高效液相色谱法测定金银花中绿原酸的含量
高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量
高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量摘要提供色谱柱为Spherigel C18色谱柱（200mm×4.6mm，5μm）、流动相为乙腈-1.0%醋酸水、检测波长327nm等色谱条件，建立了高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量的方法。
在该色谱条件下，绿原酸的含量在1.56~25μg/mL范围内线性关系良好，相关系数r=0.999 2，加样回收率为99.7%，RSD为2.63%（n=5），最低检出限为0.05μg/mL。
结果表明，该方法操作简单，分离度好，适用于金银花含片中绿原酸含量的测定。
关键词高效液相色谱法（HPLC）；绿原酸；金银花含片金银花（Flos lonicerae）为忍冬科（Caprifoaceae）忍冬属（Lonicera）植物[1]。
金银花的活性成分之一为绿原酸（结构式见图1）。
绿原酸为咖啡酰奎尼酸衍生物，由奎尼酸和咖啡酸缩合而成，易溶于甲醇、乙醇、丙酮等极性溶剂，微溶于乙酸乙酯，难溶于三氯甲烷、乙醚、苯等亲脂性溶剂，是一种重要的生理活性物质。
绿原酸为抗菌消炎的主要成分，对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、痢疾球菌、伤寒杆菌、肺炎球菌有显著的抑制作用；有抗病毒、升高白细胞、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基等作用；与人体血小板凝集和凝血因子的生成有关，还具有抗生育作用及对免疫系统的调节作用[2]。
本文采用高效液相色谱法，对金银花含片中绿原酸的含量进行测定，以期提高金银花含片质量标准可控性，为进一步完善其质量标准提供试验依据。
1仪器与试药1.1仪器DionexAT330（美国）高效液相色谱仪：由P680四元泵、UVD170U紫外检测器和AT330恒温箱组成；KQ 3200 B型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司生产）。
1.2材料与试剂金银花含片（河北省某厂生产）；绿原酸标准品（购自中国药品生物制品检定所）；甲醇、丙酮、无水乙醇、磷酸均为分析纯、乙腈为色谱纯，二次蒸馏水。
实验二 高效液相色谱法测定未知溶液中绿原酸的含量
实验二高效液相色谱法测定金银花中绿原酸的含量【目的】1、学习高效液相色谱仪的结构及操作方法；2、掌握高效液相色谱法进行定性和定量的分析方法；3、掌握索氏提取法对目标物提取的方法。
【概述】高效液相色谱法是以液体作为流动相的重要的一种色谱分析法。
它选用颗粒很细的高效固定相，采用高压泵输送流动相，分离、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成。
除了有快速、高效的特点外，它能分离沸点高、分子量大、热稳定性差的试样。
根据使用的固定相及分离原理不同，—般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排斥色谱等。
在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K:K=组分在固定相中的浓度/组分在流动相中的浓度显然，K越大，组分在固定相上的停留时间越长，固定相与流动相间的极性差值也越，因此，相应出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相液相色谱法和以流动相为极性而固定相为非极性物质的反相液相色谱法。
目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定烷)键合到硅胶基质上。
以极性溶剂(如相。
若将正构烷烃等非极性物质(如n—CN甲醇和水)为流动相，则可分离非极性或弱极性的化合物。
样品经进样系统注入到色谱仪，在色谱中进行分离分配，按时间顺序流出色谱柱，进入检测器，检测器将各组分的质量信号转变成电信号，得到色谱图，进行定性、定量分析。
【器材与试剂】1.器材（1）LC-20A型高效液相色谱仪（2）紫外检测器（3）计算机（4）打印机（5）20ul微量进样器（6）抽滤装置（7）色谱柱：250mm×4.6mm，n-C18柱（8）容量瓶（9）移液管（10）吸耳球（11）电子天平（12）量筒（13）滤膜（0.25μm）（14）注射器（15）过滤头（0.25μm）（16）索氏提取器装置（17）水浴锅（18）烧杯2.试剂（1）绿原酸标准品。
（2）甲醇（色谱纯）（3）乙腈（色谱纯）（4）磷酸（优级纯）（5）超纯水（6）金银花（7）乙醇【方法与步骤】1. 将干燥的金银花用粉碎机粉碎，准确称取8.000g，用滤纸包好，置于索氏提取器中，取90%的乙醇溶液90mL，先往索氏提取器中加90%的乙醇至与虹吸管相平，剩余液体加入圆底烧瓶中，对样品浸泡2h，然后在水浴锅上加热回流至无色，控制温度在80℃左右。
四川南江金银花中绿原酸含量的测定
标准溶 液制备
精密称取对照品绿原酸5.000 mg，以 80 %的甲醇溶解，并定容至5 mL 棕色 容量瓶中，得1.000 mg/mL的绿原酸标 准溶液；储存于冰箱（4 ℃）备用。
样品溶 液制备
精确称取金银花细粉0.300 g，置50 mL 具 塞三角瓶中，加入40 mL 80 %的乙醇，超 声（400 Hz）提取2次，每次30 min，收 集合并滤液，45 ℃真空浓缩至浸膏。加入 80 %的甲醇适量，定容至50 mL 的容量瓶 中，用0.45 µm 微孔滤膜过滤，冰箱冷藏 避光，备用。
• 金银花不同器官部位的绿原酸含量差异较大。 金银花不同器官部位的绿原酸含量差异较大。
金银花不同器官部位的绿原酸含量差异较大。 金银花不同器官部位的绿原酸含量差异较大。 南江金银花的花蕾中绿原酸含量最高， 南江金银花的花蕾中绿原酸含量最高，叶中绿 原酸含量其次，茎中绿原酸含量很低. 原酸含量其次，茎中绿原酸含量很低
结论
四川南江金银花与山东平邑金 银花及山东鲁峰金银花中绿原 酸含量比较表明：南江金银花 中绿原酸含量比山东平邑和鲁 峰金银花中的绿原酸高，为 6.234 8 %；南江金银花在越 冬期的叶中绿原酸含量较高， 达到4.525 1 %，茎中含量较 低，仅0.304 7 %。
参考文献： 参考文献：
[1] 国家药典委员会．中国药典，I 部[S]．北京：化学工业出 版社，2000：177 [2] 阎巧娟，韩鲁佳，江正强.金银花中绿原酸提取纯化工艺 的优化[J]. 中国农业大学学报,2002，7(2):22-26 [3] 罗磊，郭晓园.金银花中绿原酸的研究进展[J].工艺探讨， 2008(8)：60-63 [4] 包卫华.不同产地加工的金银花中绿原酸含量的研究比较 [J]. 时珍国医国药,2008,18(7): 1075-1076 [5] 杨敏丽. 不同品种的金银花及金银花的不同部位中绿原酸 含量的比较研究[J].分析测试学报,2006,25(11):122-124
不同加工方法对山银花中绿原酸含量测定的影响
【 ｅ ｒｓ Ｆｏ ｏ ｉｅａ ； ｈｏｏ ｅ ｉ ａ ｉ； Ｐ Ｈ Ｌ Ｋ ｙ Ｗｏｄ ］ ｌ Ｌ ｎｃ ｒ Ｃ ｌ ｇ ｎｃ ｃ Ｒ — Ｐ Ｃ ｓ ｅ ｒ ｄ
山 银 花 是 忍 冬 科 植 物 灰 毡 毛 忍 冬 Ｌ ｎｃｒｍａｒｎ ｏｉ ａ ｅａ ｅ ｔ ｉｅＨ ｎ ｚ、 ｈ ｄｓ ａ ｄＭａｚ 红腺 忍冬 Ｌ ｎｃｒ ｙ ｏｌ ｃ ｑ或华 南 ｏ ｏｉｅａｈｐ ｇ ｕ ａＭｉ． ａ
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况 分 别 采 用之 。
［ 键 词 】 金 银 花 ； 原 酸 ； 工 方 法 ； Ｐ ＨＰ Ｃ 关 绿 加 Ｒ — Ｌ
［ 中图分类号１９７ Ｒ ２． ２
［ 文献标识码１ Ａ
［ 文章编号］ ７—５Ｘ ２０ ）１０５０ １ ２９ １ （０８ １－７— ２ ６
Ｅｆｅ ｔ ｏ ｏ ｔ ｎｔ ｏ ｌ ｒ ｇ ｎｉ ｉ ｎ Ｆｌ ｓ Ｌｏ ｉ ｅ ａ ｂ ｆｅ ｅ ｙ ｎｇ Ｗ ａ ｓ ｆ ｃ ｎ ｃ ｎ ｅ ｆ Ｃｈ ｏ ｏ ｅ ｃ Ａｃ ｄ ｉ ｏ ｎ ｃ ｒ ｅ ｙ Ｄｉ ｒ ｎｔ Ｄｒ ｉ ｙ Ｚ Ａ Ｇ Ｈｕ－ａｆ Ｕ ｕ－ ａ１ Ｈ Ｎ Ｚ ｎ－ｉ ｆ Ｈ Ｎ ｉ ｎ ，Ｌ Ｏ Ｇ ｏ ｈ ｉ ｆ ，Ｃ Ｅ ｏｇ ｌｎ ａ
高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量
高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量【摘要】目的建立金银花提取物中绿原酸含量的HPLC测定方法。
方法国产C18柱（4.6 mm×250 mm，7 μm）;流动相为乙腈：0.4%磷酸（12∶88）；检测波长为327 nm；流速1 ml・min-1；进样量10 μl；柱温25℃。
结果绿原酸在0.071 6～0.644 4 μg范围内线性关系良好，r=0.999 6；平均回收率99.99%，RSD=1.61%（n=6）。
结论该方法简便、快速、准确，可用于金银花提取物的含量测定及质量控制。
【关键词】金银花提取物；绿原酸；高效液相色谱法AbstractObjectiveTo establish a method for the determination of Chlorogenic acid in the extract of Flos Lonicerae.MethodsThe chromatographic conditions were as follows: C18 chromatographic column (4.6 mm×250 mm，7 μm)，a mobile phase of acetonitrile and 0.4%H3PO4(12:88)，the detection wavelength at 327 nm and the flow rate being 1 ml・min-1. ResultsA linearity of Chlorogenic acid in the extract was obtained in the range of 0.071 6～0.644 4 μg r=0.999 6(n=6).The average recovery was 99.99% and RSD=1.61%(n=6). ConclusionThis method is easy，sensitive and accurate for the determination of Chlorogenic acid in the extract of Flos Lonicerae.Key wordsChlorogenic acid; HPLC; Determination金银花Flos Lonicerae又名忍冬、双花，为临床常用中药，具有清热解毒、凉散风热之功效，主治痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等［1］。
高效液相色谱蒸发光散射检测法测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量
高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量【摘要】目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法测定金银花中绿原酸及木犀草苷的方法。
方法采用Chromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5.0μm)为色谱柱，用乙腈(A)-0.5%冰醋酸(B) 为流动相梯度洗脱，以蒸发光散射检测器检测绿原酸和木犀草苷。
梯度程序为：0 min(A：10%，B：90%)→16 min(A：25%，B：75%)→22 min(A：50%，B：50%)；流速1.0 ml・min-1；检测器漂移管温度110℃ ，载气流速3.0 ml・min-1。
结果绿原酸及木犀草苷的回归方程分别为：lgA=1.34lgm + 4.360，r=0.999 5；lgA =1.653lgm + 5.327，r=0.999 6。
线性范围分别为5.0～45 μg和0.4～3.6 μg；平均回收率分别为99.94%(RSD=1.43%，n=5)和100.85%(RSD=1.78%，n=5)。
结论该方法操作简便、结果准确，专属性强，分离效果和重现性好，可有效缩短总分析时间。
为较全面控制金银花药材的质量控制提供了简便可靠的方法。
【关键词】金银花绿原酸木犀草苷高效液相色谱-蒸发光散射检测器含量测定Abstract:ObjectiveTo develop a method for determination of chlorogenic acid(ChA) and galuteolin(Gal) in Flos LoniceraeJaponicae.MethodsAn HPLC equipped with ELSD method was applied to quantify chlorogenic acid and galuteolin．The analytical column was Chromasil C18(4.6 mm×250 mm，5.0μm)with the temperature of 30℃. The chromatogram for the ChA and Gal was developed on a gradient phase. Two solution were acetonitrile(A) and 0.5 % acetic acid solution and the gradient mode was as follows：0 min(A：10%，B：90%)→16min(A:25%，B:75%)→22 min(A：50%，B：50%). The flow rate was 1.0 ml・min-1．The temperature of drift tube was set at 110℃ and the flow rate of gas maintained at 3.0 ml・min-1．ResultsThe calibration curves of ChA and Gal were linear in the range of 5.0～45 μg and 0.4～3.6 μg，and the average recoveries were 99.94%(RSD was1.43%) and 100.85%(RSD was 1.78%) respectively．ConclusionThe method is accurate，specific，and can shorten the total analytical time of Flos Lonicerae Japonicae．Key words:Flos Lonicerae Japonicae； Chlorogenic acid；Galuteolin； HPLC-ELSD； Determination金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.，红腺忍冬L. hypoglauca Miq.，山银花L. confusa DC.，或毛花柱忍冬L. dasystyla Rehd.的干燥花蕾或带初开的花［1］。
金银花提取物中绿原酸含量测定方法(H)
编号:FZD0166 金银花提取物中绿原酸（Chlorogenic acid）含量测定方法
一、色谱条件
色谱柱：Inertsil ODS-3 150mm×4.6mm 5μm
流动相：乙腈：水：0.4%磷酸水溶液（13：87，V/V）
流速：1mL/min
检测波长：327nm
柱温：25℃
进样量：10μL
二、溶液制备
1. 对照品溶液制备精密称取绿原酸对照品约5mg于50mL容量瓶中，加入50%甲醇溶解定容。
2. 样品溶液制备精密称取金银花提取物样品适量，于50mL容量瓶中，加入50%甲醇超声振荡20min后，冷却至室温定容，用0.45μm微孔滤膜过滤即得。
三、样品测定
在上述色谱条件下，待仪器稳定基线平稳后进样测定，绿原酸保留时间约为12min，用外标法计算含量。
金银花中绿原酸含量测定
金银花中绿原酸含量测定摘要】目的：通过测定金银花中主要特征成分绿原酸含量评价金银花品质。
方法：高效液相色谱法。
采用C185柱（250mm×4.6mm），流动相为乙腈-1.0%冰醋酸溶液，0.45μm滤膜抽滤，流速为1.0ml/min，检测波长为242nm。
结果：绿原酸进样量在0.2～1.0μg范围内与峰面积线性关系良好，精密度RSD为1.13%，平均回收率为101.2%。
结论：高效液相色谱法测定金银花中绿原酸含量操作简便，结果准确，可用于对金银花品质的评价。
【关键词】高效液相色谱法；金银花；绿原酸；含量；测定【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）06-0374-02金银花具有清热解毒之功效，绿原酸是其中的主要特征成分，而且也是目前所发现的金银花中药理活性最强的物质。
绿原酸是植物进行有氧呼吸过程中产生的苯丙素类化合物，经现代药理研究证实，这种化合物不仅能够抗病毒，而且可以止血、利肝利胆、抗氧化。
因此，绿原酸含量是金银花品质评定的重要依据。
通过提取绿原酸，并测定绿原酸含量，将为金银花药物开发与利用提供支持。
本文将探讨采用高效液相色谱法测定金银花中的绿原酸含量。
1．材料与方法1.1 材料与仪器材料：将采摘的金银花放置阴凉处，直至质量稳定。
使用粉碎机将金银花粉碎，过40目筛，以备试验使用。
试剂：绿原酸对照品（批号110753-200413）由中国药品生物制品检定所提供；水为纯化水；乙腈、甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
仪器：采用美国安捷伦公司生产的全自动液相色谱仪系统Aligent1100（四元梯度洗脱泵、二极管检测器、温柱箱等）；昆山市超声波仪器有限公司生产的超声波清洗器；梅特勒-托利多仪器上海有限公司生产的电子分析天平。
1.2 试验方法1.2.1试样制备将金银花粉末精确称取1.0g，放置在100ml量瓶中，加入50%甲醇10ml，放入超声清洗器中震荡，进行减压过滤，然后将滤液放置在25ml量瓶中定容。