《中国免疫学杂志》关于彩图处理的有关说明
抗血清制备及抗体效价测定
摘要 (4)【实验过程】 (3)PartⅠ. NDV 抗血清制备 (3)一、实验原理 (3)二、实验仪器、材料和试剂 (4)1. 仪器 (4)2. 材料 (4)3. 试剂 (4)三、方法和步骤 (4)（一）NDV 兔抗血清制备 (4)1. 家兔捉拿方法 (4)2. 家兔固定方法 (4)3. 初次免疫 (5)4. 二次免疫 (5)5. 终末免疫 (6)6. 试血 (6)7. 颈动脉放血 (6)8. 血清分离 (6)9. 抗血清保存 (7)（二）NDV 鼠抗血清制备 (7)1. 小白鼠的捉拿和固定 (7)2. 初次免疫 (7)3. 二次免疫 (8)4. 终末免疫 (8)5. 试血 (8)6．放血 (9)7．血清分离 (10)8．抗血清保存 (10)Part Ⅱ. 琼脂双扩散实验检测抗体效价 (10)一、基本原理 (10)二、实验仪器、材料和试剂 (10)1. 仪器 (10)2. 材料 (10)3. 试剂 (10)三、方法和步骤 (10)1. 灭活鸡新城疫病毒Ulster 2C 株抗原提取 (10)2. 1%琼脂糖配制 (10)3. 倒平板 (10)4. 打孔 (10)5. 稀释抗血清 (11)6. 加样 (11)7. 孵育 (11)8. 结果观察 (11)Part Ⅲ. 酶联免疫吸附试验测定NDV 抗血清效价 (12)一、基本原理 (12)二、实验仪器、材料和试剂 (12)1. 仪器 (12)2. 材料 (12)3. 试剂 (12)三、方法和步骤 (12)1. 鸡新城疫病毒Ulster 2C 株灭活抗原提取 (12)2、抗原包被 (13)3. 封闭 (13)4. 洗板 (13)5. 稀释抗血清 (13)6. 加抗血清 (13)7. 洗板 (13)8. 加酶标二抗 (13)9. 洗板 (13)10. 显色 (13)11. 终止 (13)12. 读数 (14)13. 结果判定 (14)Part Ⅳ. 免疫印迹实验鉴定抗体的特异性 (14)一、基本原理 (14)二、实验仪器、材料和试剂 (14)1. 仪器 (14)2. 材料 (14)3. 试剂 (14)（1）SDS-PAGE 相关试剂： (14)（2）Western blotting 相关试剂： (15)三、方法和步骤 (15)1. SDS-PAGE (15)2. 转膜 (16)3. 免疫检测 (16)（1）膜的封闭 (16)（2）洗膜 (16)（3）加入一抗 (17)（4）洗膜 (17)（5）与二级抗体作用： (17)（6）洗膜 (17)（7）Odessey 近红外成像仪扫描成像 (17)【实验结果及分析】 (17)NDV 抗血清制备及抗体效价测定摘要：抗血清，新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。
多色荧光免疫组化
多色荧光免疫组化近年来，免疫组化技术（Immunohistochemistry，IHC）已被广泛应用于病理学研究。
多色荧光免疫组化（multi-color fluorescence Immunohistochemistry，MF-IHC）是一种多抗性IHC 技术，可以使用多种特异性抗体，同时检测多个标志物在一个切片上不同细胞类型以及细胞器中的同源性和功能性关系，为作出准确诊断和判断提供强大的依据。
本文将简要介绍多色荧光免疫组化技术的工作原理、应用以及发展现状。
一、多色荧光免疫组化工作原理1、抗体过程多色荧光免疫组化技术使用适当的抗体，如多色荧光免疫组化所使用的抗体，可以与细胞类型的不同标记物结合，为多色荧光技术提供了可能性。
2、组化技术为保证抗原检测的准确性，多色荧光免疫组化采用一系列特定的抗体技术，如Diaminobenzidine（DAB）或AEC。
抗体可以与血液、尿液、活细胞、细胞器或者病理标本的特定抗原结合，使它们可以被可见的颜色进行染色，而不同抗原的特异性抗体则可以使用不同的染料进行染色，以保证其清晰度。
3、荧光技术多色荧光免疫组化技术还使用特殊的荧光技术，其中包括使用特异抗体和多色荧光成像技术。
这种技术中，只需使用一种特异性抗体，就可以获得多个抗原的检测结果。
MF-IHC使用特定的荧光标记，将多种抗原特异性抗体和一种特定的抗体荧光素结合在一起，可以在一张切片中同时检测多个抗原，特异性抗体使用不同的荧光颜色标记，以保证其准确性。
二、多色荧光免疫组化的应用1、临床检测由于多色荧光免疫组化可以快速检测多个抗原，在临床实践中得到了广泛的应用，可用于对癌症细胞的表型检测，以及在辅助诊断中的分子病理学检测，用于基因表达的蛋白分析，有助于临床医生有效地选择治疗策略。
2、研究MF-IHC技术还可用于检测各种细胞的功能和结构变化，如细胞凋亡、细胞增殖、细胞迁移等，有助于提高药物和生物分子研究的准确性。
钌红染色和单克隆抗体免疫标记植物叶片中的果胶
林业工程学报，２０２２，７（３）：１００－１０６ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＤＯＩ：１０．１３３６０／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９６－１３５９．２０２１０８０１０收稿日期：２０２１－０８－０９㊀㊀㊀㊀修回日期：２０２１－１１－１０基金项目：国家自然科学基金（３１８７０５５１）；云南省万人计划 青年拔尖人才 项目（ＹＮＷＲ－ＱＮＢＪ－２０１８－１２０）㊂作者简介：李晓宝，男，研究方向为生物质复合材料㊂通信作者：李晓平，女，教授㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｌｘｐ８１０５２５＠１６３．ｃｏｍ钌红染色和单克隆抗体免疫标记植物叶片中的果胶李晓宝，孙振炳，姚曜，汤正捷，李晓平∗（西南林业大学云南省胶黏剂与胶合制品重点实验室，昆明６５０２２４）摘㊀要：果胶是植物组织中重要的化学组成成分之一，但目前关于植物叶片中果胶含量及表征的相关研究较少㊂为了更好地开发植物叶片的应用价值和发展潜力，利用草酸铵螯合法㊁钌红染色及单克隆抗体免疫标记法对６种植物叶片（杨树叶㊁云南松松针㊁刺槐叶㊁榆树叶㊁慈竹叶和大麻叶）中的果胶进行含量测定和表征㊂结果表明：大麻叶㊁杨树叶和榆树叶中的果胶含量（质量分数）较高，分别是１２％ １７％，１０％ １５％和１０％ １７％；刺槐叶和云南松松针次之，为５％ ８％，１．５％ ２．５％；竹叶最少，不足１％；确定了植物叶片中有大量的果胶存在㊂钌红染色和单克隆抗体免疫标记法均可有效表征果胶的分布，即植物叶片中的果胶部分可以被钌红染色，被单克隆抗体标记的果胶成分在紫外荧光照射下有亮光；比较着色程度和荧光亮度，可以看出果胶成分主要分布于叶片的叶肉细胞中㊂经过４种单克隆抗体标记之后，６种叶片中的荧光分布没有显著区别，即４种单克隆抗体能够标记的特定糖分在６种叶片中均有分布，果胶中的糖分是呈混合分布的状态，没有特定的富集区域㊂关键词：果胶；植物叶片；钌红染色；单克隆抗体免疫标记中图分类号：Ｓ７１８．４７㊀㊀㊀㊀㊀文献标志码：Ａ㊀㊀㊀㊀㊀文章编号：２０９６－１３５９（２０２２）０３－０１００－０７ＲｕｔｈｅｎｉｕｍｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｉｍｍｕｎｏｌａｂｅｌｉｎｇｏｆｐｅｃｔｉｎｉｎｐｌａｎｔｌｅａｖｅｓＬＩＸｉａｏｂａｏ，ＳＵＮＺｈｅｎｂｉｎｇ，ＹＡＯＹａｏ，ＴＡＮＧＺｈｅｎｇｊｉｅ，ＬＩＸｉａｏｐｉｎｇ∗（ＹｕｎｎａｎＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＷｏｏｄＡｄｈｅｓｉｖｅｓａｎｄＧｌｕｅＰｒｏｄｕｃｔｓ，ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０２２４，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｅｃｔｉｎｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓ，ｂｕｔｔｈｅｒｅａｒｅｌｉｍｉｔｅｄｒｅｌａｔｅｄｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｐｅｃｔｉｎｉｎｐｌａｎｔｌｅａｖｅｓ．Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｖａｌｕｅ，ｔｈｅａｍｍｏｎｉｕｍｏｘ⁃ａｌａｔｅｃｈｅｌａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄａｎｄｒｕｔｈｅｎｉｕｍｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｉｍｍｕｎｏｌａｂｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅ⁃ｔｅｒｍｉｎｅａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｐｅｃｔｉｎｉｎｓｉｘｐｌａｎｔｌｅａｖｅｓ，ｉ．ｅ．，ｐｏｐｌａｒ（ＰｏｐｕｌｕｓＬ．）ｌｅａｖｅｓ，Ｐｉｎｕｓｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓｌｅａｖｅｓ，Ｒｏｂ⁃ｉｎｉａ（ＲｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａＬ．）ｌｅａｖｅｓ，ｅｌｍ（ＵｌｍｕｓｐｕｍｉｌａＬ．）ｌｅａｖｅｓ，ｂａｍｂｏｏ（Ｎｅｏｓｉｎｏｃａｌａｍｕｓａｆｆｉｎｉｓ）ｌｅａｖｅｓａｎｄｈｅｍｐ（ＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａＬ．）ｌｅａｖｅｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｈｅｍｐｌｅａｖｅｓ，ｐｏｐｌａｒｌｅａｖｅｓａｎｄｅｌｍｌｅａｖｅｓｈａｄｈｉｇｈｐｅｃｔｉｎｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ１２％－１７％，１０％－１５％ａｎｄ１０％－１７％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＲｏｂｉｎｉａｌｅａｖｅｓａｎｄＰｉｎｕｓｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓｌｅａｖｅｓｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙ５％－８％ａｎｄ１．５％－２．５％，ａｎｄｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓｈａｄｔｈｅｓｍａｌｌｅｓｔｃｏｎｔｅｎｔ，ｗｈｉｃｈｗａｓｌｅｓｓｔｈａｎ１％．Ｉｔｗａｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗａｓａｌａｒｇｅａｍｏｕｎｔｏｆｐｅｃｔｉｎｉｎｐｌａｎｔｌｅａｖｅｓ．Ｂｏｔｈｒｕｔｈｅｎｉｕｍｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｉｍｍｕｎｏｌａｂｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｃａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｐｅｃｔｉｎ，ｔｈａｔｉｓ，ｔｈｅｐｅｃｔｉｎｐａｒｔｏｆｐｌａｎｔｌｅａｖｅｓｃａｎｂｅｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈｒｕｔｈｅｎｉｕｍｒｅｄ，ａｎｄｔｈｅｐｅｃｔｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｗｏｕｌｄｈａｖｅｂｒｉｇｈｔｌｉｇｈｔｕｎｄｅｒｔｈｅｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｃｏｌｏｒｄｅｐｔｈａｎｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｂｒｉｇｈｔｎｅｓｓｗｅｒｅｄｉｒｅｃｔｌｙｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌｔｏｔｈｅａｍｏｕｎｔｏｆｐｅｃｔｉｎｃｏｎｔｅｎｔ．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇｔｈｅｃｏｌｏｒｉｎｇａｎｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｓｉｘｌｅａｖｅｓ，ｈｅｍｐｌｅａｖｅｓ，Ｒｏｂｉｎｉａｌｅａｖｅｓ，ｐｏｐｌａｒｌｅａｖｅｓ，ａｎｄｅｌｍｌｅａｖｅｓｈａｄｍｏｒｅｐｅｃｔｉｎｃｏｎｔｅｎｔｔｈａｎｔｈｅｏｔｈｅｒｔｗｏ，ｆｏｌ⁃ｌｏｗｅｄｂｙＰｉｎｕｓｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ．Ｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓｗｅｒｅｔｈｅｌｅａｓｔｐｅｃｔｉｎｃｏｎｔｅｎｔａｍｏｎｇｔｈｅ６ｔｙｐｅｓｏｆｌｅａｖｅｓ，ｗｈｉｃｈｉｓｃｏｎ⁃ｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐｅｃｔｉｎｃｏｎｔｅｎｔｂｙａｍｍｏｎｉｕｍｏｘａｌａｔｅｃｈｅｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｈｅｍｐｌｅａｖｅｓ，ｐｏｐｌａｒｌｅａｖｅｓａｎｄｅｌｍｌｅａｖｅｓｈａｄｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｏｅｘｔｒａｃｔｐｅｃｔｉｎ．Ｔｈｅｆｏｕｒｋｉｎｄｓｏｆｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ⁃ｌａｂｅｌｅｄｈｅｍｐｌｅａｖｅｓ，Ｒｏｂｉｎｉａｌｅａｖｅｓ，ｅｌｍｌｅａｖｅｓａｎｄｐｏｐｌａｒｌｅａｖｅｓｍｅｓｏｐｈｙｌｌｃｅｌｌｓｈａｄｂｒｉｇｈｔｅｒｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅａｎｄｃｏｌｏｒｄｅｐｔｈｔｈａｎｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓ，ｔｈａｔｉｓ，ｔｈｅｍｅｓｏｐｈｙｌｌｃｅｌｌｓｈａｄｍｏｒｅｐｅｃｔｉｎｃｏｎｔｅｎｔｔｈａｎｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓ，ａｎｄｓｏｏｎ．Ｔｈｅｐｅｃｔｉｎｃｏｎ⁃ｔｅｎｔｓｏｆｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓａｎｄｖｅｉｎｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｌｅｓｓｔｈａｎｔｈａｔｏｆｍｅｓｏｐｈｙｌｌｃｅｌｌｓ，ａｎｄｍａｉｎｌｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄｉｎｍｅｓｏｐｈｙｌｌｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｂａｍｂｏｏｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓａｎｄｍｅｓｏｐｈｙｌｌｃｅｌｌｓｈａｄｌｅｓｓｐｅｃｔｉｎｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｍｏｒｅｖｅｉｎｔｉｓｓｕｅｓ．Ａｆｔｅｒｌａｂｅｌｉｎｇｗｉｔｈ４ｋｉｎｄｓｏｆｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｉｎｔｈｅ６ｋｉｎｄｓｏｆｌｅａｖｅｓ，ｔｈａｔｉｓ，ｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｓｕｇａｒｓｔｈａｔｃａｎｂｅｌａｂｅｌｅｄｂｙｔｈｅ４ｋｉｎｄｓｏｆｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｒｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｉｎ㊀第３期李晓宝，等：钌红染色和单克隆抗体免疫标记植物叶片中的果胶ｔｈｅ６ｋｉｎｄｓｏｆｌｅａｖｅｓ，ａｎｄｔｈｅｓｕｇａｒｉｎｐｅｃｔｉｎｉｓｉｎａｍｉｘｅｄｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓｔａｔｅａｎｄｔｈｅｒｅｉｓｎｏｓｐｅｃｉｆｉｃｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｒｅａ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｅｃｔｉｎ；ｐｌａｎｔｌｅａｖｅｓ；ｒｕｔｈｅｎｉｕｍｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇ；ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｉｍｍｕｎｅｍａｒｋｅｒｓ㊀㊀果胶是自然界最复杂的化学物质之一，常存在于植物的根㊁茎㊁叶和果实等组织中［１］，早在１８２５年就从胡萝卜（Ｄａｕｃｕｓｃａｒｏｔａｖａｒ．ｓａｔｉｖａ）中被分离出来㊂果胶质是黏结不同细胞的物质，主要存在于细胞壁的初生壁和胞间层［２－３］，但对于存在多层细胞壁的细胞（如初生壁㊁次生壁和胞内层的木质细胞），果胶在各个细胞壁层之间的功能尚不明确㊂果胶分为直链区和毛发区，Ｄ⁃半乳糖醛酸通过α⁃１，４⁃糖苷键连接成主链，毛发区支链上的糖基种类则高达１６种，且会随着植物种类㊁果胶储存时间的变化而变化［４－５］㊂果胶应用广泛，可被应用于制备饮料㊁化妆品㊁保健品㊁药品㊁血浆替代品㊁重金属吸附剂等［６－８］㊂目前主要利用水果或果皮来生产果胶，除此以外，果胶还普遍存在于植物的根茎叶中㊂因此，植物叶片也可以用来提取果胶，但迄今为止对叶片中果胶含量和分布的研究报道甚少，尤其是利用单克隆抗体标记法对叶片中果胶进行研究的报道较少［９－１１］㊂为了更好地开发利用叶片中的果胶成分，对一些药用叶片提取剩余物进行进一步价值的提升有着非常积极的意义㊂例如，将工业大麻叶提取大麻二酚（ＣＢＤ）后再进一步进行果胶提取，将桉树叶提取桉树精油后再进一步提取果胶等，不仅可以拓宽果胶的原料来源，还可以提高植物叶片的利用价值和利用率㊂笔者根据ＧＢ／Ｔ１０７４２ ２００８‘造纸原料果胶含量的测定“对叶片的果胶含量进行测定，并利用钌红染色和单克隆抗体免疫标记法对叶片中的果胶进行标定㊂１㊀材料与方法１．１㊀试验材料大麻（ＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａＬ．）叶，采自云南农业科学研究院经济作物研究所；云南松（Ｐｉｎｕｓｙｕｎ⁃ｎａｎｅｎｓｉｓ）松针和慈竹（Ｎｅｏｓｉｎｏｃａｌａｍｕｓａｆｆｉｎｉｓ）叶，采自云南省昆明市；杨树（ＰｏｐｕｌｕｓＬ．）叶㊁刺槐（ＲｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａＬ．）叶和榆树（ＵｌｍｕｓｐｕｍｉｌａＬ．）叶，采自山东省临沂市㊂６种叶片均为春季４ ５月采集㊂甲醛㊁冰醋酸和无水乙醇，均为分析纯；伦敦白胶（ＬＲＷｈｉｔｅ）树脂㊁钌红染色剂㊁ＴＢＳ缓冲液（ｐＨ７．４ ７．６，０．０５ｍｏｌ／Ｌ三乙醇胺缓冲盐水溶液）㊁ＴＢＳＴ缓冲液（ｐＨ７．４ ７．６，０．０５ｍｏｌ／Ｌ三乙醇胺缓冲盐水溶液＋质量分数０．１％Ｔｗｅｅｎ⁃２０）㊁山羊原血清㊁甘油ＰＢＳ封片剂㊂上述试剂均购自昆明硕阳生物有限责任公司㊂单克隆第一抗体材料共有４种，分别是：ＪＩＭ５抗同型半乳糖醛酸聚糖（单克隆抗体抗同型半乳糖醛酸聚糖）㊁ＪＩＭ７抗同型半乳糖醛酸聚糖（单克隆抗体抗同型半乳糖醛酸聚糖）㊁ＬＭ５抗⁃（１⁃４）⁃β⁃Ｄ⁃半乳聚糖［单克隆抗体（１⁃４）⁃β⁃Ｄ⁃半乳聚糖］和ＬＭ６抗⁃（１⁃５）⁃α⁃Ｌ⁃阿拉伯聚糖［单克隆抗体（１⁃５）⁃α⁃Ｌ⁃阿拉伯聚糖］㊂单克隆第二抗体为山羊抗大鼠（ＩｇＧ），是与第一抗体结合的抗体，可改善应用结果并减少假阳性或阴性结果㊂１．２㊀实验方法１．２．１㊀果胶含量的测定将６种风干的植物叶片进行粉碎，分别收集２０ ４０目（粒径４２０ ８４０μｍ），４０ ６０目（粒径２５０ ４２０μｍ），６０ ８０目（粒径１７８ ２５０μｍ），８０ １００目（粒径１５０ １７８μｍ）和１００目（粒径１５０μｍ）以上的５种粉末，在ＤＨＧ⁃９００３型电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司制造）中干燥至质量恒定㊂准确称取１．０００ ３．０００ｇ样品，加入１００ｍＬ无水乙醇，８０ħ下抽提３ｈ，干燥至质量恒定；将样品置于２００ｍＬ烧瓶中加１００ｍＬ质量分数１％的草酸铵溶液，水浴加热冷凝回流３ｈ后倒去上清液；继续加入１００ｍＬ质量分数０．５％的草酸铵溶液冷凝回流２ｈ；用滤纸过滤，接着用热的蒸馏水清洗残渣３次以上，收集并蒸发掉大部分的滤液至７０ ８０ｍＬ；加入９０ｍＬ盐酸和酒精的混合溶液（１０００ｍＬ乙醇＋１１ｍＬ盐酸）静置１２ｈ以上，再用３０ｍＬ盐酸㊁酒精和水的混合溶液（１０００ｍＬ乙醇＋１１ｍＬ盐酸＋２５０ｍＬ蒸馏水）分３次洗涤；将滤纸和滤渣放入７５ｍＬ热氨水溶液（７５ｍＬ沸水＋１．５ｍＬ氨水混合）中煮沸，过滤；得到的滤液中加１００ｍＬ的０．１ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液，搅匀静置１２ｈ；加入５０ｍＬ的１ｍｏｌ／Ｌ乙酸溶液，搅匀静置５ｍｉｎ后加入５０ｍＬ的１ｍｏｌ／Ｌ氯化钙溶液，搅匀静置１ｈ，煮沸５ｍｉｎ，过滤，热蒸馏水洗涤数次，收集滤渣于烘箱中烘干至质量恒定［１２－１３］㊂根据ＧＢ／Ｔ２６７７．２ ２０１１‘造纸原料水分的测定“测定水分㊂果胶的含量以测定的果胶酸钙的含量表示：１０１林业工程学报第７卷Ｘ＝ｍ１－ｍ()４００ｍ０１００－ｗ()ˑ１００％（１）式中：Ｘ为果胶的含量（以果胶酸钙计），％；ｍ为滤纸的绝干质量，ｇ；ｍ１为烘干至质量恒定后沉淀连同滤纸的质量，ｇ；ｍ０为试样质量，ｇ；ｗ为试样含水率，％㊂１．２．２㊀叶片切片制备叶片切片的制备主要包括样品采集固定㊁脱水㊁钌红染色㊁包埋和切片５个步骤㊂１）样品采集固定：分别采集新鲜杨树叶㊁云南松松针㊁槐树叶㊁榆树叶㊁慈竹叶和大麻叶；切成５ｍｍˑ５ｍｍˑ５ｍｍ（长ˑ宽ˑ厚）的小块，浸泡于由体积分数５０％甲醛⁃乙酸⁃乙醇（ＦＡＡ）固定液（９０ｍＬ体积分数５０％乙醇＋体积分数３８％甲醛和冰醋酸各５ｍＬ）中固定２４ｈ㊂２）脱水：将样品从ＦＡＡ固定液中取出，用琼脂固定，将琼脂固定的叶片切成宽３ｍｍ的细条状，然后用体积分数５０％乙醇浸泡脱水，接着分别用７０％，８０％，９０％和１００％乙醇梯度浸泡，每个梯度脱水４ｈ以上，１００％乙醇需进行２次脱水（６０ｍｉｎ以上）㊂３）钌红染色：钌红可以通过静电与羧基（酸性基团）结合，在电子显微镜下出现电子密度高度着色，在光学显微镜下则呈现出本色㊂叶片浸没于质量分数０．０２％钌红染色剂中，对叶片进行染色［１４］㊂４）包埋：采用伦敦白胶（ＬＲＷｈｉｔｅ）包埋［１５－１６］㊂将钌红染色和未染色的样品移至新的离心管中，用移液枪移取体积比为１ʒ１的无水乙醇和纯的伦敦白胶树脂混合溶液（由５０ｇ树脂＋０．９９ｇ催化剂配制而成）直到树脂完全没过样品，在室温下浸泡渗入４ｈ以上；接着用干净的镊子将材料放入新的离心管中，然后用移液枪移取纯度为１００％的伦敦白胶树脂加入离心管中直到树脂完全没过样品，静置２ｈ以上，重复数次；之后取出样品放入包埋用胶囊中，注入纯的伦敦白胶树脂，充满胶囊，将胶囊在不接触水的情况下用超声清洗机处理６０ｍｉｎ；接着用循环水真空泵抽真空３次（３ ５ｈ／次），最后将胶囊放入电热鼓风干燥箱中６５ħ聚合２４ｈ（６０ħ时聚合１６ｈ以上）㊂５）切片：在３７ħ水中将胶囊溶解，对聚合好的材料块进行修整，用切片机进行切片，厚度为５ １０μｍ，将切好的切片置于滴有水滴的干净载玻片上；接着将放有切片的载玻片放在７０ħ的烘干台上，烘烤至少５ｍｉｎ，直到水滴蒸干，切片完全干燥平铺于载玻片；切片完全干燥后，为保证叶片中果胶成分能够被充分染上颜色，钌红染色的样品可再一次进行染色，烘干待用［１７－１９］㊂１．２．３㊀免疫标记将切好的未被染色的切片连同载玻片置于ＴＢＳ和ＴＢＳＴ的混合缓冲溶液中浸润１０ｍｉｎ；取出玻片，将山羊原血清和ＴＢＳＴ缓冲液混合配出１／３０的山羊原血清溶液滴加在玻片上，将半薄切片封闭１ｈ；然后，分别在４个载玻片上滴加经ＴＢＳＴ缓冲溶液稀释为１／４的单克隆第一抗体（ＪＩＭ５㊁ＪＩＭ７㊁ＬＭ５和ＬＭ６），并在４ħ的冰箱中与半薄切片反应１２ｈ以上；接着用ＴＢＳ洗涤３次（５ｍｉｎ／次），洗涤后风干玻片；再用经ＴＢＳＴ缓冲溶液稀释为１／１００的单克隆第二抗体［山羊抗大鼠（ＩｇＧ）］对半薄切片进行封闭，在３７ħ烘箱中烘干１ｈ；用ＴＢＳ缓冲溶液清洗样品，清洗５次（５ｍｉｎ／次），之后用蒸馏水清洗２次（５ｍｉｎ／次）；置于干燥通风处晾干，用甘油ＰＢＳ封片剂封片，用荧光显微镜进行拍照㊂２㊀结果与分析２．１㊀不同叶片中的果胶含量经测定６种叶片在样品尺寸不同时的果胶含量（质量分数）不同，测定结果见表１㊂工业大麻叶片的果胶含量为１２％ １７％㊁杨树叶片为１０％ １５％㊁榆树叶片为１０％ １７％㊁刺槐叶片为５％ ８％㊁松针为１．５％ ２．５％㊁慈竹叶在１％以下，其中工业大麻叶片㊁杨树叶㊁榆树叶的果胶含量在６种叶片中相对较多，刺槐叶片次之，慈竹叶的果胶含量在６种叶片中最少㊂对于同一种叶片，当颗粒尺寸由２０ ４０目减表１㊀不同植物叶片中的果胶含量Ｔａｂｌｅ１㊀Ｐｅｃｔｉｎｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｌｅａｖｅｓ样品尺寸／目果胶含量（质量分数）／％大麻叶松针刺槐叶杨树叶榆树叶慈竹叶２０ ４０１２．４１ʃ０．２７１．６４ʃ０．０６５．５９ʃ０．５５１１．５８ʃ０．６４１３．０９ʃ１．２００．５３ʃ０．０６４０ ６０１１．９９ʃ０．２５１．９６ʃ０．０９５．８６ʃ０．９４１２．５６ʃ０．８８１６．１６ʃ１．７８０．７３ʃ０．１６６０ ８０１６．６１ʃ１．５１２．３０ʃ０．１３７．８７ʃ１．０６１４．３８ʃ０．３２１６．１４ʃ０．７２０．８８ʃ０．０５８０ １００１５．５１ʃ１．６５２．０７ʃ０．１３５．４４ʃ０．９５１３．１６ʃ１．４３１２．７６ʃ１．０６０．８６ʃ０．１３１００以上１４．４０ʃ０．６８１．６８ʃ０．１８５．００ʃ０．４５１０．２１ʃ０．９２１０．１５ʃ１．２９０．６７ʃ０．１１㊀注：数值代表每类样本３次重复的平均值ʃ标准差㊂２０１㊀第３期李晓宝，等：钌红染色和单克隆抗体免疫标记植物叶片中的果胶小到８０目时，叶片的果胶含量都在逐渐地增加，而当颗粒尺寸小于８０目时叶片的果胶含量开始逐渐地降低㊂这可能是由于果胶主要存在于胞间层和初生壁中，在植物细胞生长过程中起着调控作用，有一定的韧性，不易被粉碎，所有在８０目以下颗粒中主要是生物质材料的其他化学成分，有待进一步研究㊂２．２㊀不同叶片中的钌红染色图像６种植物叶片经钌红染色后的果胶分布见图１㊂植物叶片中的果胶成分能够被钌红染色剂染上红色，颜色深浅与果胶含量的多少成正比，对比６种叶片的着色情况，大麻叶㊁刺槐叶㊁杨树叶㊁榆树叶的果胶含量比其他两种多，松针次之，慈竹叶在６种叶片中最少㊂比较各组织的钌红着色深度，大麻叶㊁刺槐叶㊁榆树叶和杨树叶叶肉细胞的果胶含量比表皮细胞多；松针表皮细胞和静脉组织的果胶含量比叶肉细胞少，果胶多分布于叶肉细胞中；慈竹叶表皮细胞㊁叶肉细胞的果胶含量较少，静脉组织的果胶含量多一些㊂１．表皮细胞；２．叶肉细胞；３．静脉组织㊂ａ１ ａ２）不同放大倍数下的大麻叶；ｂ１ ｂ２）不同放大倍数下的松针；ｃ１ｃ２）不同放大倍数下的刺槐叶；ｄ１ ｄ２）不同放大倍数下的杨树叶；ｅ１ ｅ２）不同放大倍数下的榆树叶；ｆ１ ｆ２）不同放大倍数下的慈竹叶㊂图１㊀钌红染色的６种叶片Ｆｉｇ．１㊀Ｓｉｘｋｉｎｄｓｏｆｌｅａｖｅｓｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈｒｕｔｈｅｎｉｕｍｒｅｄ２．３㊀不同叶片中果胶的荧光图像２．３．１㊀不同波长荧光照射下的木质素粉与果胶粉免疫标记是以抗原和抗体的特异性结合产生抗原⁃抗体免疫复合物，通常是指使用荧光素㊁放射性同位素㊁酶㊁胶体和化学（或生物）发光剂作为标记，并且使用标记的抗体或抗原以及相应的抗原或抗体用于特异性抗原⁃抗体反应［２０］㊂Ｌ１ Ｌ３和Ｐ１ Ｐ３分别为木质素粉和经过ＪＩＭ５标记后的果胶粉在３种不同波长荧光［紫外（ＵＶ）荧光波长为３７２ ４５６ｎｍ，绿色荧光波长４９０ ５２０ｎｍ，黄色荧光波长５３０ ６１５ｎｍ］照射下的情况，如图２所示㊂由图２可知，３种波长下均有亮光，即木质素粉和经过ＪＩＭ５标记后的果胶粉在荧光照射下都有自发荧光；但比较Ｌ１和Ｐ１可以看到在ＵＶ荧光照射下，木质素粉的亮光暗淡且不明显，经过ＪＩＭ５标记后的果胶粉明显比木质素粉发出的荧光要亮且均匀，因此选择ＵＶ荧光作为光源照射，分析果胶在叶片中的分布状态㊂图２㊀不同波长荧光照射下的木质素粉与果胶粉Ｆｉｇ．２㊀Ｌｉｇｎｉｎｐｏｗｄｅｒａｎｄｐｅｃｔｉｎｐｏｗｄｅｒｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎｓ２．３．２㊀单克隆抗体标记叶片中的果胶成分在ＵＶ荧光照射下经ＬＭ５㊁ＬＭ６㊁ＪＩＭ５㊁ＪＩＭ７这４种单克隆抗体标记的６种植物叶片果胶成分均发出亮光，发出亮光的强弱和果胶含量的多少成正相关的关系，结果见图３ ８㊂对比６种叶片发出亮光的强弱可以知道大麻叶㊁杨树叶㊁榆树叶㊁刺槐叶３０１林业工程学报第７卷的果胶含量比其他２种叶片多，云南松松针次之，慈竹叶在６种叶片中果胶含量最少㊂这与前面果胶含量测定及钌红染色的结果是一致的㊂比较叶片中不同部位荧光的亮度，４种单克隆抗体标记的大麻叶片㊁刺槐叶㊁榆树叶和杨树叶叶肉细胞的荧光亮度比表皮细胞部分亮，即叶肉细胞的果胶含量比表皮细胞多㊂以此类推，松针的表皮细胞和静脉组织的果胶含量比叶肉细胞少，主要集中在叶肉细胞中；慈竹叶表皮细胞㊁叶肉细胞的果胶含量较少，静脉组织较多㊂另外，经过４种单克隆抗体标记之后，６种叶片中的荧光分布没有显著区别，说明在这６种叶片中４种单克隆抗体能够标记的特定糖分均有分布，即果胶中的糖分是呈混合分布的状态没有特定的富集区域㊂１．表皮细胞；２．叶肉细胞㊂图３㊀４种单克隆抗体标记的大麻叶中的果胶成分Ｆｉｇ．３㊀ＰｅｃｔｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＣａｎｎａｂｉｓｓａｔｉｖａＬ．ｌｅａｖｅｓｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈ４ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ１．表皮细胞；２．叶肉细胞；３．静脉组织㊂图４㊀４种单克隆抗体标记的云南松松针中的果胶成分Ｆｉｇ．４㊀ＰｅｃｔｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＰｉｎｕｓｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓｎｅｅｄｌｅｓｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈ４ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ１．表皮细胞；２．叶肉细胞；３．静脉组织㊂图５㊀４种单克隆抗体标记的刺槐叶中的果胶成分Ｆｉｇ．５㊀ＰｅｃｔｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＲｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａＬ．ｌｅａｖｅｓｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈ４ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ４０１㊀第３期李晓宝，等：钌红染色和单克隆抗体免疫标记植物叶片中的果胶１．表皮细胞；２．叶肉细胞㊂图６㊀４种单克隆抗体标记的杨树叶中的果胶成分Ｆｉｇ．６㊀ＰｅｃｔｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＰｏｐｕｌｕｓＬ．ｌｅａｖｅｓｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈ４ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ１．表皮细胞；２．叶肉细胞㊂图７㊀４种单克隆抗体标记的榆树叶中的果胶成分Ｆｉｇ．７㊀ＰｅｃｔｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＵｌｍｕｓｐｕｍｉｌａＬ．ｌｅａｖｅｓｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈ４ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ１．表皮细胞；２．叶肉细胞；３．静脉组织㊂图８㊀４种单克隆抗体标记的慈竹叶中的果胶成分Ｆｉｇ．８㊀ＰｅｃｔｉｎｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＮｅｏｓｉｎｏｃａｌａｍｕｓａｆｆｉｎｉｓｌｅａｖｅｓｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈ４ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ３㊀结㊀论通过测定果胶含量（质量分数）㊁钌红染色和单克隆抗体标记技术来表征叶片中的果胶成分，确定了植物叶片中有大量果胶的存在，为发掘新的果胶提取来源提供了依据㊂具体结论如下：１）大麻叶㊁杨树叶和榆树叶中的果胶含量（质量分数）分别是１２％ １７％，１０％ １５％和１０％１７％，含量均在１０％以上，在６种叶片中较高，刺槐叶和松针次之，慈竹叶最少㊂２）钌红染色和单克隆抗体标记技术均可有效表征果胶，果胶含量与叶片钌红染色剂的着色深度㊁果胶单克隆抗体标记的荧光亮度均呈正相关关系㊂在６种叶片中，大麻叶㊁杨树叶和榆树叶被钌红着色的深度较深，免疫标记荧光亮度较亮，尤其是叶片的叶肉细胞，因此这３种树叶具有提取果胶５０１林业工程学报第７卷质的潜在价值㊂经过４种单克隆抗体标记之后，６种叶片中的荧光分布没有显著区别，即４种单克隆抗体能够标记的特定糖分在６种叶片中均有分布，果胶中的糖分呈混合分布状态，没有特定的富集区域㊂参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）：［１］任多多，江伟，孙印石，等．果胶的分类㊁功能及其在食品工业中应用的研究进展［Ｊ／ＯＬ］．食品工业科技，２０２１－０６－２３．ＤＯＩ：１０．１３３８６／ｊ．ｉｓｓｎ１００２－０３０６．２０２１０２００６９．ＲＥＮＤＤ，ＪＩＡＮＧＷ，ＳＵＮＹＳ，ｅｔａｌ．Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｔｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｅｃｔｉｎｉｎｆｏｏｄｉｎｄｕｓｔｒｙ［Ｊ／ＯＬ］．ＦｏｏｄＩｎｄｕｓｔｒｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０２１－０６－２３．［２］ＣＯＳＧＲＯＶＥＤＪ．Ｇｒｏｗｔｈｏｆｔｈｅｐｌａｎｔｃｅｌｌｗａｌｌ［Ｊ］．ＮａｔｕｒｅＲｅ⁃ｖｉｅｗｓＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，２００５，６（１１）：８５０－８６１．ＤＯＩ：１０．１０３８／ｎｒｍ１７４６．［３］ＰＬＯＭＩＯＮＣ，ＬＥＰＲＯＶＯＳＴＧ，ＳＴＯＫＥＳＡ．Ｗｏｏｄｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｔｒｅｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００１，１２７（４）：１５１３－１５２３．ＤＯＩ：１０．１１０４／ｐｐ．０１０８１６．［４］ＹＩＬＭＡＺＮ，ＫＯＤＡＭＡＹ，ＮＵＭＡＴＡＫ．Ｒｅｖｅａｌｉｎｇｔｈｅａｒｃｈｉｔｅｃ⁃ｔｕｒｅｏｆｔｈｅｃｅｌｌｗａｌｌｉｎｌｉｖｉｎｇｐｌａｎｔｃｅｌｌｓｂｙｂｉｏｉｍａｇｉｎｇａｎｄｅｎｚｙ⁃ｍａｔｉｃｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２０２０，２１（１）：９５－１０３．ＤＯＩ：１０．１０２１／ａｃｓ．ｂｉｏｍａｃ．９ｂ００９７９．［５］ＣＯＳＧＲＯＶＥＤＪ．Ｌｏｏｓｅｎｉｎｇｏｆｐｌａｎｔｃｅｌｌｗａｌｌｓｂｙｅｘｐａｎｓｉｎｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２０００，４０７（６８０２）：３２１－３２６．ＤＯＩ：１０．１０３８／３５０３００００．［６］白岚，杜继煜．果胶在食品加工中的应用［Ｊ］．农业与技术，２００２，６：１１５－１１６．ＤＯＩ：ＣＮＫＩ：ＳＵＮ：ＮＹＹＳ．０．２００２－０６－０３７．ＢＡＩＬ，ＤＵＪＹ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｅｃｔｉｎｉｎｆｏｏｄｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ［Ｊ］．Ａｇ⁃ｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００２，６：１１５－１１６．［７］陈靖，陈孔荣．果胶 一种有开发前途的药物制剂基质［Ｊ］．现代应用药学，１９９７，１４（３）：２２－２３．ＤＯＩ：１０．１３７４８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ１００７－７６９３．１９９７．０３．０１１．ＣＨＥＮＪ，ＣＨＥＮＫＲ．Ｐｅｃｔｉｎ：ａｐｒｏｍｉｓｉｎｇｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｐｒｅｐａ⁃ｒａｔｉｏｎｍａｔｒｉｘ［Ｊ］．ＭｏｄｅｒｎＡｐｐｌｉｅｄＰｈａｒｍａｃｙ，１９９７，１４（３）：２２－２３．［８］刘英，邱逸凡，许希贤．果胶研究和应用进展［Ｊ］．现代食品，２０１９，２４：１７－２０．ＤＯＩ：１０．１６７３６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｎ４１－１４３４／ｔｓ．２０１９．２４．００７．ＬＩＵＹ，ＱＩＵＹＦ，ＸＵＸＸ．Ｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｐｅｃｔｉｎ［Ｊ］．ＭｏｄｅｒｎＦｏｏｄ，２０１９，２４：１７－２０．［９］姚穆，孙润军，陈美玉，等．植物纤维素㊁木质素㊁半纤维素等的开发和利用［Ｊ］．精细化工，２００９，２６（１０）：９３７－９４１．ＤＯＩ：ＣＮＫＩ：ＳＵＮ：ＪＸＨＧ．０．２００９－１０－０００．ＹＡＯＭ，ＳＵＮＲＪ，ＣＨＥＮＭＹ，ｅｔａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｕｔｉｌｉｚａ⁃ｔｉｏｎｏｆｐｌａｎｔｃｅｌｌｕｌｏｕｓｅ，ｌｉｇｎｉｎａｎｄｈｅｍｉｃｅｌｌｕｌｏｓｅａｎｄｓｏｎｏ［Ｊ］．ＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓ，２００９，２６（１０）：９３７－９４１．［１０］孙毅，魏金凤．树叶资源及野生蔬菜开发利用的前景［Ｊ］．科技信息，１９９９（１）：１０－１１．ＳＵＮＹ，ＷＥＩＪＦ．Ｔｈｅｐｒｏｓｐｅｃｔｓｏｆｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｌｅａｆｒｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄｗｉｌｄｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ［Ｊ］．ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，１９９９（１）：１０－１１．［１１］廖朝阳．绿叶的妙用［Ｊ］．林业与生态，２０１０，１１：２６．ＤＯＩ：１０．１３５５２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｌｙｙｓｔ．２０１０．１１．００１．ＬＩＡＯＣＹ．Ｔｈｅｍａｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｏｆｇｒｅｅｎｌｅａｖｅｓ［Ｊ］．ＦｏｒｅｓｔｒｙａｎｄＥ⁃ｃｏｌｏｇｙ，２０１０，１１：２６．［１２］龙海蓉，王齐玮，李晓平，等．生长期和植株性别对工业大麻杆果胶含量及质量的影响［Ｊ］．西北林学院学报，２０１６，３１（２）：２４４－２４８．ＤＯＩ：ＣＮＫＩ：ＳＵＮ：ＸＢＬＸ．０．２０１６．ＬＯＮＧＨＲ，ＷＡＮＧＱＷ，ＬＩＸＰ，ｅｔａｌ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｏｆｇｒｏｗｔｈｓｔａｇｅａｎｄｐｌａｎｔｇｅｎｄｅｒｏｎｐｅｃｔｉｎｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｗｅｉｇｈｔｏｆｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｈｅｍｐ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１６，３１（２）：２４４－２４８．［１３］ＫＡＳＨＹＡＰＤＲ，ＶＯＨＲＡＰＫ，ＣＨＯＰＲＡＳ，ｅｔａｌ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｐｅｃｔｉｎａｓｅｓｉｎｔｈｅｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｓｅｃｔｏｒ：ａｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．ＢｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００１，７７（３）：２１５－２２７．ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｓ０９６０－８５２４（００）００１１８－８．［１４］朱进，彭玉全，李文静．一种观察植物内部显微结构的染色方法：２０１９１０３６３６９５．２［Ｐ］．２０１９－０８－２７．ＺＨＵＪ，ＰＥＮＧＹＱ，ＬＩＷＪ．Ａｄｙｅｉｎｇｍｅｔｈｏｄｆｏｒｏｂｓｅｒｖｉｎｇｔｈｅｉｎｔｅｒｎａｌｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｐｌａｎｔｓ：２０１９１０３６３６９５．２［Ｐ］．２０１９－０８－２７．［１５］曾兵，吴佳海，王少青，等．一种组织完整㊁利于显微观察的植物组织切片的制备方法：２０１９１０１７８７４９．８［Ｐ］．２０１９－０６－０７．ＺＥＮＧＢ，ＷＵＪＨ，ＷＡＮＧＳＱ，ｅｔａｌ．Ａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｐｒｅｐａｒｉｎｇｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓｅｃｔｉｏｎｓｗｉｔｈｉｎｔａｃｔｔｉｓｓｕｅａｎｄｇｏｏｄｆｏｒｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ：２０１９１０１７８７４９．８［Ｐ］．２０１９－０６－０７．［１６］杨晓冬，孙素，李一勤．硼缺乏导致花粉管细胞壁多糖分布的改变［Ｊ］．植物学报，１９９９，４１（１１）：１１６９－１１７６．ＤＯＩ：１０．３３２１／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９０７２．１９９９．１１．００６．ＹＡＮＧＸＤ，ＳＵＮＳ，ＬＩＹＱ．Ｂｏｒｏｎｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｌｅａｄｓｔｏｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｔｈｅｃｅｌｌｗａｌｌｏｆｐｏｌｌｅｎｔｕｂｅｓ［Ｊ］．ＡｃｔａＢｏｔａｎｉｃａＳｉｎｉｃａ，１９９９，４１（１１）：１１６９－１１７６．［１７］曾月星，许明坤，丁水汀．鉴定木材显微切片制作技术［Ｊ］．人造板通讯，２００２，９（７）：１３－２０．ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－５０６４．２００２．０７．００５．ＺＥＮＧＹＸ，ＸＵＭＫ，ＤＩＮＧＳＤ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｗｏｏｄｍｉｃｒｏ⁃ｓｅｃｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｗｏｏｄ⁃ｂａｓｅｄＰａｎｅｌＮｅｗｓｌｅｔｔｅｒ，２００２，９（７）：１３－２０．［１８］李亚男，严炜，罗丽娟，等．一种低毒透明剂制作植物叶片石蜡切片的方法［Ｊ］．热带农业科学，２０１９，３９（４）：５８－６１．ＤＯＩ：ＣＮＫＩ：ＳＵＮ：ＲＤＮＫ．０．２０１９－０４－０１１．ＬＩＹＮ，ＹＡＮＷ，ＬＵＯＬＪ，ｅｔａｌ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｐａｒａｆｆｉｎｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｐｌａｎｔｌｅａｖｅｓｗｉｔｈａｌｏｗ⁃ｔｏｘｉｃｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔａｇｅｎｔ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒｏｐｉｃａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，２０１９，３９（４）：５８－６１．［１９］王皓翔．尖叶木犀榄叶片的石蜡切片制作［Ｊ］．宁德师专学报（自然科学版），２０１０，２２（２）：１８３－１８５．ＤＯＩ：ＣＮＫＩ：ＳＵＮ：ＮＤＳＸ．０．２０１０－０２－０１９．ＷＡＮＧＨＸ．ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｐａｒａｆｆｉｎｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆＯｓｍａｎｔｈｕｓｃｕｓｐｉ⁃ｄａｔｕｍｌｅａｖｅｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｉｎｇｄｅＴｅａｃｈｅｒｓＣｏｌｌｅｇｅ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ），２０１０，２２（２）：１８３－１８５．［２０］刘勇，ＫＡＳＨＩＮＯＧ，陈一瑋，等．运用免疫荧光法检测温热对于硼化合物细胞微分布影响［Ｊ］．中华临床医师杂志（电子版），２０１２，６（１０）：２６１８－２６２３．ＬＩＵＹ，ＫＡＳＨＩＮＯＧ，ＣＨＥＮＹＷ，ｅｔａｌ．Ｕｓｉｎｇｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓ⁃ｃｅｎｃｅｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｗａｒｍｉｎｇｏｎｔｈｅｍｉｃｒｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｂｏｒｏｎｃｏｍｐｏｕｎｄｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃｉａｎｓ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ），２０１２，６（１０）：２６１８－２６２３．（责任编辑㊀李琦）６０１。
免疫科试题及答案(5)
免疫科试题及答案631.每种荧光染料都有特定的激发波长，激发后产生的荧光波长( )A.与激发波长相同B.会产生特定波长的荧光和颜色C.会产生相同波长荧光和不同颜色D.都是长寿命荧光E.会产生相同波长荧光答案：B632.关于速率散射比浊分析的评价，错误的是( )A.测定抗原抗体反应第一阶段B.可快速测定C.灵敏度高D.测定速率散射信号E.受本底散射信号干扰较大答案：E633.为保证定时散射比浊分析所获取的信号峰值为被检抗原产生，设计时采用( )A.抗原过量检测B.抗体过量检测C.平行管检测D.本底的检测E.阈值限定答案：A634.下列关于双参数直方图的描述，错误的是( )A.双参数直方图是一种细胞数与双测量参数的图型B.通常采用线性信号C.通常采用设置十字门来区分细胞信号D.纵、横坐标分别代表被测细胞的两个测量参数E.在图示中每一个点代表一个细胞答案：B635.HLA细胞学分型法用于检测( )A.HLA-A、BB.HLA-DR、DQC.HLA-A、DPD.HLA-D、DPE.HLA-C、D答案：D636.速率散射比浊法测定是在( )A.抗原抗体反应的稳定阶段B.终点比浊C.抗原抗体反应的第一阶段D.抗原抗体反应的第二阶段E.以上均不对答案：C637.化学发光免疫测定最常用的反应体系为( )A.气相B.液相C.固相D.半固体E.气溶胶答案：B638.大鼠的主要组织相容性抗原为( )A.HLAC.H-2D.AgBH-1E.RLA答案：D639.下列哪项属于HLA复合体的非经典Ⅰ类基因区( )A.HLA-E、F、GB.HLA-DN、DO、DMC.HLA-A、B、CD.HLA-E、F、G、H、XE.HLA-DP、DQ、DR答案：D640.FITC发射荧光的pH最适工作环境是( )A.pH4.0～4.8B.pH5.0～5.8C.pH6.8～7.2D.pH8.2～9.2E.pH7.2～9.2答案：C641.FPIA分析中标本抗原浓度越高( )A.形成的标记抗原-抗体复合物越少B.形成的标记抗原-抗体复合物越多C.游离的标记抗原越少D.游离的已知抗体越少E.以上均不对答案：A642.对培养细胞的分选不宜选择高速的最可能原因是( )A.细胞太多B.细胞太大C.细胞膜脆弱D.细胞核脆弱E.胞浆所占比例大答案：C643.下列与强直性脊柱炎密切相关的是( )A.HLA-DR9B.HLA-DR4C.HLA-B27D.HLA-DR2E.HLA-DR5答案：C644.目前最有发展前途的超微量分析技术是( )A.解离增强镧系元素荧光免疫B.荧光偏振免疫测定C.荧光酶免疫分析D.双标记法荧光抗体染色E.定时散射比浊分析答案：A645.藻红蛋白(PE)的荧光发射强度比FITC强多少倍( )A.9B.19C.190D.1900E.19000答案：B646.双抗体夹心法微粒子化学发光免疫分析中，将抗原-磁珠抗体复合物与非特异性物质快速分离的机制为( )A.磁力的作用B.电场力的作用C.PEG的凝聚作用D.洗涤E.超速离心法答案：A647.激发光与发射光的波长间stakes位移最大的是( )A.FITCB.RB200C.血清白蛋白D.镧系金属离子E.异氰蒽答案：D648.藻胆蛋白类染料中，最常用的免疫荧光标记物是( )A.藻红蛋白B.藻红蛋白花青苷7C.藻红蛋白花青苷5、藻红蛋白花青苷7(Pecy7)D.藻青蛋白E.别藻青蛋白答案：A649.一台好的流式细胞仪每秒钟可测量( )A.25000个细胞B.20000个细胞C.15000个细胞D.10000个细胞E.5000个细胞答案：C650.某一子代个体HLA-A位点的基因型为A3/A11，其中A3来源于父亲，A11来源于母亲，则( )A.A3，A11同等表达B.A3表达，A11不表达C.A11表达，A3不表达D.A3，A11相互抑制，都不表达E.以上均不对答案：A651.电化学发光免疫分析中，最常使用的标记物是( )A.吖啶酯类B.三丙胺C.鲁米诺类D.三联吡啶钌E.三氧乙烷答案：D652.进行流式细胞分析最关键的第一步是( )A.将两个细胞的重叠B.将多个细胞的粘连C.制备细胞碎片D.制备单细胞悬液E.进行细胞荧光染色答案：D653.下列哪种物质产生的荧光为长寿命荧光( )A.FITCB.RB200C.血清白蛋白D.镧系金属离子E.胆红素答案：D654.前向散射光(FS)信号的强弱与细胞的哪项成正比( )A.体积大小B.细胞性状C.颗粒多少D.位移速度E.荧光强弱答案：A655.化学发光酶免疫分析(CLETA)的反应中对鲁米诺和过氧化氢起催化作用的酶是( )A.HRPB.ALPC.AHPPDD.PR3E.AMPPD答案：A656.下列关于能量传递复合型荧光染料的描述，错误的是( )A.用化学方法将两种不同的激发波长的染料结合B.通过一个荧光染料被激发后产生的发射波长激发另一荧光染料产生荧光信号C.主要用于同一激光束激发分析单个细胞分子的多参数资料提供更方便科学的手段D.主要用于对同一激光束激发分析多个细胞分子的多参数资料提供更方便科学的手段E.利用488nm波长激发光照射答案：D657.MHC-Ⅰ类分子的CD8分子结合部位位于( )A.B.C.D.E.答案：C658.流式细胞仪采集的用于分析的电信号是( )A.前向散射光、侧向散色光、速率散射光B.前向散射光、荧光、侧向散射光C.侧向散射光、速率散射光、荧光D.前向散射光、侧向散射光、可见光E.前向散射光、荧光答案：B659.对PCR扩增产物进行测序分析的HLA基因分型法是( )A.PCR-RFLPB.PCR-SSCPC.PCR-SSOPD.SBTE.PCR-SSO答案：D660.下列关于单向MLC的描述，错误的是( )A.单向MLC以刺激指数作为判断淋巴细胞反应强度的指标B.阴性分型法的SI=标准分型细胞对待测细胞刺激的cpm/待测细胞自身刺激的cpmC.阳性分型法的SI=待测细胞对预致敏淋巴细胞刺激的cpm/预致敏淋巴细胞自身刺激的cpmD.HLA-D抗原可用阴性和阳性分型法检测E.HLA-DP抗原可用阴性和阳性分型法检测答案：E661.HLA基因复合体位于( )A.第6对染色体的短短臂B.第15号染色体C.第14号染色体D.第9号染色体E.第7号染色体答案：A662.等高线图由类似地图上的下列哪种线组成( )A.实线B.虚线C.连线E.等高线答案：E663.流式细胞仪流动池鞘液孔径通常为( )A.50μmB.50～100μmC.50～200μmD.50～300μmE.300μm答案：D664.目前时间分辨荧光检测系统最常用的激发光源是( )A.脉冲钨灯B.脉冲氙灯C.高压汞灯D.卤素灯E.氖灯答案：A665.MHC-Ⅱ类分子的Ig样区由( )A.B.C.D.E.答案：D666.对实验分析数据存储、显示与分析的流式细胞仪组成部件是( )A.计算机B.光学系统C.光电倍增管E.数据处理系统答案：E667.关于化学发光免疫分析的描述，下列错误的是( )A.根据其采用的标记物不同可分为发光物标记、酶标记和元素标记三种B.化学发光与荧光的根本区别是形成激发态分子的激发能原理不同，荧光是发光物质吸收了激发光后使分子产生发射光，化学发光是化学反应过程中所产生的化学能使分子激发产生的发射光C.化学发光只能在液相反应体系D.在自动化化学发光免疫分析仪的设计中，最常采用的是化学发光物质的氧化发光E.分析过程中包括化学发光反应系统和免疫反应系统答案：C668.A.去除I类抗体B.去除I类抗原C.去除Ⅱ类抗体D.去除Ⅱ类抗原E.去除Ⅲ类抗体答案：A669.峰值脉冲信号是指( )A.电压脉冲曲线内外区域的大小B.电压脉冲曲线外区域的大小C.电压脉冲曲线内区域的大小D.电压脉冲的高度E.以上都不是答案：D670.关于荧光偏振免疫分析，下列描述错误的是( )A.原理是利用荧光物质在溶液中被单一平面的偏振光照射后，吸收光能而产生另一单一平面的偏振发射荧光B.发射荧光强度与荧光标记物在溶液中旋转的速度与分子大小呈正比C.可用于分析大分子物质D.FPIA是主要用于测定小分子药物的技术E.在检测设计中，采用均相竞争法答案：C671.流式细胞仪最常采用的激光波长是( )A.568nmB.633nmC.488nmD.520nmE.495nm答案：C672.MHC-Ⅱ类分子的抗原肽结合部位由( )A.B.C.D.E.答案：C673.HLA细胞学阴性分型法的阴性反应是( )A.不发生或仅出现轻微的增殖反应，DNV小于30%B.仅出现轻微的增殖反应，DNV小于50%C.表示待分型细胞的LD抗原不与HTC相同D.表示待分型细胞的SD抗原不与HTC相同E.表示待分型细胞的SD抗原与HTC相同答案：A674.速率散射比浊分析的抗原过量检测时，出现第二次速率峰值信号表示( )A.被测定抗原量过高，应稀释重测B.被测定抗原量太低，应取上一个稀释浓度C.第一次速率峰值信号是由全部的待测抗原产生D.第一次速率峰值信号是由部分的待测抗原产生E.以上均不对答案：C675.流式细胞仪中涉及的散射光信号可分为( )A.前向散射光和侧向散射光B.前向散射光和速率散射光C.速率散射光和侧向散射光D.定时散射光和侧向散射光E.定时散射光和前向散射光答案：A676.速率散射比浊免疫分析是( )A.抗原-抗体结合反应的终点测定法B.抗原-抗体结合反应的动态测定法C.免疫扩散与散射比浊相结合测定法D.免疫沉淀与散射比浊相结合测定法E.对流免疫扩散反应与散射比浊分析相结合的技术答案：B677.免疫比浊分析主要用于检测( )A.免疫球蛋白、补体等B.肿瘤标志物C.病毒血清标志物D.内分泌激素E.细胞表面标志答案：A678.从新鲜实体组织制备单细胞悬液的理想目标是( )A.分离细胞B.不损伤细胞C.既分离细胞又不损伤细胞D.破坏组织间的胶原纤维E.分解组织间的蛋白质答案：C679.计算最佳条件下的变异时，数据处理中( )A.超出2S的数据应删除B.超出3S的数据要删除C.超出-3S的数据要删除D.所有数据不管是否超出3S，均要用于统计E.以上都不是答案：D680.关于肿瘤逃避免疫监视的机制，下列哪项是错误的( )A.机体免疫系统功能障碍B.肿瘤抗原诱导免疫耐受C.宿主抗原提呈细胞功能低下D.肿瘤细胞抗凋亡或诱导免疫细胞调亡E.以上都不对答案：E681.下列涉及Ⅳ型超敏反应机制是( )A.过敏性休克B.结核菌素皮肤试验阳性C.血管神经性水肿D.血清病E.系统性红斑狼疮答案：B682.若TP为真阳性，FN为假阴性，TN为真阴性，FP为假阳性，诊断敏感性计算公式是( )A.TN/(TN+FN)×100%B.TP/(TP+FN)×100%C.TN/(TN+FP)×100%D.TP/(TP+FP)×100%E.(TP+FN)/(TP+FP+TN+FN)×100%答案：B683.在急性排斥反应中起主要作用的是( )A.细胞免疫应答B.体液免疫应答C.移植物供血不足D.血栓形成E.增强抗体引起答案：A684.现在流式细胞仪设置的分选收获率均在( )A.100%B.99%以上C.98%以上D.95%以上E.90%以上答案：D685.选择性Ig缺陷最常见的是( )A.选择性IgG缺陷B.选择性IgA缺陷C.选择性IgM缺陷D.选择性IgD缺陷E.选择性IgE缺陷答案：B686.脱敏治疗可用于( )A.冷空气过敏B.食物过敏C.血清过敏症D.接触性皮炎E.血清病答案：C687.与宫颈癌发病有关的病原是( )A.衣原体B.支原体C.HIVD.EBVE.HPV答案：E688.与Ⅱ型超敏反应无关的成分是( )A.抗体B.补体C.致敏淋巴细胞D.巨噬细胞E.NK细胞答案：C689.遗传性血管神经性水肿的发生机制是( )A.C2a产生过少B.C2a产生过多C.C3a产生过少D.C3a产生过多E.C4a产生过多答案：B690.作ROC曲线时，横坐标、纵坐标分别为( ) A.假阳性率与诊断敏感性B.真阳性率与诊断敏感性C.假阳性率与真阳性率D.真阳性率与诊断特异性E.假阳性率与诊断特异性答案：C691.若TP为真阳性，FN为假阴性，TN为真阴性，FP为假阳性，阳性预测值计算公式是( )A.TN/(TN+FN)×100%B.TP/(TP+FN)×100%C.TN/(TN+FP)×100%D.TP/(TP+FP)×100%E.(TP+FN)/(TP+FP+TN+FN)×100%答案：D692.下列由受体抗体引起自身免疫性疾病的是( )A.Grave病B.肺出血肾炎C.系统性红斑狼疮D.多发性硬化症E.溃疡性结肠炎答案：A693.下列组合中由抗体介导的超敏反应有( )A.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型超敏反应B.Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型超敏反应C.Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型超敏反应D.Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型超敏反应E.Ⅱ、Ⅳ型超敏反应答案：A694.质控图制作的关键是( )A.标准差选择B.控制限选择C.质控血清选择D.试剂盒选择E.Cut-off值的选择答案：B695.干燥综合征患者初期最常侵犯的器官是( )A.皮肤B.唾液腺和泪腺C.心脏D.神经系统E.肾脏答案：B696.下列属于T细胞免疫缺陷病的是( )A.Bruton综合征B.吞噬细胞功能缺陷C.XSCIDD.慢性肉芽肿E.DiGeorge综合征答案：E697.B细胞分化抗原主要是检测( )A.CD3B.CD4C.CD8D.CD34E.CD9、CD10、CD19、CD20答案：E698.皮肤试验的最常用部位是( )A.上臂B.背部C.前臂内侧D.前臂背侧E.大腿内侧答案：C699.关于室间质量评价的描述，正确的是( )A.是对实验室操作和实验方法的即时性评价B.可以帮助实验室对自己的实验操作进行纠正C.室间质量评价为室内质量控制的补充，属于实验室的内部质量控制措施D.室内质控是室间质评的有益补充，做好室间质评就说明一个实验室质量控制很好E.是对实验室操作和实验方法的前瞻性评价答案：B700.定性免疫检测的室内质控，每次测定都应检测( )A.阳性对照B.阴性对照C.阳性、阴性对照D.弱阳性对照E.以上都不是答案：D。
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既往 地 关心杂 志的成 长。
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士 句鼓励， 不仅激荡着编者对杂志 进一步发 展的 深刻思考， 也化为期盼的目 光注视并推动着杂志不断 前行。
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免疫荧光技术的几种实验方法及其分类
免疫荧光技术的几种实验方法及其分类1、免疫标记法及其分类1）荧光免疫法：原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。
底物用磷酸-4-甲基伞形酮，检测产物发出的荧光，荧光强度与Mb浓度呈正比，可在8min内得出结果。
结果以Mb每小时释放的速率表示(△Mb)表示。
该法重复性好，线性范围宽，具有快速、敏感、准确的特点。
以双抗夹心法为例，首先将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体。
除去未结合抗体，然后加受检标本，使其中的蛋白抗原与固相抗体形成抗原抗体复合物。
洗涤除去未结合物，接着加入荧光标记的抗体，使之与抗原特异性结合，形成抗体—抗原—抗体复合物。
最后根据荧光强度，即可对蛋白抗原进行定量。
传统的荧光免疫法受本底荧光的干扰较大，时间分辨荧光免疫测定法是以具有特长寿命的稀土金属如铕，作为标记物，加入正常液后激发测定，能有效去除短寿命本底荧光的干扰。
2）放射免疫法放射免疫法是以过量的未标记抗原与放射性物质标记的抗原，竞争性地与抗体结合，形成有放射性的抗原—抗体复合物与无放射性的抗原—抗体复合物，并有过剩的标记抗原与未标记的抗原。
然后通过离心沉淀等方法，将抗原—抗体复合物与游离抗原分离，分别测定其放射性强度与标准曲线比较，即可对未标记的待测抗原进行定量。
RIA法测定血清蛋白灵敏度高、特异性强，可准确定量到ng／ml水平。
但早期的方法操作麻烦，耗时长，且有放射性污染。
近年来，随着单克隆抗体的应用，RIA的灵敏度又有了较大提高，且操作大为简化，并已有商品试剂盒供应，使用方便。
3）酶联免疫法(ELISA)ELISA法有竞争法和夹心法两种。
竞争法是基于标准或血清Mb和微孑L板上包被的Mb竞争性地与单克隆抗体相结合的原理而建立，该法的最低检测限为10μg／L，线性范围达1 000ug／L。
夹心ELISA法与EIA具有良好的相关性(r＝0.92)。
ELISA法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，操作简单，适用于多份标本的检测，不需特殊仪器设备等优点，易于推广普及。
多b值DWI成像在肝脏感染性病变诊断的应用
多b值DWI成像在肝脏感染性病变诊断的应用阿丽亚·艾则孜;王云玲;王红;艾合买提·依沙克;贾文霄【摘要】目的:探讨多b值DWI序列ADC值测量在肝脏感染性病变诊断及鉴别诊断中的应用价值.方法:回顾性分析23例肝脏病变(肝脓肿11例,肝结核3例,9例肝泡状棘球蚴)行多b值的DWI扫描及常规MRI检查,分别拟合出10个b值ADC10b图,3个低b值(0s/mm2、50s/mm2、100s/mm2) ADCl.w图,3个高b 值(500s/mm2、750s/mm2、1000s/mm2) ADChigh图,并将ADCl.w与ADChigh值之间的差异定义为ADCperf值.在病变液化区及边缘带绘制两个相同大小的感兴趣区(ROI),分别计算出ADClow、ADChigh、ADCperf及ADC10b值,并分析三组肝脏病变在不同b值以及不同区域各个测量参数之间的差异.结果:不典型肝泡型包虫与脓肿之间液化区及边缘带ADC10b,ADChigh值的差异均有统计学意义(P＜0.05);结核、脓肿、不典型泡性包虫病边缘带ADC10b、ADCperf差异均有统计学意义(P＜0.05);而脓肿及泡性包虫病液化区ADCperf以及结核及脓肿边缘带ADChigh无统计学意义(P＞0.05).肝脏各组病变不同区域的ADCl.w值差异无统计学意义(P＞0.05).结论:DWI和ADC图分析及ADC值测量可为肝脏感染性病变的诊断及鉴别诊断提供重要的补充信息.【期刊名称】《中国医学计算机成像杂志》【年(卷),期】2015(021)002【总页数】5页(P134-138)【关键词】扩散加权成像;肝脏感染性病变;鉴别诊断【作者】阿丽亚·艾则孜;王云玲;王红;艾合买提·依沙克;贾文霄【作者单位】新疆医科大学第二附属医院影像中心;新疆医科大学第二附属医院影像中心;新疆医科大学第二附属医院影像中心;新疆医科大学公共卫生学院;新疆医科大学第二附属医院影像中心【正文语种】中文【中图分类】R445.2磁共振扩散加权成像（diffusion weighted imaging，DWI）是观察活体组织微观扩散运动最理想的成像技术[1-3]。