无纯样色谱校正因子的测定
色谱定性定量方法
既充分利用红外光谱、质谱等适于分析分子结构、官能 团或物质的摩尔质量等特点，克服了它们不易检定复杂 物质的困难，又充分利用了色谱的高效分离能力
2.与其它方法结合定性
①与化学方法结合进行定性 将试样经过一些特殊试剂处理，发生物理 变化或化学反应后，其色谱峰将会提前、 移后或完全消失 比较处理前后色谱图的差异，以及在柱后 用化学试剂鉴定流出物，就可初步定性鉴 别试样中含有哪些官能团
2.与其它方法结合定性
②与红外光谱、质谱及核磁共振谱联合定性
用相对校正因子
把混合物中的不同组份的峰面积校正成相当
于某一标准物质的峰面积，用于计算各组份的 含量
1.定量依据和校正因子
相对校正因子fis是指某组份i的绝对校正因子与标准物质s的绝对 校正因子之比值，通常简称为校正因子，即
标准物质：
f is
fi fs
苯（用于热导检测器）
正庚烷（用于氢火焰离子化检测器） 质量校正因子、摩尔校正因子和体积校正因子
常用标准物：苯、正丁烷、对二甲苯、环己烷、2,3,4-三甲基戊烷
对于组份比较简单的已知范围的混合物试样，可采用此法进行定 性。也可利用文献上的r2,1值或色谱手册中的r2,1值对照定性。
1.利用色谱保留参数定性
②加入已知物增加峰高法
首先用被测试样作色谱图，然后将已知纯物质加到试 样中去，在相同的条件下作色谱图，对比这两个色谱 图
100 %
Ai为任一组份的峰面积，fi为任一组份的质量校正因子 归一法的优点是无需标样，结果准确，操作简便，操作条件（如 进样量、流速等）变化对测定结果影响较小，宜于分析多组份试 样中各组份的含量。
定量校正因子的测定
定量校正因子的测定【色谱世界】【本书目录】【引用网址】/books/C/71/0.html1. 绝对校正因子由此方法测定出的校正因子称为绝对校正因子，它只适用于这一个检测器。
因为即使是换一个同一类型的检测器，甚至是换一个同一厂家生产的同一型号检测器，由于两个检测器的灵敏度总是有些差异的，这就使等量的同一种物质在这两个检测器上的响应值有所不同，因此计算出的绝对校正因子也有所不同。
同一个检测器，随着使用时间和操作条件改变灵敏度也在改变。
这些都使绝对校正因子在色谱定量分析中的使用有很大的局限性，为此引出了相对校正因子的概念。
2. 相对校正因子常用的基准物质对不同检测器是不同的，热导检测器常用苯作基准物质，氢焰离子化检测器则常用正庚烷作基准物质。
通常人们将相对校正因子简称为校正因子，它是一个无因次量，数值与所用的计量单位有关。
根据物质量的表示方法不同，校正因子分为：3. 峰高定量校正因子在用峰高进行色谱定量时要使用峰高定量校正因子。
因为峰高定量校正因子受操作条件影响较大，因此一般不能直接引用文献值，必须在实际操作条件下，用标准纯物质测定。
对于同系物的峰高定量校正因子与峰面积定量校正因子间有如下的关系：即可得到a，b值。
此方法不适于保留时间过小和不对称的色谱峰。
4. 响应值与校正因子的关系响应值即为组分通过检测器时所产生的信号强度，可以用来表示检测器的灵敏度。
响应值与校正因子间有一定的关系。
即相对响应值为相对校正因子的倒数。
5. 校正因子的实验测量方法准确称取色谱纯（或已知准确含量）的被测组分和基准物质，配制成已知准确浓度的样品，在已定的色谱实验条件下，取准确体积的样品进样，这样可以准确知道进入检测器的组分和基准物质的质量或摩尔数或体积，然后准确测量所得组分和基准物质的色谱峰峰面积，根据式（2-3-6）、式（2-3-7）和式（2-3-8），就可以计算出质量校正因子、摩尔校正因子和体积校正因子。
在没有合适的基准物质时，也可以测出绝对校正因子，利用绝对校正因子，在同一个检测器，相同的色谱实验条件下，也可作定量计算。
气相色谱内标法校正因子计算
气相色谱内标法校正因子计算
气相色谱内标法校正因子计算的步骤如下：
1. 首先确定内标物质的纯度和浓度。
纯度可以通过红外光谱、NMR光谱等手段进行检测，而浓度可以通过紫外分光光度法、滴定法、重量法等方法进行测定。
2. 然后将内标物质与待测物质混合，以一定的比例进行洗脱和提取。
3. 将混合样品注入气相色谱仪进行分析。
在分离图谱中水平轴为时间，垂直轴为信号强度。
4. 在分离图谱中，找到内标物质和待测物质的峰（一般情况下，它们应该位于分离图谱的第一或第二个峰），并计算它们的相对保留时间。
5. 通过浓度比例计算内标物质和待测物质的峰面积比值，即校正因子。
具体公式为：校正因子 = 待测物质峰面积 / 内标物质
峰面积 * 内标物质浓度 / 待测物质浓度。
6. 将校正因子应用于待测样品中的待测物质浓度，校正后的浓度即为准确浓度。
实验三十三定量校正因子的测定
实验B-23 定量校正因子的测定实 验 目 的1.掌握色谱定量校正因子的测定方法。
2.进一步熟悉，了解色谱仪的操作和性能。
实 验 原 理在一定色谱操作条件下，被测组分i 的重量（W i ）与检测器的响应信号峰面积（A i ）,成正比，W i =f i ′²A i ，这就是色谱定量分析的依据，式中f i ′为比例常数，称为被测组分i 的绝对校正因子。
由于检测器对不同物质具有不同响应，就不能用峰面积来直接计算物质的含量，而需要对响应值进行校正，这就是校正因子的意义，即f i ′= W i / A i ,可见f i ′代表了单位面积物质的重量。
由于f i 值与色谱条件有密切关系，不易准确测定，因而常采用相对校正因子f i ,即被测物质i 与标准物质s 的绝对校正因子之比(通常把“相对”二字略去)：is si s s i s i i A W A W A W A W f f f i ∙∙===//'' 式中f s ′、 W s 、A s 分别为标准物质的绝对校正因子，重量及峰面积。
仪器与试剂1.仪 器岛津GC-14气相色谱仪 载气钢瓶H 2 色谱柱（参见前一实验） 微量注射器10μL2.试 剂101白色硅烷化担体（60－80目） 有机皂土34 邻苯二甲酸二壬酯 苯（分析纯） 甲苯（分析纯） 邻二甲苯（分析纯）实 验 步 骤1.实验条件：检测器：热导池检测器（TCD ） 桥电流100mA 温度：色谱柱 90°C 检测器 110°C 汽化室 150°C 载气： H 2纸速： 30 mm/min 进样量: 4μL2.色谱操作：(1) 准确称取苯0.4g(±0.0001g),甲苯0.4g(±0.0001g),邻二甲苯0.5g(±0.0001g)于具塞试管中，摇匀备用。
(2) 吸取混合试样4μL 进样，得到各组分的色谱图，出峰顺序为苯，甲苯，邻二甲苯。
定量校正因子的测定
五、数据及处理 1、（ 、（P27） 、（ ） 2、处理色谱数据文件，记录各组分的 、处理色谱数据文件， 峰面积A、称量的质量m， 峰面积 、称量的质量 ，以邻二甲苯 为标准物质计算m 为标准物质计算 i/ms、Ai/As和fi等值列 入下表中。 入下表中。
m/g 苯 甲苯 乙苯 三甲苯 邻二甲苯 标物） （标物）
色谱过程
不同组分通过 色谱柱的迁移 速度不等
定量的依据： 定量的依据： 物质的质量或浓度与峰面积呈正比
mi mi = fi Ai ⇒ fi = Ai
' '
绝对校正因子
m样品 = fi A样品
'
'
m fi ⋅ A 相对校正因子 m A i i i i = ' ⇒ = fmi ⋅ ms fs ⋅ A ms A s s A 品 样 m 品 = fmi ⋅ ms 样 A s
四、实验步骤 1、混合试样的配制 称取 苯、1g甲 称取1g苯 、 甲 乙苯、 邻二甲苯 邻二甲苯， 苯、1g乙苯、 1g邻二甲苯，1g1，2， 乙苯 ， ， 3-三甲苯于容量瓶中，摇匀备用。 三甲苯于容量瓶中， 三甲苯于容量瓶中 摇匀备用。 2、（ 、（P26） 、（ ） 3、吸取混合试样 进样， 、吸取混合试样1uL-10uL进样，得 进样 到其色谱图，重复两次。 到其色谱图，重复两次。各组分出峰 顺序为： 甲苯、乙苯、邻二甲苯、 顺序为：苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、 1，2，3-三甲苯。 三甲苯。 ， ， 三甲苯
1
Байду номын сангаас
2
A 3
平均值
mi/ms Ai/As
fi
1
1
1
相对校正因子
定量校正因子的测定
色谱定量分析要点
色谱定量分析色谱分析的重要作用之一是对样品定量。
色谱法定量的依据是：组分的重量或在载气中的浓度与检测器的响应信号成正比。
在此，响应信号指峰面积或峰高，表示为：i i i A f w =，其中：w i 为欲测组分i 的量，A i 为组分i 的峰面积，f i 为比例系数，在此称为校正因子。
由此可见，要准确定量，首先要准确测出峰面积与定量校正因子。
一、峰面积的测量1. 对称峰面积的测量对称色谱峰近似地看作一个等腰三角形，按照三角形求面积的方法，峰面积为i w h A h i i 2=，经验证明该方法计算的面积只有实际面积的0.94倍，故再乘一系数1.065，i w h A h i i 2065.1=，这是目前应用较广的计算法。
2. 不对称峰面积的测量在色谱分析中，经常会遇到不对称峰，多数不对称峰为拖尾峰，峰面积的计算方法为：取峰高0.15倍处和0.85倍处峰宽的平均值，乘峰高：h W W A h h ⨯+=)(2185.015.0 3. 大色谱峰尾部的小峰面积的测量分析某主成分中痕量组分时，常会遇到主峰未到基线，杂质峰开始馏出的情况。
此时，杂质峰面积计算法如下：沿主峰尾部划出杂质峰的基线，由峰顶作主峰基线的垂线。
峰顶为A ，垂线与主峰尾部交点为B ，峰高一半处峰宽为b ，则A=AB·b 。
4. 基线漂移时峰面积的测量基线漂移时的峰面积，形状与大峰后面拖尾的小峰的峰缝相似，计算方法相同。
5. 重合峰面积的测量在色谱分析中，常会遇到分离不完全的重合峰，峰面积可如下计算：两峰重合，如果交点位于小峰半高以下，可由峰高乘半高峰宽法计算两峰面积。
如果两峰交点位于小峰半高以上，通常是由交点作基线的垂线，再用剪纸称重法计算。
6. 峰高乘保留时间法同系物间，半高峰宽与保留时间呈线形关系：a bt W R h +=2，对于填充柱0≈a 。
当色谱峰很尖、很窄、半高峰宽不易测准时，可用保留时间代替半高峰宽R bt h A ⋅=065.1。
定量校正因子的测定
(3)、增加峰高法 该法是在样品中加入一种纯物质，测定未知物 色谱峰是否有增高，从而判断未知物与加入的 纯物质是否同一种物质。在试样中加入适量的 某纯物质，进样后峰高增加的色谱峰可能与加 入的纯物质为同一物质。 上述的3种定性方法的分析结果并非绝对可靠， 这是因为尽管保留值具有特征性，但却不具备 专一性，有些物质也可能具有相同或相近的保 留值，难免会造成错误的判断，较为可靠的方 法是以下两种。
1/ 2
A实际 1.065 h W 1/ 2
(2)、峰高乘以平均峰宽 当色谱峰的峰形不对称时，一般可采用此法。即先分 别测出峰高为 0.15 和 0.85 处的峰宽，然后按下式计 算面积：
A 1 h (W0.15 W0.85 ) 2
此法计算出的峰面积较准确。 对一些对称的狭窄峰，可直接以峰高代替峰面积， 这样做既简便快速，又准确。
(1)、绝对保留值法 该法是在相同的条件下分别测定未知物和已知 纯物质的保留值，通过对照比较两者的保留值 是否相同，判断两者是否同一种物质。保留值 相同时，可能 (2)、相对保留值法 该法是在样品中加入一种基准物，测定未知物 对基准物的相对保留值，通过对照文献数据判 断未知物是哪一种物质(文献上有各种常见物 质对某些基准物的相对保留值可供查阅)。相 对保留值仅与固定相及柱温有关，不受其他操 作条件的影响。在规定的固定相及柱温条件下， 测出未知组分对基准物的相对保留值，与文献 数据对照即可做出定性判断。
W i = fi Ai 式中的 f i称为组分的校正因子。由式可知，定量分 析必须测量其峰面积 A i和确定组分的校正因子 f i ，
再用适当的定量计算方法，将色谱峰面积换算为试样 中组分的含量。
色谱校正因子
色谱的检测器对不同物质有不同的响应，换句话说，1mg化合物A在检测器上能产生1000mAu的响应，但同样是1mg的化合物B在该检测器上也许就只能产生847mAu的响应，所以我们不能在检测器输出1000mAu的响应时就认定样品中一定含有1mg化合物，这时就必须引入定量校正因子。
校正因子的作用就是反映某物质的量与检测器响应之间的关系。
定量校正因子分为两种：1.绝对定量校正因子f；f=M/A，（其中M代表被测物质的量，A代表检测器信号响应，可以是峰面积或峰高），其意义为单位响应所反映的物质量。
2.相对定量校正因子f'；f'=fi/fs=（Mi/Ai）/(Ms/As)=（Mi*As）/（Ms*Ai）,（其中i代表被测定物质，s代表选定的基准物质）。
绝对定量校正因子一般用于外标法，相对定量校正因子一般用于内标法。
色谱法的含量测定中之所以要先用待测成分的对照品来建立校准曲线，然后才用这个曲线来计算待测样品中该化合物的含量，实际上就是在测定样品前先确定校正因子。
日常操作中我们都是以：M标/A标=M样/A样直接计算样品含量了，所以没太注意有什么校正因子，事实上只要将公式作一个简单的变形：M样=A样*（M标/A标），不难看出式中的（M标/A 标）其实正是定量校正因子f，那么M样=A样*f了。
（简单来说可以理解为标准曲线的斜率) 最后提醒一点，用面积百分比法做含量测定时，不可简单地认为各成分的峰面积百分比就是它们的含量百分比哦，理由如上所述，各成分含量与响应的比例关系可不一定都相同啊！色谱定量分析的依据是被测组分量与检测器的响应信号(峰面积或峰高)成正比。
但是同一种物质在不同类型检测器上往往有不同的响应灵敏度；同样，不同物质在同一检测器上的响应灵敏度也往往不同，即相同量的不同物质产生不同值的峰面积或峰高。
这样，各组分峰面积或峰高的相对百分数并不等于样品中各组分的百分含量。
因此引入定量校正因子，校正后的峰面积或峰高可以定量地代表物质的量。
校正因子
校正因子（色谱法的专业术语，一般常用于气相色谱GC和液相色谱HPLC） 定量校正因子 （最常见） 由于同一检测器对不同物质的响应值不同，所以当相同质量的不同物质通过检测器时，产生的峰面积（或峰高）不一定相等。为使峰面积能够准确地反映待测组分的含量，就必须先用已知量的待测组分测定在所用色谱条件下的峰面积，以计算定量校正因子。 相对校正因子 相对校正因子定义为 fi¢ = fi / fs 即某组分i的相对校正因子fi¢为组分i与标准物质s的绝对校正因子之比。 fi¢ =（mi /Ai）/（ms/As）=（mi / ms）?（As / Ai ） 可见，相对校正因子fi¢就是当组分i的质量与标准物质s相等时，标准物质的峰面积是组分i峰面积的倍数。若某组分质量为mi ，峰面积Ai ，则fi¢ Ai的数值与质量为mi的标准物质的峰面积相等。也就是说，通过相对校正因子，可以把各个组分的峰面积分别换算成与其质量相等的标准物质的峰面积，于是比较标准就统一了。这就是归一法求算各组分百分含量的基础。 相对校正因子的表示方法 上面介绍的相对校正因子中组分和标准物质都是以质量表示的，故又称为相对质量校正因子；若以摩尔为单位，相对摩尔校正因子；另外相对校正因子的倒数还可定义为相对响应值S¢（分别为相对质量响应值Sw¢、相对摩尔响应值SN¢）。通常所指的校正因子都是相对校正因子。 相对校正因子的测定方法 相对校正因子值只与被测物和标准物以及检测器的类型有关，而与操作条件无关。因此， fi¢ 值可自文献中查出引用。若文献中查不到所需的fi¢ 值，也可以自己测定。常用的标准物质，对热导检测器（TCD）是苯，对氢焰检测器（FID）是正
6种检测方法
（含量）或杂质检查法（有关物质）控制 。 部分原料中间体会用面积归一化法控制。（一般考察线性、灵敏度浓度
达到杂质指标限度一般以下）
总结
百分比法
归一化法
外标法
内标法
杂 加校正因子 质 的主成分自 检 身对照法 查 法
某化合物百分含量（%）= 峰面
积Σ峰面
×100%
简单的说就是配制溶液，进样，积按峰面积百分比法读取含量。
一般系统适应性主要考察分离度。（如：双乙酰阿昔洛韦。
D-NAP方法，P4）
峰面积百分比法
优点：
快速、简单、无需考察系统重复性（进样量不严格）无需 对照品
缺点：
测定误差大，本法通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另 有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。
同一针比值来计算），定量结果与进样量的重复性无关。 ②、只要被测组分及内标物出峰，且分离度合乎要求，就可定量，与其
他组分是否出峰无关。 ③、很适用于测定药物中微量有效成分或杂质的含量。由于杂质(或微量
组分)与主要成分含量相差悬殊，无法用归一化法测定含量，用内标 法则很方便。加一个与杂质量相当的内标物。加大进样量突出杂质峰， 测定杂质峰与内标峰面积之比，即可求出杂质含量。
样浓度或进样量） 2、系统适应性考察：通常含量低于0.5%的杂质，峰面积的相对标 准
偏差（RSD）应小于10%；含量在0.5%～2%的杂质，峰面积的 RSD应小于5%；含量大于2%的杂质，峰面积的RSD 应小于2%
3、供试品溶液的记录时间，除另有规定外，一般为主成分色谱峰 保留时间的2倍。
方法确定后不调节。