血液细胞分析仪网织红细胞计数试剂盒的研制及临床应用_蹇启政

国外医学临床生物化学与检验学分册 2005 年 2 月第 26 卷第 2 期 Sect Clin Biochem & Lab M ed Foreign Med Sci, February 2005, Vol 26, No. 2 # 125 #
# 经验交流 #
血液细胞分析仪网织红细胞计数试剂盒的研制及 临床应用
讨论
Ret 及其参数是反映骨髓造血 功能的敏感 指标, 对血液 病 的诊断、治疗及预后判断具有十分重要的价值。传统的显微 镜 法, 由于受检测人员素质( 水平) 、染色、制片等多方面因素的 影 响, 使结果准确性、重复性差, 且 耗时, 不能满 足科研 及临床 需 求。随着多参数血 细胞 分析 仪、流式 细 胞仪 的 推广 应用, R et 已经逐 渐 被 仪 器 法 所 取 代。其 测 定 原 理 为: R et 内 残 留 的 RN A 被生物活性染料染色, 经多角度激光( 0b、10b、90b) 照射 产 生荧光( 或流式细胞术原理) , 对 Ret 内已 着色的 RN A 含量 进 行分析, 经相关软件分 析处理, 即可 准确测 定 Ret 数及 其相 关 指数( 如 IF R 等) 。检 测结 果快 速、准确、重复 性好, 适 用于 科 研及临床使用[8] 。但仪器所 需的 RET 试 剂盒价 格昂贵, 患 者 难以承受。为此, 成功研 制出仪器 法 Ret 试剂盒, 经与进口 试 剂盒及显微镜法比较, 在 测定精 密度、稳定性 和线性 范围等 方 面均达到 ICSH/ N CCL S 规定的标准, 并与进 口试剂一 致。在 37 e 的测 定 条 件 下, 稳 定 时 间 大 于 进 口 试 剂。 进 口 试 剂 在 30min 后即开始出现 红细胞 碎片, 使 Ret 计数 结果 大大 增高, 而自行研制试 剂则 不如 进口 试剂 增加 明 显。在 室温 ( 20 e ) 、 4 e 时与进口试剂 一致。R et 试 剂无 论是 进口 还是 自行 研制, 其荧光本底对测定结果都 有很大的 影响。要 求其荧 光底数 < 100, 若过大 , 可使结果假 性增高。因 此, 在分装 时均要 求无 尘
结果
1. 取 3 例标本分别用进口和自行研制染液连续测定 10 次, 所得精密度结果, 见表 1。表 1 显 示自行研 制试剂 准确性 测定 与进口试剂相比无显著性差别( P> 0. 05) , 符合临床要求。
作者单位: 610072 成都, 四川省 人民 医院 省临 检中心 ( 蹇启 政、喻 华、陈梅、张丁丁、绕绍琴、杨明 清) ; 614000 四 川省乐 山市人 民医院 ( 佘 仕金) ; 四川省都江堰市二医院( 李 玲) ; 重庆 医科大学 医检 99 级 实习生 ( 王东生)
表 2 不同温度、时间对 Ret 进口及自行研究试剂测定结果( %)
时间( 分钟)
室温 ( 2
4e 进口 自行研制
5
0. 92 0. 88
1. 48 1. 38
0. 92 0. 85
10
1. 02 0. 92
1. 46 1. 41
1. 13 0. 84
( 下转第 127 页)
国外医学临床生物化学与检验学分册 2005 年 2 月第 26 卷第 2 期 Sect Clin Biochem & Lab M ed Foreign Med Sci, February 2005, Vol 26, No. 2 # 127 #
能很好地鉴别卵巢原发癌 和胃肠 道转移 癌。本研究 用免疫 组 化技术检测 CK20 膀胱癌患者组 阳性率为 65. 22% , 而对照 组 中均无阳性表达, 特异性为 100% 。分析 其阳性率较 低的原 因 可能为: ( 1) 涂片在染色过程中反复冲洗, 使部分细胞洗脱; ( 2) 尿沉渣中细胞太少或标本处理不及时、不得当 ; ( 3) 分化较好 的 细胞不易脱落。联合 H E 染色其阳性率大大提高, 其敏感性 和 特异性分别为 91. 30% 和 96. 67% , 分析其 与病 理分级 关系 发 现, 差异无显著意义( P> 0. 05) 。总 之, 脱 落细胞学 联合 CK 20 免疫组化检测方法简单、敏感性 高、易于筛查 和普查 膀胱癌 患 者, 从而争取了积极主动、有效治疗, 提高了患者生存率和生 活 质量, 也可减少患者痛苦及资源浪费。
4. 线性范围测 定: 取 溶血 性贫 血 高网 织 红细 胞 血标 本 1 份, 用稀释液作不同倍数稀释, 作线性范围测定, 结果 Ret 绝 对 值在 0. 05~ 0. 84@ 1012 / L 范围内, 线性良好。
5. 稳定 性观察: 自行研制试剂盒室温保存 12 个月, 本底 荧 光均符合要求, 对临床标本的测定与进口试剂 无差异。
15
1. 05 1. 07
1. 54 1. 57
0. 98 0. 81
30
1. 22 1. 27
3. 63 1. 85
1. 20 0. 92
60
1. 25 1. 26
7. 76 1. 75
1. 36 1. 11
表 3 两组标本用自行研制与进口试剂盒及显微镜法对比测定结果
组别
例数
R et ( % )
r
2. 取新鲜静脉血 20Ll 于 3. 75ml 染液 中, 观察 不同 温度、 时间对 Ret 计数 结果的影响, 结果 见表 2。表 2 显 示自行 研制 试剂与进 口试剂计数 在室温情况 下结果相 近, 二 者高度相关。 在 37 e , 自 行 研 制 试 剂 稳 定 性 大 于 进 口 试 剂, 进 口 试 剂 在 30min 后出现红细胞碎片, 导致测 定结果 升高。4 e 结果 与室 温结果比较偏低, 与丛玉隆等[ 4] 报道有细微差异。
= 关键词> 网织红细胞; 试剂盒; 血细胞分析仪
网织红细胞 ( reticulo cyte, Ret) 计数 是反 映骨 髓造 血功 能 的敏感指标, 对各种贫血的诊断治疗及预后判 断等起着重要作 用[1] 。由于显微镜法 耗时, 影 响因 素 多, 重复 性 差, 已不 常 使 用。随着自 动化仪器的推广和普及, 越来越多的医院采用仪 器 计数网织红细胞。但是这些高档仪器需要进口试剂, 因进口 试 剂价格昂贵, 成本高, 不利 于该检测 项目的 推广。为 此自行 研 制出仪器法 Ret 试剂盒, 经与进口试剂盒研究对比使用效果 满 意。现报道如下。
蹇启政 喻华 陈梅 张丁丁 李玲 绕绍琴 佘仕金 王东生 杨明清
= 摘要> 目的 研制血细胞分析仪网织红细胞( R et) 染液试剂盒, 并与进口试剂盒进行比较。 方 法 应用 CEL L- DY N3700 全自动血液分析仪, 对自行研制的 Ret 试剂盒进行精密度、线性、不同温 度 及时间对测定结果的影响、本底计数等指 标测定, 并分 别使用 进口试 剂盒和 自行研制 的试剂 盒对 50 例血液病患者静脉血标本和 30 例健康体检者静脉血标本进行检 测, 数据结果作 配对 t 检验和相关 性 分析。结果 自行研究的试剂盒精密度良好; 温度、染色时 间等对结 果的影响 小于进 口试剂 盒; 测 定 正常标本和异常标本时, 两种 试剂 盒测定 结果 相比差 异无 显著( P > 0. 05) , 相关 性良 好( r > 0. 94) 。 结论 自行研制的试剂盒的测定结果经多方面 验证比较, 达到 ISCH / N CCLS 标准, 可以代 替进口 试 剂盒, 值得临床推广应用。
( 收稿日期: 2004-02-24) ( 本文编辑: 郭霞)
( 上接第 125 页) 3. 留取 30 份健康体 检者 EDT A- K2 抗 凝血标 本、50 份 临
床诊断或高度怀疑血液病患者血标本, 按以上 实验方法进行网 织红细胞计数, 分别测定 2 次, 取平均值, 结果作 t 检验和相 关 性分析, 结果见表 3。表 3 表 明相 关性 良好, 两种 染液 测定 结 果差异无显著性, 并与显 微镜法 高度相 关, 与 相关文 献报道 一 致[5~ 7] , 符合临床需求。
2 张建 军, 郑闪, 邸雪冰, 等. 微卫星分析在膀胱癌诊断中应用 的进 一步研究. 中华医学杂志, 2001, 81( 20) : 1224- 1226.
3 王翔 , 张元芳, 叶烈夫, 等. 膀胱癌尿脱落细胞端粒酶活性检 测及 其临 床 意义. 中 华 泌 尿 外科 杂 志, 1999, 20( 5) : 267-
表 1 进口、自行研制 Ret 试剂盒精密度比较( x ? s )
标本编号
进口( % )
自行研制( % )
标本 1
1. 661 ? 0. 196
1. 631 ? 0. 210
标本 2
0. 588 ? 0. 051
0. 515 ? 0. 034
标本 3
0. 607 ? 0. 046
0. 531 ? 0. 091
P
健康体检组
30
进口
0. 686 ? 0. 19 0. 9498 > 0. 05
自行研制 血液病患者组
0. 691 ? 0. 205 50
进口
1. 301 ? 1. 098 0. 9862 > 0. 05
自行研制
1. 311 ? 1. 200
显微镜检
1. 312 ? 1. 181 0. 9934 > 0. 05
269 . 4 Ser ipa D, P arr ella P , Gallucci M , et al. Sensitiv e detect ion
of tr ansit ional cell carcinoma of the bladder by micr osate-l lite analy sis o f cells ex fo liated in urine. Int J Cancer, 2001, 95( 6) : 364- 369. 5 M ao L , L ee DJ, T ockman M S, et al. M icrosatellite alterat ions as clo na l mar kers fo r the detectio n of human cancer. Pr oc Nat l A cad Sci U SA , 1994, 91( 21) : 9871- 9875. 6 Kino shita H, Og awa O , K akehi Y , et al. Detectio n of telomer ase activit y in ex foliated cells in urine fr om patients with bladder cancer . J N atl Cancer I nst, 1997, 89( 10) : 724- 730. 7 Buchumensky V , K lein A , Z emer R, et al. Cyto ker atin 20: a new marker fo r ear ly detection of bladder cell carcinoma? J U rol, 1998, 160( 6 Pt 1) : 1971- 1974. 8 戴林, 宋秋静, 李丽 华, 等. 细胞 角蛋白 7 和 20 在卵巢转 移 癌中的表达. 中华病理学杂志, 2001, 30( 2) : 114- 117.