水五日生化需氧量BOD5的测定
BOD5的测定(稀释接种法)
BOD5的测定（稀释接种法）BOD5，即5天生化需氧量（也称为生化需氧量-5天），是自然水体和生活废水的有机质污染指标之一。
BOD5测定是指在5天内，在一定的温度和pH值下，微生物在无氧条件下将有机物氧化成为二氧化碳和水的化学量测定方法。
其结果反映了水中有机物的含量。
BOD5测定的原理是：通过将水样稀释后与特定的微生物进行接种，并在一定的条件下培养，使微生物对有机物进行氧化分解，用电化学分析仪器测定分解过程中氧的消耗量，计算出单位体积水样中有机物的含量。
BOD5测定中的稀释接种法是一种常见的测定方法，其主要步骤如下：1. 制备好试样和质量达标的无菌生理盐水，生理盐水中含有必需的微量元素和氮源，可以提供微生物的生长所需的营养物质。
2. 将水样进行必要的预处理，即去除悬浮物、沉淀物等大颗粒物质，并用筛网过滤掉较小的颗粒物质，得到清洁、透明的水样，以便稀释和接种。
3. 根据水样的不同特性和预期的BOD5值，选择适当的稀释倍数，将水样用无菌生理盐水稀释到不同浓度的试样中。
试样的总体积通常为300~350ml，并且每个稀释倍数至少需要重复3个。
4. 取少量的无菌水，将试管中的试样进行接种。
生物接种可以选择一些常见的微生物，比如肠杆菌和亚硝酸盐还原菌。
为了更好地模拟水体中的自然情况，可以采用在野外水域中分离出的有机物降解菌进行接种。
5. 分别将接种后的试样置于5天内，36 ± 1℃恒温搅拌培养，以促进微生物的快速生长和有机物的氧化分解。
6. 在5天后，再次测定水样中溶解氧的浓度，通过差值计算出BOD5值。
计算公式如下：BOD5= (T1-T2)×df/V其中，T1为初始溶解氧浓度，mg/L；T2为5天后的溶解氧浓度，mg/L；df为稀释倍数；V为试样体积，ml。
通过稀释接种法进行BOD5测定，可以掌握水体中有机物的污染情况，评估水质和水环境的健康状态。
在实际应用中，为了保证测定结果的准确性和可靠性，还需要进行控制实验（比如负对照实验和阳性对照实验）和重复测定。
五日生化需氧量(BOD5)的测定
五日生化需氧量(BOD5)的测定日生五需化量(氧od5)的测b定、实验目一的掌生活握污或工业水废水日五生需化量氧测的。
定二、实验原理生化氧需是指量在好氧件条下微生，物分解中的水机物有生物化的过程学中消所耗解溶氧的量此生化。
全程进过行时的间很，如在长02下℃养，培完此过成程1需00多。
天目国前外内都采20℃用养培天五为检验作标指，为五称生日需氧量(化od5b。
)分测别样品定培前养的溶解后氧二者之，差即为odb值，以氧5的g/l表示m 。
水样稀用释稀释，水定合确的倍数非适重常。
稀要释数倍大或太太，小五则培天养后余剩的溶解太氧多或太，甚至为少零都，不得能可到的靠果结。
释的稀程应使五天培养度中消耗所溶解的氧大2m于g/l而剩余,溶解氧在1g/l以上。
m此在前提件下，稀条释倍可数估以算，也可依据经验以法来值确定对于不。
含或含少生微的物水，废测在bod定时应进5行接种。
三实、验仪培器箱，大养玻瓶璃1，000m量筒，blo培养瓶d各，规的格(胖、肚刻)度液移管等。
、四实验试剂除测定溶解所需氧试的外，还需剂列下试剂：化钙溶液氯三，氯化溶铁，液酸镁溶硫液，酸盐磷缓冲溶液。
等、实验五骤1.步2.3.稀释的配制水使蒸：水的馏解氧为2溶℃0的时饱和解溶氧在这含有饱，和溶氧蒸解水中馏，每00lm0加入l上述种四液各溶1l。
m测定水的c污odn值或cdr。
值调节水ph值至样中性。
样水培液养配制的：()1据根得测的cod值计出算释稀数倍，一般时同3~做4种释稀倍。
数2)(用即吸虹把一些先释水引稀入1000lm量的中(约所需体积的筒1/)，3用再液移管吸所需取水的体积样，加量筒入。
移取中样水3()稀用释水释到所稀需的积体注意（本次：验实稀释的总体积为700m所），小心摇l匀将，配此的好样用虹吸法水入引带号编的2培个瓶养中，至全完充，满好盖盖，水子封。
此为一种稀第释倍的数培液(在养整操作个过程应免产生避气泡。
其)的几种余释稀倍数养液培，亦按法上作操。
HJ505-2009 水质 五日生化需氧量(BOD5)的测定 稀释与接种法
HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法1.引言1.1 目的旨在规定水质中五日生化需氧量(BOD5)的测定方法，采用稀释与接种法进行测定。
1.2 术语定义1.2.1 五日生化需氧量(BOD5)指在规定的条件下，细菌生物对有机物所需的氧量。
1.2.2 稀释与接种法一种测定水质中BOD5的方法，通过将待测水样稀释后与BOD5基准溶液接种，测定不同时间间隔下的溶液中溶解氧的消耗量。
2.范围2.1 适用范围本方法适用于表征水质中有机物的生化需氧量。
2.2 不适用范围本方法不适用于含有高浓度或难以接种的水样。
3.装备与试剂3.1 装备所需装备，包括但不限于：溶氧仪、稀释器、恒温培养箱等。
3.2 试剂所需试剂，包括但不限于：BOD5基准溶液、氨氮缓冲溶液等。
4.操作步骤4.1 样品采集与处理详细描述样品采集的步骤，包括样品的选择、采集容器的准备等。
4.2 稀释与接种详细描述稀释与接种法的步骤，包括待测水样的稀释比例、接种基准溶液的准备等。
4.3 培养与测定详细描述培养与测定的步骤，包括培养温度、培养时间、测定溶解氧的方法等。
5.结果计算与报告详细描述结果计算与报告的方法，包括BOD5值的计算公式、结果的单位表示等。
6.质量控制详细描述质量控制的方法，包括质控样的使用、质控结果的判定等。
7.附件所涉及的附件如下：- 附件1：某水样BOD5测定数据记录表- 附件2：BOD5基准溶液配制方法8.法律名词及注释所涉及的法律名词及注释如下：- 法律名词1：注释1- 法律名词2：注释29.遇到的困难及解决办法在实际执行过程中，可能遇到的困难及解决办法如下：- 困难1：描述困难1的情况，并提供相应的解决办法。
- 困难2：描述困难2的情况，并提供相应的解决办法。
参考文献：[1] 相关文献1的引用[2] 相关文献2的引用附录：- 附录A：常用实验室设备清单- 附录B：常用试剂列表以上为HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法的详细文档模板范本。
水五日生化需氧量(BOD5)的测定
实验五水五日生化需氧量（BOD5）的测定1 目的1.1 理解BOD的含义及测定条件；1.2 了解水样预处理的道理与预处理方法。
2 方法原理生物化学需氧量(BOD)定义为：在规定的条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程所消耗的溶解氧量。
该过程进行的时间很长，如在20℃培养条件下，全过程需100天，根据目前国际统一规定，在20±1℃的温度下，培养五天后测出的结果，称为五日生化需氧量，记为BOD5，其单位用质量浓度mg/L表示。
对于一般生活污水和工业废水，虽然含较多有机物，如果样品含有足够的微生物和具有足够氧气，就可以将样品直接进行测定，但为了保证微生物生长的需要，需加入一定量的无机营养盐(磷酸盐、钙、镁和铁盐)。
某些不含或少含微生物的工业废水、酸碱度高的废水、高温或氯化杀菌处理的废水等，测定前应接入可以分解水中有机物的微生物，这种方法称为接种。
对于一些废水中存在着难被一般生活污水中微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，可以将水样适当稀释，并用驯化后含有适应性微生物的接种水进行接种。
一般检测水质的BOD5只包括含碳有机物质氧化的耗氧量和少量无机还原性物质的耗氧量。
由于许多二级生化处理的出水和受污染时间较长的水体中，往往含有大量硝化微生物。
这些微生物达到一定数量就可以产生硝化作用的生化过程。
为了抑制硝化作用的耗氧量，应加入适量的硝化抑制剂。
3 适用范围BOD5为2—1000mg/L水样，超过1000mg/L的水样，应适当稀释。
4 主要仪器及设备使用的玻璃仪器皿在实验前应认真清洗，防止油污、沾尘。
玻璃器皿干燥后方能使用。
常用实验室设备如下：4.1 生化培养箱温度控制在20±l℃，可连续无故障运行。
4.2 充氧设备充氧动力常采用无油空气压缩机(或隔膜泵、或氧气瓶、或真空泵)。
充氧流程可分为正压、负压充氧两种流程。
4.3 BOD培养瓶：容积550±1mL。
水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法
水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法
什么是BOD5？
BOD5，也就是五日生化需氧量（Biochemical Oxygen Demand），是一种用来衡量水中有机物质分解速度的指标。
通俗地说，就是测量水中的有机物质被微生物分解所消耗的氧气量。
这个指标可以评估污水、废水以及天然水体的水质。
BOD5的测定
BOD5的测定需要进行水样稀释和接种操作。
下面分别介绍这两个步骤。
水样稀释
为了保证BOD5的测定准确性，需要将水样进行稀释，通常是以1:5或1:10
的比例稀释。
具体的步骤如下：
1.取一定量的水样，根据实际情况选择合适的量，通常是10 mL或20
mL；
2.分别加入已经在恒温条件下预先接种好的含有适当微生物的生物培养
液；
3.用去离子水或蒸馏水进行稀释，使稀释比例达到1:5或1:10；
4.用漩涡振荡器将混合液充分混匀，然后装入BOD5需氧瓶中。
接种
接种是指在水样中向其中添加某些特定微生物，常用的有镰刀菌和链球菌等。
作用是加速水中的有机物质分解，提高BOD5的测定准确性。
接种的具体步骤如下：
1.在稀释过的水样中加入0.5 ml左右的包含有大量微生物的生物培养
液，然后用漩涡振荡器均匀混合，放入BOD5需氧瓶中；
2.氧化还原指示液（常用的指示液为甲基橙）滴入需氧瓶中，然后将其
密封，放入常温下放置5天。
BOD5的测量是一种水质评价的标准方法，可以作为污水、废水处理以及水环境保护的重要依据。
通过对稀释和接种方法的认真实施，可以保证测定结果的准确性和可靠性。
水质五日生化需氧量(bod5)的测定
中华人民共和国国家环境保护标准HJ 505—2009代替GB/T 7488-1987水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法警告：丙烯基硫脲属于有毒化合物，操作时应按规定要求佩带防护器具，避免接触皮肤和衣服；标准溶液的配制应在通风柜内进行操作；检测后的残渣残液应做妥善的安全处理。
1 适用范围本标准规定了测定水中五日生化需氧量（BOD）的稀释与接种的方法。
本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD）的测定。
方法的检出限为L，方法的测定下限为2mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6mg/L，稀释与稀释接种法的测定上限为6000mg/L。
2 规范性引用文件本标准内容引用了下列文件中的条款。
凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 7489 水质溶解氧的测定碘量法GB/T 11913 水质溶解氧的测定电化学探头法HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范3 方法原理生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程消耗的溶解氧。
通常情况下是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4h 或(2+5)d±4h(先在0～4℃的暗处培养2d，接着在(20±1)℃的暗处培养5d，即培养(2+5)d)，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD形式表示。
若样品中的有机物含量较多，BOD的质量浓度大于6mg/L，样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处理等的废水，在测定BOD时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。
当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应将驯化后的微1生物引入水样中进行接种。
水五日生化需氧量(bod5)的测定
实验五水五日生化需氧量（BOD5）的测定1 目的1.1 理解BOD的含义及测定条件；1.2 了解水样预处理的道理与预处理方法。
2 方法原理生物化学需氧量(BOD)定义为：在规定的条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程所消耗的溶解氧量。
该过程进行的时间很长，如在20℃培养条件下，全过程需100天，根据目前国际统一规定，在20±1℃的温度下，培养五天后测出的结果，称为五日生化需氧量，记为BOD5，其单位用质量浓度mg/L表示。
对于一般生活污水和工业废水，虽然含较多有机物，如果样品含有足够的微生物和具有足够氧气，就可以将样品直接进行测定，但为了保证微生物生长的需要，需加入一定量的无机营养盐(磷酸盐、钙、镁和铁盐)。
某些不含或少含微生物的工业废水、酸碱度高的废水、高温或氯化杀菌处理的废水等，测定前应接入可以分解水中有机物的微生物，这种方法称为接种。
对于一些废水中存在着难被一般生活污水中微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，可以将水样适当稀释，并用驯化后含有适应性微生物的接种水进行接种。
一般检测水质的BOD5只包括含碳有机物质氧化的耗氧量和少量无机还原性物质的耗氧量。
由于许多二级生化处理的出水和受污染时间较长的水体中，往往含有大量硝化微生物。
这些微生物达到一定数量就可以产生硝化作用的生化过程。
为了抑制硝化作用的耗氧量，应加入适量的硝化抑制剂。
3 适用范围BOD5为2—1000mg/L水样，超过1000mg/L的水样，应适当稀释。
4 主要仪器及设备使用的玻璃仪器皿在实验前应认真清洗，防止油污、沾尘。
玻璃器皿干燥后方能使用。
常用实验室设备如下：4.1 生化培养箱温度控制在20±l℃，可连续无故障运行。
4.2 充氧设备充氧动力常采用无油空气压缩机(或隔膜泵、或氧气瓶、或真空泵)。
充氧流程可分为正压、负压充氧两种流程。
4.3 BOD培养瓶：容积550±1mL。
水中五日生化需氧量BOD5的测定
水中五日生化需氧量(BOD5)的测定水中五日生化需氧量（BOD5）的测定一、实验目的1.了解水中有机物污染的重要指标之一——五日生化需氧量的概念和意义。
2.掌握BOD5测定的基本原理和方法，熟悉实验操作流程。
3.学会使用稀释接种法进行BOD5的测定，掌握实验技巧和注意事项。
二、实验原理五日生化需氧量（BOD5）是指在一定条件下，水中有机物在微生物作用下进行生物化学反应所消耗的溶解氧量。
BOD5是反映水体有机物污染的重要指标，也是水环境监测中的重要参数。
BOD5的测定采用稀释接种法。
该方法是将水样进行稀释，然后接种到培养瓶中，在恒温条件下培养5天，然后测定培养前后水样中溶解氧的差值，从而计算出BOD5值。
三、实验步骤1.采样：选择有代表性的水样，用干净的玻璃瓶采集，避免污染。
采集的水样应具有代表性，且应满足实验所需的最低浓度要求。
2.稀释：将采集的水样用去离子水或蒸馏水稀释至适当的浓度，以便接种到培养瓶中。
稀释倍数应根据水样的BOD5值和实验要求确定。
3.接种：将稀释后的水样分别接种到含有适量营养盐的培养瓶中，每个浓度至少接种3个培养瓶。
接种时，应将培养瓶放入恒温器中，在20℃±1℃的条件下培养5天。
4.测定溶解氧：在培养前后分别测定每个培养瓶中溶解氧的含量。
可使用溶解氧仪或碘量法进行测定。
5.数据处理：根据培养前后溶解氧的差值和稀释倍数，计算出BOD5值。
可按照以下公式进行计算：BOD5 = (ΔDO/Δt) × (V/V0) × 1000其中，ΔDO/Δt为培养期间溶解氧的变化速率，V为接种的培养瓶体积，V0为原始水样的体积。
四、实验结果与分析1.结果记录：将实验测定的BOD5值记录在表格中，包括稀释倍数、培养前后溶解氧含量、BOD5值等。
2.结果分析：根据实验数据，分析水中有机物污染程度，比较不同稀释倍数下的BOD5值，探讨稀释倍数对BOD5测定的影响。
同时，还可以将实验结果与标准值进行比较，评估实验的准确性。
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实验五水五日生化需氧量（BOD5）的测定1 目的1.1 理解BOD的含义及测定条件；1.2 了解水样预处理的道理与预处理方法。
2 方法原理生物化学需氧量(BOD)定义为：在规定的条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程所消耗的溶解氧量。
该过程进行的时间很长，如在20℃培养条件下，全过程需100天，根据目前国际统一规定，在20±1℃的温度下，培养五天后测出的结果，称为五日生化需氧量，记为BOD5，其单位用质量浓度mg/L表示。
对于一般生活污水和工业废水，虽然含较多有机物，如果样品含有足够的微生物和具有足够氧气，就可以将样品直接进行测定，但为了保证微生物生长的需要，需加入一定量的无机营养盐(磷酸盐、钙、镁和铁盐)。
某些不含或少含微生物的工业废水、酸碱度高的废水、高温或氯化杀菌处理的废水等，测定前应接入可以分解水中有机物的微生物，这种方法称为接种。
对于一些废水中存在着难被一般生活污水中微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，可以将水样适当稀释，并用驯化后含有适应性微生物的接种水进行接种。
一般检测水质的BOD5只包括含碳有机物质氧化的耗氧量和少量无机还原性物质的耗氧量。
由于许多二级生化处理的出水和受污染时间较长的水体中，往往含有大量硝化微生物。
这些微生物达到一定数量就可以产生硝化作用的生化过程。
为了抑制硝化作用的耗氧量，应加入适量的硝化抑制剂。
3 适用范围BOD5为2—1000mg/L水样，超过1000mg/L的水样，应适当稀释。
4 主要仪器及设备使用的玻璃仪器皿在实验前应认真清洗，防止油污、沾尘。
玻璃器皿干燥后方能使用。
常用实验室设备如下：4.1 生化培养箱温度控制在20±l℃，可连续无故障运行。
4.2 充氧设备充氧动力常采用无油空气压缩机(或隔膜泵、或氧气瓶、或真空泵)。
充氧流程可分为正压、负压充氧两种流程。
4.3 BOD培养瓶：容积550±1mL。
4.4 样品运输贮藏箱：温度保持0~4℃。
4.5 250mL溶解氧瓶或具塞试剂瓶2~6个。
4.6 50mL滴定管2支。
4.7 1mL移液管3支，25mL、100mL移液管各1支。
4.8 10mL、100mL量筒各1个。
4.9 250mL碘量瓶2个。
5 试剂采用分析纯试剂。
实验用水采用重蒸蒸馏水。
5.1硫酸锰溶液将MnSO4·4H2O 480g或MnSO4·2H2O 400g溶于蒸馏水中，过滤后稀释成100mL。
(此溶液中不能含有高价锰，试验方法是取少量此溶液加入碘化钾及稀硫酸后溶液不能变成黄色，如变成黄色表示有少量碘析出，即表示溶液中含有高价锰)。
MnO23+2I-+6H+=I2+Mn2++3H2O5.2碱性碘化钾溶液溶解500g氢氧化钠于300—400mL蒸馏水中，冷至室温。
另外溶解300g碘化钾于200mL蒸馏水中，慢慢加入已冷却的氢氧化钠溶液，摇匀后用蒸馏水稀释至1000mL(强碱性溶液腐蚀性很大，使用时注意勿溅在皮肤或衣服上)，如有沉淀，则放置过夜取上清液，贮藏于塑料瓶或棕色试剂瓶中（用棕色试剂瓶时要用橡胶瓶塞）。
5.3 浓硫酸比重1.84，强酸腐蚀性很大，使用注意勿溅在皮肤或衣服上。
5.4 1％淀粉指示液称取2g可溶性淀粉，溶于少量蒸馏水中，用玻璃棒调成糊状：慢慢加入(边加边搅拌)刚煮沸的200mL 蒸馏水中，冷却后加入0.25g水杨酸或0.8g氯化锌ZnCl2防腐剂。
此溶液遇碘应变为蓝色，如变成紫色表示已有部分变质，要重新配制。
5.5 (1+1)硫酸溶液将浓硫酸(比重1．84)与水等体积混合。
5.6 2 mol/L(1／2 H2SO4)5.7盐溶液下述溶液至少可稳定一个月，应贮存在玻璃瓶内，置于暗处。
一旦发现有生物滋长迹象，则应弃去不用。
5.7.1 磷酸盐：缓冲溶液。
将8.5g磷酸二氢钾(KH2PO4)、21.75g磷酸氢二钾（K2HPO4）、33.4g七水磷酸氢二钠(NaH2PO4·7H2O)、和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于500mL水中，西是指1000mL。
此缓冲溶液的pH应为7.2。
5.7.2 七水硫酸镁：22.5g/L溶液将22.5g七水硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀释至1000mL并混合均匀。
5.7.3 氯化钙：27.5g/L溶液将27.5g无水氯化钙（CaCl2）（若用水合氯化钙，要取相当的量）溶于水，稀释至1000mL并混合均匀。
5.7.4：0.25g /L溶液将0.25g六水氯化铁（Ⅲ）（FeCl3·H2O）溶解于水中，稀释至1000mL并混合均匀。
5.8 硫代硫酸钠溶液C(Na2S2O3)=0.025mol／L称取 6.2g硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)溶于煮沸放冷的蒸馏水中，加入0.2g碳酸钠，用水稀释至1000mL。
贮于棕色瓶中，使用前用重铬酸钾，C(1／6K2Cr2O7)=0.0250mol／L标准溶液标定，标定方法如下。
于250mL碘重瓶中，加入l00mL蒸馏水和1g碘化钾，加入10.00mL 0.0250 mo1／L重铬酸钾标准溶液，5mL 2 mol/L(1／2 H2SO4)硫酸溶液(5.6)，密塞，摇匀，于暗处静置5 min后，用待标定的硫代硫酸钠溶液滴定至溶液呈淡黄色，加入1 mL淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪尽为止，记录用量。
标定反应：K2Cr2O7+6KI+7H2SO4=Cr2(SO4)3+312+4K2SO4+7H2O(硫酸铬，绿色)I2+2Na2S2O3=2NaI+Na2S4O6(连四硫酸钠，无色)C=10.00×0.0250／V式中C——硫酸钠溶液浓度(mol/L)V——硫代硫酸钠溶液消耗量(mL)5.9 氢氧化钠，0.5mol/L5.10 盐酸，0.5mol／L5.11 稀释水在5-20L玻璃内瓶装入一定量的纯水曝气2-8h，使稀释水的溶解氧接近饱和；曝气后瓶口盖上两层干净纱布，置于20℃培养箱中放置数小时，使水中溶解氧含量不少于8mg/L。
临用前每升水中加入四种营养盐溶液(5.7.1)、(5.7.2)、(5.7.3)、(5.7.4)各lmL并混合均匀。
稀释水的pH值为7.2，应在8h内使用完。
5.12 接种水如被检验样品本身不含有足够的适应性微生物，应采取下述方法获得接种水。
接种温度应在20±l℃。
5.12.1 城市污水，一般采用住宅区生活污水，过滤后在20℃培养箱内放置一昼夜，取上清液作为接种水。
5.12.2 待测样品经生化处理构筑物的出水处的出水。
5.12.3 当工业废水中含有难降解有机物时，取该工业废水排放口下游3-8Km 处的水作为做接种水；如无此种水源采用驯化菌种的方法在实验室培养含有适应于待测样品的接种水，建议采用如下方法：取中和或适当稀释后的该水样进行连续曝气，每天加少量新鲜水样。
同时加入适量表层土壤、花园土壤或生活污水，使能适应水样的微生物大量繁殖。
当水中出现大量絮状物，或分析其化学需氧量的降低值出现突变时，表明适应的微生物已经繁殖，可用做接种水。
一般驯化过程需要3-8d。
5.13 接种的稀释水根据需要和接种水的来源，向每升稀释水（5.11）中加入1.0~5.0mL接种水（5.12）中的一种。
以接种的稀释水的5天（20℃）耗氧量应在0.3~1.0mg/L之间。
6 步骤6.1 实验前准备工作6.1.1实验前8h将生化培养箱接通电源，并使温度控制在20℃下正常运行。
6.1.2将实验用的稀释水、接种水和接种的稀释水放入培养箱内恒温备选用。
6.2水样预处理6.2.1水样的pH值不在6.5~7.5之间时；先做单独试验，确定需要的盐酸（5.10）或氢氧化钠溶液（5.9）体积，再中和样品，不管有无沉淀形成。
当水样的酸度或碱度很高，可改用高浓的碱或酸进行中和，确保用量不少过水样体积的0.5%。
6.2.2含有少量游离氯的水样，一般放置1-2h后，游离氯即可消失。
对于游离氯在短时间内不能消失的水样，可加入适量的亚硫酸钠溶液，以除去游离氯。
6.2.3从水温较低的水体中或富营养化的湖泊中采集的水样，应迅速升温至20℃左右，以赶出水样中过饱和的溶解氧。
否则会造成分析结果偏低。
从水温较高的水体中或废水排放口取样，应迅速使其冷却至20℃左右，否则会造成分析结果偏高。
6.2.4若待测水样没有微生物或微生物活性不足时，都要对样品进行接种。
诸如以下几种工业废水：a、未经生化处理过的工业废水；b、高温高压或经卫生杀菌的废水，特别要注意食品加工工业的废水和医院生活污水；c、强酸强碱性的工业废水；d、高BOD5值的工业废水；e、含铜、锌、铅、砷、镉、铬、氰等有毒物质的工业废水。
以上的工业废水都需采用具有足够微生物。
7 测试7.1 不经稀释水样的测定①溶解氧含量较高、有机物含量较少的地表水，可不经稀释而直接以虹吸法将约20℃的混匀水样转移入两个溶解氧瓶内，转移过程应注意不使产生气泡。
以同样的操作使两个溶解氧瓶充满水样后溢出少许，加塞。
瓶内不应留有气泡。
②其中一瓶随即测定溶解氧，另一瓶的瓶口进行水封后，放入培养箱中，在20培养5天。
在培养过程中注意添加封口水。
③从开始放入培养箱算起，经过5昼夜后，弃去封口水，测定剩余的溶解氧。
7.2 需经稀释水样的测定7.2.1 稀释倍数的确定根据实践经验，提出下述计算方法，供稀释时参考。
7.2.1.1地表水由测得的高锰酸盐指数与一定的系数的乘积，即求的稀释倍数。
高锰酸盐指数与系数的关系见表2-3。
表2-3 由高锰酸盐指数与系数的关系7.2.1.2工业废水由重铬酸钾法测得的COD值来确定，同程需作单个稀释比。
使用稀释水时，由COD值分别乘以系数0.075、0.15、0.225，即获得三个稀释倍数。
使用接种稀释水时，则分别乘以系数0.075、0.15、0.25即获得三个稀释倍数。
7.2.2 稀释操作7.2.2.1 一般稀释法：按照选定的稀释比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水（或接种稀释水）于1000mL量筒中，加入需要量的均匀水样，再加入稀释水（或接种稀释水）至800mL，用带胶板的玻棒小心上下搅匀。
搅拌时勿使搅棒的胶板露出水面，防止产生气泡。
按照（7.1）相同的步骤操作，测定培养5天前后的溶解氧。
另取两个溶解氧瓶，用虹吸法装满稀释水（或接种稀释水）作为空白试验，测定培养5天前后的溶解氧。
7.2.2.2 直接稀释法直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。
在已知两个容积相同（其差＜1mL）的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水（或接种稀释水），再加入根据瓶容积和稀释比例计算出来的水样量，然后用稀释水（或接种稀释水）使刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。
7.3溶解氧的测定：溶解氧的测定方法用碘量法（通常用叠氮化钠改良法），详见本书第二章《实验六水溶解氧（DO）的测定》8 计算8.1不经稀释直接培养的水样BOD s = DO1－DO2BOD s——水样的BOD5值，mg／LDO1：水样在培养前的溶解氧浓度，mg／LDO2：水样在培养五天后的溶解氧浓度，mg／L8.2 经稀释后培养的水样2121215)()(ffBBCC BOD⋅---=C1——水样在培养前的溶解氧浓度，mg／LC2——水样在培养五天后的溶解氧浓度，mg／LB1——稀释水（或接种稀释水）在培养前的溶解氧浓度，mg／LB2——稀释水（或接种稀释水）在培养五天后的溶解氧浓度，mg／Lf1——稀释水（或接种稀释水）在培养液中所占比例f2——水样在培养液中所占比例1[1]9 注意事项9.1 根据废水浓度高低及毒性大小确定使用稀释水、接种水还是稀释接种水，若稀释比大于100，将分两步或几步进行稀释。