细胞复苏
细胞复苏的基本过程
细胞复苏是指受损或受压力的细胞逐渐恢复正常功能和结构的过程。
下面是细胞复苏的基本过程：
感知和响应：细胞首先感知到外部环境的变化或内部损伤，通过细胞表面的受体和信号传导通路来传递信号。
防御和修复：细胞启动防御机制，抵御外部压力或损伤。
这可能涉及调节细胞内的代谢活动、释放抗氧化剂和抗炎因子，以及修复受损的细胞结构和功能。
能量调节：细胞为了适应恢复和修复的需要，调节能量代谢过程。
它可能增加能量产生的过程，如线粒体呼吸和ATP合成，以支持细胞复苏所需的能量需求。
蛋白质合成和修复：细胞增加蛋白质合成，以产生新的蛋白质来替代受损的蛋白质。
这可以通过启动细胞内的信号通路和转录因子来实现，促进相关基因的表达和蛋白质合成。
恢复平衡：细胞恢复内部环境的平衡，包括细胞内离子浓度、酸碱平衡和水分平衡等。
这可以通过细胞内的离子通道和转运蛋白来实现，调节离子的进出和维持正常的细胞内环境。
以上是细胞复苏的基本过程，不同类型的细胞和受损程度可能会有所不同。
细胞复苏的过程是复杂而精细的，需要多个细胞内和细胞间的相互作用来实现细胞的恢复和修复。
细胞复苏
细胞复苏实验操作流程
主要器材：酒精灯、镊子、记号笔、废液缸、封口膜。
主要试剂：PBS、干细胞基础培养基、75%酒精、双抗、胎牛血清。
培养基配制：干细胞基础培养基，添加10%胎牛血清和1%双抗。
细胞复苏操作步骤：
1.佩戴眼镜和手套，从液氮罐中取出冻存管。
2.迅速放入37℃水浴中，用镊子夹住冻存管，并不时摇动，在1分钟内使其90%融化，然后在无菌下吸取出细胞到9ml的干细胞完全培养基中重悬，用干细胞完全培养基冲洗冻存管2-3次。
3.在1200r/min速度下离心3分钟，弃去上层液，加入适量培养液后进行计数，全量接种于T75培养瓶中，置37℃温箱静置培养，次日全量更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。
细胞复苏的注意事项：
1.细胞复苏时要注意融化冻存细胞的应注意融化冻存细胞速度要快，可不时摇动安瓿或冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段(-5～0℃)。
2.冻存液对细胞有毒性，解冻后必须用洗掉冻存液才能移入培养瓶中培养。
3.从液氮拿出来，以最快速度丢入37度水浴，等细胞液刚刚化完取出，加培养液稀释。
4.刚复苏的细胞还是少折腾它好，细胞37°快速解冻后直接放入预热的培养基。
5.复苏必须尽快除去DMSO。
要记得速溶！
6.取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。
细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。
细胞复苏的操作方法有
细胞复苏的操作方法有
细胞复苏是一种实验室技术，用于使脱水、冷冻或干燥的生物样本重新恢复到活动状态。
以下是常用的细胞复苏操作方法：
1. 退火复苏法：将冷冻或干燥的细胞样本迅速放入含有保护性溶液或培养基的温暖环境中，使样本迅速恢复到正常温度。
这样可以防止细胞膜的破裂和细胞器的失活。
2. 液相复苏法：将冷冻样本悬浮在适当的培养基中，并在适当的温度和营养条件下培养恢复。
这种方法适用于以液体形式保存的细胞样本。
3. 干燥复苏法：将干燥的样本暴露在湿润的环境中，使其重新吸湿，并注入适当的培养基中进行培养。
这种方法适用于以干燥形式保存的细胞样本。
4. 渐进复苏法：渐进地增加冷冻样本的温度或湿度，以避免温度和压力的突变对细胞造成伤害。
这种方法适用于非常敏感的细胞。
5. 化学复苏法：使用化学物质或添加剂来促进细胞复苏，如聚乙二醇（PEG）或DMSO等。
这些化学物质可以提供保护性的作用，促进细胞膜的再生和细胞器的活性恢复。
需要注意的是，细胞复苏的操作方法可能因细胞类型、保存条件和实验目的等因
素而有所不同。
在进行细胞复苏实验前，建议查阅相关文献，了解适合您实验条件的最佳方法。
否则，可以咨询专业的实验室人员或领域专家，以获得更准确的指导和建议。
细胞复苏的名词解释
细胞复苏的名词解释细胞复苏是一个涉及生物学和医学领域的概念，指的是通过各种生理和化学过程以及外部干预措施促使细胞从濒临死亡状态恢复并再次恢复其正常功能的过程。
在人类和其他生物体中，细胞复苏是一种至关重要的生理现象，可以在某些情况下拯救细胞，并帮助人体恢复健康。
细胞复苏的基本过程可以概括为以下几个方面：1. 能量供应与代谢重新启动：细胞出现衰竭时，能量供应会受到干扰，而细胞需要能量来维持其功能。
细胞复苏的过程中，通过补充适当的营养物质和氧气，细胞能够重新启动代谢过程，产生所需的能量。
2. DNA修复与蛋白质合成：细胞衰竭时，DNA受到损害，而DNA修复是细胞复苏的重要环节。
细胞利用其内部的修复系统，修复DNA的损伤，并开始合成所需的蛋白质，以恢复正常的细胞功能。
3. 抗氧化防御与清除有害物质：在细胞衰竭的过程中，通常会产生大量的自由基和其他有害物质，这些物质会进一步损害细胞的功能。
细胞复苏过程中，细胞会启动自身的抗氧化防御系统，清除有害物质，减少细胞的氧化损伤。
4. 细胞再生与重建：在严重的细胞损伤或死亡情况下，细胞复苏可能无法实现，此时需要依靠细胞再生和重建来恢复受损的组织。
一些干细胞和组织再生技术可以在需要的情况下，促使新的健康细胞代替损伤的细胞。
尽管细胞复苏是一个自然生理过程，但科学家和医学界一直致力于研究和扩展细胞复苏的机制和途径，以改善疾病治疗和生命救助的效果。
在临床应用上，细胞复苏的概念被广泛运用于急救、神经科学、器官移植和新药研发等领域。
例如，急救人员常用心肺复苏术将受伤或心脏停止的患者维持在生命支持状态，以便在适当的时机进行进一步治疗。
此外，研究人员也努力开发新型药物和治疗手段，以促进细胞复苏，提高疾病治疗的效果。
细胞复苏不仅仅局限于人类，其他生物体中也存在这种机制。
例如，植物细胞在遭受外部环境压力或生长停滞的情况下，可以借助一系列的修复与恢复机制来实现细胞复苏。
这种机制使得植物能够适应不利环境条件，并维持一定的生长和生存能力。
细胞复苏知识点总结图文
细胞复苏知识点总结图文细胞复苏是指细胞在受到外界刺激或损伤后能够恢复正常功能的过程。
这种过程涉及到多种细胞生物学过程和细胞原理，包括细胞膜的修复、细胞器的恢复、细胞代谢的调节等。
细胞复苏知识对于了解细胞生物学和细胞医学具有重要意义。
下面将对细胞复苏的知识点进行总结。
1. 细胞膜的修复细胞膜是细胞的外界保护层，也是细胞与外界环境交换物质的重要通道。
在受到外界刺激或损伤后，细胞膜可能会受到破坏，导致细胞内外环境失衡。
细胞复苏过程中，细胞膜的修复是至关重要的一环。
细胞膜的修复过程主要包括以下几个方面：1）脂质合成：受损细胞膜需要合成新的脂质来修复受损部分。
这一过程涉及到细胞内脂质合成通路的调节，包括脂质合成酶的表达和活性调节等。
2）蛋白质修复：细胞膜的正常功能依赖于多种膜蛋白的存在与活性。
当细胞膜受损时，需要修复受损膜蛋白或合成新的膜蛋白。
这一过程涉及到蛋白质合成途径的调节，包括翻译后修饰、定位和折叠等。
3）离子通道修复：细胞膜上的离子通道在细胞功能和稳态维持中起着重要作用。
受损细胞膜需要修复失活的离子通道或合成新的离子通道。
这一过程涉及到细胞内离子通道途径的调节，包括膜蛋白的合成与修饰等。
2. 细胞器的恢复除了细胞膜的修复外，受损细胞还需要恢复其内部结构和功能。
这涉及到细胞器的恢复过程。
常见的细胞器包括内质网、高尔基体、溶酶体、线粒体等。
细胞复苏过程中，细胞器的恢复主要包括以下几个方面：1）内质网的修复：内质网是细胞内蛋白质合成和修饰的重要场所，受损细胞需要修复内质网结构和功能。
这一过程涉及到内质网蛋白的合成与修饰、膜磷脂的合成等。
2）高尔基体的恢复：高尔基体是细胞内蛋白质转运和修饰的重要细胞器，受损细胞需要恢复高尔基体的结构和功能。
这一过程涉及到高尔基体中各种酶的合成和活性调节等。
3）溶酶体的修复：溶酶体是细胞内液泡结构，参与细胞内物质降解和再利用。
受损细胞需要修复溶酶体的膜结构和酶活性。
这一过程涉及到溶酶体膜蛋白和酶的合成与修饰等。
复苏细胞的原理
复苏细胞的原理
复苏细胞，也称为再生细胞，是一种具有特殊修复和再生能力的细胞。
它们存在于人体的各个组织和器官中，并在受损或受创时被调动起来进行修复和再生。
复苏细胞的主要作用是通过分裂和分化产生新的细胞，以替代受损或死亡的细胞。
当组织或器官受到损伤时，身体会释放一系列信号物质，这些信号物质会触发复苏细胞进入活跃状态。
一旦复苏细胞被激活，它们会开始增殖，分裂成更多的细胞，并向受损区域迁移。
复苏细胞的再生能力来自于它们具有较高的增殖和分化潜力。
与其他细胞相比，复苏细胞的增殖速度更快，可以快速填补受损区域，恢复组织的完整性。
此外，复苏细胞还能够分化成不同类型的细胞，例如肌肉细胞、神经细胞等，以修复和重建组织和器官的结构与功能。
复苏细胞的再生过程还受到一系列因素的调控。
例如，生长因子和细胞外基质的存在可以促进复苏细胞的增殖和分化。
同时，免疫系统的参与也对复苏细胞的活动起到重要作用。
免疫细胞可以识别并清除受损组织中的残留细胞和炎症因子，为复苏细胞提供清晰的环境，促进其修复和再生的过程。
需要注意的是，复苏细胞的再生能力并非无限的。
随着年龄的增长，复苏细胞的数量和活性会逐渐减少，导致机体对损伤的修复和再生能力下降。
因此，保持良好的生活习惯和健康饮食，
以及适度的运动，可以促进复苏细胞的活性，延缓机体老化进程。
简述细胞复苏流程与注意事项
简述细胞复苏流程与注意事项
细胞复苏流程：
1、将冻存的细胞从液氮罐中取出，立即放入37°C的水浴中进行融化，轻柔晃动，加速融化，直到小瓶中只剩下一小块冰，时长应控制在1min 中；
2、用70%乙醇擦拭瓶外后转移无菌操作台中，打开瓶盖前，用酒精灯火焰对瓶口进行消毒；
3、将预加热的新鲜完全培养基滴入小瓶中。
缓慢用移液枪吸取瓶中液体至15ml离心管中，加入适量浓度和体积的完全培养基，轻柔混合均匀；
4、200 ×g左右细胞悬浮液离心5-10分钟。
实际的离心速度和持续时间因细胞类型而异。
弃掉上清，加入新鲜完全培养基重悬细胞，并将其转移到适当的培养容器和推荐的培养环境中。
注意事项：
1、液氮温度低，小心低温对人造成的伤害，在液相中储存的冷冻瓶在解冻时存在爆炸的风险，因此，取出冻存管的时候，要做好个人防护。
2、通常细胞集中储藏在液氮中，取出时应迅速，避免温差对其他冻存
细胞造成影响。
3、复苏细胞的核心技术，简而言之就是快融，将在37°C水浴中快速解冻冷冻细胞(< 1分钟。
4、解冻时，冻存管先放入无菌一次性PE手套中，再放入水中融化，避免污染也方便操作。
5、用预热过的培养基慢慢稀释解冻的细胞。
6、解冻细胞后，在培养皿中培养时，应尽量维持高密度，以提高细胞存活率。
7、注意无菌操作，避免细胞发生污染。
细胞的复苏
谢谢您的倾听
再见
冻存管
• 冻存管：冻存管是商用名菌种保存管的通称。
液氮罐
• 液氮罐一般可分为液氮贮存罐、液氮运输 罐两种。 贮存罐主要用于室内液氮的静置 贮存，不宜在工作状态下作远距离运输使 用； 液氮运输罐为了满足运输的条件，作 了专门的防震设计。其除可静置贮存外， 还可在充装液氮状态下，作运输使用，但 也应避免剧烈的碰撞和震动。
液氮罐的保存
• 一、液氮罐的放置 液氮罐要存放在通风良好 的阴凉处，不要在太阳光下直晒。由于其制造精 密及其固有特性，无论在使用或存放时，液氮罐 均不准倾斜、横放、倒置、堆压、相互撞击或与 其他物件碰撞，要做到轻拿轻放并始终保持直立。 • 二、液氮罐的清洗 液氮罐闲置不用时，要用 清水冲洗干净，将水排净，用鼓风机吹干，常温 下放置待用。液氮罐内的液氮挥发完后，所剩遗 漏物质(如冷冻精子)很快融化，变成液态物质而 附在内胆上，会对铝合金的内胆造成腐蚀，若形 成空洞，液氮罐就会报废，因此液氮罐内液氮耗 尽后对罐子进行刷洗是十分必要的。
细胞的复苏
细胞的复苏
• 细胞复苏的基本知识： • 细胞置于液氮中，正常情况下，可保存数 年至数十年。细胞的复苏与冻存的要求相 反，应采用快速融化的手段。复苏时溶解 细胞速度要快，使之迅速通过细胞最易受 损的-5~0º C，这样可以保证细胞外结晶在 很短的时间内融化，避免由于缓慢融化使 水分渗入细胞内形成细胞内再结晶对细胞 造成损害，以防细胞内形成冰晶引起细胞 死亡。 • 冻存的细胞并非100%复苏成功。
• 具体的刷洗办法如下：首先把液氮罐内提筒取出， 液氮移出，放置2—3天，待罐内温度上升到0℃ 左右，再倒人30℃左右的温水，用布擦洗。若发 现个别融化物质粘在内胆底上，一定要细心洗刷 干净。然后再用清水冲洗数次，之后倒置液氮罐， 放在室内安全不宜翻倒处，自然风干，或如前所 述用鼓风机风干。注意在整个刷洗过程中，动作 要轻慢，倒人水的温度不可超过40℃，总重不要 超过2kg为宜。 • 三、液氮罐的安全运输 液氮罐在运输过程中 必须装在木架内垫好软垫，并固定好。罐与罐之 间要用填充物隔开，防止颠簸撞击，严防倾倒。 装卸车时要严防液氮罐碰击，更不能在地上随意 拖拉，以免减少液氮罐的使用寿命。
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关于细胞复苏细胞冷冻保存与复苏原理三木转自体外培养的原理和技术. 薛庆善主编. 2001年2月.科学出版社, pp128-136细胞冷冻保存与复苏原理在低于-700C的超低温条件下，有机体细胞内部的生化反应极其缓慢，甚至终止。
因此，采取适当的方法将生物材料降至超低温，即可使生命活动固定在某一阶段而不衰老死亡。
当以适当的方法将冻存的生物材料恢复至常温时，其内部的生化反应可恢复正常。
所谓冷冻保存，就是将体外培养物或生物活性材料悬浮在加有或不加冷冻保护剂的溶液中，以一定的冷冻速率降至零下某一温度（一般是低于-700C的超低温条件），并在此温度下对其长期保存的过程。
而复苏就是以一定的复温速率将冻存的体外培养物或生物活性材料恢复到常温的过程。
不论是微生物、动物细胞、植物细胞还是体外培养的器官都可以进行冻存，并在适当条件下复苏。
水在低于零度的条件下会结冰。
如果将细胞悬浮在纯水中，随着温度的降低，细胞内外的水分都会结冰，所形成的冰晶会造成细胞膜和细胞器的破坏而引起细胞死亡。
这种因细胞内部结冰而导致的细胞损伤称为细胞内冰晶的损伤。
如果将细胞悬浮在溶液中，随着温度的降低，细胞外部的水分会首先结冰，从而使得未结冰的溶液中电解质浓度升高。
如果将细胞暴露在这样高溶质的溶液中且时间过长，细胞膜上脂质分子会受到损坏，细胞便发生渗漏，在复温时，大量水分会因此进入细胞内，造成细胞死亡。
这种因保存溶液中溶质浓度升高而导致的细胞损伤称为溶质损伤或称溶液损伤。
当温度进一步下降，细胞内外都结冰，产生冰晶损伤。
但是如果在溶液中加入冷冻保护剂，则可保护细胞免受溶质损伤和冰晶损伤。
因为冷冻保护剂容易同溶液中的水分子结合，从而降低冰点，减少冰晶的形成，并且通过其摩尔浓度降低未结冰溶液中电解质的浓度，使细胞免受溶质损伤，细胞得以在超低温条件下保存。
在复苏时，一般以很快的速度升温，1-2分钟内即恢复到常温，细胞内外不会重新形成较大的冰晶，也不会暴露在高浓度的电解质溶液中过长的时间，从而无冰晶损伤和溶质损伤产生，冻存的细胞经复苏后仍保持其正常的结构和功能。
冷冻保护剂对细胞的冷冻保护效果还与冷冻速率、冷冻温度和复温速率有关。
而且不同的冷冻保护剂其冷冻保护效果也不一样。
冷冻速率冷冻速率是指降温的速度，直接关系到冷冻效果。
细胞在冷冻过程中会发生如下变化：当细胞被冷至-50C时，因溶液中加有冷冻保护剂而降低溶液的冰点，细胞内外溶液仍未结冰；当被冷至-5～-1 50C之间时，细胞外溶液先出现结冰而细胞内仍保持未结冰状态。
细胞内未结冰的水分子会比细胞外部分结冰溶液中的水分子具有更高的化学能。
其结果是，细胞内水分子为了和细胞外水分子保持化学能的平衡，会向细胞外流动。
冷冻速度不同，细胞内水分向外流动的情况也不相同：如果冷冻速度慢，细胞内水分外渗多，细胞脱水，体积缩小，细胞内溶质浓度增高，细胞内不会发生结冰；如果冷冻速度快，细胞内水分没有足够的时间外渗，结果随着温度的下降而发生细胞内结冰；如果冷冻速度非常快（即超快速冷冻），则细胞内形成的冰晶非常小或不结冰而呈玻璃状态（玻璃化冷冻）。
Luyet（197 3）证实液体的凝固可分为两种形式：一种是晶体化，溶液中的分子呈有序排列；另一种情况是非晶体即玻璃化，液体中的分子呈无序状态，保持未凝固前的状态。
不同的冷冻速度既然能使细胞内发生不同的生理变化，也可以对细胞产生不同的损伤。
当冷冻速度过慢时，细胞脱水严重，细胞体积严重收缩，超过一定程度时即失去活性。
同时冷冻速度过慢，还会引起细胞外溶液部分结冰，从而使细胞外未结冰的溶液中溶质浓度增高，产生溶质损伤。
当冷冻速度过快时，细胞内水分来不及外渗，会形成较到冰晶，造成细胞膜及细胞器的破坏，产生细胞内冰晶损伤。
超快速玻璃化冷冻对细胞存活来说是最为理想的冷冻方法。
细胞内外呈玻璃化凝固，无冰晶形成或形成很小的冰晶，对细胞膜和细胞器不致造成损伤，细胞也不会在高浓度的溶质中长时间暴露而受损。
不同细胞的最适冷冻速率不同。
小鼠骨髓干细胞、酵母、人红细胞的最适冷冻速率分别为1.60C/min、70C/min和2000C/min。
细胞与细胞之间的最适冷冻速率可在1.60C～3000C/min，故对一种细胞进行冷冻保存之前，首先需要测定其最适冷冻速率，以保证获得最高的冷冻存活率。
冷冻保存温度冷冻保存温度是指能长期保存细胞的超低温度，在此温度下，细胞生化反应极其缓慢甚至停止，但经过长期保存，在复苏后仍能保持正常的结构和功能。
不同的细胞和生物体以及使用不同的冷冻保存方法要取得同样的冷冻保存效果，冷冻保存温度可以不同。
但从实际和效益的观点出发，液氮温度（-1960C）是目前最佳的冷冻保存温度。
在-1960C 时，细胞的生命活动几乎完全停止，但复苏后细胞的结构和功能完好。
如果冷冻过程得当，一般生物样品在-1960C下均可保存十年以上。
应用-700C～-800C保存细胞，短期内对细胞的活性无明显影响，但随着冻存时间延长，细胞存活率明显降低。
在冰点到-400C范围内保存细胞的效果不佳。
复苏速率冷冻保护体外培养物，除了必须有最佳的冷冻速率、合适的冷冻保护剂和冻存温度外，在复苏时也必须有最佳的复温速率，这样才能保证最后获得最佳冷冻保存效果。
复温速率是指在细胞复苏时温度升高的速度。
复温速率不当也会降低冻存细胞存活率。
一般来说，复温速度越快越好。
常规的做法是，在370C水浴中，于1-2分钟内完成复苏。
复温速度过慢，细胞内往往重新形成较大冰晶而造成细胞损伤。
复温时造成的细胞损伤非常快，往往在极短的时间内发生。
冷冻保护剂冷冻保护剂是指可以保护细胞免受冷冻损伤的物质。
冷冻保护剂常常配制成一定的溶液。
一般来讲，只有红细胞、大多数微生物和极少数有核的哺乳动物细胞悬浮在不加冷冻保护剂的水或简单的盐溶液中，并以最适的冷冻速率冷冻，可以获得活的冻存物。
但对于大多数有核哺乳动物细胞来说，在不加冷冻保护剂的情况下，无最适冷冻速率可言，也不能获得活的冷冻物。
例如将小鼠骨髓细胞悬浮在不加冷冻保护剂的平衡盐溶液中，并以0.3～6000C/min的冷冻速率降温冷冻，98%以上的细胞会死亡；而加入甘油冷冻保护剂进行冷冻保存时，98%以上的细胞都可存活。
冷冻保护剂可分为渗透性和非渗透性两类。
渗透性冷冻保护剂可以渗透到细胞内，一般是一些小分子物质，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。
其保护机制是在细胞冷冻悬液完全凝固之前，渗透到细胞内，在细胞内外产生一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤，同时，细胞内水分也不会过分外渗，避免了细胞过分脱水皱缩。
甘油和DMSO并不防止细胞内结冰，在使用该类冷冻保护剂时，需要一定的时间进行预冷，让甘油或DMSO等成分渗透到细胞内，在细胞内外达到平衡以起到充分的保护作用。
目前DMS O的应用比甘油更为广泛，但要注意的是，DMSO在常温下对细胞的毒性作用较大，而在40C时，其毒性作用大大减弱，且仍能以较快的速度渗透到细胞内。
所以，冻存时DMSO平衡多在40C下进行，一般需要40～60分钟。
非渗透性冷冻保护剂不能渗透到细胞内，一般是些大分子物质，主要包括聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羟乙基淀粉等。
其保护机制的假说很多，其中有一种可能是，聚乙烯吡咯烷酮等大分子物质可以优先同溶液中水分子结合，降低溶液中自由水的含量，使冰点降低，减少冰晶的形成；同时，由于其分子量大，使溶液中电解质浓度降低，从而减轻溶质损伤。
不同的冷冻保护剂有不同的优、缺点。
目前一般多采用联合使用两种以上冷冻保护剂组成保护液。
由于许多冷冻保护剂（如DMSO）在低温下能保护细胞，但在常温下却对细胞有害，故在细胞复温后应及时洗涤冷冻保护剂。
冷冻保存方法按照冷冻保护液在冻结后是否形成冰晶来划分，冻存方法可分为非玻璃化和玻璃化冻存两种。
非玻璃化冻存是利用各种温级的冰箱分阶段降温至-700C～-800C，然后直接投入液氮进行保存；或者是利用电子计算机程控降温仪以及利用液氮的气、液，按一定的降温速率从室温降至-1000C以下，再直接投入液氮保存的方法。
以该种方法冻结的细胞悬液或多或少都有冰晶的形成。
玻璃化冻存则是指利用多种高浓度的冷冻保护剂联合形成的玻璃化冷冻保护液保护悬浮细胞，直接投入液氮进行冻存的方法。
以该中方法冻结的细胞悬液没有冰晶的形成。
但目前细胞冻存最常用的仍是前一种方法。
非玻璃化冻存方法下面以肿瘤细胞和杂交瘤细胞为例，介绍非玻璃化冻存细胞的详细过程。
主要材料（1）仪器设备：普通冰箱、-300C低温冰箱和-700C～-800C超低温冰箱、液氮冻存罐、高速离心机、电子计算机程控降温仪等；（2）冻存管：容量为1ml或1.5ml；（3）冷冻保护液：一般是以9份小牛血清或细胞培养液与1份DMSO混合而成。
现配现用，或配制后防入普通冰箱冰盒内冷冻保存。
使用前，于室温下水浴溶解；（4）待冻存细胞：各种肿瘤细胞或杂交瘤细胞。
操作过程1. 待冻存细胞悬液的制备(1) 按常规方法消化处于对数生长期的细胞培养物，制备单细胞悬液，并计算细胞总数；(2) 将细胞悬液以800～1000r/min离心5min，去上清夜；(3) 向细胞沉淀物中加入冷冻保护液，轻轻吹打混匀，使细胞密度达1×106～1×107个/ml；(4) 按每管1～1.5ml的量分装于冻存管内，拧紧管盖；(5) 再冻存管上做好标记，包括细胞代号及冻存日期。
2. 分级冷冻(1) 先将冻存管放入普通冰箱冷藏室（4～80C），约40min；(2) 接着将冻存管置于普通冰箱冷冻室（-100C～-200C），约30～60min；(3) 将冻存管转入低温冰箱（-300C），放置30min左右；(4) 然后将冻存管转移到超低温冰箱（-700C～-800C），过夜；(5) 最后将冻存管投入液氮保存。
3. 记录做好冻存记录。
记录内容包括冻存日期、细胞代号、冻存管数、冻存过程中降温的情况、冻存位置以及操作人员。
冻存结果如此冻存的细胞，其存活率可达90%以上。
讨论在使用DMSO前，不要对其进行高压灭菌，因其本身就有灭菌作用。
高压灭菌反而会破坏其分子结构，以致降低冷冻保护效果。
在常温下，DMSO对人体有毒，故在配制时最好带手套。
在将细胞冻存管投入液氮时，动作要小心、轻巧，以免液氮从液氮罐内溅出。
若液氮溅出，可能对皮肤造成冻伤。
操作过程中最好带防冻手套、面罩、工作衣或防冻鞋。
应注意控制冻存细胞的质量。
既要在冻存前保障细胞具有高活力，还要确保无微生物污染，这样的细胞才具有冻存价值。
另外，在每批细胞冻存一段时间后，要复苏1～2管，以观察其活力以及是否受到微生物的污染。
冻存管宜采用塑料冻存管，不宜使用玻璃安瓿。