快速分离血浆磁珠法的建立

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磁珠法核酸分离技术概况

磁珠法核酸分离技术概况

磁珠法核酸分离技术概况
传统的核酸分离技术包含沉淀,离心等过程,这些纯化方法的步骤繁杂、费时长、收率低,接触有毒试剂,很难实现自动化操作;而采用磁性微球做载体进行核酸分离技术就能很好地克服这些缺点,实现样品的快速、高效制备,是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。

一、磁珠法提取核酸简介
磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞,从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面,而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。

反应一定时间之后,再在磁场作用下,使磁性颗粒与液体分开,回收颗粒(即磁珠-DNA 混合物),再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。

磁珠法不需要离心、不需要加入多种试剂,操作简单,符合核酸自动化提取要求,是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。

二、技术路线简易流程
样品裂解—磁珠与待分离DNA特异性结合—磁珠-DNA混合物的洗涤—磁珠与待分离DNA的洗脱分离(即结合-洗涤-洗脱三步)。

细胞裂解后,向裂解液中加入磁珠,当溶液的PH值小于6.5时,磁珠选择性的与优化的DNA结合,此时将吸附有DNA的磁珠置于磁场中,通过缓冲液去除没有被吸附的杂质(蛋白等),然后将磁珠置于PH值8.5的缓冲液中,纯化的DNA即可进入缓冲液中。

三、优点
配合微纳米磁珠核酸提纯试剂,优化样品回收和提纯效果,直接用于后续实验。

1、自动化操作保证了实验结果稳定,避免人工操作引起的差异及错误。

2、自动化操作系统,严格控制孔孔之间污染,避免操作人员的污染和被污染。

四、临床应用
乙肝、丙肝、艾滋病、流行性病毒、感染性疾病等。

下图是国外kingfisher磁珠法核酸提取技术原理图,供参考。

磁珠法和一步法提取

磁珠法和一步法提取

磁珠法和一步法提取磁珠法和一步法提取是两种常用的分离纯化技术,主要用于生物样品中的目标分子的分离和纯化。

两种方法在操作和原理上略有不同,下面将从不同角度对这两种方法进行介绍。

磁珠法提取(Magnetic bead extraction)是一种利用表面修饰的磁性微珠进行生物分子分离的技术。

该技术利用了磁性微珠与生物分子之间的特异性结合,通过磁场对磁珠进行分离,从而实现了对生物分子的快速、高效、特异性纯化。

操作步骤:1、将磁珠悬浮液与待纯化溶液进行混合,磁珠表面的功能化基团与待纯化样品中的目标分子结合。

2、使用磁力使磁珠聚集在一起,利用外部磁场,将磁珠沉降到底部,分离不含目标分子的上清液。

3、用洗涤缓冲液对磁珠进行洗涤,去除非特异性吸附的杂质,提高样品的纯度。

4、调节溶液条件,使磁珠与目标分子结合的特异性增强,从而实现目标分子的特异性纯化。

优点:1、快速:磁珠法提取中的磁场分离可以快速完成分离纯化的操作,比传统分离方法更加高效。

2、特异性强:磁珠本身可以表面化学修饰,增加生物分子与其之间的亲和力,可以实现高特异性纯化。

3、多样性:磁珠可以根据不同的样品类型和目标分子的特性来选择不同的表面修饰方法和磁性微珠,适用于不同种类的生物分子的纯化。

一步法提取是一种快速、高效的蛋白质纯化方法,可用于提取膜蛋白、质粒、抗原等生物大分子。

该方法基于亲和纯化原理,利用静电作用或氢键等作用机制,使目标分子与亲和基团结合,从而实现其高效纯化。

1、制备含有亲和基团的亲和树脂,如Ni-NTA、Protein A等。

2、将亲和树脂与待纯化的样品进行搅拌,通过稳定的结合-解离过程,使目标分子通过亲和树脂的结合和分离步骤,被高效分离和纯化出来。

3、洗涤并剥离亲和树脂,以去除非特异性结合物,提高目标分子的纯度。

4、Elution(洗脱):通过改变溶液条件,将目标分子从亲和树脂上洗脱下来,成为纯化后的目标分子。

1、高特异性分离:亲和树脂与目标分子之间具有特异性结合作用,从而实现了目标分子的高特异性分离纯化。

nipt提取流程磁珠法

nipt提取流程磁珠法

nipt提取流程磁珠法NIPT(Non-Invasive Prenatal Testing)是一种非侵入性产前筛查测试,用于检测胎儿染色体异常,特别是常见的三体综合征(Down综合征),还包括父源性染色体异常和染色体微重排。

NIPT的一个流行的测试方法是使用磁珠法来提取胎儿游离DNA。

以下是NIPT磁珠法的提取流程。

1.培养腹腔游离DNA细胞:通过母体血液提取,将血浆和红细胞分离。

血浆中包含一定量的胎儿游离DNA。

提取的血浆样本需要在规定温度下储存,以保持DNA的稳定性。

2.提取游离DNA:使用商用化学试剂盒来提取血浆中的游离DNA。

这一步通过化学变性和蛋白酶处理,可以去除多余的蛋白质和核酸,同时保留游离DNA。

3.DNA片段大小选择:在这一步中,使用甲基化磁珠来结合DNA片段。

甲基化磁珠利用DNA序列上的甲基化模式进行特异性结合。

非甲基化DNA片段则不结合磁珠,可以通过磁力分离去除。

4.洗涤和去除杂质:将结合DNA的甲基化磁珠通过磁力分离,洗涤多次以除去杂质。

这一步的目的是保证提取的DNA纯度高,减少干扰因子的影响。

5. 洗脱DNA:将纯化后的DNA从磁珠上洗脱下来。

这一步可以使用Elution Buffer等特定试剂洗脱。

6. DNA定量和质检:使用核酸分析仪(如Qubit或NanoDrop)对提取的DNA进行定量和质检。

定量是为了确定DNA的浓度,而质检则是检查DNA的纯度和完整度。

7.NIPT结果分析:经过上述流程提取的DNA样本会进行高通量测序。

通过测序分析获得的数据会与数据库中的正常基因组和已知突变序列进行比对。

最后,在有经验的专业人员的参与下,根据比对结果对胎儿染色体异常进行判断。

总结:磁珠法是NIPT提取胎儿游离DNA的常用方法之一、它通过对游离DNA进行化学提取和纯化,能够有效去除杂质和蛋白质,提高DNA的纯度和浓度。

整个流程需要严格控制各个步骤的条件和操作,以保证提取到高质量的DNA样本,从而确保NIPT的准确性和可靠性。

磁珠制备方法

磁珠制备方法

磁珠制备方法
磁珠制备方法是一种常见的实验技术,广泛应用于生物医学、药物研发、生物分离等领域。

磁珠制备方法的关键在于选择合适的磁性材料,以及制备工艺的优化。

首先,选择合适的磁性材料是磁珠制备方法的关键。

常见的磁性材料包括氧化铁、氧化镍、氧化钆等。

这些材料具有良好的磁性和生物相容性,能够在生物样品中实现快速、高效的分离和富集。

其次,制备工艺的优化对于磁珠的性能和应用至关重要。

一般来说,制备磁珠的工艺包括溶剂反应法、共沉淀法、溶胶凝胶法等。

在选择制备方法时,需要考虑磁珠的粒径、分散性、表面修饰等因素,以满足不同实验的需求。

在实际操作中,磁珠的制备通常包括以下几个步骤:首先是原料的准备,即选择合适的磁性材料和表面修饰剂;其次是合成反应,通过溶剂反应、共沉淀等方法将原料转化为磁珠;最后是表面修饰,通过化学修饰、功能化处理等方法,改善磁珠的性能和稳定性。

除了传统的制备方法,近年来,一些新型的磁珠制备技术也不断涌现,如微流控技术、纳米材料修饰等。

这些新技术在提高磁珠的性能和应用方面具有重要意义,为磁珠制备方法的发展带来了新的机遇和挑战。

总之,磁珠制备方法是一项重要的实验技术,对于生物医学、药物研发等领域具有重要意义。

通过选择合适的磁性材料和优化制备工艺,可以制备出具有优良性能的磁珠,为科研工作者提供了重要的实验工具。

随着新技术的不断涌现,相信磁珠制备方法将会在未来发展出更多的应用和潜力。

磁珠法孕周血样提取

磁珠法孕周血样提取

孕周血浆DNA提取
实验目的:孕周血浆样本cfDNA提取。

实验:
一. 实验材料
实验仪器:金属浴
实验试剂:人和未来血浆游离DNA提取试剂盒
二. 实验方法
实验步骤:
1、向无核酸管中加入2ml Lysis buffer、120ulproteinaseK、15ul助沉剂、30ul磁珠及1m样
本,颠倒混匀20min;
2、将1.5ml Ep管置于磁力架上,将样本转移至Ep管中,静置至磁珠吸附至磁铁一端后吸
去废液;
3、重复步骤2至所有样品均转移至Ep管内;
4、将Ep管从磁力架上取下,加入500ul Wash BufferⅠ充分颠倒混匀使磁珠重悬,将Ep管
置于磁力架上,静置至磁珠吸附至磁铁一端后吸去废液;
5、将Ep管从磁力架上取下,加入500ul Wash BufferⅡ充分颠倒混匀使磁珠重悬,将Ep管
置于磁力架上,静置至磁珠吸附至磁铁一端后吸去废液;
6、保持Ep管置于磁力架上,加入550ul Wash Buffer Ⅲ(小心不要冲散磁珠),静置1min
后吸去废液;
7、将Ep管从磁力架上取下,加入30ul Elution Buffer,充分吸打使磁珠混匀,置于55℃金
属浴10min,每隔1-2min将Ep管取出使磁珠混匀;
8、将Ep管置于磁力架上,静置至磁珠吸附至磁铁一端后吸出溶液待建库;
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磁珠法组织与血液DNA提取操作规程

磁珠法组织与血液DNA提取操作规程

磁珠法组织与血液DNA提取操作规程(仅供科研使用)操作程序1.打开恒温培养振荡器,设置温度为50℃;打开恒温水浴锅,设置温度70℃;(试剂盒说明书是55-56℃,因恒温培养振荡器温度达不到55℃,实际操作时取50℃)2.配制Proteinase K溶液:每管粉末蛋白酶K中加入4.5ml Protease Dissolve Buffer并充分溶解(现配现用,未用完的Proteinase K置4℃保存短期使用);3.按每人份200ul ATL与20ul Proteinase K溶液混合,轻轻摇匀(混合液要求现配现用);4.在放有血片的浅孔96孔板内加入200ulATL与Proteinase K的混合液,用封口胶密封;(试剂盒说明书上要求每孔加入220ul ATL & Proteinase K混合液,实际操作时加入200ul)5.50℃恒温培养振荡器中250rpm洗脱1小时;(实际操作时50℃振荡洗脱45min)6.洗脱完后每孔加入200ul AL,振荡2-3min混匀,封口胶密封,70℃水浴15min;7.在深孔96孔板内每孔加入20ul磁珠和400ul Binding Buffer,振荡2-3min混匀,将水浴后浅孔96孔板内上清液加入对应的深孔96孔板中;(磁珠用前要充分混匀,上清液在前面加热过程会有所损失)8.在振荡器上1300rpm,10min,放置磁力板上5-7min,倒掉上清液;9.每孔加入600ul GW1,1300rpm,5min,放置磁力板上5min,倒掉上清液;10.每孔加入600ul GW2,1300rpm,5min,放置磁力板上5min,倒掉上清液;(磁力吸附时间依据磁珠聚集在底部,上清液澄清即可)11.重复步骤10一次;12.倒扣96孔板于吸水纸上,静置3min,放加热器上50℃,5min,观察若没水痕,则挥发干净;13.每孔加入50ul Elution Buffer,1300rpm,70℃,20min,恢复室温测定样品DNA浓度;14.取用DNA前将96孔板放置磁力板上3min再取样。

血清快速分离方法

血清快速分离方法

离心法
•优点:快速、简单、有效。

•步骤:
–将血液样本收集到带有凝固剂的试管中。

–将试管放置在离心机中,高速离心(通常为 10 分钟,3000 rpm)。

–离心后,血清将漂浮在凝固的红细胞之上。

–使用移液器小心吸取血清。

凝胶分离法
•优点:可同时分离血浆和血清。

•步骤:
–将血液样本收集到带有凝胶分离剂的试管中。

–将试管垂直放置并静置一段时间(通常为 30-60 分钟)。

–凝胶分离剂将在红细胞、血浆和血清之间形成分层。

–使用移液器小心吸取血清层。

垂直柱分离法
•优点:可去除凝固因子,获得纯净的血清。

•步骤:
–使用带有滤纸柱的小柱子。

–将血液样本滴到滤纸柱的顶部。

–血清将通过滤纸柱流下,而细胞和凝固因子将被滤除。

–使用移液器小心吸取滤纸柱底部的血清。

其他方法
•冷沉淀法:将血液样本放置在 4°C 下过夜,血清将沉淀至底部。

•血清吸管:使用专门的血清吸管从离心后的血液样本中吸取血清。

•磁珠分离法:使用磁珠与凝固因子结合,然后通过磁力分离,留下纯净的血清。

nipt提取流程磁珠法

nipt提取流程磁珠法

NIPT提取流程磁珠法的步骤和流程引言非侵入性产前基因检测(Non-Invasive Prenatal Testing,NIPT)是一种通过检测孕妇血液中的胎儿游离DNA来评估胎儿染色体异常风险的方法。

NIPT的提取流程是其中的核心步骤之一,而磁珠法是目前广泛应用的一种提取方法。

本文将详细描述NIPT提取流程磁珠法的步骤和流程,确保流程清晰且实用。

1. 实验前准备在开始NIPT提取流程磁珠法之前,需要准备以下实验材料和设备: - 孕妇血液样本 - 磁珠提取试剂盒 - 离心机 - 磁珠分离架 - PCR仪 - 试剂及耗材:酶、缓冲液、洗涤缓冲液、洗涤液、洗涤管等2. 样本处理2.1 血液处理 - 将孕妇血液样本离心,将血浆转移到一个新的离心管中。

- 离心血浆样本以去除细胞残留物,离心条件为3000g,10分钟。

- 将上清液转移到一个新的离心管中,避免沉淀和红细胞。

2.2 DNA提取 - 向血浆中加入磁珠提取试剂,根据试剂盒说明书中的比例加入。

- 彻底混匀样品和试剂,使其充分反应。

- 将反应混合物孵育在适当的温度下,一般为室温,孵育时间根据试剂盒说明书中的要求。

- 加入磁珠,使其与DNA结合。

- 使用磁珠分离架分离磁珠- DNA复合物,去除上清液。

3. 洗涤步骤3.1 第一次洗涤 - 向磁珠- DNA复合物中加入洗涤缓冲液。

- 彻底混匀样品和洗涤缓冲液,使其充分反应。

- 使用磁珠分离架分离磁珠- DNA复合物,去除上清液。

3.2 第二次洗涤 - 向磁珠- DNA复合物中加入洗涤液。

- 彻底混匀样品和洗涤液,使其充分反应。

- 使用磁珠分离架分离磁珠- DNA复合物,去除上清液。

4. DNA洗脱•向磁珠- DNA复合物中加入适当的洗脱缓冲液。

•彻底混匀样品和洗脱缓冲液,使其充分反应。

•将磁珠- DNA复合物孵育在适当的温度下,一般为室温,孵育时间根据试剂盒说明书中的要求。

•使用磁珠分离架分离磁珠- DNA复合物,收集洗脱液,其中含有目标DNA。

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著 ・
快 速 分离 血 浆磁珠 法 的 建立
栾 建凤 。 姚 根 宏 。 朱 培 元 。 叶 东。 严 京 梅 王 言 帅 , , , , ,
(. 1 南京 军 区南 京总 医院输血科 , 江苏 南京 2 0 0 ; . 10 2 2 英科 新创科技 有 限公 司 , 建厦 门 3 10 ) 福 6 0 0
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6 5・ 7
第2 卷 1
第 7期
医 学 研 究 生 学 报
J u n l fMe ia o trd ae o r a dc lP sga u ts o

V0 . No Βιβλιοθήκη 1 21 . 20 0 8年 7月
J 12 0 u. 0 8
摘 要 : 目的 : 立 一 种 快 速 分离 血 浆 的 方 法 , 建 旨在 为 常 规 检验 工 作 中的 血浆 快 速 分 离 和为 野 战 条件 下进 行快 速 血 液 质 量 控 制提 供 基 础 。 方法 : 备 用植 物 凝 集 素 预 包 被 的 免 疫 磁 珠 ; 健 康 献 血 者 的抗 凝 全 血 , 别 用 离 心 和 制 5名 分 磁 珠 分 离 法 获得 血 浆 , 过 血 型 反 定 型 、 型 抗 体 、 离 血 红 蛋 白 ( b 和 生 化 指 标 的检 测 结果 判 定 磁 珠 分 离 法 的 通 血 游 H ) 可行性。 结果 : 磁珠 分 离 法 可 在 不离 心 的情 况 下 2 i mn内分 离 血浆 ; 离 心 获得 的血 浆 相 比 , 血 型 反 定 型 、 型 与 其 血 抗 体 、 浆 游 离 H 、 化指 标结 果 均 无 明 显 差 异 。 结 论 : 珠 分 离 法 可 不 离 心 达 到 快 速 分 离 血 浆 的 目的 , 分 离 血 b生 磁 其
E tbi meto rpd pamai lt nmeh db s l h n f a i ls oai to yi a s a s o mmu o g ei b a sa n ma n t e dasy c
L N Ja . n UA in f g ,YAO Ge — o g ,Z e. u n ,YE Do g ,YAN J g me e n h n HU P i a y n i — i ,W AN Ya —h a n G n s u i
效果 与 离 心 法 相 当 , 血浆 质量 无 任 何 影 响 。 对 关键 词 : 磁 珠 ; 分 离 ; 血浆 ; 血液 质 量 中 图分 类 号 : R 3 1 一3 文献 标 识 码 : A 文 章编 号 : 10 -19 2 0 )70 7 -3 0 889 (0 8 0 -65 0
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