免疫学检测项目(部分)的临床应用
免疫学检测原理及临床应用
免疫学检测原理及临床应用免疫学检测是一种通过检测体内免疫系统的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断技术。
其基本原理是利用体内自身的免疫系统对外来物质（如细菌、病毒或人工合成物质）做出特异性反应，产生特异性抗体或细胞免疫反应，并将其检测出来。
免疫学检测可分为血清学检测和细胞免疫学检测两种。
血清学检测是指通过检测血清中特异性抗体的存在来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有ELISA、免疫荧光、免疫印迹等方法。
其基本原理是将目标抗原或建立细胞突变株制备成特异性抗原，与患者血清中的特异性抗体结合，用酶、荧光或其他标记物检测出来。
例如，ELISA是一种广泛应用的免疫学检测技术，用于检测抗体和抗原的相互作用。
它的原理是将抗原吸附到多孔板上，在体外将待测样本加入其中，样品中如有特异性抗体，则与抗原结合，未结合的抗体被洗掉，再加入标记抗体，标记物与抗原相互结合形成复合物，可以根据标记物的性质来检测复合物的形成。
细胞免疫学检测是指通过检测免疫细胞的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有淋巴细胞转化试验（LTT）、流式细胞术等方法。
其基本原理是将血液或其他体液样本中的免疫细胞与特异性抗原共同孵育，在体外激活免疫细胞产生抗体或细胞反应，使用流式细胞术分离、检测不同类型的免疫细胞。
例如，LTT可用于检测细菌或病毒等病原体感染及免疫功能异常等疾病。
其原理是将血液或其他体液样本加入培养基中，与特定抗原刺激后，在体外培养一段时间，测定培养物中的淋巴细胞增殖情况，反映细胞免疫应答功能的多样性和复杂性。
免疫学检测在临床实践中的应用非常广泛。
它被用来诊断多种感染性疾病，例如乙型肝炎、艾滋病、结核病等。
通过检测患者体内是否存在相应的抗体或细胞反应，可以确定疾病病原体是否存在以及疾病的严重程度。
此外，免疫学检测还被用于诊断自身免疫性疾病，例如狼疮、风湿性关节炎等。
通过检测患者体内是否存在特定的自身抗体，可以确定患者的疾病类型和严重程度。
免疫学临床应用
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
（一）凝集反应（agglutination）
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）与 抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
1 、直接凝集(direct agglutination) 玻片凝集、试管凝集
2、间接凝集（indirect agglutination） 可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应 抗 体混合出现的凝集现象。
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。
①免疫学方法：ELISA、RIA等。
②细胞生物学方法 ③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损
免疫重建(immunoreconstitution)
将免疫功能正常个体的造血干细胞或淋巴细胞移植 给患有免疫功能缺陷的个体，使后者的免疫功能全部 或部分得到恢复。
一、免疫增强疗法和免疫抑制疗法
二、特异性免疫治疗和非特异性免疫治疗
三、主动免疫治疗（active immunotherapy） 和被动免疫治疗（passive immunotherapy）
（三）计划免疫
二、新型疫苗的发展 三、疫苗的应用
1、抗感染 2、抗肿瘤 3、计划生育 4、防止免疫病理损伤
复习题
一、名词解释 凝集反应、沉淀反应、ELISA、人工主动免疫、 人工被动免疫、类毒素、LAK细胞、TIL细胞
二、问答题 1、简述抗原抗体反应的特点。 2、何谓免疫标记技术？简述三大免疫标记技术 的原理和应用。 3、试比较人工主动免疫与人工被动免疫。
临床免疫学检验项目
临床免疫学检验项目一、引言临床免疫学检验项目是通过检测人体免疫系统的功能和免疫相关指标，以辅助临床诊断和监测疾病进展的一种重要实验室检查方法。
免疫学检验项目广泛应用于各个领域，包括感染病、自身免疫病、肿瘤、器官移植、过敏性疾病等。
二、常见的临床免疫学检验项目1. 免疫球蛋白检测免疫球蛋白（Immunoglobulins，Ig）是人体内最重要的抗体，可分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE等不同类型。
通过检测免疫球蛋白的水平，可以评估人体免疫系统的功能状态，判断是否存在免疫缺陷或免疫异常。
2. 细胞免疫功能检测细胞免疫功能检测主要包括淋巴细胞亚群分析、细胞因子检测和免疫细胞功能评价等。
淋巴细胞亚群分析可通过检测CD4+和CD8+T 细胞的比例，评估免疫系统对感染和疾病的应答能力。
细胞因子检测可以检测IL-2、IL-6、IFN-γ等细胞因子的水平，用于评估炎症反应和免疫调节功能。
免疫细胞功能评价可以通过检测免疫细胞的增殖、杀伤力和吞噬功能等指标，评估免疫细胞的功能状态。
3. 自身抗体检测自身抗体是指机体免疫系统异常产生的针对自身组织或器官的抗体。
自身抗体检测可以帮助诊断自身免疫病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等。
常见的自身抗体检测项目包括抗核抗体（ANA）、类风湿因子（RF）、抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAs）等。
4. 过敏原检测过敏原检测是通过检测人体对特定过敏原的免疫反应，帮助诊断和治疗过敏性疾病。
常见的过敏原检测方法有皮肤划痕试验、血清特异IgE抗体检测和免疫球蛋白E（IgE）介导的组织释放试验等。
5. 肿瘤标志物检测肿瘤标志物检测是通过检测体液或血清中特定蛋白质的水平变化，辅助肿瘤的早期诊断、疾病进展监测和预后评估。
常见的肿瘤标志物检测项目包括癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）、甲胎蛋白（AFP）等。
三、临床意义和应用临床免疫学检验项目在临床诊断和治疗中具有重要意义。
通过对免疫学指标的检测，可以辅助诊断免疫缺陷病、自身免疫病、感染病等，并评估疾病的严重程度和预后情况。
临床常用免疫学检验项目参考区间第1部分：血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、补体3、补体4
临床常用免疫学检验项目参考区间第1部分：血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、补体3、补体41 范围本部分规定了中国成人（≥18岁）血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、补体3、补体4的参考区间及其应用。
本部分适用于医疗卫生机构临床实验室对血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、补体3、补体4检验结果的报告，相关体外诊断产品生产厂商可参照使用。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注该日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
WS/T 225 临床化学检验血液标本的收集与处理WS/T 402 临床实验室检验项目参考区间的制定3 术语和定义WS/T 402 界定的术语和定义适用于本文件。
4 参考区间4.1 中国成人（≥18岁）血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、补体3、补体4参考区间见表1。
表1 中国成人血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、补体3、补体4参考区间4.2中国成人血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、补体3、补体4参考区间建立过程的相关信息参见附录A。
5 参考区间的应用5.1 一般原则5.1.1临床实验室应首先考虑引用本文件的参考区间。
注1：建立参考区间的研究工作量大、成本高，临床实验室引用参考区间比自己建立参考区间更为现实、可行。
注2：本参考区间基于中国成年人群大规模多中心研究结果建立。
检验结果可溯源至国际公认参考物质，参见附录B。
5.1.2使用本文件的参考区间前应进行必要的验证或评估。
注1：本文件参考区间的适用性主要取决于实验室检验结果与参考区间建立时检验结果的可比性以及人群的适用性。
注2：实验室在使用本文件参考区间前应保证分析系统性能符合相关要求。
注3：本文件参考区间基于新鲜血清检测结果建立，若临床实验室使用的标本类型为血浆，应进行适当的评估以决定是否采用本参考区间。
临床免疫学检验方法与应用
临床免疫学检验方法与应用免疫学是一门研究机体对抗病原体、维持免疫平衡的科学，其在临床诊断中起着举足轻重的作用。
免疫学检验方法多种多样，能够准确地检测机体的免疫状态，有助于诊断和治疗各种疾病。
本文将介绍几种常见的临床免疫学检验方法及其应用。
1. ELISA法ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的免疫学检验方法，通过酶标法测定抗体或抗原的存在量。
ELISA法可用于检测HIV、乙肝、梅毒等疾病的抗体水平，也可用于测定药物浓度或病毒载量。
由于ELISA法操作简便、灵敏度高，因此在临床诊断中得到广泛应用。
2. 免疫荧光法免疫荧光法是一种通过检测抗体或抗原在细胞或组织中的荧光信号来进行免疫检测的方法。
免疫荧光法被广泛用于自身免疫性疾病的诊断，如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
通过观察免疫荧光信号的强度和分布，可以判断患者的免疫状态和疾病程度。
3. 免疫印迹法免疫印迹法（Western Blot）是一种通过检测抗体与特定抗原结合而形成的免疫复合物来进行检测的方法。
免疫印迹法主要用于检测蛋白质的表达水平和鉴别不同蛋白质。
在临床上，免疫印迹法常用于肿瘤标记物的检测和分析，有助于早期发现恶性肿瘤。
4. 细胞免疫学方法细胞免疫学是研究机体免疫细胞及其功能的学科，其方法主要包括细胞毒活性测定、淋巴细胞亚群分析、细胞因子测定等。
这些方法在免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应的诊断和治疗中起着关键作用。
5. 其他免疫学检验方法除了上述几种常见的免疫学检验方法外，还有许多其他方法，如流式细胞仪、PCR法、化学发光法等。
这些方法在特定疾病的诊断和治疗中有其独特的应用价值，为临床医生提供了更多的诊断手段和治疗选择。
总结免疫学检验方法在临床诊断中发挥着不可替代的作用，能够帮助医生准确判断患者的免疫状态和疾病情况，指导治疗方案的制定和调整。
不断发展的免疫学技术为医学进步提供了强大的支持，相信随着科学技术的不断创新和进步，免疫学检验方法将在临床应用中发挥越来越重要的作用。
免疫学检测技术及应用
划痕法
细胞因子的检测技术
一、 生物学检测技术 二、 免疫学检测技术 三、分子生物学检测技术
依赖细胞株测定法 ELISA法
分子杂交、PCR 等检测mRNA
细胞因子检测的特点
• 样品含量低 •样品具有时效性 •生物效应特异性差
Figure 14-12
细胞因子的功能
Cell activation
／immunogold staining)
（一）免疫荧光技术(又称荧光抗体技术) 原理：用荧光素(如异硫氰酸荧光素、罗
丹明B200等) 标记抗体(荧光抗体)，用荧光 抗体浸染细胞或组织切片，抗原与荧光抗体 结合，于荧光显微镜下观察荧光，确定被检 抗原的存在。
免疫荧光技术包括：
直接法
间接法
间接补体增强法
ELISA法： 直接法 间接法 双抗体夹心法(双位点法) 竞争法
ELISA
(三) 同位素标记技术(isotope-labelling technique) 放射免疫分析(radioimmunoassay,
RIA) 是一种用放射性同位素分析抗原抗体反应 相结合方法。 优点：灵敏度高, 可检测0.001pg／mL
Direct and indirect immunofluorescence staining of membrane antigen (mAg).
（二）免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)
是将抗原抗体反应与酶催化底物的作用 相结合的一种方法。
主要有两种类型： 1.免疫酶染色 2.酶免疫测定（enzyme immunoassay, EIA）
•3H-胸腺嘧啶核苷参入法（3H-TdR）: 间接观察DNA 合成含量。灵敏度高，具有放射性。 •四甲基偶氮唑盐法（MTT）: MTT商品名为噻唑蓝。 原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶可将外源性 MTT还原成蓝紫色结晶-甲瓒（formazan）, DMSO使 其溶解，酶标分析仪检测。简便，灵敏度高，稳定性 差。
临床免疫学检验
临床免疫学检验临床免疫学检验是一种透过检验身体免疫系统的功能状态来诊断和治疗人体免疫疾病的医学检验技术。
它主要应用于检测人体免疫功能的变化，例如免疫缺陷、自身免疫性疾病、过敏反应等。
其检测结果成为了判断疾病是否存在、发展过程和预后的重要依据。
一、临床免疫检查所涉及的项目1、全血细胞计数：包括白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血小板等。
白细胞计数对疾病监测有重要意义，其异常值可能暗示某些疾病的存在，如感染、免疫疾病、白血病等。
2、单个抗体检测：单个抗体检测用于检测某个特定的抗体，例如细菌感染、病毒感染、肿瘤标志物等。
3、自身抗体检测：自身抗体检测用于检测人体免疫系统对自身组织或成分的免疫反应。
例如自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等。
4、流式细胞术：流式细胞术通过检测细胞表面标志物和细胞内物质，可以识别不同的细胞类型，例如白细胞分化、肿瘤细胞的识别等。
5、免疫固定电泳：免疫固定电泳是一种检测血清蛋白质的方法，其主要应用于鉴定血清蛋白质成分的变化，例如蛋白质异常增加、某些种类蛋白质缺失等，以及某些疾病的辅助诊断。
二、临床免疫检验的意义临床免疫学检验在筛选、诊断、治疗疾病、预测预后等方面有重要的意义。
1、疾病筛查：许多免疫学检查项目可以用于常见和罕见疾病的筛查。
例如，促甲状腺激素检查可以预先诊断甲状腺自身免疫疾病，抗心肌抗体和心肌肌原纤维蛋白抗体可以诊断心肌病，肝疾病特异性抗体可以确定患者是否感染肝炎病毒等。
2、疾病诊断：免疫学检查也可以用于特定疾病的诊断，如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、白血病、骨髓增生异常综合征等。
3、治疗效果观察：对于特定的疾病或治疗方式，需要通过免疫学检查来了解患者的治疗效果，如慢性乙型肝炎治疗后的血清HBV DNA状态、各类肿瘤治疗后肿瘤标志物水平的变化、免疫调制药物治疗后CD4/CD8等细胞水平的变化等。
4、预后预测：免疫学检查还可以为临床预后预测提供指导，如系统性红斑狼疮患者抗双链DNA抗体和抗精氨酸胞浆蛋白抗体储量高则易发生肾脏损害，骨髓增生异常综合征患者骨髓造血功能可通过检查免疫球蛋白储量进行评估。
免疫学检测的方法有哪几种
免疫学检测的方法有哪几种免疫学检测是以分子生物学、免疫学等作为理论基础，应用于多种疾病诊断以及病情预估的检测方法。
尽管免疫学检测在临床中较为常见，但多数人对其包含的具体方法了解的并不透彻，下面就免疫学的检测项目及方法进行科普。
1. 免疫学检测项目临床免疫学检测的项目包含种类很多，以下列几种的应用较为频繁，临床较为常见，即细胞免疫检测、体液免疫检测、感染免疫检测、肿瘤标志物检测以及自身抗体检测，而移植免疫学检测项目则较为少见。
（1）细胞免疫检测：细胞免疫学检测通常会针对多种类型的细胞进行含量及形态的测定，除了我们熟悉的淋巴细胞、粒细胞以及巨噬细胞以外，还包含前体细胞及单核细胞等[1]。
（2）体液免疫检测：体液免疫检测是针对免疫球蛋白（IgA、IgE 、IgG、IgM）、血清B因子以及血清补体（CH50、C3、C4）进行含量及形态的测定。
通过体液检测结果能够让医师了解受检者的体液免疫功能情况，进而判断其是否患有免疫性疾病或者感染性疾病；通过对血清补体指标的检测结果还能判断受检者是否患有肾小球肾炎、急性感染性疾病或者红斑狼疮等疾病[2]。
（3）感染免疫检测：感染免疫检测主要通过对寄生虫、病毒及细菌等指标的测定，判断受检者是否感染轮状病毒、结核杆菌、脑炎病毒、艾滋病毒、寄生虫或者微生物等。
（4）肿瘤标志物检测：肿瘤标志物检测是针对酶类、激素类、组织多肽抗原、糖类抗原、甲胎蛋白（AFP）以及癌坯抗原（CEA）等多种标志物的检测。
医师可通过检测结果判断受检者是否患有肿瘤及肿瘤的良恶程度，进而对病情、预后以及治疗效果展开预估和评价[3]。
（5）自身抗体检测：自身抗体检测是针对多种不同抗体的测定，包括抗核抗体、抗组织细胞、风湿因子等。
医师可根据这些指标的检测结果判断受检者是否患有炎性疾病、甲状腺以及风湿免疫性疾病等。
（6）移植免疫学检测：移植免疫学检测主要针对接受移植治疗的患者，并对其移植前后的相关指标进行检测和比较，有助于医师判断移植组织是否出现排斥反应，以便能够及时作出应对[4]。
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1、抗-HCV测定结果是弱阳 性时，应建议患者间隔一段 时间后 复检，在特定情况下
（患者需要）应建议进行确 认试验。
4、肿瘤标志物浓度的升高速度经常被 用于评估肿瘤发展和转移情况，如果能 准确测定肿瘤标志物，则对近50%的 病例来说，其浓度将比其他检查至少早 10个月预示肿瘤的进展。
50
p = 0 .0 0 2
40
p = 0 .0 3
30
20
10
0 > 0 .0 3 9 > 0 .0 2 -< 0 .0 4 < 0 .0 2 1 > 0 .0 4 0 > 0 .0 2 1 -< 0 .0 4 1 < 0 .0 2 2
AccuTnI
c T n I, L ia is o n
c T ro p o n in I, g /L
David A. Morrow et al .Clinical Chemistry 2003,1396-1398
O u tc o m e . d e a th %
O u tc o m e (D e a th ) in h e a lth y 7 0 y e a rs o ld m e n in re la tio n to c T ro p o n in I
COOH
H2N
108 COOH
NT-proBNP 1-76
BNP 77-108
BNP1－32aa BNP3－32aa
NT-proBNP是急性呼吸困难中HF的最佳 独立预测因素。
急性呼吸困难中HF的最佳独立预测因素
预测因素
OR 95% CI P 值
NT-proBNP升高 胸片间质水肿
44.0 21.0-91.0 <.001 11.0 4.5-26.0 <.001
70岁以上健康人中，AccuTnI的浓度值与10年死亡比例成线性相关
利钠肽
是一类具有扩张血管、拮抗RAS 系统、抑制交感神经活性、促进 尿钠排泄、减少水钠潴留等作用 的心血管肽类激素。
由心房释放 ANP
抑制肾素血管紧 张素和内皮素
影响因素
ANP 容量压力
BNP 左室收缩功能障碍/左室舒张功能障 碍/右室功能障碍/瓣膜功能障碍
5、RF（类风湿因子）检测阴性不能排 除RA的诊断
6、ANA（抗核抗体）是活动性SLE非 常敏感的参数，阳性率>99%。ANA 阴 性 基 本 上 可 排 除 SLE。 但 ANA 并 非 SLE 特 异 的 ， 在 其 他 多 种 疾 病 中 可 检 出。
心肌肌钙蛋白I与ACS的危险分层
CNP内皮细胞受到的剪切力
由心室内皮细 胞释放CNP
由心室释放BNP 周边血管阻力 下降 (血压降低)
增强的 尿钠排泄
利钠肽的体内分泌过程
心肌细胞
Prepro-BNP (134 aa)
Pro-BNP (108 aa)
Signal peptide (26 aa)
1 H2N
血循环
Cleaved
76
77
端坐呼吸
9.6 4.0-23.0 <.001
袢利尿剂的应用
3.4 1.8-6.4
.01
体检有啰音
2.4 1.2-5.2
.05
年龄(每年)
1.03 1.01-1.05 .01
咳嗽
.43 .23-.83
.05
发热
.17 .05-.50
.03
Januzzi et al, Am J Cardiol 2005;95:948
9、NT-proBNP的临床意义：心衰的诊 断和鉴别诊断，心衰的危险
分层，评估心衰的预后。
10、血中NT-proBNP水平随着年龄 的增加而增高，与体重指数呈反比， 如 果 GFR<60ml/min 则 要 考 虑 调 高 Cutoff值。
谢谢！