department of Environmental Science and Engineering ,Tsinghua University ,Beijing 100084,China )Abstract :Methods of the enumeration of total bacteria and Coliform in drinking water were researched in this paper.The differences between heterotrophic plate count and direct viable count method were compared.It is concluded that the total number of bacteria in R2A medium is one order of quantity higher than the traditional plate count agar ,and the results of acridine orange direct counts (AODC )is the highest.S ome different staining methods in direct viable count were also compared in this paper ,such as nalidixic acid ,CTC staining and BacLight staining.The proportion of the live bacteria to the dead is about 10%.K ey w ords :drinking water ;enumeration ;PC ;DVC ;bacteria 在饮用水处理中,出厂水加氯消毒后进入管网,部分存活的微生物和管网中生物膜中的微生物会利用管网水中的微量可生物降解有机物进行再生长,引起所谓的生物稳定性问题[1].长期以来,国内多采用异养菌平板计数法(Heterotrophic Plate Counts ,HPC )和最大或然数法(Most Probable Number ,MPN )来测定饮用水中的活菌数.但由于饮用水中的贫营养环境有别于传统培养基提供的富营养环境,大多数在显微镜下观察到的细菌不能在传统培养基中生长(Nonculturable ),致使活菌计数结果偏低.近些年来,国外先后应用吖啶橙染色直接计数(Acridine Orange Direct Counts ,AODC )、活菌直接计数(Direct Viable Counts ,DVC )等方法对饮用水中的细菌总数及活菌数进行快速、直接的镜检计数.一些新的染色方法,如采用52氰基22,32联甲苯四唑盐酸盐(52Cyano 22,32ditolyltetrazolium chloride ,CTC )、核酸探针(BacLight )等对活细菌计数,都取得了很好地效果.国内这方面的研究却未见报道.本文应用AO 、CTC 、BacLight 等试剂染色,采用显微镜直接计数对饮用水中的细菌数量进行测定,并与常规平板计数方法所得结果进行了比较与讨论.1൫ဒҋਘބٚم111 水样的采集本试验所用水样分别取自实验室自来水和北方某市管网水.水样均采用无菌磨口玻璃瓶采集.实验室自来水未经特殊处理直接测定.现场水样采集后立即放入冷却箱中保存,4h 内测定.消毒试验所用水样为实验室自配水.112 细菌计数11211 总细菌计数(1)AODC 法[2] 水样采集后迅速加入甲醛固定,甲醛最终浓度2%;取10mL 固定后水样加入015mL 012%吖啶橙(Acridine Orange ,Sigma 公司)染色1～2min ;将染色水样经滤膜(孔径012μm ,直径25mm ,黑色聚碳酸脂滤膜,Nuclepore 公司)过滤;过滤后将滤膜置于载玻片上,用落射荧光显微镜(日本Nikon ,EF 2D 型)计数视野中发橙色或绿色荧光的菌体;显微镜光源为200W 汞灯,激发光滤光片第25卷第4期2004年7月环 境 科 学ENV IRONM EN TAL SCIENCEVol.25,No.4J uly ,20041༥ऩ࠹ඔࢲݔFig.1 The results of bacteria enumeration为450～490nm ,光束分离滤光片510nm ,阻挡滤光片520nm.(2)BacLight 染色直接计数法 将试剂按照产品要求配制后,取2mL 固定后水样加入60μL 所配BacLight 染色试剂,避光培养15～20min ;然后按照AODC 处理方法制片,观察计数视野中发红色或绿色荧光的菌体.所用滤光片波段同AODC 相同.11212 活细菌计数(1)DVC 法 方法①(DVC 2N.A.):向水样中加入01002%萘啶酮酸(N.A.,Nalidixic Acid ,Fluka 公司)和01025%酵母膏(均为最终浓度),避光,25℃培养6h ,然后2%甲醛固定,再按照AODC 法直接镜检计数.视野中长大或变粗的菌体被认为是活菌;方法②(DVC 2CTC ):将012mL 1167%的CTC 加入10mL 水样中(CTC 最终浓度1mmol/L ),避光室温培养4h ,然后2%甲醛固定,再按照AODC 法直接镜检计数视野中的红色菌体;方法③(DVC 2BacLight ):参见11211,只镜检计数视野中发绿色荧光的菌体.(2)HPC 法 采用传统营养琼脂培养基和R2A 培养基进行平板计数,详见相关检验手册[3].R2A 培养基基本组成为:酵母浸膏015g ,蛋白胨015g ,酸水解干酪素015g ,葡萄糖015g ,可溶性淀粉015g ,丙酮酸钠013g ,K 2HPO 4013g ,MgSO 4・7H 2O 0105g ,琼脂15g ,溶于1L 水.11213 总大肠菌群计数消毒试验考察消毒剂的灭菌效果,配水中投加的大肠杆菌菌液为实验室自培养.(1)滤膜法 常规检测方法,详见检验手册[3].(2)荧光显微计数 参见11211,11212.2൫ဒࢲݔაษં211 细菌计数方法比较应用AODC 、DVC 及HPC 等方法对实验室自来水及城市管网水中细菌总数及活菌数计数的结果见图1,表1中计算了活菌数占总细菌数的比例.і1ࠃऩඔᅝሹ༥ऩඔ֥б২/%Table 1 Proportion of the live bacteria to the total/%样品计数方法N.A./AODCCTC/AODC Bac 2live/AODC HPC/AODC营养琼脂R2A 实验室自来水13191717251701094111某水厂出水6119181217未检出01068管网水818101512140100770112管网末梢水7191113915010100112 由图1可以看出,AODC 和BacLight 2种方法得出的总细菌数无显著性差异.北方某市各点水样中细菌总数在105个/mL 量级,活菌数在104个/mL 量级.实验室自来水中细菌总数在104个/mL量级,活菌数在103个/mL 量级.以营养琼脂作为培养基的平板计数只有几十个CFU/mL ,以R2A 作为培养基的平板计数也只达到102个/mL 量级.实验室自来水是高校自供水,水源为地下水,所调查水厂的水源为地表水,水源水质差异可能是引起细菌数差异的因素之一.由表1看出,实验室自来水中活菌数所占比例在10%～25%之间,而以地表水为水源的水厂出水中活菌数所占比例基本在10%左右.活菌计数中计数结果大小顺序为:BacLight >CTC >N.A.>R2A >营养琼脂.R2A 培养基是一种贫营养培养基,其提供的培养条件更接近饮用水中的贫营养环境,因此其结果较常规营养琼脂培养基高.但是由于自然环境中大多数微生物是不可培养的(Nonculturable ),所以DVC 结果又远高于平板计数结果.萘啶酮酸可以抑制细菌DNA 的复制,但不影响细胞中其它合成途径的继续运转,在一定浓度营养物存在下,菌体伸长、变大(如图2所示).但是由于部分格兰氏阳性及格兰氏阴性菌对萘啶酮酸有抗性,低浓度的NA 不能抑制它们的繁殖,致使计数结果出现偏差[4].BacLight 是近年来由分子探针公司研制出的新型荧光染色剂,由SYTO9和碘化丙锭(propidium iodide )2种核酸探针组成.SYTO9能将所有细菌染色,发绿色荧光,而碘化丙锭能穿透细胞膜受损细胞,发红色荧光(如图2所示)[5].由于碘化丙锭只能穿透受损细胞,因此部分细胞膜完好但实际不能存活的部分细菌未能被染色,这就导致了BacLight 的活菌计数结果高于CTC 、NA 的计数结果.应用CTC 进行活菌计数时,由于细菌的呼吸作用,CTC 被还原成CTF (CTC Formazan ),其在荧光显微镜下发红色荧光(如图2所示)[6],从理论上看,CTC 方法的基本原理是利用活细胞的呼吸作用,因此能够比较准确地反映活细菌的数量,而且该方法的试验费用相对较低,适合实验室研究使用.212 消毒试验大肠杆菌计数2ࠃऩ࠹ඔم႐ܻಙཞ(ᅶோनູՂऩအު෮ജ,٢նПඔູ࣍රᆴ,ࣇ܂ҕॉ)Fig.2 The images of fluorescent staining methods 实验室通过配水试验,考察一定浓度余氯对大肠菌群的灭活效果,大肠菌群计数方法采用常规膜滤法和DVC 方法.当初始加氯量015mg/L 时,存活细菌数与时间的关系如图3所示.3թࠃ༥ऩඔაൈࡗ֥ܱ༢Fig.3 The relationship of time and the number of the live bacteria从图3中可以看出,AODC 计数结果基本不随时间变化,始终停留在初始量级105.N.A.,CTC ,BacLight 3种药剂的DVC 计数结果基本相同,从105逐渐下降到103.传统的膜滤法平板计数结果同样都随着时间的推移而逐渐减少,但是计数结果与DVC 方法存在显著的差异,这说明常规计数方法并不能准确反映水体中微生物的存活状况.3ࢲં (1)显微镜直接计数的结果远远高于常规平板计数,更能准确反映饮用水中的微生物数量.(2)活菌计数中计数结果大小顺序为:DVC 2BacLight >DVC 2CTC >DVC 2N.A.>R2A >营养琼脂.其中CTC 方法能够比较准确地反映活细菌的数量,而且该方法的试验费用相对较低,适合实验室研究使用.(3)在考察消毒剂对细菌的灭活效果时,直接计数可以更准确地反映细菌存活的状况.ҕॉ໓ང:[1] 王占生,等.微污染水源饮用水处理[M ].北京:中国建筑工业出版社,1999.236～243.[2] Hobbie J E ,et e of nuclepore filters for counting bacteriaby fluorescence microscopy [J ].Appli.Environ.Micriobiol.,1976,33(5):1225～1228.[3] 俞毓馨,等.环境工程微生物检验手册[M ].北京:中国环境科学出版社,1990.136～144.[4] Kazuhiro K ogure ,et al .An improved direct viable countmethod for aquatic bacteria[J ].Arch.Hydrobiol.,1984,102:117～122.[5] Lina Boulos ,et al.L IVE/DEAD BacLight TM :application of a new rapid staining method for direct enumeration of viable and total bacteria in drinking water [J ].J.Microbiological Methods.,1999,37:77～86.[6] Rodriguez G G ,et e of a fluorescent redox probe fordirect visualization of actively respiring bacteria.Appli.Environ.Micriobiol.,1992,58(6):1801～1808.。
细菌的度量单位
细菌的度量单位细菌是一类微生物，它们存在于自然界中的各种环境中，包括土壤、水体、空气、人体和动物体内等。
细菌可以对人类和环境产生积极的影响，但也可能引起疾病和污染。
为了更好地了解细菌的数量和分布，科学家们开发了一系列细菌的度量单位。
CFU/mlCFU/ml（Colony Forming Units per milliliter）是一种常用的细菌计数单位，它表示在每毫升液体中存在的细菌数量。
CFU/ml的测量方法是将样品分散在含有营养物质的琼脂平板上，然后在适宜的温度和湿度下孵育。
经过一段时间后，每个细菌单元会形成一个可见的结构，称为菌落。
科学家们可以根据菌落的数量来计算出CFU/ml。
CFU/gCFU/g（Colony Forming Units per gram）是另一种常用的细菌计数单位，它表示在每克物质中存在的细菌数量。
CFU/g的测量方法类似于CFU/ml，但是样品通常是固体或半固体的物质，如土壤、食品和动物组织等。
科学家们可以通过将样品分散在含有营养物质的琼脂平板上，并在适宜的温度和湿度下孵育来测量CFU/g。
MPN/gMPN/g（Most Probable Number per gram）是一种用于测量微生物数量的统计方法，它可以用于测量细菌、真菌和其他微生物的数量。
MPN/g通常用于测量食品、水和环境中存在的微生物数量。
测量方法是将样品分散在含有营养物质的培养基中，然后在适宜的温度和湿度下孵育。
科学家们可以通过观察培养基中的气泡数量来计算MPN/g。
NTUNTU（Nephelometric Turbidity Unit）是一种用于测量水体中悬浮物浓度的单位，其中包括细菌、沙子和其他微小颗粒。
NTU的测量方法是使用一种称为涡流法的技术，通过测量水体中光线的散射来测量悬浮物的浓度。
NTU通常用于测量饮用水和工业用水的质量。
总结细菌是一类微生物，它们在自然界中广泛分布。
为了更好地了解细菌的数量和分布，科学家们开发了一系列细菌的度量单位，包括CFU/ml、CFU/g、MPN/g和NTU等。
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在 30-80 的稀释度计数，在该稀释度中选取 10 个视野，记录荧光点数，一个点 代表一个菌。 （ 8 ）原菌体浓度 E 计算： E X
S1 v1 V N ，其中 X 表示平均视 S2 v 2
野菌数，是 10 个视野中荧光点数的平均值，S1 表示磨面积，等于 D2π/4,其中 D 表示膜直径，为 25mm，S2 表示视野面积,等于 d2π/4,其中 d 为显微镜视野直径， 为 0.22mm ； v1 、 v2 分 别 表 示 原 菌 液 （ 4mL ） 和 固 定 后 菌 液 体 积 （4mL+0.160mL）,v1/v2 表示过滤的稀释液中原菌液比例；V 表示过滤的稀释菌 液的体积，为 9mL；N 表示稀释倍数。 实验中所有试剂，蒸馏水均经过 0.22μm 的微孔过滤，实验所用的过滤器， 无菌水，注射器，7mL 离心管，枪头数
最早由 Francisco 等采用该方法计数自然水体中的细菌总数，从而确定了该 方法的基本程序 （Francisco et al., 1973） ， 后经由 Hobbie 等人 （Hobbie et al., 1977 ） 改进形成经典的计数方式而推广。国内目前主要用于水生环境中细菌的计数，有 外文文献报道用该法富集硝化细菌的富集（Ågot Aakrået al., 1999），尚未发现 将该法用于硝化细菌分离的实验。郑忠辉 1992 年在 《亚硝酸氧化细菌分离方法 的比较》 一文中提到稀释法成功分离到硝化细菌， 参照该实验方法， 利用 AODC 技术方法取代传统的细菌计数进行硝化细菌的分离。本实验主要依据 chwinghamer 的操作,采用 0.22µm 的纤维素微孔滤膜拦截细菌，截留率可以达到 90%以上 （chwinghamer, 1988 ） 。 实验中将低压真空泵更换成手动的玻璃过滤器， 操作更方便。具体实验参数由预实验操作确定，最终确定的操作步骤如下： （1）取样：无菌操作条件下，准确吸取 4mL 的富集培养液于灭菌烘干的 7mL 离心管内，盖紧盖子。 （2）振荡：将离心管固定在振荡器上，振荡 10min,使菌体充分打散。 （3）固定：加入 40%甲醛 0.160mL，混合均匀，固定 1-2min。 （4）梯度稀释：9mL 无菌水进行 10 倍数梯度稀释，确定稀释后液体量为 9mL。 （5）染色：加入 1g/L 的吖啶橙 0.9mL，控制吖啶橙的终浓度约 0.01%，染 色时间 7min。 （6）过滤：旋开无菌的一次性过滤器（直径 25mm） ，在过滤器滤层上加盖 一片直径 25mm，孔径 0.45μm 的微孔滤膜（保证 0.22μm 膜的平整性） ，再在膜 上放置一片直径 25mm， 孔径 0.22μm 经 2g/L 苏丹黑 4℃浸泡 16-24h 的微孔滤膜 （苏丹黑浸泡以去除微孔滤膜本身的自发荧光） ，旋紧后，标记，用过滤器吸取 染色后液体，微孔过滤，使菌体截留在 0.22μm 的苏丹黑溶液处理的膜上，蒸馏 水 3mL 洗涤染色液 PA 瓶，洗涤液依然微孔过滤。 （7）镜检观察： 干净的载玻片上滴加一滴松柏油， 将 0.22μm 的微孔滤膜转 移到玻片上， 加盖松柏油， 再加盖干净的盖玻片， 保证膜与盖玻片间无气泡， 100x 油镜下找到界面， 转换荧光显微镜微调至细菌荧光清晰界面观察，选取荧光点数