细胞- HEK293-说明书
HEK293细胞培养（生物学）
293细胞培养293细胞是用5型腺病毒75株系转化，含有Ad5 E1区的人胚肾亚三倍体细胞系，是一种E1区缺陷互补细胞系。
它是加拿大McMaster University的F.L.Graham与ey于1976年用DNA转染技术构建而成。
293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。
哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。
这三种方式均可用于293细胞的大规模培养。
293细胞在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长，也可生长在血清浓度降低的培养基中。
单层培养细胞在5-10％FBS-DMEM中能生长很好。
一般来讲，1:10传代后，一周可以长满。
严禁过度生长，这点很重要。
因为会导致细胞密度加大和堆积，影响病毒斑的形成和转染，传代时也不易打散。
悬浮的293细胞很容易大规模培养，但不容易长期保持稳定。
293细胞在传代120次以后，其表型可能改变，生长状况不再完全是单层的了，偶尔会形成局部的细胞成团聚集，应立即抛弃，重新引入新传代的细胞。
293细胞培养特性：1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。
一般用高糖的DMEM培养基。
2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s,镜下观察细胞变圆,就可加DMEM终止消化，反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。
12小时-24小时90%以上细胞贴壁。
293细胞传代时机为达80-90%汇合，传代比例为1：3。
3、293细胞在低代时容易贴壁，生长良好，在传到几十代以后，易聚集成团，且贴壁不牢，用PBS冲洗时即可能脱落，即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液，最好购入时先大量冻存。
HEK-293T细胞转染操作步骤
经优化的转染结 果。转染质粒： pGIPZ- eGFP
将 X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent，DNA 和稀释培养基（如 Opti-MEM® I Reduced Serum Medium 或无血清培养基）孵育到室温 （+15 至+25℃）。使用前将转染试剂轻柔混匀。
使用 X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent 转染 HEK-293T 细胞系 慢病毒生产的优化实验步骤
在转染实验前 18~24 小时，将 HEK-293T 细胞按照 5.0× 105 细胞/孔的 密度接种到 6 孔板中，每孔中含有 2ml 完全生长培养基（60~80%的细 胞汇集度）。细胞培养过夜。
在无菌管中加入 180 μl 稀释培养基。 加入 2 μg 质粒 DNA（按摩尔化学计量混合 1:2:2 比例的表达载体， 包装质粒和包膜质粒，体积共计 20μl)，轻柔混匀。
Hale Waihona Puke 在上述 DNA 稀释液中加入 6μl X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent（转染试剂：DNA=3：1），轻柔混匀。 +15 至+25℃下孵育 15~30 min，形成转染复合物。
在细胞培养板中以逐滴加入的方式，在每孔中加入 200 μl 转染复合 物。轻柔晃动 6 孔板，将转染复合物和细胞培养物混匀。 细胞继续培养 24-72h 后，进行病毒滴度检测。
HEK-293T ACE2 细胞稳转株使用说明书
派真生物HEK-293T/ACE2 细胞稳转株使用说明书HEK-293T/ACE2 细胞稳转株HEK-293T/ACE2 细胞稳转株ACE2即血管紧张素转化酶II（Angiotensin-converting enzyme2）是一种Ⅰ型膜蛋白,其包括一个N端肽酶结构域( peptidasedomain,PD)和一个C端 Collectrin样结构域（Collectrin-ikedomain,CLD）。
ACE2的PD为冠状病毒的S蛋白提供了直接结合位点。
冠状病毒因其病毒脂质层外由棘突蛋白） spike protein,S蛋白）构成的冠状突起而得名。
冠状病毒通过S蛋白与靶细胞表面特定受体结合,然后进入细胞复制并引起宿主感染。
冠状病毒的S蛋白包含S1及S2两个亚单位,其中S1包含受体结合域（RBD）,RBD直接与血管紧张素转换酶2（ACE2）结合,S2负责与宿主细胞膜融合。
当S1与宿主受体ACE2结合时,S2上的裂解位点暴露并被宿主蛋白酶切断,此过程对于病毒感染十分重要。
本细胞系是将ACE2过表达慢病毒感染293T细胞并筛选得到的稳定株。
HEK-293T/ACE2 细胞稳转株产品描述产品名称：中文名称：包装规格：特性蛋白：HEK-293T/ACE2过表达人源 ACE2 的人肾上皮细胞2管（细胞数1E+7个/管）过表达人的血管紧张素转化酶 2 蛋白（ACE2）建议第一次 1:2 传代。
2 天换液10%DMSO +90%完全培养基Puro 嘌呤抗性传代方法: 传代情况：冻存条件：备 注：检测报告：提供感染滴度数据、293T /hACE2感染图片或荧光素酶表达量结果派真生物复苏细胞：将含有2mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基混合均匀。
在 1000rpm 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。
然后将所有细胞悬液加入 10cm 皿中培养过夜，培养过夜。
hek293t细胞基因序列
hek293t细胞基因序列摘要：1.介绍hek293t 细胞2.阐述hek293t 细胞的基因序列3.讨论hek293t 细胞基因序列的重要性正文：一、介绍hek293t 细胞hek293t 细胞是一种人类胚胎肾细胞系，它具有无限制传代的能力，并且易于培养和操作。
由于其独特的特性，hek293t 细胞被广泛应用于生物学和医学研究领域，如基因表达研究、药物筛选和病毒学研究等。
二、阐述hek293t 细胞的基因序列hek293t 细胞的基因序列是指其细胞核中所包含的基因的排列顺序。
这个基因序列决定了hek293t 细胞的生物学特性，如细胞的生长速度、细胞周期和细胞凋亡等。
目前，科学家已经对hek293t 细胞的基因序列进行了深入研究，并发现了许多与细胞生长和功能相关的关键基因。
三、讨论hek293t 细胞基因序列的重要性hek293t 细胞基因序列的重要性体现在以下几个方面：首先，了解hek293t 细胞的基因序列有助于我们深入理解细胞的生物学特性。
通过研究基因序列中的关键基因，我们可以揭示细胞生长和功能的分子机制，从而为细胞生物学研究提供理论基础。
其次，hek293t 细胞基因序列的研究可以为药物筛选提供重要线索。
通过筛选基因序列中的特定基因，我们可以找到潜在的药物靶点，从而提高药物筛选的效率和准确性。
最后，研究hek293t 细胞基因序列有助于优化细胞培养条件。
通过分析基因序列中与细胞生长和凋亡相关的基因，我们可以找到影响细胞生长的关键因素，进而调整培养条件，提高细胞培养的成功率和效率。
综上所述，hek293t 细胞基因序列对于理解细胞生物学、药物筛选和优化细胞培养条件具有重要意义。
HEK293 载体
HEK293 载体1. 简介HEK293 是一种常用的哺乳动物细胞系，广泛应用于生物医学研究和生物制药领域。
该细胞系最初于1973年由 Alex van der Eb 和 Frank Graham 在荷兰莱顿大学首次建立，现在已经成为最常用的工具细胞系之一。
HEK293 细胞具有许多有益特点，例如易于培养、细胞增殖能力强、耐受大部分常用培养条件和试剂等。
此外，该细胞系还可以通过转染外源载体来表达特定的基因或蛋白质，因此被广泛用作功能研究、蛋白质表达和大规模药物筛选等实验研究中的载体。
2. HEK293 载体的构建2.1 载体选择在使用 HEK293 细胞进行基因表达和蛋白质功能研究时，需要选择合适的载体。
常见的载体选择包括质粒、病毒载体和转座子载体等。
2.1.1 质粒载体质粒是一种圆形、双链DNA分子，在分子生物学研究中广泛应用于基因克隆、表达和转染等实验中。
质粒载体通常由多个区域组成，包括起始子区域、多克隆位点、选择标记位点和终止子区域等。
2.1.2 病毒载体病毒载体是一种利用病毒的复制和传递机制来实现目的基因表达的工具。
常见的病毒载体包括腺病毒（Adenovirus）、腺相关病毒（Adeno-associated virus, AAV）和冠状病毒（Coronavirus）等。
2.1.3 转座子载体转座子是一种具有转座活性的DNA片段，可以在基因组中的不同位点之间移动。
转座子载体可以将目的基因插入到宿主基因组的特定位点，实现基因敲入或敲除等操作。
2.2 载体构建流程线性化质粒载体用于接受目的基因，并与目的基因片段进行连接。
常见的连接方法包括内切酶质粒连接法和PCR克隆法。
接下来，已经成功连接的质粒载体与 HEK293 细胞进行转染，以使目的基因在细胞中表达。
3. HEK293 载体的应用3.1 基因表达HEK293 细胞可用作基因表达的载体。
可以将目的基因或蛋白质的编码序列克隆到质粒载体中，并通过转染来将载体导入 HEK293 细胞中。
herk293指标
herk293指标
Hek293是一种常用的细胞系，被广泛应用于生物医学和药物研究中，用于生产外源性蛋白质、疫苗、抗癌试剂及重组腺病毒包被等。
Hek293细胞具有较高的生长效率，直径通常在11-15μm左右，属于亚3倍体人细胞系，携带64条染色体。
Hek293细胞既可以贴壁培养也可以悬浮培养，但多数
情况下，这类细胞采用贴壁的方式进行单层培养。
正常情况下，应在大约
2-3天内更换。
Hek293细胞需要设置在37°C的加湿培养箱才能生长。
此外，Hek293细胞具有以下特点：
1. 转染效率高，可悬浮培养用于大规模表达。
2. 表达蛋白结构最接近其在人体内构象。
3. Hek293细胞在培养体系中能够快速增长，高密度培养。
4. Hek293细胞与神经元细胞一样，对外界微环境较为敏感，利用这一特点，可用于药物发现及细胞毒性测试。
以上信息仅供参考，如果需要了解更多信息，建议查阅相关文献或咨询专业人士。
吐温裂解hek293的条件
吐温裂解hek293的条件吐温裂解是一种常用的细胞裂解方法，主要用于真核细胞如HEK293的裂解。
这种方法的主要优点是可以有效地释放细胞内的蛋白质和核酸，同时保持其活性。
以下是吐温裂解HEK293的条件：1. 细胞培养：首先，需要将HEK293细胞在适当的培养基中培养到适当的密度。
通常，我们会选择DMEM或Opti-MEM作为培养基，因为这些培养基中含有必要的营养物质，可以支持细胞的生长和分裂。
2. 细胞收集：当细胞达到适当的密度后，可以使用胰蛋白酶或其他细胞消化酶进行消化，使细胞从培养皿上脱落。
然后，可以通过离心将细胞收集到一起。
3. 细胞裂解：将收集到的细胞重悬在含有吐温20的裂解缓冲液中。
吐温20是一种非离子表面活性剂，可以破坏细胞膜，使细胞内的蛋白质和核酸释放出来。
裂解缓冲液通常还包含其他成分，如磷酸盐、硫酸镁等，这些成分可以帮助维持细胞内环境的稳定，防止蛋白质的降解。
4. 裂解条件：吐温裂解的条件通常包括温度、时间和pH值。
温度通常选择在4℃或室温，时间通常选择在15分钟到1小时之间，pH值通常选择在7.4到8.0之间。
这些条件的选择可以根据具体的实验需求进行调整。
5. 裂解后的处理：裂解后的细胞可以进行进一步的处理，如离心、过滤等，以去除不需要的细胞碎片和其他杂质。
然后，可以将裂解液中的蛋白质和核酸进行分离和纯化。
6. 注意事项：在进行吐温裂解时，需要注意以下几点：首先，需要确保所有的操作都在无菌条件下进行，以防止细菌或其他微生物的污染；其次，需要避免过度裂解，否则可能会导致蛋白质和核酸的降解；最后，需要根据具体的实验需求选择合适的裂解条件。
总的来说，吐温裂解是一种有效的细胞裂解方法，可以用于HEK293等真核细胞的裂解。
通过合理的选择和调整裂解条件，可以获得高质量的蛋白质和核酸样品，为后续的实验提供可靠的材料。
珠海恺瑞293细胞蛋白表达系统(3.3版)
客服电话： KOP293瞬时转染蛋白表达系统使用指南（3.3版）1.产品概述本系统适合于HEK-293细胞及其它293细胞的高密度悬浮培养、DNA瞬时转染及蛋白表达。
为确保使用效果，建议用户在使用本系统前详细阅读此使用指南。
此系统所包含的试剂可在本指南末页附录中查找，用户可根据需要自行搭配使用。
2.实验步骤本实验方法根据HEK-293细胞的三角烧瓶悬浮培养经验总结而成，但此蛋白表达系统同时适用于其它悬浮培养方式的293细胞的DNA转染及蛋白表达。
2.1转染前细胞培养1、将HEK-293细胞置于5%的CO2恒温摇床中（使用其它浓度的CO2可能会严重影响细胞培养效果），37℃、120rpm恒温震荡培养（具体转速可根据用户培养箱摇床种类及实际培养情况自行调节）。
传代时，需先做细胞计数和观察细胞活率，尽量选择密度在3-6×106个/毫升的高活率细胞进行传代培养。
过高培养密度的细胞在传代培养后有可能会出现生长速度缓慢、培养密度降低等生长状态的变化，并直接影响重组蛋白表达等后续应用效果。
2、传代培养时建议传代后的细胞密度为0.3×106个/毫升，一般每4天需传代1次（或传代密度为0.6×106个/毫升，每隔3天传代1次）。
本培养液可支撑的最高细胞密度约为1.3×107个/毫升，细胞在达到此密度时存活率一般仍可保持在95%以上。
3、若在培养过程中出现死细胞数过多的状况，应把细胞丢弃，使用新的细胞。
2.2转染细胞的准备a.在细胞瞬时转染前需确定其细胞密度及存活率。
为确保转染效果，建议使用生长处于指数期（密度约为2~4×106个/毫升）、存活率大于98%的细胞转染；b.细胞无需离心，若细胞密度为2.0×106个/ml时，则可直接转染，若细胞密度>2.0×106个/ml，则需兑入新鲜的KOP293培养液，将细胞密度稀释成2×106个/毫升（客户也可根据自身经验摸索合适的转染密度）；c.摇瓶置于5%的CO2恒温摇床中，37℃、120rpm恒温震荡培养10min后开始转染。