CTAB法提DNA
提取植物DNA方法
提取植物DNA方法植物DNA的提取方法是将植物细胞中的DNA分离出来，以便进行进一步的研究。
以下是常用的植物DNA提取方法：1. CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种表面活性剂，可以溶解脂质，破坏细胞膜，从而释放DNA。
首先，将植物样品粉碎，加入CTAB缓冲液中并进行润湿，然后加入蛋白酶，破坏细胞膜。
接下来，加入CTAB-蛋白酶混合液，室温静置，使DNA与CTAB结合。
之后，将混合液经过苯酚-氯仿提取，将DNA从其他组分中分离出来。
最后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。
2. 硅胶柱法：硅胶柱法适用于小规模提取和纯化植物DNA。
首先，将植物样品粉碎，加入提取缓冲液中，并加入蛋白酶进行细胞壁降解。
接下来，将溶有脂质的提取液加载到硅胶柱上，使用重力流动分离DNA。
然后，使用洗涤缓冲液去除残余的污染物。
最后，使用低盐缓冲液将DNA从硅胶柱上洗脱，并收集纯化的DNA。
3. 高盐法：高盐法适用于粗提植物DNA。
首先，将植物样品细碎，加入高盐缓冲液中，其中含有高浓度的盐和蛋白酶。
高盐浓度可以破坏细胞膜，并使DNA 从蛋白质中解离出来。
然后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。
4. 快速提取法：快速提取法是一种高效和便捷的方式，适用于大规模提取植物DNA。
首先，将植物样品经过快速研磨处理，将DNA释放到提取缓冲液中。
然后，使用聚乙二醇或盐酸沉淀方法使DNA沉淀，然后洗涤并溶解。
这些方法在植物科学研究中被广泛使用。
在选择提取方法时，需要考虑样品量、样品类型、实验目的和所需纯度等因素。
植物DNA的提取方法的选择也可以根据实验室设备和研究经验进行调整，以获得满意的结果。
需要注意的是，植物样品在提取DNA之前需要进行适当的贮存和处理。
样品应在低温下保存，以保持DNA的完整性。
此外，处理样品时要避免污染和酶解，以确保提取的DNA质量。
CTAB法提取DNA
1、液氮研磨1 g左右的幼芽成粉末状, 取0.4g左右置于2mL离心管中, 加入1mL提取缓冲液(0.4mol /L葡萄糖、3%可溶性PVP、10mmol /L β-巯基乙醇), 悬浮并混匀后4℃下10000 g离心10min (Eppendorf 5180R)；2、弃去上清液后重新加入1mL提取缓冲液悬浮沉淀, 以同样条件离心10min, 弃去上清液；3、加入0.7 mL经65℃预热的裂解缓冲液(100mmol /L Tris HC l, pH 8.0, 20 mmol/L EDTA, 1.4 mol/L NaC l, 1.5% SDS), 65℃温浴40 min, 不时轻轻摇动。
从水浴中取出, 冷却后加入0.8 mL氯仿抽提溶液(氯仿∶异戊醇∶乙醇=80∶4∶16), 轻轻颠倒混匀, 室温下静置10m in, 4℃下10000 g离心10min；4、小心地将上清液移入新的2mL离心管中,加入等体积的异丙醇, 混匀, 室温放置30min, 此时出现絮状DNA。
小心吸出(或离心) 絮团状DNA, 用70%的乙醇溶液洗涤两遍, 晾干后加入1mL TE (10mmol/L Tris HC l, 1mmol/L EDTA, pH8.0) 溶液, 溶解DNA；5、再用氯仿(氯仿∶异戊醇=24∶1) 抽提2遍, 离心条件同上。
小心吸取上清液约0.6mL, 加入0.06mL的5mol /L的醋酸胺溶液, 混匀后加入1.3mL的冰冷的无水乙醇, 颠倒混匀后置于- 20℃冰箱1 h。
取出后在4℃下10 000 g离心10m in, 获得DNA 沉淀物, 用70%的乙醇洗沉淀2次；6、超净工作台上吹干后, 用0.5mL TE溶液溶解。
用1.0%的琼脂糖凝胶检测DNA的完整性, 用核酸蛋白测定仪(Eppendorf BioPhotometer) 检测DNA的浓度。
提取植物DNA方法
提取植物DNA方法提取植物DNA的方法有许多种，下面将介绍其中几种常用的方法。
1. CTAB法CTAB法（Cetyltrimethylammonium Bromide法）是一种经典的植物DNA 提取方法，适用于多种植物样本。
其基本步骤如下：（1）取植物样本，如叶片、茎等，将其研磨成细碎的粉末。
（2）将粉末加入含有CTAB（一种能溶解细胞膜的表面活性剂）的提取缓冲液中，加入蛋白酶K（能降解蛋白质）和β-巯基乙醇（能还原核酸）。
（3）在65下进行细胞破裂和DNA溶解。
（4）通过氯仿/异戊醇提取和乙醇沉淀的方法，将DNA从混合物中分离出来。
（5）最后用纯净水洗涤DNA，使其得以纯化。
2. 高盐法高盐法属于常规的DNA提取方法，适用于大部分的植物样本。
基本步骤如下：（1）取捣碎的植物材料加入含有高盐浓度的提取缓冲液中，并加入蛋白酶K和β-巯基乙醇。
（2）在室温下进行混合，并在高温下（如65）进行DNA的溶解。
（3）通过氯仿/异戊醇提取和乙醇沉淀的方法，将DNA分离和纯化出来。
（4）最后用纯净水洗涤DNA，使其得以纯化。
3. 磁珠法磁珠法是一种相对快速、高效的DNA提取方法，基于磁珠与DNA之间的亲和力。
该方法需要使用一些商业化的提取试剂盒，操作过程相对简单，适用于大规模样本的提取。
基本步骤如下：（1）将植物样本加入含有提取缓冲液和蛋白酶K的试管中，同时加入磁珠试剂。
（2）在高温下进行DNA的溶解和蛋白质的降解。
（3）将混合物与磁珠结合，并使用磁力架将DNA磁珠复合物分离出来。
（4）对磁珠复合物进行洗涤和溶解，获得纯化的DNA。
4. 二硫苏糖盐法二硫苏糖盐法是一种用于植物材料中DNA提取的改良方法，适用于纤维素含量较高的植物样本。
基本步骤如下：（1）将植物材料加入二硫苏糖盐提取缓冲液中，加入蛋白酶和β-巯基乙醇。
（2）对细胞质进行破裂和溶解，使DNA释放到溶液中。
（3）通过异丙醇的加入，将DNA从混合物中分离和沉淀。
ctab法提取dna的原理
ctab法提取dna的原理
CTAB法（Cetyltrimethylammonium Bromide）是一种常用于
提取DNA的方法，原理是利用CTAB结合DNA形成稳定的DNA-CTAB复合物。
与DNA相结合的CTAB可以将其他细
胞组分如蛋白质和RNA等溶解。
下面将介绍CTAB法的操作
步骤：
1. 准备样品：将待提取DNA的生物材料如植物叶片或动物组
织切碎，并放入离心管中。
2. 加入CTAB溶液：向离心管中加入含有CTAB的提取缓冲液，CTAB会结合DNA并分离细胞组分。
3. 细胞破碎：将离心管置于60-65°C的水浴中，短暂加热使细
胞完全破碎。
4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，轻轻摇匀并离心。
这一步可以将DNA从细胞残渣和其他溶解物中提取出来。
5. DNA沉淀：将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的
异丙醇，再次轻轻摇匀。
在冰上静置几分钟后离心，可使
DNA沉淀到离心管底部。
6. 溶解DNA：倒掉上清液，加入70%乙醇洗涤DNA沉淀，
离心去除乙醇。
再次离心后，将残留的乙醇洗涤液倒掉，将离心管倒置在纸巾上，将DNA自然风干。
通过以上步骤，利用CTAB法可以提取到高质量的DNA样品。
此方法的优势在于CTAB的高度阳离子性可以有效溶解其他
细胞组分，而不影响DNA的稳定性。
同时，CTAB法适用于
不同种类的生物材料，如植物，微生物和动物组织等。
ctab法提取dna流程
ctab法提取dna流程
CTAB法是一种有效的提取植物组织DNA的方法，它基于离子型表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)的使用。
此方法在提取高品质、高纯度DNA方面非常有效，并且适用于多种植物组织类型。
以下是CTAB法提取DNA的步骤：
1. 收集样品并切碎：将植物材料收集并切碎成小片或粉末。
最好在样品收集后立即进行，以确保样品的DNA质量。
2. 前处理：将样品加入含有CTAB溶液的离心管中，然后添加蛋白酶K、DTT和PEG。
该混合物将帮助去除植物样品中的蛋白质和碳水化合物。
3. 离心：将离心管放入离心机中，在高速离心下离心5-10分钟，以分离出DNA和其他细胞残留物。
4. 加入异丙醇：将异丙醇加入混合物中，沉淀DNA。
5. 洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，去除杂质。
6. 溶解：将DNA沉淀用TE缓冲液溶解，保存在冰箱中。
以上是CTAB法提取DNA的基本步骤。
使用这种方法提取的DNA 可以用于PCR扩增、测序和其他分子生物学实验。
需要注意的是，使用CTAB法提取DNA时，最好在实验室的无尘环境中操作，并使用无菌器材和试剂。
此外，为了确保DNA的质量和完整性，最好避免反复冻融DNA样品。
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ctab法提取dna流程
CTAB法提取DNA流程引言DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的基础实验之一，它可以用于从各种生物样品中纯化DNA，并用于进一步的分析和研究。
CTAB法是一种常用的DNA提取方法之一，其在提取DNA时使用了CTAB作为离子相互作用剂，能够有效地纯化DNA。
本文将详细介绍CTAB法提取DNA的流程。
实验材料与设备•样本：细菌、植物或动物组织样本•CTAB提取缓冲液：含有CTAB、EDTA和TRIS的缓冲液•醇类溶液：包括乙醇和异丙醇•氯仿•甲醇•高盐溶液：含有NaCl和CTAB的溶液•TE缓冲液：含有TRIS和EDTA的缓冲液•离心管•离心机•热平台实验步骤1. 样本处理1.将样本收集或制备成细胞输液。
2.使用离心机将细胞输液离心，分离得到细胞沉淀。
2. 细胞裂解1.向细胞沉淀中加入适量的CTAB提取缓冲液，并充分混匀。
2.放置于热平台上，在适当的温度下，通常为60°C-65°C，孵育一段时间，使细胞充分裂解。
3. 蛋白质沉淀1.将蛋白质沉淀剂（氯仿）加入到裂解液中，充分混匀。
2.离心管盖住盖子，以高转速离心，使裂解液分为上清液和沉淀两部分。
4. DNA沉淀1.将上清液转移到新的离心管中。
2.加入等体积的醇类溶液，充分混匀。
3.放置于冰箱中，使DNA在醇类溶液中沉淀。
5. DNA洗涤1.使用离心机将DNA沉淀离心，将上清液倒出，注意不要破坏DNA沉淀。
2.加入预冷的85%乙醇，使DNA沉淀溶解。
3.放置于冰箱中，使DNA在乙醇中沉淀。
4.重复以上步骤，直至DNA沉淀洗涤干净。
6. DNA溶解1.使用离心机将DNA沉淀离心，将上清液倒出。
2.加入适量的TE缓冲液，使DNA沉淀溶解。
结果与讨论通过CTAB法提取DNA的流程，我们可以成功地从细菌、植物或动物组织样本中获得高质量的DNA。
这种方法利用CTAB作为离子相互作用剂，能够有效地去除细胞的蛋白质和其他杂质，从而纯化DNA。
在DNA溶解的步骤中，使用TE缓冲液可以保护DNA的稳定性并提高其质量。
DNA提取(CTAB法)
CTAB法提取细菌总DNA
先用试剂盒提取DNA，未成功则采用此方法。
（1）将供试细菌纯培养后接入LB液体培养基，28℃震荡培养24h，取振荡培养LB液体细菌培养物，10000r/min离心10min，收集菌体装入1.5ml的离心管中。
（2）每30mg菌体加1mL菌体裂解液悬浮沉淀，加溶菌酶（50mg/mL）5μL，混匀，37℃保温20min。
（3）加RNase(10mg/mL)5μL，37℃保温30min。
（一般PCR这步可省略）
（4）加蛋白酶K（20mg/mL）20μL，混匀，65℃保温1h。
（5）用等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提，12000r/min 离心10min，取上清于另一离心管，重复抽提一次。
（6）用等体积氯仿：异戊醇（24：1）抽提一次，12000r/min 离心10min，取上清于另一离心管。
（7）加0.1V醋酸纳溶液（pH 5.2）和2V无水乙醇，混匀，-20℃沉淀1-2h。
（8）4℃ 12000r/min 离心10min，收集沉淀，70% 乙醇洗涤沉淀2次，干燥后溶解于适量的TE中，-20℃保存备用。
CTAB法提DNA
一、CTAB法提取DNA主要试剂及配方：CTAB缓冲液（2%）：试剂用量(g/L)CTAB 20NaCl 81.816Tris-base 7．444EDTA-Na212.114β巯基乙醇2~3mLpH 8.0称量好后65℃水浴，搅拌，直至完全溶解，然后定容，调pH24:1溶液：24:1为体积比，如果是一瓶新的三氯甲烷（500mL），可直接加入21mL异戊醇即可。
70%乙醇：二、CTAB法提取DNA的简要步骤步骤备注1将新鲜叶片叶脉去掉，剪碎置于研钵中，加入液氮快速研磨成粉末状，转入2mL离心管，加入65℃预热的CTAB提取液900 uL充分混匀，65℃保温40 -60min，在此期间轻轻颠倒离心管几次。
加入CTAB后，需及时充分混匀，然后水浴。
开始混匀可以使劲，后面的混匀要轻，保证DNA的完整性。
此步骤是裂解细胞，释放细胞产物2水浴完后，冷却至室温，加入等体积的氯仿/异戊醇(24：1)混合液轻轻摇动10 min。
12000 r/min离心10 min；第一次抽提24:1尽量加满2mL的离心管，摇和离心的时候尽量轻拿轻放。
此步骤是用氯仿抽提有机相，异戊醇的作用是去除气泡。
3取上清液，再用等体积的氯仿/异戊醇抽提一次，12000 r/min离心10 min；离心后，DNA溶于上层水相，变性蛋白溶于下层氯仿，第二次24:1抽提加1mL即可。
4小心吸出上清液于另一2mL离心管中，加入0.6倍上清液体积的异丙醇，缓慢混匀，于-20℃冰箱中沉淀DNA；第二次吸上清尽量不要吸到中间层，按需要浓度大小，可选择性吸取。
异丙醇用前需预冷。
5挑出成团的DNA，用70％乙醇洗2～3次；挑出的DNA还是含有一定的杂质，因此，第一次70%乙醇洗时间建议长些，一般不低于10分钟，期间上下摇晃几次，但不可太长，否则DNA要断裂6无水乙醇洗1次；7倒干残余乙醇，自然干燥也可以进行真空干燥8加无菌水溶解DNA9 RNA去除，按100微升DNA溶液加1微升RNARNA酶可以加到水中，溶解DNA 酶10溶解后放置几小时后（尽量过夜）便可电泳检测，浓度测定三、提取过程中可能出现的一些情况（主要是提玉米DNA）四、10×TBE配方Tris-base 108g/L硼酸55 g/LEDTA-Na27.444 g/LpH 8.0。
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CTAB法提取基因组DNA
（1）水浴加热CTAB提取液至60-65℃；
（2）取叶片200 mg，液氮研磨成粉末；
（3）用预冷的小药匙将粉末迅速转入预冷的1.5 mL 离心管中加入650 µL CTAB提取液并且迅速混匀；
（4）60°C-65℃水浴30 min至1 h，期间每隔5-10 min轻摇一次；
（5）加入等体积氯仿/异戊醇（24:1），颠倒混合；
（6）12,000 rpm离心10 min，将上清液转移到新管中，注意不要触动中间的蛋白质层；
（7）向上清中加入0.6倍至等体积异丙醇（提前预冷），颠倒混匀，-20℃冰箱中静止15min使DNA从溶液中析出，形成絮状沉淀；
（8）12,000 rpm离心10 min收集DNA沉淀，弃上清，75%酒精洗涤（两次），晾干，加入适量超纯水溶解，置于-20℃保存；
溶解后的DNA取部分稀释至100 ng/µL备用。
植物总DNA提取缓冲液（CTAB提取缓冲液）：Tris·Cl pH 8.0 100 mM，EDTA
20 mM，NaCl 1.4 M，CTAB 2%（w），巯基乙醇0.2%（先将除巯基乙醇之外的药品配好，高压蒸汽灭菌之后加入巯基乙醇）。