试验四放线菌和真菌形态的观察
实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.
实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.实验四放线菌、酵母菌、霉菌形态观察（一）放线菌的形态观察1 目的观察放线菌的基本形态特征掌握培养放线菌的几种方法2 原理放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。
孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。
孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。
它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。
放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。
3 材料3.1 菌种灰色链霉菌(Str. griseus),天蓝色链霉菌(Str. coelicolor),细黄链霉菌（Str.microflavus）。
3.2 培养基高氏1号培养基。
3.3 器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。
4 流程4.1插片法: 倒平板→插片→接种→培养→镜检→记录绘图4.2压印法: 倒平板→划线接种→挑取菌落→加盖玻片→镜检→记录绘图4.3埋片法: 倒琼脂→切槽→接种→培养→镜检→记录绘图5 步骤5.1插片法5.1.1倒平板将高氏1号培养基熔化后，倒10~12毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用.5.1.2插片将灭菌的盖玻片以45度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或1/3(图5-1)。
5.1.3接种与培养用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28℃培养3～7天。
5.1.4观察培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。
直接在显微镜下观察。
5.2压印法5.2.1制备放线菌平板同5.1.1。
在凝固的高氏1号培养基平板上用划线分离法得到单一的放线菌菌落。
实验四真菌形态的观察
1、取一洁净载玻片，在载玻片上滴一滴蒸馏水。
啤酒酵母；青霉；米曲霉 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物。
4、先用低倍镜，再用高倍镜观察酵母细胞的形状、大小及出芽方式。 种环轻轻划动，使其分散成云雾状薄层。
2、试剂 盖上盖玻片（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片）
实验步骤---酵母菌水浸片的观察
1、取一洁净载玻片，在载玻片上滴一滴蒸馏水。 2、用接种环挑取少许啤酒酵母菌苔置于蒸馏水中，用接
种环轻轻划动，使其分散成云雾状薄层。 3、取一盖玻片，小心覆盖菌液。 4、先用低倍镜，再用高倍镜观察酵母细胞的形状、大小
及出芽方式。
实验步骤---青霉及曲霉水浸片观察
在载玻片上滴加一滴蒸馏水。 用解剖针从生长有霉菌的平板中挑取少量带有孢子的
实验步骤---酵母菌水浸片的观察 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物。
蒸馏水；复红 观察霉菌的平板菌落特征，掌握霉菌的菌落特征。
观察霉菌的平板菌落特征，掌握霉菌的菌落特征。 实验步骤---青霉及曲霉水浸片观察
3、其他 实验步骤---酵母菌水浸片的观察
观察霉菌的平板菌落特征，掌握霉菌的菌落特征。
盖玻片；解剖针；镊子等 实验步骤---酵母菌水浸片的观察
无性分子孢子 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物。
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物。 实验原理---啤酒酵母 3、取一盖玻片，小心覆盖菌液。 1、取一洁净载玻片，在载玻片上滴一滴蒸馏水。 实验步骤---酵母菌水浸片的观察
实验器材
先用低倍镜，再用高倍镜镜检并记录观察结果。 加深理解真菌的形态特征 用解剖针从生长有霉菌的平板中挑取少量带有孢子的霉菌菌丝放入载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来。 学习观察真菌形态的基本方法
细菌、酵母菌、放线菌、霉菌四大菌落形态观察
一、实验目的
1.熟悉各大类微生物群体类微生物
二、基本原理
区分和鉴别各大类微生物通常不外乎包括群体形 态和个体形态两方面的观察，而在一般条件下，特别 是在菌种筛选和菌种辨别等方面，多半首先采用观察 群体形态基本特征的方法来区分各大类微生物。这种 方法简便快速，应用非常广泛。
四、实验结果
微生物 菌落 特性
大肠 杆菌
干湿
啤酒 酵母
放线菌
曲霉
根霉
青霉
厚薄
松紧
大小 结果
微生物
菌落 特征
细菌
酵母
霉菌
放线菌
干湿 厚薄 松紧 大小
很湿或较湿 较湿
干燥
干燥或较干燥
透明或 稍透明
稍透明
不透明
不透明
松
松
小而突起或 大而平坦
大而突起
很紧 小而紧密
较紧
大而疏松或 大而致密
青霉（Penicillium Sp.）
菌丝较粗壮，形成的 菌落较疏松，呈绒毛 状、絮状或蜘蛛状， 菌落大。
曲霉（Aspergillus Sp.）
曲霉菌是一种典型的丝状 菌，菌落生长较快，结构 疏松，表面灰绿色，背面 无色或略呈褐色。菌体有 许多复杂的分枝菌丝构成。
根霉（Phizopus Sp.）
大肠杆菌（Escherichia coli）
啤酒酵母 （Saccharomyces cereuisiae）
大多数酵母菌的 菌落特征与细菌 相似，但比细菌 菌落大而厚，菌 落表面光滑、湿 润、粘稠，容易 挑起，菌落质地 均匀，正反面和 边缘、中央部位 的颜色均一，菌 落多为乳白色。
放线菌5406 （Streptomyces microflavus）
实验四 细菌、真菌、放线菌的分离与培养
实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。
二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。
在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。
为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。
通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。
挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。
1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。
2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。
用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
用途一般多用于筛选菌株。
实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的：1.了解放线菌和酵母菌的形态特征。
2.学习区分细胞的死活状态。
二、实验原理：1.放线菌的形态特征：放线菌属于细菌的一种，具有很大的细胞大小差异，通常为革兰氏阳性菌。
放线菌的形态特征包括菌落形态、细胞形态、颜色、菌丝特征等。
放线菌的菌落形态多呈现出有规则的褶皱或丝状结构。
2.酵母菌的形态特征：酵母菌属于真菌的一种，单细胞有丝分裂生殖的真菌。
酵母菌的形态特征包括细胞形态、菌落形态、颜色等。
酵母菌的细胞呈球形或卵圆形，常以单细胞或成链形式存在。
3.死活细胞鉴别：通过酵母菌培养基中的亚甲基蓝染色来判断细胞的存活状态，活细胞吸收染料颜色比较浅，死细胞吸收染料颜色比较深。
三、实验材料与方法：1.材料：-放线菌菌种：已提前分离培养好的放线菌-放线菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-培养皿、显微镜、镰刀、牛津杯、显微镜载玻片-无菌移液器、无菌吸管、火焰灭菌器-酵母菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-亚甲基蓝染液：浓度为1%2.方法：a.取一小块放线菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的放线菌菌落。
b.用无菌吸管将放线菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。
c.让菌液干燥后，用显微镜在高倍镜下观察放线菌的细胞形态和菌落特征。
d.取一小块酵母菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的酵母菌菌落。
e.用无菌吸管将酵母菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。
f.将带有酵母菌菌液的显微镜载玻片倾斜，滴入一滴亚甲基蓝染液，静置5分钟。
g.用显微镜在高倍镜下观察染色后的酵母菌细胞，根据染色程度判断细胞的存活状态。
四、实验结果与分析：通过观察放线菌的细胞形态和菌落特征，可以发现放线菌的形态特征是不规则的菌落结构，内部有菌丝状结构。
放线菌的细胞形态多样，有圆形或椭圆形细胞。
(四)放线菌和真菌形态的观察.
霉菌的营养体是分枝的丝状体，细胞 的平均宽度是3-10微米，比细菌要宽得 多，所以，显微镜检查时，在低倍镜下 就可以看清楚。
（四）放线菌和真菌形态的观察 及环境微生物的检测
（实验8，实验1）
目的要求
1、学习并掌握放线菌、霉菌小室 培养的技术和方法。 2、了解放线菌的形态特征。 3、掌握常见霉菌的基本形态特征。
实验原理
放线菌是指能形成分枝丝状体或 菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。菌丝 体分为两部分，即潜入培养基中的营 养菌丝(或称基内菌丝) 和生长在培 养基表面的气生菌丝。
开皿盖，在空气中暴露1小时（每桌1培 养皿）。 2．取一带培养基（牛肉）的培养皿，打 开皿盖，用手指触摸培养基的表面（每5 人1培养皿）。 将培养皿倒置于37℃温箱培养1-2天。
教学内容
小室的制作方法,小室培养. 观察自然状态的霉菌形态. 观察保持完整形态的放线菌。
实验报告及思考题
绘制观察到的自然状态的霉菌形态， 放线菌形态。
分生孢子
霉 菌 的 无 性 孢 子
芽生孢子 节孢子
厚垣孢子
孢囊孢子
二 放线菌
1、营养菌丝
匍匐生长于培养基内，吸收营养，也称基内菌丝。一般无隔膜， 直径0.2-0.8 mm，长度差别很大，有的可产生色素。
2、气生菌丝 营养菌丝发育到一定阶段，伸向空间形成气生菌丝，叠生于营养 菌丝上，可覆盖整个菌落表面。在光学显微镜下观察，颜色较深 ，直径较粗（1-1.4 mm），有的产色素。
有些气生菌丝分化成各种孢子丝， 呈螺旋形、波浪形或放射分枝状等。 孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。气生 菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类 的重要依据。
实验五___放线菌、霉菌及真菌的形态观察
a.形态观察：酵母是不运动的单细胞真核生物， 形态观察：酵母是不运动的单细胞真核生物， 形态观察 通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。 通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。 大多数 酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁 有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。 殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。 b.死活鉴定：美蓝是一种无毒的染料，它的氧 b.死活鉴定：美蓝是一种无毒的染料， 死活鉴定 化型呈蓝色，还原型呈无色。 化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的 活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用， 活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用， 细胞内具有较强的还原能力， 细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色 的氧化型变为无色的还原型。因此， 的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原 能力的酵母活细胞是无色的， 能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢 作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。 作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。
实验五
放线菌、 放线菌、霉菌及酵母菌的 形态观察
一．实验目的
学习并掌握观察放线菌、 学习并掌握观察放线菌、霉菌及酵母菌 形态的基本方法； 形态的基本方法； 初步了解放线菌、霉菌及酵母菌的形态 初步了解放线菌、 特征。 特征。
04 实验四 放线菌、酵母和霉菌形态的观察
04 实验四放线菌、酵母和霉菌形态的观察实验目的：1. 了解微生物的形态特征。
2. 熟悉显微镜的使用方法，学习普通染色技术。
3. 学习鉴别放线菌、酵母和霉菌的形态特征。
实验材料：1. 盐酸裂解液、甲醛定型液、碘酒、甲基橙、溴酚蓝等。
2. 放线菌、酵母和霉菌的培养物。
实验步骤：1. 取一小块培养物放在玻片上，滴上一滴生理盐水并用小棒子将其研磨均匀。
2. 放线菌培养物制片：将研磨好的放线菌制成薄片，滴上盐酸裂解液使其变成透明，定型液使其固定，并在空气中晾干。
然后，在火上加热定邦，再用碘酒染色，过后清水洗净，醋酸洗净并晾干或用吹风机吹干。
3. 酵母培养物制片：将研磨好的酵母制成薄片，滴上碘酒染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。
4. 霉菌培养物制片：将研磨好的霉菌制成薄片，滴上甲基橙染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。
5. 用显微镜观察制片。
实验结果：放线菌：放线菌为革兰阳性菌，细胞形状呈弯曲的短小棍形，光学显微镜下看到的细胞较长，一般在1-20微米之间，可以分枝，分枝形成的菌丝从外形上呈现出类似于蜘蛛网的形状。
勃林美细胞内有许多成熟的孢子，呈现为典型的链状。
常常在不规则的小菌落或黏液内生长。
酵母菌：酵母细胞直径一般在2-5微米之间，为单细胞生物，在将染好色的玻片放在光学显微镜下很容易看到直径3微米以上的球形，卵圆形等细胞结构，表面光滑。
细胞质软，柔软而透明。
霉菌：霉菌属真菌，具有多种形态，种类繁多，细胞直径1-5微米，长1-10微米，细胞呈现不规则形状，通常形成的是在菌丝基础上聚合并且扩展而成的菌落。
通过本次实验观察和比较放线菌、酵母和霉菌的形态特征，可以得出以下结论：1. 放线菌为分枝杆菌，细胞型态呈弯曲状，外观类似于蜘蛛网。
2. 酵母为单细胞生物，呈圆球形或卵圆形，表面光滑、整齐。
3. 霉菌属于真菌，细胞形态呈现不规则形状。
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Filamentous Actinomycetes
• Stages in the conversion of a streptomycete’s(链霉菌) aerial hypha into spores (conidia)
Various types of spore-bearing structures in the streptomycetes
实
验
ห้องสมุดไป่ตู้
3-1
放线菌形态的观察
放线菌形态的观察
• • • • 目的要求 实验材料 实验程序 思考题
目的要求
• 学习观察放线菌的基本方法 • 加深理解放线菌的形态特征
实验材料
• 放线菌培养物：费氏轮生菌或“5406”产 生菌（St. microflacus）细黄链霉菌四 天培养物。 • 显微镜、载玻片、接种环、解剖针、 解剖刀、酒精灯、镊子等。 • 酒精、蒸馏水等。
印片染色法
• 微热载玻片－印片－ 固定 －石炭酸复红染色1min －水洗－晾干－油镜 • 5406菌孢子丝的形状，如分枝状况及孢子丝的卷曲 等，并绘图说明。
思考题
• 在用插片法观察气生菌丝和孢子丝的形态时， 要注意些什么？
实验3-1
结
束
实
验
3-2
霉菌的载片培养
• • • • • • • •
青霉、黑曲霉 培养小室准备（干热灭菌） 无菌操作 半固体察氏培养基分别滴在载玻片两端 接菌种（孢子） 盖上盖玻片 吸入无菌水2-3ml（or20％甘油） 28度培养
实验3-2
结
束
Filamentous Actinomycetes
• Several spore-bearing structures of actinomycetes: Streptomyces.
Filamentous Actinomycetes
• A young colony of an actinomycete of the genus Nocardia(奴卡 (氏)(放线)菌属)
Filamentous Actinomycetes
• Typical appearance of a streptomycete growing on agar slants • The colors are due to the production of pigments
Filamentous Actinomycetes
• Antibiotic action of soil microorganisms on a crowded plate
streptomycetes Bacillus
插片染色法
• • 28℃插片培养4-6d，轻轻取出盖玻 片，直接观察镜检。 观察菌丝和孢子丝自然生长的性 状，其中包括气生菌丝（较粗）、 基内菌丝（较细）和孢子丝的形 状，如分枝状况及孢子丝的卷曲 等，并绘图说明（本实验采用费氏 轮生菌接种后观察 ）。 首先寻找插在培养基的界面分界 线，观察营养菌丝、气生菌丝形态 及分枝情况。 调节亮度 直接镜检