iQ5校正标准流程
仪器设备校正与管理流程
重庆国虹塑胶制品有限公司编号WI-DZ-007版本 1.0名称生效日期2012/11/26 仪器设备校正与管理流程页数1/1一、目的目的：为维持本公司各量测仪器及测试设备(以下简称仪器设备)之精确度与使用寿命，确保量测及测试作业均能正常执行，特订定本程序二、适用范围本公司各仪器设备均适用。
三、职责1、仪器设备的保管使用中：各使用部门。
非使用中：品质部门。
2、仪器设备年度校正计画之执行：各使用单位。
3、仪器设备校正记录的保管使用中：各使用部门。
非使用中：品质部门。
四、定义1、外校：专门机构、国家标准的校验中心。
2、内校：本公司自行校验。
3、免校：不直接影响产品品质或仅供参考用的仪器设备，免予校验。
4、停用：校（复）验不合格、停用状态的仪器设备。
5、报废：无法维修的仪器设备。
6、周期：外校仪器设备周期一年，内校仪器设备周期半年。
五、内容1、仪器设备校正作业流程图：附件一。
2、量测标准追溯体系：附件二。
3、仪器设备量测标准必须追溯至国家或国际标准。
4、当无法追溯至国家或国际量测标准时，仪器设备使用单位应提供足够的证明，以显示其量测结果之正确性。
例如参加不同使用单位的比对或适当之能力校验。
5、仪器设备资料建立与借出：（1）品保单位针对公司内使用于检测、量测与试验之设备，按本公司财产编号原则加以编号管理。
（2）所有仪器设备均需建立，并纳入「仪器设备管理总表」、「仪器设备资料表」管制。
（3）各使用单位得依相关规定，予品保单位办理借出使用，并须妥善保管。
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压力传感器校准流程
压力传感器校准流程压力传感器是一种用于测量压力变化的设备，广泛应用于工业控制、汽车制造和医疗设备等领域。
为确保传感器的准确性和可靠性，进行校准是必不可少的步骤。
本文将介绍压力传感器的校准流程，以确保其正常工作。
1. 概述校准是指通过与已知压力源比较，确定传感器输出与实际压力之间的误差，并进行相应的补偿调整。
压力传感器校准流程分为以下几个步骤：准备工作、校准设备准备、校准参数设置、校准执行、数据处理及报告生成。
2. 准备工作在进行压力传感器校准之前，需要准备好以下事项：- 校准设备：压力源、数字压力计等。
- 校准环境：确保校准环境的温度、湿度和压力稳定，并满足校准要求。
- 校准记录表格：用于记录校准过程中的各项参数和结果。
3. 校准设备准备将压力源和数字压力计连接到校准系统中。
确保连接稳固可靠，并检查设备的运行状态。
4. 校准参数设置在校准系统中，设置校准参数，包括校准压力范围、校准步长和校准时间间隔等。
这些参数需要根据具体的传感器型号和要求进行设置。
5. 校准执行a) 将待校准的传感器连接到校准系统中，并确保连接正常。
根据校准要求，设置待校准传感器的工作模式和参考输出值。
b) 通过调节校准压力源的输出，分别施加不同的压力值到待校准传感器上。
c) 记录每个压力点的校准结果，包括传感器输出和实际压力值，同时记录环境条件。
d) 根据校准结果，判断传感器的误差范围，并进行修正计算。
e) 重复以上步骤，直至完成所有校准点的测试。
6. 数据处理及报告生成将校准结果输入到数据处理软件中，进行数据分析和处理。
根据校准结果，生成校准报告，包括误差曲线图、校准曲线和修正参数等信息。
校准报告应包含校准日期、环境条件和校准人员等必要信息。
7. 结论通过以上流程进行压力传感器的校准，可以获得准确和可靠的测量结果。
校准后的传感器可以被广泛应用于各种工业和科研领域，确保系统的稳定性和精确性。
总结压力传感器校准是确保其准确性和可靠性的重要步骤。
iq信号校准算法
iq信号校准算法
IQ信号校准算法是通信系统中的重要组成部分，用于纠正信号传输过程中的失真和误差。
在无线通信系统中，信号常常会受到多种因素的影响，如噪声、干扰、失真等，导致接收到的信号质量下降，无法准确还原原始信息。
因此，需要进行信号校准，以恢复信号的原始特征。
IQ信号校准算法主要分为两个步骤：IQ不平衡校准和相位校准。
IQ不平衡校准是为了纠正信号传输过程中的幅度和相位失真。
在发射端，信号被调制为IQ分量，分别对应于正弦和余弦波。
在接收端，这两个分量被分别接收并解调，但往往会因为硬件设备的不完全对称而导致幅度和相位的不平衡。
这种不平衡会导致信号失真，影响通信质量。
因此，需要进行IQ不平衡校准，以恢复信号的原始幅度和相位特征。
相位校准是为了纠正信号传输过程中的相位误差。
在无线通信系统中，信号的传输会受到多径效应和大气条件等因素的影响，导致信号的相位发生变化。
这种相位误差会导致信号的解调出现问题，影响通信质量。
因此，需要进行相位校准，以恢复信号的原始相位特征。
在实际应用中，IQ信号校准算法可以通过硬件设备实现，也可以通过软件算法实现。
硬件设备可以通过调整电路参数来纠正失真和误差，而软件算法则可以通过对接收到的信号进行分析和处理，计算出失真和误差的大小，并生成校准参数用于纠正失真和误差。
总之，IQ信号校准算法是通信系统中的重要组成部分，可以有效提高信号的传输质量和通信可靠性。
在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的校准算法和实现方式。
水准仪i角检验和校正方法
水准仪i角检验和校正方法什么是水准仪的i角水准仪的视准轴在垂直方向与水准轴的夹角。
水准仪产生i角变化的原因：是仪器本身的结构与外业工作条件的变化而致仪器中的十字丝是固定在上下的V形槽中下面的V形槽由弹簧支撑着上面是一个压紧调节螺丝。
由于因内部与外界环境条件的变化如温度、湿■度、震动的变化它会产生i角微小的变化或者由于其它内应力的变化而产生不同程度的变化也是不足为奇的。
在用户说明书中已明确水准仪的i角可由用户自行调整。
请参照水准仪说明书自行调整。
现在再扼要地介绍水准仪i角的测定办法如图所示将水准仪置平在二支水准标尺的中间仪器距标尺约30 米或40米前后大约等距离读取标尺上的读数得到二点的高差值。
搬迁器至二支标尺的一内侧或外侧均可此时仪器至标尺的距离分别为近距离的标尺只是几米而远距离的标尺已是几十米。
同样测量这二点的高差值如果二次测得的高差相等说明仪器i角为零。
高差不等就说明仪器存在着i角的误差。
如：仪器在中间读取A尺的读数a1 0962 B尺的读数b1 1062 仪器在一侧读取A尺的读数a2 0835 B尺的读数b2 0933hi 1062 0962 0100 h2 0933 0835 0098 h 0098 0100 2 mm按小角公式计算i角i △• p s = 2 mm X 206265” / 60000mm 二41 / 6 ”二7”i角的测定也可以按照将水准仪可以放置在二支水准标尺二外侧法测定仪器的i角。
道理是一样的正确的a4值是a4 = aF - a2' + a3'水准仪i角的允许误差水准仪i角允许误差的概念应该说有三方面的涵义也是三种情况下的不同要求1. 出厂时工厂调校的允许误差、2. 用户调校时的允许误差、3. 测量等级或规定所要求的允许误差。
如彳来卡NA2 i角的允许误差出厂调校为±8”用户调校为±20” 但是根据我国国家水准测量规范和工程测量规范的要求用于一、二等水准测量的水准仪仪器的i角不应超过15” 用于三、四等水准测量的仪器仪器的i角不应超过20” o所以在用彳来卡水准仪NA2加GPM3测微分划板进行一、二等水准测量时仪器的i角必须调校至15”以内在进行三等以下水准测量时仪器的i角应在20”以内。
精密仪器校准手册校准步骤和精度要求
精密仪器校准手册校准步骤和精度要求1. 简介精密仪器在现代科学研究和工业生产中起着关键作用。
为了确保其准确性和可靠性，需要进行定期校准。
本文将介绍精密仪器的校准步骤和精度要求，以确保准确的测量结果和可靠的使用。
2. 校准步骤下面是常见的精密仪器校准步骤，供参考：2.1 准备工作在进行校准之前，需要进行一些准备工作，包括仪器的清洁、环境的控制以及校准标准的准备等。
确保仪器工作正常，并且符合校准所需的条件。
2.2 校准标准的选择选择合适的校准标准非常重要。
校准标准应具有稳定性、可追溯性和高精度等特点。
根据仪器的类型和测量参数，选择合适的校准标准进行校准。
2.3 进行校准根据仪器的校准要求，按照校准标准的操作指南进行校准。
校准过程中需注意仪器的稳定性和准确度，确保每一步的操作都按照标准要求进行。
2.4 记录校准结果校准过程中应及时记录各项校准数据和结果。
包括校准前后的仪器读数、误差值、标准差等信息。
校准完成后应将校准结果进行整理，并存档备查。
3. 精度要求精密仪器的校准精度要求根据具体的使用场景和行业标准有所不同。
以下是一些常见的精度要求示例：3.1 仪器误差校准后的仪器误差应控制在规定的范围内。
例如，某精密仪器在特定测量范围内，其误差应在±0.1%以内。
3.2 适用标准校准所采用的标准应具备更高的精度。
例如，某仪器的校准标准应具有更高的精度，如±0.05%以内。
3.3 校准间隔校准间隔应根据仪器的稳定性和使用环境进行设定。
一般而言，校准间隔可按年度或半年度进行。
对于某些特定行业要求更高的精密度的仪器，校准间隔可更加频繁。
3.4 确定合理的控制限根据精密仪器的校准结果，可以确定合理的控制限范围。
控制限应保证仪器在正常使用过程中的测量结果可靠，并及时发现异常情况。
4. 结论精密仪器校准是确保其准确性和可靠性的重要环节。
通过严格的校准步骤和精度要求，可以确保仪器的测量结果准确可靠，从而为科学研究和工业生产提供高质量的数据支持。
理化检验仪器设备校准规程是什么样的
理化检验仪器设备校准规程是什么样的化学分析仪器设备校准规程一般包括以下步骤：
（1）确定校准人员。
校准规程必须明确规定谁来执行校准。
（2）检查仪器设备。
校准前需要检查仪器设备的性能，以确保仪器
设备状况良好，再接着校准。
（3）准备校准工作。
校准规程中要做好仪器设备校准前的准备工作，如准备校准用品、检测仪器设备的性能等。
（4）执行校准。
根据规定，用正确的方法执行校准。
（5）记录校准结果并处理问题。
根据校准结果，记录校准结果，并
处理出现的问题，档案记录所有的校准数据。
（6）定期校准。
定期对仪器设备进行校准，以保证它的准确性和正
确性。
计量器具校准程序
计量器具校准程序一、目的：为使公司新购与使用的计量器具（设备），保持正确度与精确度，避免因磨损或其他误差而影响品质判断。
二、范围：本规定适用于检验、测量、试验设备和计量标准设备的校准。
三、职责：3.1品质部负责检测设备、计量设备的送检、封存、启用、降级、报废、限用等管理和控制，制定校准/验证计划表，建立台帐，状态标识等质量记录。
3.2品质部检验员负责试验室检测设备的维护保护，并编制有关检测设备的操作规程和保养规程，校验规程。
3.3品质部负责编写计量器具内部校验规程，内校员负责对公司所有计量器具进行定期校准并建立计量器具履历表。
3.4使用部门：日常维护与异常送检，并协助工艺工程部做好台账工作。
四、定义：4.1免检验4.1.1不用于产品品质上的量测，仅限于参考等使用，以及对计算数据无严格准确度要求的计量设备。
4.2外校4.2.1凡需校验，而本公司无法自行校验的计量设备都要外校。
4.3新设备4.3.1凡需校验，而购入时间不到一年新设备。
五、作业流程：5.1校验系统需求鉴别：5.1.1品质部应查清进料、过程、成品等各阶段检验作业所需的计量器具（设备），并依料品的特征要求审查其适用性（测量项目、范围），并确定准确度和精确度。
5.1.2 清查与审查后，由工艺工程部建立《计量器具清单》和《量规器具履历表》。
5.1.2.1如属于免校验者，品质部确认后贴上黄色“免校”。
5.1.3校准周期：5.13.1外校和内校周期：1年。
5.2新购计量器具（设备）验收程序：5.2.1需求单位：申请购计量器具（设备），填写《申购单》，总经理审批。
5.2.2采购人员：依据《采购管理程序》订购，并于交货时通知相关部门验收。
5.2.3验收：5.2.3.1规格与精度的验收：如计量设备购入时，已有国家计量单位发“鉴定合格证”者，或提供数据符合“合格”接收，则可以“合格”验收。
否则，应送外计量校准或本公司自行计量校准。
5.2.3.2相关文件验收：计量器具（设备）须附件使用或操作说明书.(相关部门保存拷贝件，原件由品质部保存)。
IQ调试手册中文版
IQ10至IQ35外壳为铝合金，紧固件为不锈钢，推力型底座为铸铁材料。IQ40至IQ95的外壳为铝合金和铸铁，紧固件为不锈钢，推力底座为铸铁材料。
用户必须保证其操作环境和任何执行器外围材料的安全性不受影响，不应由执行器本身来承担保护作用。在适当的情况下用户必须确保针对其操作环境对执行器进行适当的保护。
3.4显示-报警指示
IQ显示屏的上半部分有四个图标，分别为阀门、控制系统、执行器和电池报警指示。每个图标都代表某个报警条件。也可使用标准帮助屏幕来检查执行器的操作和报警状态。
(请参见第63页帮助屏幕)
阀门报警
图4.4
阀门报警图标，图4.4是显示由于阀门故障，使力矩超出执行器设定值而导致执行器“跳断”。(参见第25页[tO]/[tC])
4.1 IQ10至IQ35
A和Z型推力底座
卸下驱动轴套以备加工
图5铜制轴套装入推力底座
将执行器倒向一侧，卸下两个固定底座的螺钉，将带有轴承部件的驱动轴套全部卸下。
加工驱动轴套之前，先按下述方法卸下轴承：
1.找到并松开钢制轴承挡圈上
的平头螺上拧下轴套挡圈,
并将轴承滑出，要保证轴承
如果需要进一步有关RotorkIQ系列执行器的资料和指南，我们将根据需要提供。
如果执行器不能立即安装，则应将它保存在一个干燥的地方，直到准备接线。
如果执行器已安装好，但还没有接线，那么建议您将电缆入口的塑料塞换成缠有聚四氟乙烯的密封金属塞。
如无意外，Rotork产品的双密封结构能很好地保护部的电气元件。
图2
现场控制
顺时针旋转红色选择器旋钮至现场位置，相邻的黑色旋钮可分别转至开和关的位置。逆时针旋转红色旋钮则停止运行。
远程控制
逆时针旋转红色选择器旋钮至远程位置，远程控制只能用于开和关，此时顺时针旋转红色旋钮仍可使执行器停止运行。
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Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXXiQ™5 校正:内容何时需要进行校正. . . 2进行校正前的准备进行校正的必备物品. . . .2装配校正前的准备. . . 3标准流程标准流程的小结. . . 4具体的操作说明. . . 5.5.Mask.6.Background..Well Factors. . . 7Pure Dyes. . . 8各种校正后生成的文件. . . 10文件的格式和命名方式. . . 10文件的位置. . . 11查看校正文件. . . 11校正结果的评估. . .1212..Masks.12.Background..Well Factors. . . 1213Pure..Dyes.13.RMEFormat..Identifying Calibrated Fluorophores. . . 13Fluorophore Reference Tables . . . 14Using the iQ5 RME (Pure Dye) Decoder. . .15RMEs. . . 16EvaluatingSYBR Green的校正. . . 17多条FAM探针的校正 . . . 17iQ5中不正确的校正. . . 18校正过程中需要的Consumable及货号 . . 19Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX何时需要进行校正:在下列的情况下需对iQ5进行校正:1. 当iQ5进行安装时.2. 当光路系统的任一元件被更换的情况下. 这些元件包括:a. 灯b. 滤光片c. 光学热盖d. 光学模块e. CCD检测器 (需送回原产地维修)3. 当原先控制iQ5的PC更换且原来的校正文件丢失的情况下.建议将校正文件进行备份 (参见第12页,校正文件的位置)4. 当软件给出提示信息时. 背景校正因子和永久孔间校正因子的文件有效期为30天,当软件在运行含有过期的背景校正因子和永久孔间校正因子文件时会给出提示信息.进行校正前的准备:必须准备好下列的物品才能进行校正:1. iCycler iQ Calibrator Dye Solution Set2. iCycler iQ External Well Factor Solution(与iQ Calibrator Dye Solution Set在一起)3. 3块96孔PCR反应板或其他的PCR耗材4. QPCR专用封膜或其他封PCR反应板的方法进行校正时的2个原则:1.2.(包括PCR反应管或板以及封膜).Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX校正前3块96孔PCR反应板的准备:准备3块96孔反应板(或其他PCR耗材)并按如下的方式分别进行标记:1. Plate A : 每孔内都加入孔间因子校正液( well factor solution)a. 将10x 的External Well Factor Solution用水稀释至1x.b. 将上述1x的External Well Factor Solution以等体积加入每个反应孔内,加入的体积数与以后进行实验时采用的总体积数一致.c. 采用以后进行实验时相同的封膜方法进行封膜.2. Plate B也可以采用96个空的反应管 (反应管内不要加水).3. Plate C Pure dyes.a. 将1x 的calibrator solution以等体积加入到96孔反应板中的8个孔内(建议按列加入),加入的体积数与以后进行实验时采用的总体积数一致.b. 按上述方法加入所有荧光通道对应的calibrator solution.c. 采用以后进行实验时相同的封膜方法进行封膜.Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX校正标准流程的小结:下面是四种类型校正的列表,以96孔板为例.(也可采用PCR反应单管)1. Mask – 96孔每孔内含有well factor solution (Plate A )2. Background – 96孔,每孔内皆空(Plate B )3. Well Factors - 96孔每孔内含有well factor solution (Plate A )4. Pure Dyes – 每一列或排的孔内都含有特定荧光通道对应的Pure dyes进行校正. (Plate C )上述每一个的校正步骤在软件的校正模块里面都有对应的按键(见下图). 一个完整的校正程序必须按照正确的次序完成,该次序就是每个按键在校正模块里的排列顺序,即: (1) Mask, (2) Background (3) Well Factors (4) Pure Dye.Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX具体的操作说明:在进行校正前提前10分钟左右打开iQ5.Mask Alignment:按下图中数字对应的操作完成Mask:1. 将上述Plate A放入iQ5的热循环base部位.2. 切换至软件的Calibration模块的Mask按键.3. 点击Home.4. 点击Filter Position 3 option button.5. 点击Take an Exposure.6. 点击Show Mask.7. 如果在Mask上有粉红色的像素出现, 减少暴光时间再次进行暴光直至Mask没有粉红色的像素出现为止.8. 点击Optimize Mask.9. 点击Save Mask.进行Mask Calibration时的注意事项:1. 如果Mask失败,出现MASK ALIGNMENT FAILS点击Restore FactoryMask调整mask框和96孔尽可能的匹配. 在上图中数字”8”附近的按键可用来调整mask框的位置.Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXXa. 采用 + 和 – 按键调整孔间的距离.b. 采用Up, Down, Left and Right 按键调整mask和96个孔的相对位置.2. 在使用Optimize Mask的功能时由于每次都对mask框进行微调,所以连续使用能获得最佳的Mask效果.3. 完成了Mask的校正后必须点击Save Mask.4. 采用Optimize Mask的功能要比利用肉眼进行优化好的多. 如果你点击了Optimize Mask数次,那么此时Mask的结果已经处于最佳的状态,可以进行保存.Background Calibration:1. 将上述Plate B放入iQ5的热循环base部位.2. 选择封膜方式(见下图).3. 选择PCR耗材种类(见下图).4. 点击Collect Background Factors(见下图).5. 当iQ5完成了背景的校正后, 会弹出一个对话框 "Background CalibrationRun Complete."6. 点击OK退出.Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXXPersistent Well Factor Generation:1. 将上述Plate A放入iQ5的热循环base部位.2. 选择反应体积数(见下图).3. 选择封膜方式(见下图).4. 选择PCR耗材种类(见下图).5. 点击Collect Persistent Well Factors(见下图).6. 当iQ5完成了永久孔间校正因子的校正后,会弹出一个对话框, "PersistentWell Factor Calibration Run Complete".7. 点击OK退出.Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXXPure Dye Calibration:1. 将上述Plate C放入iQ5的热循环base部位.2. 按下列的a方法或b方法进行Pure Dye的校正.a. 在User 1文件夹下选择已经存在的Pure Dye Calibration的设置板或者采用默认的设置板. 在仪器安装时可以选择 Pure DyeCalibration Kit设置板. 注意反应体积, 封膜的种类, 和耗材的类型都要和实际校正实验的条件一致. (见下图)b. 创建一个新的设置板1.) 根据具体Pure Dye校正的情况选择/添加荧光种Array类.2.) 根据Plate C的情况在相对应的位置选择或添加荧光种类.3.) 选择反应体积,封膜种类和PCR的耗材.4.) 保存校正结果最后退出.Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX3. 点击Run Pure Dye Calibration.4. 当iQ5完成Pure Dye Calibration后会弹出一个对话框, "Pure DyeCalibration Run Complete".5. 点击OK并退出.在一次Pure Dye Calibration的过程中,iQ5可以根据一块Pure Dye校正板上荧光种类的情况来进行校正. 不存在使用同一套滤光片的几种荧光分子不能进行校正的光学限制.Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX各种校正后生成的文件:文件的格式和命名方式:所有校正后生成的文件都是以xml的格式保存. 大多数的操作系统会采用IE的方式来浏览这些文件. 这些文件是高度格式化的文本文件.所有校正后生成的文件都自动地以下列的方式进行命名. 黑体字部分是与校正过程中的具体条件相吻合的,该部分的内容可以根据校正的实验条件改变.Masks:在系统中只存在一个mask的校正文件,该文件名为:mask-data.Background:Background_Vessel_Seal_iQ5 Serial #_Base Unit Serial #在系统中只存在一个激活状态下的背景校正因子的文件,该文件的文件名中黑体字的部分与校正时的条件一致.在进行实验时,软件会根据实验中样品板的设置情况自动地选择与之匹配的背景校正因子文件.Well Factors (persistent):Persistent_Vessel_Seal_Volume_iQ5 Serial #_Base Unit Serial #在系统中只存在一个激活状态下的孔间校正因子的文件,该文件的文件名中黑体字的部分与校正时的条件一致.在进行实验时,软件会根据实验中样品板的设置情况自动地选择与之匹配的孔间校正因子文件.Pure Dye:RME_Vessel_Seal_Volume_iQ5 Serial #_Base Unit Serial #在系统中只存在一个激活状态下的Pure Dye 校正文件,该文件的文件名中黑体字的部分与校正时的条件一致.在进行实验时,软件会根据实验中样品板的设置情况自动地选择与之匹配的Pure Dye 校正文件.下面是一个通过校正实际得到的RME文件的文件名:RME_Plates_Film_25ul_575BR 0123_br 12345RME说明这是一个Pure Dye校正后得到的文件.Plates说明在进行校正时采用的是96孔板.Film说明在进行校正时采用的是封膜.Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX575BR 0123 是光学模块的序列号.br 12345 I说明热循环base部分的序列号是582BR 12345Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX校正文件的位置 (建议对该文件夹进行备份):每一个校正后产生的文件都会保存在iQ5下各对应的文件夹内.在校正结束后,可以将这些文件进行备份以免由于PC的更换或故障而导致的数据丢失. 各校正文件的具体保存路径如下:MasksFiles\Bio-Rad\iQ5\MasksC:\ProgramBackgroundFiles\Bio-Rad\iQ5\BackgroundFactorsC:\ProgramWell FactorsFiles\Bio-Rad\iQ5\WellFactorsC:\ProgramPure DyeFiles\Bio-Rad\iQ5\RMEDataC:\Program以前校正后得到的背景校正因子,孔间校正因子和RME文件都会位于一个名为“Backup” 的文件夹内.Ex. C:\Program Files\Bio-Rad\iQ5\RMEData/Backup RME查看校正文件iQ5的软件内置了一个转换器,可以将除mask之外的校正文件的结果转换为可读的格式.查看校正文件的步骤: (1) 在View菜单下选择Calibration Data命令. (2) 按照上述各文件保存的路径查看相应的校正文件.Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX校正结果的评估Evaluating Masks:评价mask最好的方法是对一块每孔含有well factor solution的96孔板进行拍照,然后将此照片与现存的mask进行比对.软件上的Optimize Mask功能是进行mask的最佳工具,只要你按下该功能键数次,那么mask的位置肯定是在最理想的状态下. 不要试图手工进行Mask.在实际的状态下查看xml文件是对于评价mask的结果是没有帮助的.和所有的校正结果文件一样,mask的结果文件内也包含了仪器的光学系统序列号和base的序列号,如果文件内的序列号与仪器本身的序列号不符,那么iQ5不能调用该mask文件进行实验.Evaluating Background Factors:背景校正的结果可以用内置的xml阅读器查看.背景校正的结果按2种形式提供,一种为列表形式,每个数值代表了特定滤光片条件下每孔的数值;另一种形式为96孔板的表格,该方式可以很直观的判断出每孔背景的高低.背景校正后每孔的数值一般是一位或两位的数值,整块板各孔的数值应该比较一致.Evaluating Well Factor:孔间校正后的结果可以用内置的xml阅读器查看.和背景校正的结果类似, 孔间校正的结果按2种形式提供,一种为列表形式,每个数值代表了特定滤光片条件下每孔的数值;另一种形式为96孔板的表格,该方式可以很直观的判断出每孔数值的高低.孔间校正因子的数值位于0~4的范围内时, iQ5软件会认为该孔间因子是有效的.Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXXEvaluating Pure Dye Files (RME, Response Matrix Element): RME Format (when opened in iQ5 Calibration File viewer):RME文件可以用内置的xml阅读器查看.Pure Dye校正的结果也有2种数据输出格式. 第一种形式是完整的列表,其中包含了每种荧光染料经校正后的数值.第二种数据是以表格的形式提供的,其中包含了每种荧光染料经校正后的数值.Identifying Calibrated Fluorophores.如果在上面的表格或列表中没有显示出某种荧光染料的数值,那么说明iQ5并没有对该荧光染料进行Pure Dye校正.Fluor ID:每一种荧光染料在iQ5的软件里都有相对应的ID号.除了用户自定义的荧光染料,该ID号与荧光染料的对应关系是不变的.例如,FAM的ID号就是9.下表是各荧光染料各自对应的ID号以及相对应的滤光片:Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX Fluor IDs (按ID号排序).Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXXiQ5 RME (Pure Dye) 解码器:iQ5 RME解码器的本质就是一个简单的Excel文件,该文件可以帮助我们评价RME文件的质量.这个工作表可以使我们很方便的查看所有进行校正的荧光染料的情况以及荧光分子所采用的滤光片种类,而不用反复对照上述的Fluor IDs对照表.如何使用iQ5 RME解码器1. 在 iQ5 内进入”查看”菜单2. 选择"Calibration"命令3. 进入"RMEData" 文件夹4. 打开需查看的RME文件5. 选中并拷贝表格中每一格的信息. (第一表)6. 点击表格的A1孔并进行粘贴7. 进入解码器的表格, G 列内包含了上述Fluor IDs对照表的信息.Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX解码器内拷贝了信息后的情况见下图:Evaluating RMEs:一般而言,经过RME校正后每个荧光染料的数值在其默认的滤光片位置下数值应该最高.iQ5 RME解码器可以帮助我们对Pure Dye校正的结果进行评价.在荧光种类名称的右侧是该种荧光分子所默认的滤光片种类,该解码器还会用深绿色自动标记出某种荧光分子经过所有滤光片后得到数值中最高的那个值.SYBR Green的校正:对于SYBR Green I ,没有必要进行校正.iQ5包含了SYBR Green I 的固定值,利用该值来进行数据的收集.多条FAM探针的校正(or other fluorophores):在某些条件下,用户会在一次实验中采用多条不同的FAM标记的探针检测不同分子的表达.在这种情况下,可以在进行校正时采用多重FAM的校正方式,即采用同一种Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX分子进行校正,采用FAM1,FAM2分别进行命名.(当然如果是其他的荧光染料也可采取相同的方法)Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXXiQ5中不正确的校正为什么要确保在iQ5上正确的校正?上述的iQ5校正中的4个步骤都非常重要.缺少任何一个步骤的校正都会影响到实验的结果.Mask:如果mask的结果不好,就会导致在实验过程中不能有效的收集数据或采集到的数据不稳定,从而造成复孔实验结果的重复性不好.iQ5的CCD相机将整板的图象数据传输给电脑,而电脑就是根据校正后得到的mask文件来决定上述图象中每孔的位置以及荧光信号的强度. Background Factors:失败的背景校正结果会导致数据的重复性不好,在多重PCR的实验中会产生光谱间的干扰.空的PCR反应管或空的96孔反应板也会产生一定的荧光本底信号,而背景校正因子就是用来补偿该部分荧光本底信号的.如果背景校正的结果不好,那么PCR耗材(PCR反应管,封膜材料等)本身的荧光信号就会影响实验结果.目前背景校正因子稳定性的测试还在进一步的完善中.将来可能可在间隔更久的情况下才需要重新进行校正(目前为间隔30天需重新进行校正).Well Factors:不好的孔间校正因子可能导致实验重复性不好.虽然iQ5可得到相对清晰和一致性良好的图象,但是每套光学系统的孔间还是存在微小的差异,当进行校正取得孔间偏差数据后iQ5就可以彻底消除孔间的偏差.目前孔间偏差校正因子稳定性的测试还在进一步的完善中.将来可能可在间隔更久的情况下才需要重新进行校正(目前为间隔30天需重新进行校正).Pure Dye Calibration:Thermal Cycler: iCycler 582BR XXXXX失败的pure dye校正会导致数据分析过程中base line计算的失败以及在进行多重PCR实验中出现很多奇怪的结果.Pure Dye校正可以使iQ5获得每种荧光染料间的overlap,并在进行数据分析时正确的计算出每个通道荧光信号的强度.进行校正所需的Consumable及货号:170-8792 iCycler iQ Calibrator Dye Solution Set170-8794 iCycler iQ External Well Factor Solution223-9441 96-well 200ml Thin Wall PCR Plates, 25 per box223-9444 Optical Quality Sealing Tape, optimized for use with 223-9441, 100 sheets223-9443 96-well 200ml PCR Plate Caps, for 223-9441, 300 per box Other components of interest:170-8793 iCycler iQ FAM Calibrator Solution, 5 per package170-8795 iCycler iQ HEX Calibrator Solution, 5 per package170-8797 iCycler iQ Texas Red Calibrator Solution, 5 per package170-8799 iCycler iQ Cy5 Calibrator Solution, 5 per package170-8756 Replacement Halogen Lamp170-9753 iQ5 Software Installation Disk。