发酵工程半乳糖醛酸标准曲线
多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4145
多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性检测试剂盒说明书微量法货号:UPLC-MS-4145规格:100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体10mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶4℃保存试剂三液体20mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂一：若溶液中有晶体析出，37℃水浴溶解；2、试剂二：临用前加入10mL蒸馏水，60℃水浴助溶；3、标准品：10mg半乳糖醛酸。
临用前加入0.943mL蒸馏水，配成50μmol/mL的标准液；产品说明：多聚半乳糖醛酸酶（Ploygalacturonase，PG）属果胶酶的一种，广泛存在于植物、细菌及真菌中。
其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果实软化、花粉授粉、种子发育成熟及器官脱落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物时，可分泌多聚半乳糖醛酸酶来降解宿主细胞壁，进而导致病程发展。
PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，16000g，离心10min，取上清置于冰上待测。
细菌：先收集细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细菌数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000︰1的比例（建议500万个细菌加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细菌（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，总时间5min）；然后4℃，16000g，离心10min取上清置于冰上待测。
香菇多糖中半乳糖醛酸的含量测定及抗氧化活性研究
香菇多糖中半乳糖醛酸的含量测定及抗氧化活性研究赵鹤鹏;许秋达;常丹;周鸿立【摘要】Lentinan has anti-rumor,anti-virus,improving the immune function and stimulating the formation of interferon and other functions The present study was to determinate the content of lentinanuronic acid and to examine the antioxidation activity of Lentinan.The content of uronic acids was determined according to the method of Carbazolesulfuric acid colorimetry and m-hydroxydiphenyl.The antioxidant effect of Lentinan was detected by scavenging hydroxyl radical,reducing power assay,DPPH radicals,superoxide anion free radical O2-,and ABTS radical method with Vc as a positive control.The results showed that a good linearity relation was existed between the absorbency and the concentration of standard galacturonic acid in the range of 26.15～78.45μg/mL (r =0.999 4),and the average recovery was 99.87％,RSD was 0.11％,and the lowest detection limit was 4.086 μg/mL.The content of uronic acids in Lentinan was 30.25 μg/mg.The concentration of Lentinan in the range of 0.2～1.0 mg/mL had a certain antioxidant effect,which was in the order of scavenging hydroxyl radical,reducing power assay and DPPH radicals.The superoxide anion free radical and ABTS were not within the scope of IC50.It was concluded that the method of Carbazolesulfuric acid colorimetry and m-hydroxydiphenyl to determinate the lentinanuronic acid content in Lentinan wassimple,available,accurate and reproducible,and the Lentinan had been proved to have certain antioxidation effect by 5 kinds of method.%研究香菇多糖中半乳糖醛酸的含量测定和抗氧化作用.采用硫酸-咔唑比色法与间羟基联苯法测定半乳糖醛酸的含量,采用羟基自由基、总还原力、1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基、超氧阴离子自由基、2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基的清除作用考察5种不同体系香菇多糖的抗氧化活性.标准半乳糖醛酸质量浓度在26.15～78.45 μg/mL之间呈良好的线性关系,r=0.999 4,平均加样回收率为99.87％,RSD为0.11％,最低检出限为4.086 μg/mL,糖醛酸含量为30.25 μg/mg;香菇多糖质量浓度在0.2～1.0 mg/mL范围内抗氧化作用大小依次为羟基自由基、总还原力、DPPH,超氧阴离子和ABTS没在IC50范围内.硫酸-咔唑比色法简便易行、准确性高、重现性好,且多糖5种体系验证香菇多糖具有一定的抗氧化能力.【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(038)002【总页数】5页(P100-104)【关键词】香菇多糖;糖醛酸;咔唑-硫酸比色法;抗氧化作用【作者】赵鹤鹏;许秋达;常丹;周鸿立【作者单位】吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022;吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022;吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022;吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022【正文语种】中文【中图分类】TS201.2网络出版时间：2017-4-20 14:09:52香菇（Lentinula edodes）[1]是全球第二大人工种植的食用菌，也是我国特产之一，在民间素有“山珍”之称，野生香菇主要生长在林区，种植生长在木材上。
半乳糖醛酸标准品
半乳糖醛酸标准品（分析纯），果胶标准品.果胶酶活力的测定果胶酶活力单位1 g或1 mL酶液在50℃、pH 5.0的条件下,1 h分解果胶产生1 mg半乳糖醛酸为一个酶活单位。
半乳糖醛酸标准曲线制作精确称取1.000 g半乳糖醛酸,用缓冲溶液定容至1 000 mL,获得1 mg/mL的半乳糖醛酸溶液。
取9支25 mL的刻度试管编号,并按表1加入各种试剂。
制备酶液:吸取1 mL浓缩酶液于一定体积的容量瓶中,用缓冲溶液定容。
加入试剂后在混合振荡器上振荡均匀,在沸水浴中加热5 min,取出后立即用流水冷却,加蒸馏水定容至25 mL(以1号试管作为空白调零),在540 nm波长下比色测定吸光度。
以吸光度纵坐标,半乳糖醛酸含量为横坐标,绘制标准曲线。
酶活力测定步骤①于甲、乙两支25 mL比色管中分别加入果胶底物5 mL,在50℃水浴中预热5 min;②于甲、乙管中分别加4 mL磷酸-柠檬酸缓冲液,甲管中加入1 mL稀释酶液,立即摇匀,在50℃水浴中准确反应30 min,立即给乙管中加1 mL稀释酶液,立即放入沸水浴中煮沸5min,终止反应,冷却;③分别取甲、乙管中反应液2 mL于两支25 mL比色管中,再分别给甲、乙管加2 mL蒸馏水,5 mLDNS试剂,混合,沸水浴煮沸5 min,取出,立即冷却。
加蒸馏水定容到25mL。
3 600 r/min离心8 min,取上清液,以标准空白为基准调零,在540 nm处测吸光度(吸光度要在0.025~0.843之间,否则重新稀释)。
酶活力计算:X=[(A甲-A乙)×Dr×5]/(K×t)式中,A甲为酶样吸光度;A乙为酶空白样的吸光度;K为标准曲线斜率;5为测定酶活时取了反应液的1/5;Dr为稀释倍数;t为反应时间(h)。
. 壳聚糖固定化酶的制备准确称取壳聚糖1.0g 溶于2%的醋酸中磁力搅拌.均匀后逐滴滴加0.25mol/L NaOH 溶液至pH 值7.0 加入5%戊二醛并磁力搅拌10h 静置1h 4 800r/min 离心15min 用蒸馏水清洗直到中性为止将戊二醛交联后的壳聚糖加入到果胶酶液中缓慢震荡反应30min 后于4 下固定12h 以上并用蒸馏水将未固定的果胶酶清洗干净最终得到壳聚糖固定化果胶酶产品相对酶活力：以酶活力最大值为100%，其余数值与其对比，即相对酶活力，以质量分数表示。
葡萄糖醛酸标准曲线
葡萄糖醛酸标准曲线简介葡萄糖醛酸（gluconic acid）是一种有机酸，由葡萄糖氧化得到。
它广泛应用于食品、医药和化妆品等领域。
在分析实验中，通过建立葡萄糖醛酸标准曲线，可以准确测定样品中葡萄糖醛酸的含量。
本文将介绍葡萄糖醛酸标准曲线的建立方法以及相应的数据处理方法。
实验步骤1.准备标准溶液：根据实验需求，选择适当浓度的葡萄糖醛酸标准品，按照预设的浓度进行稀释，得到一系列不同浓度的标准溶液。
2.反应条件设置：将标准溶液和试剂按照一定比例混合，并将反应体系保持在适当的温度和pH值下，促进反应的进行。
3.反应时间控制：根据反应的速率，确定适当的反应时间，使得反应达到平衡状态。
4.反应终止：通过加入特定试剂或改变反应条件，将反应停止，防止继续反应对结果产生影响。
5.测定吸光度：利用紫外可见光谱仪或其他适当的光度计测定各标准溶液的吸光度。
6.绘制标准曲线：将吸光度与对应的葡萄糖醛酸浓度绘制成散点图，通过最小二乘法拟合直线，得到标准曲线的方程。
数据处理1.标准曲线拟合：通过拟合标准曲线的方程，可以将吸光度值转换为葡萄糖醛酸的浓度。
常见的拟合方法有线性拟合、多项式拟合等。
2.样品浓度计算：利用标准曲线方程，根据样品的吸光度值，计算样品中葡萄糖醛酸的浓度。
3.结果分析：根据样品中葡萄糖醛酸的浓度，可以进行样品比较分析或进一步统计分析。
注意事项1.实验过程中，应注意反应条件的控制，尽量保持稳定的温度和pH值，确保实验结果的准确性。
2.标准溶液的浓度选择应根据样品的预期浓度范围进行调整，避免过于稀释或过于浓缩。
3.在吸光度测量过程中，确保光路的清洁和仪器的准确校准，以获得准确的吸光度数据。
结论葡萄糖醛酸标准曲线的建立是准确测定样品中葡萄糖醛酸含量的重要步骤。
通过标准曲线的拟合和数据处理，可以将吸光度值转化为葡萄糖醛酸的浓度，并进行进一步的分析和研究。
在进行该实验时，需注意反应条件的控制和实验过程的准确性，以保证结果的可靠性。
香菇多糖中半乳糖醛酸的含量测定及抗氧化活性研究
香菇多糖中半乳糖醛酸的含量测定及抗氧化活性研究赵鹤鹏;许秋达;常丹;周鸿立【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(038)002【摘要】研究香菇多糖中半乳糖醛酸的含量测定和抗氧化作用.采用硫酸-咔唑比色法与间羟基联苯法测定半乳糖醛酸的含量,采用羟基自由基、总还原力、1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基、超氧阴离子自由基、2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基的清除作用考察5种不同体系香菇多糖的抗氧化活性.标准半乳糖醛酸质量浓度在26.15～78.45 μg/mL之间呈良好的线性关系,r=0.999 4,平均加样回收率为99.87％,RSD为0.11％,最低检出限为4.086μg/mL,糖醛酸含量为30.25 μg/mg;香菇多糖质量浓度在0.2～1.0 mg/mL范围内抗氧化作用大小依次为羟基自由基、总还原力、DPPH,超氧阴离子和ABTS没在IC50范围内.硫酸-咔唑比色法简便易行、准确性高、重现性好,且多糖5种体系验证香菇多糖具有一定的抗氧化能力.【总页数】5页(P100-104)【作者】赵鹤鹏;许秋达;常丹;周鸿立【作者单位】吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022;吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022;吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022;吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022【正文语种】中文【中图分类】TS201.2【相关文献】1.神农香菊茎叶废弃物中多糖与总黄酮的含量测定和抗氧化活性研究 [J], 阮文静;赵耀鑫;周捷;马国飞;赵玲2.紫薯提取物中花色苷的含量测定及抗氧化活性研究 [J], 林好;陈圻宇;黄庆谱;冯娇;李煜彬;邓万里3.六味地黄丸药渣中4种活性成分含量测定及抗氧化活性研究 [J], 梁诗瑶;刘倩倩;黄胜;颜冬兰;林丽美;吴萍4.复方罗欧咳祖帕中总多酚总黄酮的含量测定与抗氧化活性研究 [J], 李玮;李莉;王晓梅;刁娟娟;王新玲5.不同产地沙棘中总黄酮、总多酚含量测定及其抗氧化活性研究 [J], 李娜;胡月月;葛亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
糖醛酸的含量测定
糖醛酸的含量测定1. 仪器、试剂与药材Hitachi U-3010 紫外可见分光光度计（日本）超声清洗机（Sb5200D）宁波生物科技有限公司恒温数控水浴锅（HH- 4）国华电器有限公司半乳糖醛酸为urchem公司，咔唑为国药集团化学试剂有限公司进口分装。
其他试剂均为分析纯。
0.1%的咔唑标准溶液的制备：取0.1g咔唑，精密称定，置于100ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。
半乳糖醛酸标准溶液的制备：称取20mg干燥至恒重的半乳糖醛酸对照品，精密称定，置于100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得0.1948mg/ml半乳糖标准溶液。
2. 实验部分2.1实验条件的选择：2.1.1最大吸收波长的选择精密吸取半乳糖醛酸标准溶液0.5ml和五加果实粗多糖溶液0.3ml，分别置于10ml 的具塞刻度试管中，加水至 1.00ml，加6ml浓硫酸，摇匀，沸水浴加热20分钟，冷至室温后假如0.1%的咔唑标准溶液0.25ml，摇匀。
另取1.00ml水同上操作制得空白溶液。
用日本hitach紫外-可见分光光度计于400-600nm波长范围内依次扫描，确定半乳醛酸最大吸收波长为520nm,样品也为520nm=糖醛酸纯品Apex (nm) End (nm) Height (Abs) Valley (nm) Valley 520.00 419.00 0.476 50.349 419.00半乳糖醛酸标准品nmAbs糖醛酸纯品Peak # Start (nm) (Abs) 600.00Abs1.0 二0.940.84圧0.640.5 !0.440芜_400五加果实粗多糖样品中糖醛酸BPeak # Start (nm) Apex (nm) End (nm) Height (Abs) Valley (nm) Valley (Abs)1600.00 518.00415.500.953131.559415.502.1.2浓硫酸用量考祭精密吸取半乳糖醛酸标准溶液0.5ml , 浓硫酸用量为3-10ml ,其它操作同前，分别测定吸收度值。
糖醛酸测定方法
糖醛酸测定方法一•间羟基联苯比色法1•原理：多聚己糖醛酸与含四硼酸钠的硫酸溶液在高温作用下水解，水解产物进一步与间羟基联苯反应，生成粉红色衍生物，产生紫外吸收，且在一定浓度范围内，该衍生物吸收值与糖醛酸含量呈线性关系，可通过比色法对糖醛酸含量进行计算。
2. 试剂配制：间羟基联苯溶液：称取0.15g间羟基联苯溶于5 mg/mL氢氧化钠溶液中，定容至100mL，其质量浓度为1.5mg/mL.四硼酸钠/硫酸溶液：0.478g四硼酸钠溶于100mL浓硫酸中，备用葡萄糖溶液：称取葡萄糖25.00mg，加水溶解并定容至25mL混匀，成1mg/mL的标准溶液。
（排除中性糖对测定结果的影响）半乳糖醛酸标准溶液：称取干燥至恒重的半乳糖醛酸25.00 mg，加水溶解并定容至25mL，混匀，成1mg/mL的标准溶液。
3. 波长扫描：取半乳糖醛酸标准溶液0.50mL，置10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀（质量浓度为0.05 mg/mL）。
量取溶液1.00 mL置于20 mL具塞试管，置冰水浴中，加入四硼酸钠/硫酸溶液6 mL，待全部加完后，用旋涡混合器混匀，于沸水浴中加热5 min，冰水浴中冷却后用微量加样枪加入1.5 mg/mL间羟基联苯溶液100此，混匀后振摇5 min，超声除去气泡。
以1 mL蒸馏水同上操作制得空白液调零，用UV-2450型紫外可见分光光度计在200 nm~ 800 nm波长范围内扫描，确定最大吸收波长。
4. 标准曲线的制备：取1mg/mL半乳糖醛酸标准溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL和0.6 mL置于10 mL容量瓶中，加水定容，再分别取上述各配制溶液1.0mL至于20mL具塞试管，置冰水浴中，加入四硼酸钠/硫酸溶液6 mL，待全部加完后，用旋涡混合器混匀，于沸水浴中加热5 min，冰水浴中冷却后用微量加样枪加入1.5 mg/mL间羟基联苯溶液100 L混匀后振摇5 min，超声除去气泡。
果冻果酱制作实验报告
果冻果酱制作实验报告专业综合训练实验报告果酱果冻的制作专业: 食品科学与工程年级: 2010姓名: 王秋红学号: 081000230指导教师: 刘卫民二0一三年六月第一部分:果酱、果冻的制作工艺一、实验目的学习果酱和果冻制作工艺及有关理化指标的测定，并亲手制作出产品。
通过本实验掌握有关果酱果冻的制作及部分成分的分析测定技术，为研究开发果酱果冻食品打下基础。
二、原辅材料、仪器设备1、实验材料:成熟度适宜的胡萝卜、柠檬酸、苹果酸、琼脂、明胶、白砂糖、山梨酸钾。
2、实验仪器:切片机或切丁机、蒸煮设备、搅拌机、胶体磨、不锈钢配料罐、夹层锅、天平、温度计。
三、工艺流程原料选择?洗涤?切片?热烫软化?破碎(过滤)?煮制?调整糖酸?加入增稠剂?煮至终点?灌装?杀菌?密封?倒罐?冷却?成品四、操作步骤(一)果酱制作、清洗、切片:将果实用清水洗净，一般用含氯较高的自来水浸泡几分钟后再洗涤。
胡1萝卜不去皮，充分利用原料，同时节省制作时间;洗涤后将胡萝卜切成1*2cm 的丁块。
2、热烫软化:将切成丁块后的胡萝卜，加入同原料1:1清水在不锈钢锅中加热煮沸，并保持微沸5分钟，以使果肉中的果胶溶出、果块软化便于破碎打浆。
软化时要经常搅拌，使果肉软化均匀。
3、破碎、煮制:果肉软化后，捣浆，制作果酱时直接用原热烫的水继续煮制，煮制过程不断搅拌，防止焦锅。
4、调整糖酸:糖和原料以1:1的比例加入，先在全部滤浆煮沸后加入0.5倍原料重的糖，10分钟后加入0.25倍原料重的糖，再10分钟后再加入0.25倍原料重的糖。
同时加入1.5%原料重的酸(柠檬酸与苹果酸比为2:1)。
煮制过程要不断搅拌，火力不能太猛，以免焦糖化。
5、加入糖酸煮制约30min后按照配方要求添加增稠剂:先添加琼脂后添加明胶。
果酱的琼脂加入量为1.2%原料重，明胶加入量为0.4%原料重。
添加的增稠剂都应当先剪断剪细并用少量热水融化后加入。
6、胶磨、煮至终点:用胶体磨磨成均匀的浆状，然后继续煮至终点，出锅前加入0.1‰原料重的山梨酸钾，工业生产可加入万分之五的量作为防腐剂，延长产品的保存期。