分子生物学问题汇总
分子生物学简答题全
简答题1．为什么利用RNAi抑制一个基因的表达较利用反义RNA技术更为彻底。
答：RNAi是外源或内源性的双链RNA 进入细胞后引起与其同源的mRNA特异性降解.dsRNA进入细胞后，在Dicer作用下，分解为21－22bp的SiRNA.SiRNA结合相关酶，形成RNA介导的沉默复合物RISC.RISC在ATP作用下，将双链SiRNA变成单链SiRNA,进而成为有活性的RISC,又称为slicer.slicer与靶mRNA结合，导致其断裂，进而导致其彻底降解。
反义RNA是与靶mRNA互补的RNA，它通过与靶mRNA特异结合而抑制其翻译表达，反义RNA是与靶mRNA是随机碰撞并通过碱基互补配对，所以，mRNA不一定完全被抑制。
2．简述真核基因表达的调控机制。
答：（1）DNA和染色质结构对转录的调控：①DNA甲基化，②组蛋白对基因表达的抑制，③染色质结构对基因表达的调控作用，④基因重排，⑤染色质的丢失，⑥基因扩增；（2）转录起始调控：①反式作用因子活性调节，包括表达调节、共价调节，配体调节等蛋白质相互作用调节），②反式作用因子与顺式作用原件结合对转录过程进行调控；（3）转录后调控：①5’端加帽和3’端多核苷酸化调控，②选择剪接调控，③mRNA运输调控，④mRNA稳定性调控；（4）翻译起始的调控：①阻遏蛋白的调控，②对翻译因子的调控，③对AUG的调控，④mRNA 5’端非编码区的调控，⑤小分子RNA；（5）翻译后加工调控：①新生肽链的水解，②肽链中氨基酸的共价修饰，③信号肽调控。
3．简述mRNA加工过程。
答：（1）5′端加帽（由加帽酶催化5′端加入7-甲苷乌苷酸，形成帽子结构m7GpppmNP-）。
（2）3′端加入Poly(A)尾（A、组蛋白的成熟mRNA无需加polyA尾；B、加尾信号包括AAUAAA和富含GU的序列；C、加尾不需模板；D剪切过程需要多种蛋白质因子的辅助）。
（3）mRNA前体的剪接（剪接加工以除去内含子序列，并将外显子序列连接成为成熟的有功能的mRNA分子。
分子生物学习题库与参考答案
分子生物学习题库与参考答案一、单选题（共49题，每题1分，共49分）1.可以实现体细胞克隆的技术是:A、基因编辑B、聚合酶链式反应C、诱导多能干细胞D、体细胞核移植正确答案：D2.在PCR反应中,引物与模板的结合温度约为:A、37°CB、55°CC、72°CD、95°C正确答案：B3.大肠杆菌对于基因克隆的主要作用是:A、提供连接酶B、合成引物C、表达目的蛋白D、作为宿主正确答案：D4.将单链DNA合成双链的酶是:A、连接酶B、DNA聚合酶C、裂解酶D、RNA聚合酶正确答案：B5.可以增加靶标DNA拷贝数的技术是:A、PCRB、电泳C、测序D、印迹杂交正确答案：A6.在Southern杂交中起探针作用的是:A、DNAB、RNAC、载体D、引物正确答案：A7.编码氨基酸顺序信息的DNA序列称为:A、启动子B、基因C、外显子D、启动密码子正确答案：B8.可以自我复制的核酸是:A、mRNAB、rRNAC、tRNAD、miRNA正确答案：B9.DNA聚合酶在PCR反应过程中不需要的元素是:A、铜离子B、镁离子C、锰离子D、钾离子正确答案：A10.启动子序列通常位于:A、转录起始点上游B、编码区C、基因内含子D、终止子上游正确答案：A11.可以直接导入植物细胞的方法是:A、阳离子脂质体法B、农杆菌法C、微粒射击法D、电穿孔法正确答案：B12.DNA的组成单位是:A、氨基酸B、核苷酸C、核糖D、脱氧核糖正确答案：B13.农杆菌可以将T-DNA转入植物细胞的原因是:A、具有连接酶B、具有限制性内切酶C、具有转座子D、可以与植物细胞膜融合正确答案：C14.DNA测序中的Sanger方法利用了:A、引物延伸终止B、核酸杂交C、蛋白质切割D、荧光标记正确答案：B15.可以用于克隆目的基因的载体是:A、慢病毒B、质粒C、线性DNA分子D、mRNA正确答案：B16.属于真核生物的模型生物是:A、小鼠B、酵母C、果蝇D、以上所有正确答案：D17.可以将质粒DNA转入宿主细胞的是:A、限制性内切酶B、DNA连接酶C、显微注射器D、电穿孔仪正确答案：C18.可以直接将外源基因导入植物细胞的是:A、电穿孔法B、微注射法C、生物炮法D、农杆菌法正确答案：D19.检测蛋白质的方法不是:A、Western印迹B、质谱C、Northern印迹D、免疫印迹正确答案：C20.对DNA进行切割的酶类包括:A、分裂酶B、连接酶C、制限酶D、聚合酶正确答案：C21.可以直接检测蛋白质的方法是:A、PCRB、Northern blotC、Western blotD、Southern blot正确答案：C22.提供能量驱动翻译反应的化学键是:A、糖苷键B、磷酸酯键C、硫磷键D、氢键正确答案：B23.编码线粒体蛋白质的基因主要位于:A、细胞质DNAB、线粒体DNAC、细胞核DNAD、质粒DNA正确答案：B24.下列DNA酶类能切断磷酸二酯键的是:A、连接酶B、DNA聚合酶C、替代酶D、制限酶正确答案：D25.在制备重组DNA时,使用琼脂糖的目的是:A、提供营养B、连接DNA段C、物理分离片段D、催化连接反应正确答案：C26.是mRNA而不是tRNA或rRNA的特征是:A、可翻译成蛋白质B、可与核糖体结合C、含有多肽链D、富含无义密码子正确答案：A27.对蛋白表达的后翻译调控方式是:A、剪接体B、RNA编辑C、蛋白质水解D、磷酸化正确答案：C28.编码tRNA的基因位于:A、线粒体B、核糖体C、细胞核D、细胞质正确答案：C29.单克隆抗体技术利用的真核细胞是:A、诱导的多能干细胞B、杆状病毒感染的淋巴细胞C、转化的肿瘤细胞D、融合瘤细胞正确答案：D30.原核生物基因组中不含有的序列是:A、终止子B、编码区C、启动子D、外显子正确答案：D31.制备cDNA文库常用的反转录酶来源于:A、大肠杆菌B、反刍动物C、艾滋病毒D、枯草杆菌正确答案：C32.编码氨基酸的三联密码所在的核酸是:A、mRNAB、rRNAC、tRNAD、盖帽RNA正确答案：C33.参与DNA复制的关键酶是:A、RNA聚合酶B、连接酶C、DNA聚合酶D、选择酶正确答案：C34.编码rRNA的基因通常组织成:A、基因簇B、可变剪接体C、假基因D、反义基因正确答案：A35.编码 rRNA 的基因位于:A、线粒体DNAB、质粒DNAC、细胞核DNAD、细胞质DNA正确答案：C36.将DNA上的遗传信息转录为RNA的过程称为:A、翻译B、转录C、复制D、修复正确答案：B37.PCR技术依赖的关键酶是:A、连接酶B、聚合酶C、裂解酶D、制限酶正确答案：B38.编码氨酰tRNA合成酶的RNA是:A、mRNAB、rRNAC、tRNAD、siRNA正确答案：B39.可以实现定点诱变的技术是:A、CRISPR/Cas9B、ZFNsC、TALENsD、以上均可正确答案：D40.利用生物信息学分析推测基因功能的方法是:A、突变分析B、蛋白质互作C、序列比对D、同源建模正确答案：C41.可以改变染色体DNA序列的技术是:A、基因敲除B、基因转染C、基因沉默D、基因编辑正确答案：D42.下列不属于PCR反应体系的组成部分是:A、DNA模板B、聚合酶C、dNTPD、琼脂糖正确答案：D43.检测目的蛋白表达的方法不是:A、Southern blottingB、Western blottingC、Eastern blottingD、Northern blotting正确答案：A44.从cDNA库中可以获得的是:A、所有DNA片段B、编码区序列C、非编码区序列D、全部基因组序列正确答案：B45.可以直接克隆cDNA的是:A、质粒B、YACC、λ噬菌体D、人工染色体正确答案：A46.病毒载体导入宿主细胞的方法是:A、共转化B、显微注射C、电穿孔D、吸附感染正确答案：D47.可以识别启动子序列的转录因子是:A、β因子B、α 因子C、σ 因子D、Rho因子正确答案：C48.可以直接提取基因组DNA的方法是:A、PCRB、Northern blotC、Southern blotD、盐析法正确答案：D49.基因敲除实验中所用对照组应为:A、目的基因缺失组B、野生型组C、质粒载体组D、siRNA处理组正确答案：B二、多选题（共35题，每题1分，共35分）1.PCR反应的原料不包括:A、引物B、载体酶C、聚合酶D、dNTPE、模板DNAF、琼脂糖G、无橡皮管封闭正确答案：BFG2.对DNA序列进行PCR扩增需要以下原料:A、模板DNAB、载体酶C、引物D、连接酶E、脱氧核苷三磷酸F、DNA聚合酶G、以上ACF正确答案：G3.质粒载体应具有下列哪些特征:A、大片段插入区B、可自主复制C、含有筛选位点D、与宿主互作E、含有克隆位点F、编码病毒蛋白G、低拷贝数正确答案：BCE4.在制备cDNA文库时需要用到的关键酶包括:A、连接酶B、PCR酶C、限制性内切酶D、RNA聚合酶E、反转录酶F、RNase HG、链化酶正确答案：EF5.编码氨基酸序列的核酸为:A、rRNAB、mRNAC、tRNAD、mRNA前体E、单链RNAF、双链RNAG、环状RNA正确答案：B6.制备重组质粒的主要步骤是:A、载体线性化B、消化插入片段C、连接反应D、感受态细胞制备E、转化宿主细胞F、克隆鉴定G、所有以上步骤正确答案：G7.对肿瘤基因组的检测可以应用:A、Southern印迹B、Northern印迹C、Western印迹D、Eastern印迹E、基因检测F、测序G、基因芯片正确答案：AEFG8.基因表达调控的机制包括:A、转录水平调控B、RNA水平调控C、翻译水平调控D、蛋白活性调控E、基因增幅F、肽链释放G、以上AD均可正确答案：G9.参与翻译过程的RNA包括:A、mRNAB、rRNAC、tRNAD、siRNAE、snRNAF、反义RNAG、以上ABC均参与正确答案：G10.编码氨基酸序列的核酸为:A、rRNAB、mRNAC、tRNAD、cDNAE、基因F、反义链G、互补链正确答案：B11.PCR反应的原料组成包含:A、模板 DNAB、上游引物C、下游引物D、DNA聚合酶E、脱氧核苷三磷酸F、缓冲液G、以上ABDEF正确答案：G12.基因敲入的方法可以包括:A、siRNAB、基因敲除C、ZFNsD、TALENsE、CRISPR/Cas9F、Cre-Lox重组系统G、反义RNA抑制正确答案：CDEF13.编码脱氧核糖的DNA单链为:A、编码链B、反义链C、互补链D、下游链E、正义链F、上游链G、载体链正确答案：B14.基因编辑技术包括:A、ZFNs技术B、TALENs技术C、CRISPR/Cas技术D、基因敲除E、RNAi技术F、慢病毒介导G、以上所有正确答案：ABC15.制备重组DNA的步骤包括:A、载体选择B、插入DNA获得C、双酶切D、连接反应E、转化F、筛选G、以上全部正确答案：G16.参与制备cDNA文库的关键酶类有:A、连接酶B、限制性内切酶C、聚合酶D、反转录酶E、核酸酶F、RNase HG、以上DE正确答案：G17.制备重组质粒的关键步骤不包括:A、载体的选择B、消化载体及插入片段C、连接反应D、PCR扩增插入片段E、转化感受态细胞F、筛选重组克隆G、测序验证正确答案：D18.启动子序列的特征包括:A、定位于基因转录起始点上游B、通常为AT富集区C、具有内含子D、与编码区互补E、与编码区反向验配F、与编码区部分重叠G、保守性非常低正确答案：AB19.直接参与蛋白质翻译的分子包括:A、DNAB、mRNAC、rRNAD、tRNAE、RNA聚合酶F、释放因子G、所有以上分子正确答案：BCDF20.制备重组质粒需要下列步骤:A、载体选择B、消化载体和插入DNAC、连接反应D、感受态细胞制备E、转化宿主细胞F、克隆筛选G、以上全部正确答案：G21.检测mRNA的方法包括:A、Northern杂交B、Western印迹C、Southern印迹D、荧光in situ杂交E、实时定量PCRF、RNA序列表达谱分析G、以上ABDF正确答案：G22.启动子通常位于:A、翻译起始点上游B、转录终止点下游C、翻译终止点下游D、基因内含子E、编码区F、转录起始点上游G、终止子下游正确答案：F23.编码氨基酸序列信息的核酸为:A、DNAB、RNAC、mRNAD、tRNAE、rRNAF、cDNAG、质粒正确答案：C24.基因敲入的技术可以包括:A、siRNAB、基因敲除C、ZFNsD、TALENsE、CRISPR/Cas9系统F、Cre-Lox重组系统G、反义DNA正确答案：CDEF25.制备重组 DNA 需要以下技术:A、载体准备B、PCR 扩增插入片段C、引物设计D、双酶切连接E、宿主细胞转化F、筛选重组克隆G、以上全部正确答案：G26.编码氨基酸序列的核酸为:A、DNAB、mRNAC、rRNAD、tRNAE、miRNAF、cDNAG、基因正确答案：B27.编码mRNA的DNA单链被称为:A、编码链B、上游链C、下游链D、正义链E、反义链F、互补链G、载体链正确答案：E28.Polymerase Chain Reaction (PCR) 的关键步骤不包括:A、模板变性B、引物与模板杂交C、新链延伸合成D、反向转录E、新链变性F、产物检测G、增幅后转化正确答案：D29.Polymerase Chain Reaction (PCR) 的关键步骤包括:A、模板预变性B、引物与模板退火C、新链延伸合成D、产物检测E、反义链合成F、连接酶反应G、以上全部正确答案：ABCD30.编码氨基酸的三联密码存在于:A、DNA双链上B、mRNA分子上C、tRNA分子上D、rRNA上E、盖帽RNA上F、启动子区域G、终止子区域正确答案：C31.抑制基因在体细胞中的表达方法有:A、siRNAB、基因敲除C、反义RNAD、CRISPR/Cas9E、基因激活F、启动子激活G、剪切反应激活正确答案：ABD32.检测mRNA表达水平的技术是:A、北方印迹B、西方印迹C、南方印迹D、东方印迹E、In situ杂交F、免疫组化G、芯片杂交正确答案：AEG33.编码氨基酸的三联密码存在于:A、DNA双链上B、mRNA分子上C、tRNA分子上D、rRNA 上E、盖帽RNA上F、启动子区域G、终止子区域正确答案：C34.可以提高基因在异源表达载体中的表达水平的方法不包括:A、扩增子克隆B、终止子序列调控C、引入变位信号D、改良启动子序列E、引入选择标记F、优化文库构建方法G、优化编码序列正确答案：F35.可以提取基因组DNA的方法有:A、PCR扩增B、Northern印迹C、Southern印迹D、过滤法E、质谱法F、限制性酶切G、盐析法正确答案：CG三、判断题（共38题，每题1分，共38分）1.基因敲入可以使用双链DNA分子实现。
分子生物学问题汇总
Section A 细胞与大分子简述复杂大分子的生物学功能及与人类健康的关系。
Section C 核酸的性质1.DNA的超螺旋结构的特点有哪些？A 发生在闭环双链DNA分子上B DNA双链轴线高卷曲，与简单的环状相比，连接数发生变化C 当DNA扭曲方向与双螺旋方向相同时，DNA变得紧绷，为正超螺旋，反之变得松弛为负超螺旋。
自然界几乎所有DNA分子超螺旋都为负的，因为能量最低。
2.简述核酸的性质。
A 核酸的稳定性：由于核酸中碱基对的疏水效应以及电荷偶极作用而趋于稳定B 酸效应：在强酸和高温条件下，核酸完全水解，而在稀酸条件下，DNA的核苷键被选择性地断裂生成脱嘌呤核酸C 碱效应：当PH超出生理范围时（7-8），碱基的互变异构态发生变化D 化学变性：一些化学物质如尿素，甲酰胺能破坏DNA和RNA二级结构中的而使核酸变性。
E 粘性：DNA的粘性是由其形态决定的，DNA分子细长，称为高轴比，可被机械力和超声波剪切而粘性下降。
F 浮力密度：1.7g/cm^3,因此可利用高浓度分子质量的盐溶液进行纯化和分析G 紫外线吸收：核酸中的芳香族碱基在269nm 处有最大光吸收H 减色性，热变性，复性。
思考题：提取细菌的质粒依据是核酸的哪些性质？质粒是抗性基因，，在基因组或者质粒DNA中用碱提取法。
Sectio C 课前提问1.在 1.5mL的离心管中有500μL，取出10 μL稀释至1000 μL后进行检测，测得A260=0.15。
问（1）：试管中的DNA浓度是多少？问（2）：如果测得A280=0.078, .A260/A280=？说明什么问题？(1)稀释前的浓度：0.15/20=0.0075稀释后的浓度：0.0075/100=0.75ug/ml（2）0.15/0.078=1.92〉1.8，说明DNA中混有RNA样品。
2.解释以下两幅图（native:非变性的；denatured:变性的）图一表示dsDNA和RNA的热变性，中间的Tm值表示解链温度。
分子生物学问答题
1．何为增强子？减数增强子增强转录的特点？答：增强子：远距离调节启动子以增强子转录速率的DNA序列，其增强作用与序列的方向无关，与其在基因上下游位置无关，强烈的细胞类型依赖性。
特点：1.具有远距离效应；常在上游-200bp处，即使相距几十kb也能发挥作用；2.无方向性；无论在基因上游，下游或内部都可发挥增强作用；3.顺式调节;只调节处于同一染色体上的靶基因，对其他染色体的基因无作用；4，无物种和基因特异;对同源或异源基因都有效；5，具有组织特异性；在不同的组织细胞中，相同的增强子可以呈现不同作用强度；6有相位性；增强子的活性与其在DNA双链结构中的空间方向性有关；7，有得增强子含有许多可与转录因子结合的基序，可以不同的组合方式调控基因表达，它们是基因差别表达的主要原因。
2．何为弱化作用？以trp操纵子为例子说明转录弱化作用的基本特点答：弱化作用：RNApd在DNA模板的前导肽编码序列处停顿，依赖于转录和翻译的紧密偶联，使翻译可以在mRNA边转录边进行。
trp操纵子启动子下游有一段140bp的引导序列，终止信号位子100--140bp之间，可形成发夹结构，但取决于RNA pol与茎环之间的相对位置，引导序列50-60bp有两个trp密码子，当细胞中，trp水平较低时，核糖体会在这里停留，拉开与RNA pol之间的距离，阻止终止信号形成发夹结构，转录正常；当细胞中足够多的trp存在时，核糖体紧跟RNA pol，在转录达迈140bp位置时，终止信号形成发夹结构，pol脱离模板，转录停止。
3．DNA损伤修复类型有什么？1直接修复：E coli细胞中有光修复系统，可见光能激活细胞中的光复活酶，分解因紫外线照射而产生的胸腺嘧啶二聚体。
2.烷基转移酶：直接从突变的O6-烷基鸟嘌呤上去除烷基转移到自身，该蛋白失活。
3.切除修复：通过切除损伤部位，剩下的空隙由DNA-pol I催化dNTP聚合而填补，最后由DNA连接酶结合裂隙。
分子生物学专题训练(含答案)
分子生物学专题训练(含答案)分子生物学是研究生物体内分子结构、组成和功能的学科。
以下是一些分子生物学的专题训练题目及其答案。
1. DNA复制问题：DNA复制是指什么？在细胞中是如何进行的？答案：DNA复制是指在细胞分裂过程中，将一个DNA分子复制成两个完全相同的DNA分子的过程。
在细胞中，DNA复制通过酶的作用，在DNA双链上建立一个新的互补链，生成两个完全相同的DNA分子。
2. 基因转录问题：基因转录是什么过程？主要酶有哪些？简要描述转录的过程。
答案：基因转录是指将DNA中的基因信息转录成mRNA的过程。
主要酶有RNA聚合酶和辅助因子。
转录的过程分为三个阶段：起始、延伸和终止。
起始阶段是RNA聚合酶与DNA结合，形成转录起始复合物；延伸阶段是RNA聚合酶沿DNA模板链合成mRNA链；终止阶段是mRNA链与RNA聚合酶和DNA分离，形成终止转录复合物。
3. 翻译过程问题：翻译是指什么过程？主要的遗传密码是什么？简要描述翻译的过程。
答案：翻译是指将mRNA中的核酸序列转译成蛋白质的过程。
主要的遗传密码是以三个核苷酸为一个密码子，共有64种可能的密码子，编码了20种氨基酸和一个终止信号。
翻译的过程分为起始、延伸和终止三个阶段。
起始阶段是在起始密码子AUG的指导下，启动翻译过程；延伸阶段是tRNA带着相应的氨基酸与mRNA上的密码子互补配对，合成蛋白质链；终止阶段是遇到终止密码子时，翻译终止，释放蛋白质。
4. DNA重组问题：DNA重组是指什么过程？主要的DNA重组方式有哪些？简要描述DNA重组的过程。
答案：DNA重组是指在细胞中不同DNA分子之间交换DNA片段的过程。
主要的DNA重组方式有两个：同源重组和非同源重组。
同源重组是指两个同源染色体或同一个染色体上的两个同源DNA片段之间的重组；非同源重组是指不同染色体或同一染色体上的非同源DNA片段之间的重组。
DNA重组的过程包括DNA切割、DNA片段交换和DNA连接三个步骤。
分子生物学1000题绝对经典
〔绝对经典强烈推荐〕分子生物学1000题！分子生物学试题1. 证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是：肺炎球菌在老鼠体内的毒性和T2噬菌体感染大肠杆菌。
这两个实验中主要的论点证据是：( ) ---(选择题)2. 1953年Watson和Crick提出：(DNA双螺旋结构模型 ) ---(选择题)3. 双链DNA中的碱基对有：( ) ---(选择题)4. DNA双螺旋的解链或变性打断了互补碱基间的氢键，并因此改变了它们的光吸收特性。
以下哪些是对DNA的解链温度的正确描述：( ) ---(选择题)5. DNA的变性：( ) ---(选择题)6. 在类似RNA这样的单链核酸所表现出的“二级结构”中，发夹结构的形成：( ) ---(选择题)7. DNA分子中的超螺旋：( ) ---(选择题)8. DNA在10nm纤丝中压缩多少倍(长度)? (7 ) ---(选择题)9. DNA在30nm纤丝中压缩多少倍?(42 ) ---(选择题)10. DNA在染色体的常染色质区压缩多少倍?( 8400) ---(选择题)11. DNA在中期染色体中压缩多少倍?( ) ---(选择题)12. 组蛋白的净电荷是：( ) ---(选择题)13. 核小体的电性是：( ) ---(选择题)14. 当新的核小体在体外形成时，会出现以下哪些过程?( ) ---(选择题)15. 1953年Watson和Crick提出：( ) (e)分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变 ---(选择题)16. 当一个基因具有活性时：( ) ---(问答题)17. 在高盐和低温条件下由DNA单链杂交形成的双螺旋表现出几乎完全的互补性，这一过程可看作是一个复性(退火)反应. ---(判断题)18. 在核酸双螺旋(如DNA)中形成发夹环结构的频率比单链分子低。
发夹结构的产生需要回文序列使双链形成对称的发夹，呈十字结构。
---(判断题)19. B型双螺旋是DNA的普遍构型，而Z型则被确定为仅存在于某些低等真核细胞中。
精编分子生物学实验的常见问题与解决方案资料
分子生物学实验的常见问题与解决方案-1一、Southern杂交问题1：电泳后发现凝胶中DNA扩散，导致结果难以确定，如何解决这一问题？解决方案：（1）在操作上：电泳时隔孔上样，电泳后要对凝胶及时处理使凝胶干燥；（2）琼脂糖的质量应该较好，尤其是不应含有内切酶，否则有时将使低拷贝数基因的杂交结果难以解释。
问题2：传统方法中转膜不完全的问题如何克服？解决方案：经典的向上转移法会使凝胶短时间内变薄,此时即使延长转移时间至24小时以上,也不能使大分子DNA良好地转移出去,因此,转膜不完全。
向下转膜法由于不需在吸水纸上增加重量,凝胶基本不变形；加之吸水纸的吸力与水受到的重力方向一致,故可以良好地完成DNA的转移,它不需要特殊的仪器,转移速度较快,转移效率高。
利用地高辛标记探针进行 Southern 杂交时，对于大于15kb的 DNA片断，转膜之前用盐酸进行脱嘌呤可以促进转膜效率, 但脱嘌呤过度可导致分子量相对较小的 DNA 被打断成过小的片段而难以和尼龙膜结合。
如果实验转膜过程中同时含有大于 15kb的DNA(通常为基因组)和小片段DNA(通常是基因组酶切产物)，那么在转移的过程中倾斜容器，仅使凝胶上半部分浸泡于盐酸，这样既可以提高大片断 DNA 的转移效率，又不会打碎小片段DNA。
另外，等采用琼指糖凝胶直接杂交的方法，来解决这一难题：以转基因鼠的检测为例，实验步骤如下：1.转基因鼠的建立：以鼠乳清酸蛋白(WAP)基因5’调控区指导人G-CSF基因为构件，建立转基因小鼠。
转基因小鼠的检测采用剪取鼠尾DNA做Southern进行鉴定。
2.琼脂糖凝胶直接杂交:(l)用BanHI(150U)对由假孕鼠产生的仔鼠剪尾提取基因组DNA10μg酶切过液，取少量电泳检查酶切完全后，上样电泳8小时，(2)将电泳槽板连同凝胶置50℃放置3小时，用镊子轻轻揭起凝胶，放于变性液(0.5MNaOH，0.5MNaCl)20分钟，转置中和液(0.5MTrisHCl，0.15MNaCl)20分钟，将胶放于玻璃板上沥干液体，室温放置30分钟。
分子生物学问答题
答：RNA编辑是某些RNA，特别是mRNA前体的一种加工方式，如插入、删除或取代一些核苷酸残基，导致DNA所编码的遗传信息的改变，因为经过编辑的mRNA序列发生了不同于模板DNA的变化。（介导RNA编辑的机制有两种：位点特异性脱氨基作用和引导RNA指导的尿嘧啶插入或删除）
答：pribnow box是原核生物中中央大约位于转录起始位点上游10bp处的TATA区，所以又称作-10区。它的保守序列是TATAAT。
13、简述mRNA常以多顺反子的形式存在。真核生物mRNA一般以单顺反子的形式存在；2，原核生物mRNA的转录与翻译一般是偶联的，真核生物转录的mRNA前体则需经转录后加工，加工为成熟的mRNA与蛋白质结合生成信息体后才开始工作；3，原核生物mRNA半寿期很短，一般为几分钟，最长只有数小时。真核生物mRNA的半寿期较长，如胚胎中的mRNA可达数日；4，原核与真核生物mRNA的结构特点也不同，原核生物的mRNA的5’端无帽子结构，3’端没有或只有较短的poly A结构。
分子生物学问答题
1、请定义DNA重组技术和基因工程技术
答：DNA重组技术：目的是将不同的DNA片段（如某个基因或基因的一部分）按照人们的设计定向连接起来，然后在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。基因工程技术：是除了包含DNA重组技术外还包括其他可能是生物细胞基因结构得到改造的体系，基因工程是指技术重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。
答：1，DNA的一级结构，就是指4种核苷酸的连接及排列顺序，表示了该DNA分子的化学成分；2，DNA的二级结构是指两条多核苷酸连反向平行盘绕所形成的双螺旋结构；3，DNA的高级结构是指DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构。
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Section A 细胞与大分子简述复杂大分子的生物学功能及与人类健康的关系。
Section C 核酸的性质1.DNA的超螺旋结构的特点有哪些？A 发生在闭环双链DNA分子上B DNA双链轴线高卷曲，与简单的环状相比，连接数发生变化C 当DNA扭曲方向与双螺旋方向相同时，DNA变得紧绷，为正超螺旋，反之变得松弛为负超螺旋。
自然界几乎所有DNA分子超螺旋都为负的，因为能量最低。
2.简述核酸的性质。
A 核酸的稳定性：由于核酸中碱基对的疏水效应以及电荷偶极作用而趋于稳定B 酸效应：在强酸和高温条件下，核酸完全水解，而在稀酸条件下，DNA的核苷键被选择性地断裂生成脱嘌呤核酸C 碱效应：当PH超出生理范围时（7-8），碱基的互变异构态发生变化D 化学变性：一些化学物质如尿素，甲酰胺能破坏DNA和RNA二级结构中的而使核酸变性。
E 粘性：DNA的粘性是由其形态决定的，DNA分子细长，称为高轴比，可被机械力和超声波剪切而粘性下降。
F 浮力密度：1.7g/cm^3,因此可利用高浓度分子质量的盐溶液进行纯化和分析G 紫外线吸收：核酸中的芳香族碱基在269nm 处有最大光吸收H 减色性，热变性，复性。
思考题：提取细菌的质粒依据是核酸的哪些性质？质粒是抗性基因，，在基因组或者质粒DNA中用碱提取法。
Sectio C 课前提问1.在1.5mL的离心管中有500μL，取出10 μL稀释至1000 μL后进行检测，测得A260=0.15。
问（1）：试管中的DNA浓度是多少？问（2）：如果测得A280=0.078, .A260/A280=？说明什么问题？(1)稀释前的浓度：0.15/20=0.0075稀释后的浓度：0.0075/100=0.75ug/ml（2）0.15/0.078=1.92〉1.8，说明DNA中混有RNA样品。
2.解释以下两幅图（native:非变性的；denatured:变性的）图一表示dsDNA和RNA的热变性，中间的Tm值表示解链温度。
随着温度的升高,DNA和RNA逐渐变性形成单链，因此光吸收率逐渐增大，然而随着温度的升高RNA中双链部分的碱基堆积逐渐减少，其光吸收率不规则地增大。
较短的碱基配对区域具有更高的热力学活性，比较长的区域变性快。
图二表示的是快速慢速降温下的DNA复性，在温度缓慢下降时，DNA可以经碱基配对逐渐形成双链，但在快速降温时，DNA只形成局部区域的dsDNA，经碱基配对或者在DNA内部或者DNA之间短的互补区域的退火而形成，因此A260的下降很小。
Sectio E 提问大肠杆菌的DNA聚合酶主要有哪几种？它们有哪些特点？DNA聚合酶I：切除引物，修复DNA聚合酶II：修复DNA聚合酶III：复制Section E DNA复制1.细胞周期(The cell cycle)（1）什么是细胞周期？细胞周期包括DNA复制后的细胞分裂，即从一个母细胞产生两个子细胞。
（2）细胞分裂是有序的还是无序的？为什么？细胞周期是一个有序的过程，受细胞周期机制的控制。
2.检验点及其调控(Checkpoints and their regulation)（1）细胞如何从G0进入G1？G0期是指非增殖的休眠状态，称为沉默期。
G1期有一限制点（R点）细胞会对环境进行评估，然后决定是否进入另一个分裂周期。
细胞在到达R点之前具有胞外生长分子-促细胞分裂原即可使细胞从G0进入G1期。
（2）限制点（R点）G1期，细胞会对环境进行评估，然后决定是否进入另一个分裂周期，G1期的这一点称为限制点。
Section F DNA损伤、修复与重组思考题（1）5’-GTATCTTCTGATGGCTCGTGTACAAACACG-3’3’-CATAGAAGACTACCGAGCACATGXXXGTGC-5’根据Holliday 模型在什么时候可以被修复？该损伤的DNA链“XXX”部分本为“TTT”，修复时与另一个正常的DNA 分子同源重组，“XXX”段将通过重组被正常的姐妹链上相应区域的“TTT”替代修复，而正常链上因此产生的缺口会被个填平。
因为它的对面没有损伤，可通过正常的切除去掉，这样子就修复了。
（2）设计实验以区别细菌遗传转化转移中的转化、转导和结合的过程。
下面列出可使用的工具：（1）合适的突变菌株及其培养基。
（2）DNA酶。
（3）两种滤板，一种滤板能让游离的DNA通过，不可让细菌和病毒通过；另一种滤板只能持留细菌。
（4）一种是插入滤板使其分隔成两个空间的玻璃容器（如U型管）。
请写出实验设计并预期3种遗传转移过程的结果。
Section Kω亚基：ω亚基的功能尚不清楚,也有人认为ω亚基对于RNA聚合酶的结构和功能没有太大的影响。
问题：（1）什么是启动子？上游？下游？转录起点？启动子：RNA聚合酶结合到待转录序列上游的特定起始位点，长约40bp转录起始点：CGT/CAT,G比A更常见，被称为+1位点。
（2）原核生物δ70 启动子有哪些特点？大肠杆菌最常见的δ因子，由40-60bp的序列组成。
，含有RNA聚合酶特异性结合和转录起始所需的保守序列。
转录起始位点为+1位点，CGT/CAT，-10序列为TATAAT,也叫pribnow框，-35序列为TTGACA，也叫sextama框。
（3）原核生物的转录是如何终止的？基因3’端自身互补的序列会在RNA中形成发夹结构作为终止子。
发夹的茎部通常（G/C）含量较高，使其稳定性强，从而使聚合酶从此停顿。
发夹之后通常是4个或更多的U碱基，导致RNA与反义DNA的弱结合。
有利于RNA链解离，从而终止转录。
分析题以下是一段原核生物的DNA序列，请找出以下功能位点，并说明理由：(1) 一个启动子；（2）一个转录起始位点；（3）一个转录起始密码子；（4）一个转录终止密码子；（5）一个转录终止子。
GAATTCCGGCGGCGGGGTTTTCATTATTATGATCGTTGACATGGGACA AGGGGCTCCTATAAT AGGTGCAT TTGT AGGAGGT GTGGCCAC ATG ATA GCG （-35序列）（-10序列）启动子/+1起始位点（SD 序列）（起始密码子）+1 CGTCGAGGCATTCAGGACCGATATTGTCATATTGCCAGCATGCTGCAG CGCGCCAACTTAGTTACAACTTATACGATGATTTTAAAAAAAGAATATCA AATAGCCATCCACCCGAAAGACCACCGCAAGTATCGGTACGATCGTACCAGCACACACCACAGTCGCCAGTCTGTTACCAAA TAATAA AGTTGATAA TTAATTCACATCTACCTGGGTAACCCAGGTAGATG TGAA TTTTTAGAATT C （终止密码子）（转录终止子）Section L 原核生物的转录调控分析题含中性碳源（例如甘油）的液体基本培养基培养E.col i不能诱导lacZ操纵子。
如果一个小时后在培养基中加入乳糖，然后再隔一段时间加入过量的葡萄糖，那么对lacZ操纵子的表达会有什么影响？答：在最初的一小时内没有诱导物（乳糖）的存在，所以lac操纵子不能表达。
加入乳糖后，E.col i本身含有的低量的透性酶使其可以吸收乳糖，β-半乳糖苷酶催化一些乳糖成为异乳糖，异乳糖作为诱导物结合到乳糖阻抑物上，引起阻抑物构象变化失活，lac操纵子经诱导表达，一段时间后加入的大量葡萄糖导致分解代谢阻遏，乳糖操纵子不能被CRP激活，使lac操纵子不能表达。
思考题：1.原核生物基因表达调控的特点是什么？原核生物基因表达的单元是操纵子，包括结构基因，调控基因和调控元件。
原核基因的编码区是连续的，没有内含子和外显子，所以转录后不用加工，长度与编码区相等，转录和翻译都在细胞质，且边转录边翻译。
2.简述色氨酸操纵子的阻遏系统和弱化系统。
阻遏系统：色氨酸阻抑物是含有两个亚基的二聚体，当色氨酸与阻抑物结合形成复合物后与色氨酸操纵子的操纵基因位点特异性相互作用，通过终产物抑制自身的合成，将转录的起始抑制大约70倍。
弱化系统：RNA聚合酶在DNA模板的前导肽编码序列末端处停顿。
核糖体起始前导肽翻译时，聚合酶继续转录RNA。
如果核糖体在色氨酸密码子上停顿（如当色氨酸含量低时），它减少了用于碱基配对的互补前导序列的供应，形成替代了弱化子发夹结构的另一个DNA 发夹结构。
最终转录不终止。
如果核糖体不在色氨酸密码子上停顿（如当色氨酸含量很高时），弱化子发夹就能形成，转录将提前结束。
3.什么是葡萄糖效应？简述cAMP-CAP的作用。
葡萄糖效应：在葡萄糖没有被利用完之前，乳糖操纵子就一直被阻遏，乳糖不能被利用，这是因为葡萄糖的分解物引起细胞内cAMP含量降低，启动子不能释放cAMP-CAP蛋白，RNA聚合酶不能与乳糖的启动基因结合，以至转录不能发生，直到葡萄糖被利用完后，乳糖操纵子才进行转录，形成利用乳糖的酶，这种现象称葡萄糖效应。
cAMP-CAP作用：当葡萄糖缺乏时，细胞内cAMP水平上升，CAP结合到cAMP上。
cAMP-CAP复合物可结合到RNA聚合酶结合位点上游的乳糖操纵子的启动子P lac上，引起DNA900的弯曲，增强了RNA与启动子的结合，使转录效率提高50倍。
下面哪些物质是乳糖操纵子的诱导物？（选择题）1）乳糖2）密二糖3）O-硝基苯酚-β-半乳糖苷（ONPG）4）异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG) 5）异乳糖答：1），4),5)分析题现分离了一DNA片段，可能含有编码多肽的基因的前几个密码子。
该片段的序列组成如下：5‘-CGCAGGATCAGTCGATGTCCTGTG-3’3’-GCGTCCTAGTCAGCTACAGGACAC-5’(1)哪一条链作为模版链；3‘-5‘(2)mRNA的顺序是什么？5‘CGCAGGAUCAGUCGAUGUCCUGUG-3’(3)此mRNA能形成二级结构吗？能，有碱基配对(4)翻译从哪里开始？朝哪个方向进行？AUG开始，AUGUCCUGU延伸(5)此DNA最可能是从原核细胞还是真核细胞中分离(SD序列：AGGA) ？原核生物有SD序列Section M 真核生物的转录1.真核生物的聚合酶有哪几种？用什么方法把它们区分开来？它们的性质和功能是什么？RNA聚合酶I，II，III。
用真菌毒素——a-鹅膏蕈碱区分。
（1）负责大多数rRNA 前体的合成；(2)负责mRNA前体和一些小核RNA的合成；（3）负责5srRNA 前体，tRNA前体。
一些sRNA以及细胞质RNA前体的合成。
2.真核生物的聚合酶和原核生物的聚合酶有何异同点？都不需要引物。
只需要前体核苷酸A,U,G,C。
沿5‘-3’方向合成RNA。
与细菌聚合酶不同，真核生物在与DNA结合是需要辅助因子。