2021年石蜡切片和冷冻切片之欧阳学文创编
石蜡切片与冰冻切片培训教程石蜡切片和冰冻切片优缺点比较项目
石蜡切片与冰冻切片培训教程石蜡切片和冰冻切片优缺点比较冰冻切片概述：冰冻切片是将活组织迅速冰冻、切片、染色，进行病理诊断的方法。
主要应用:（1）快速病理诊断（2）显示组织中的脂质（3）在组织化学上显示酶活性（4）神经组织学的镀银和镀金染色法（5）免疫荧光的研究准备材料：（1）切片机刀片（2）冰冻包埋剂（3）液氮罐（4）液氮专用冻存管（5）组织镊（6）手术刀或组织剪（7）培养皿（8）生理盐水（9）粘附载玻片冰冻切片机仪器说明功能键说明灯光开关按钮，用于冷冻箱照明。
手动除霜按钮，用于激活和终止手动除霜。
入的参数。
要锁定或解锁定，按下约5秒。
用箭头所指的+和-键在钟型标记的面板上可以设置实际时间。
按下或按钮超过1秒，时间值连续增加或减少（自动重复功能）。
功能键说明紫外灯开关按钮，用于冷冻箱消毒，开启后30分钟后自动熄灭用箭头所指的+和-键设置自动除霜循环的起始。
同时，时和分标记之间的LED闪烁。
自动除霜循环每24小时进行一次。
用+和-键设置冷冻箱的温度。
实际温度是标准读数。
要显示需要的数值，触摸+和-键。
用+和-键置需要的数值。
按下或按钮超过1秒，冷冻盒温度值连续增加或减少。
完成设置后5秒将显示实际值。
用于激活Peltier元件冷冻快速冷冻站。
一旦激活，制冷系统的压缩机将在40秒后启动以加强热传导效应。
仪器无Peltier元件显示为“LL”，有Peltier元件显示为“PE”。
功能键说明粗调后退按钮，用于标本远离刀片的快速移动。
微调后退按钮，用于标本远离刀片的慢速移动。
粗调前进按钮，用于标本靠近刀片的快速移动。
微调前进按钮，用于标本靠近刀片的快速移动。
（注意：以上粗调和微调按钮均可采用点按步进移动或长按连续移动。
）冰冻切片操作流程①取材：手术过程中取下的新鲜组织，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，大小约为24×24×2mm；②设定冷冻温度：应视不同的组织选择不同的冷冻箱冷温度,冷冻不足无法切片，冷冻过度切片易碎，如：a 软骨、睾丸、脾脏等高密度组织，冷冻箱温度在-10 ～15℃；b 甲状腺、脑、心脏、肌肉等组织，温度在-15～25℃；c 肝、乳腺、膀胱等含脂肪的组织，温度在-25℃以下。
石蜡切片和冷冻切片制作流程
石蜡切片和冷冻切片制作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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1. 固定，将组织浸泡在固定液中（如福尔马林），使组织蛋白凝固。
甲状腺术中冰冻切片与术后石蜡切片的诊断结果比较
甲状腺术中冰冻切片与术后石蜡切片的诊断结果比较摘要】目的：比较甲状腺术中冰冻切片与术后石蜡切片的诊断结果。
方法：选取我院自2015年1月-2018年12月收治的65例甲状腺手术患者，所有患者于术中行冰冻切片与术后石蜡切片，比较分析诊断结果。
结果：术中冰冻切片与术后石蜡切片符合率为96.92%。
结论：术中冰冻切片与术后石蜡切片有较高一致性，且术中冰冻切片可为临床手术方式、范围的选择提供指导，术后石蜡切片可作为术后病理确诊提供参考。
【关键词】甲状腺；术中冰冻切片；术后石蜡切片；病理诊断【中图分类号】R581 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）08-0109-02甲状腺疾病是临床常见疾病及多发病，临床多采用彩色多普勒超声检查，有较高诊断率，但术前仍有部分患者无法鉴别甲状腺结节性质，增加了临床诊断难度，耽误了最佳时间[1]。
因此，提高早期诊断具有重要意义。
1.资料与方法1.1一般资料本次研究的65例甲状腺手术患者均来源于我院自2015年1月-2018年12月收治的住院病人，男性患者9例，女性患者56例；年龄17～76岁，平均年龄（51.05±14.23）岁。
类型包括甲状腺炎2例，结节性甲状腺肿30例，甲状腺腺瘤18例，甲状腺癌15例。
1.2方法术中冰冻切片术中取新鲜甲状腺病变组织，未经固定组织平行切开，采用恒温冷冻切片机行OCT包埋剂包埋及快速冷冻。
于-17℃～-20℃下保存，冷冻时间约3分钟，切面厚度约6μm，HE染色后在光镜下得以观察。
术后石蜡切片：术中剩下组织实施术后石蜡切片，于10%的中性甲醛溶液中得以固定处理，在石蜡包埋、切片及HE染色后，通过光镜观察病理组织。
1.3诊断标准观察并计算术中冰冻切片与术后石蜡切片对不同甲状腺疾病的符合率。
分为完全符合、基本符合、误诊及不能明确性质，完全符合：两种检查方法结果完全一致；基本符合：两种检查在良恶性上一致，但在分类上有一定差别；误诊：两种检查完全相反或者有较大区别；不能明确性质：冰冻切片不能明确性质需待石蜡切片诊断。
分析卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断结果
分析卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断结果【摘要】目的对比卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断价值。
方法于2020年8月-2021年7月开展卵巢肿瘤诊断方式的研究，将70例卵巢肿瘤患者纳入研究，分别进行快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断，对比各自的诊断价值。
结果快速冰冻切片病理诊断卵巢肿瘤误诊恶性肿瘤5例，石蜡切片的准确性为100%,石蜡切片病理诊断准确性更高（P<0.05）。
快速冰冻切片病理诊断时间较石蜡切片病理诊断时间短（P<0.05）。
结论快速冰冻切片病理诊断卵巢肿瘤的诊断时间较更短（P<0.05），但石蜡切片病理诊断准确性更高。
【关键词】卵巢肿瘤；病理诊断；快速冰冻切片；石蜡切片[Abstract] Objective To compare the value of rapid frozen section and paraffin section in the pathological diagnosis of ovarian tumors. Methods the diagnostic methods of ovarian tumors were studied from August 2020 to July 2021. 70 patients with ovarian tumors wereincluded in the study. The pathological diagnosis of rapid frozen section and paraffin section were carried out respectively, and their diagnostic values were compared. Results the accuracy of Paraffin section in the diagnosis of ovarian tumors was 100%. rapid frozen section was misdiagnosed as benign tumors in 5 cases, and the accuracy of rapid frozen section was higher (P < 0.05). The time ofpathological diagnosis of rapid frozen section was shorter than thatof paraffin section (P < 0.05). Conclusion the diagnostic accuracy of paraffin section is higher an， the diagnostic time is longer thanthat of rapid frozen section (P < 0.05).【 key words 】 ovarian tumor; Pathological diagnosis; Rapid frozen section; Paraffin section卵巢囊肿属于常见妇科疾病，一般在中老年女性当中多发。
实验十五、石蜡切片法(四)染色、封藏(附：冰冻切片法)
(10) 蒸馏中漂洗5min(换一次)。 (11) 1%伊红水溶液1~5min。 (12) 70%酒精数秒。 (13) 80%、95%、纯酒精(2次）各2min。 (14) 纯酒精与二甲苯等量混合液5min。 (15) 二甲苯5—10min。 (16) 封藏: 封藏于中性树胶中。
2. 封藏的方法 在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从 二甲苯中取出放在纸上（切片一面向上），迅速地在 切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再 进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧， 稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触，然后再缓慢地放下， 避免产生气泡。
四、注意事项 1、脱蜡应彻底； 2、水洗时水流不能太急； 3、“分色”、“蓝化”时间要掌握好； 4、脱水要彻底； 5、适量滴加封藏剂。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
五、实验结果 细胞核蓝色，细胞质粉红色。
六、思考题 1. 在染色、封藏过程中容易出现哪些不正常现象？ 应如何解决？
附：冰冻切片法 冰冻切片法具有制片速度快并能完整保存细 胞结构及生物大分子活性（如脂肪、酶等） 胞结构及生物大分子活性（如脂肪、酶等）的优 点，常用于临床上的病理快速诊断及细胞化学的 制片。 制片。
一、操 作 程 序 1. 取 材：取新鲜的组织。 取新鲜的组织。 2. 固 定：组织固定于10%中性福尔马林 冰冻切片。 中性福尔马林,冰冻切片 组织固定于 中性福尔马林 冰冻切片。 3. 切 片： (1) 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度， 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度， 调整切片角度，安装切片刀。 调整切片角度，安装切片刀。 (2) 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定，放到 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定， 冷台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。 冷台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。 (3) 将样品放到样品头上，用样品快进按钮将样品移 将样品放到样品头上， 近刀口，利用慢进按钮开始修片， 近刀口，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷 板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝， 板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝，取出 后染色观察。 后染色观察。
[原创]石蜡包埋切片制作法
![[原创]石蜡包埋切片制作法](https://img.taocdn.com/s3/m/37fb33260812a21614791711cc7931b765ce7be6.png)
一、制备显微标本的切片法一石蜡包埋切片制作法这是最常用的切片法。
以石蜡作为组织的填充支持介质，将整块组织加以包埋，最后凝固成均匀一致的固态结构。
用切片机制取极薄的切片。
为了让石蜡能浸入组织内部，需将组织经过脱水等处理。
过程大致如下：⑴固定：生物标本脱离机体或培养环境，细胞会发生自溶，腐败分解。
因此，需用固定剂处理，使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。
凡供永久保存的标本都需经固定处理。
常用的固定剂是甲醛、乙醇等，能使蛋白质凝固。
还有由几种试剂配成的固定液，例如Carnoy固定液，由无水酒精、氯仿、冰醋酸配成，固定力更快更强，不含水分，可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。
⑵脱水：是将组织细胞所含水分除去。
通常用乙醇（Alcohol，酒精），浓度递升到100%。
此过程还使组织块进一步硬化。
⑶透明：是用既能溶于纯酒精又能融解石蜡的有机溶剂，将组织中的酒精取代，以便石蜡浸入。
通常用二甲苯（xylene）为透明剂。
⑷浸蜡：在温箱内进行。
已透明的组织块放入加热融解的石蜡中，让石蜡浸透组织，作为支持介质。
⑸包埋：将已浸蜡的组织块放入热融的包埋石蜡中，迅速冷凝，组织决便被蜡包埋。
⑹切片：用切片机。
常用的切片机有轮转式、平推式的。
用轮转式的易于切出连续切片。
切片厚度随制片目的而调整。
教学标本厚度多是5~6μm。
⑺贴片烤干：石蜡切片在温水上展平后，移在玻片上，烤干，即可供染色处理。
染色后用树胶、盖坡片封固，可永久保存。
二冷冻切片法冷冻切片法是借组织在低温下，冻结变硬而达到符合切片要求。
冷冻切片法需有冷冻切片机，或在普通切片上配制冷设施。
恒冷切片机是高级冷冻切片设备。
它有一个恒冷箱，标本致冷台和切片机都装在箱内。
恒冷箱的作用类似冰箱，可在一定范围内调整温度，其结构有利于保持箱内恒定低温，减少箱门打开时环境温度的干扰。
切片机的轮转把手装在箱外，便于操纵切片。
冷冻切片法的优点是：在处理得当时，它可以最大限度地保持组织的新鲜状态。
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析
石蜡切片和冰冻切片都是质谱成像分析中常用的技术。
它们各自具有优点，可以根据实验需求进行选择。
石蜡切片法是将组织样本固定在石蜡块中，然后用切片机切成非常薄的切片(通常在20-50微米之间)。
这种方法的优点在于其切割厚度均匀，可以提供高质量的细胞和组织的图像。
此外，由于使用的是石蜡作为固定剂，因此可以得到长期保存的切片。
石蜡切片也有其缺点。
石蜡本身是一种有机物质，可能会对某些生物分子产生影响。
石蜡切片需要经过一系列复杂的处理步骤，包括脱水、包埋、切片等，这可能增加实验的复杂性和时间成本。
相比之下，冰冻切片法则是在冷冻状态下快速切割生物组织并立即冻结以保留其完整性。
这种方法的优点在于它可以提供实时观察的活体细胞和组织结构，对于研究动态过程非常有用。
此外，冰冻切片不需要使用石蜡或其他固定剂，因此不会对生物分子产生影响。
然而，冰冻切片也有其挑战。
由于是在冷冻状态下进行切割，因此切片的质量可能受到冷冻损伤的影响。
此外，冰冻切片需要在极短的时间内完成，这可能对切片机的性能要求较高。
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析，选择哪种方法取决于具体
的实验需求。
如果需要长期保存的高质量图像，或者需要研究静态结构和三维形态，那么石蜡切片可能是更好的选择。
而如果需要实时观察活体细胞和组织结构，或者对时间敏感，那么冰冻切片可能更合适。
卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断的对比效果分析
卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断的对比效果分析【摘要】目的探讨卵巢肿瘤石蜡切片和快速冰冻切片病理诊断的对比效果。
方法选择2020年1月-12月接受治疗的卵巢肿瘤患者40例，均在术中选择快速冰冻切片与石蜡切片进行病理诊断，对比两种诊断技术诊断结果。
结果石蜡切片诊断确诊率（55.00%）同快速冰冻切片（30.00%）相比较高，P<0.05。
结论两种诊断方式对该病的病理诊断均具有一定的优势，临床可根据具体情况进行选择。
【关键词】石蜡切片；快速冰冻切片；卵巢肿瘤；病理诊断卵巢肿瘤属于女性常见疾病，好发对象为中青年女性，其可因囊肿组织病变程度分为恶性、生理性及良性，发病早期无明显临床症状出现，随着肿瘤体积的增大，部分患者会出现腹痛及腹胀等临床症状，并可触摸到腹部肿块[1]。
恶性肿瘤会出现全身转移的症状，严重会影响女性生育能力，且伴有肌体感染等并发症，对女性身心健康造成严重威胁[2]。
由于该病早期症状不明显，需通过定期体检及常规妇科检查，才可反映出病症，为了更好检验卵巢囊肿病理变化将囊肿病变组织切片进行分析[3]。
本文实验采用快速冰冻切片与石蜡切片切片进行该病的病理诊断，比较两组之间效果，取得理想的实验效果，具体分析如下。
1资料与方法1.1一般资料选择2020年1月-12月接受治疗的卵巢肿瘤患者40例，所有患者均在术中选择快速冰冻切片与石蜡切片进行病理诊断，年龄20～70岁，平均（60.12±5.68）岁。
纳入标准：所有患者经医务人员临床确诊且常规B超检查判断为卵巢囊肿。
排除标准：存在手术禁忌症；肝肾功能异常者；严重精神疾病者。
1.2方法两组均进行基本手术治疗，均由医护人员对患者病变组织进行处理，切除一些新鲜病变组织，快速冰冻切片进行病理诊断，将病理组织放入零下温度的液氮中，冷冻时间为3分钟，等冰冻快速形成后和切片处理后在实施固定和染色，采用机器将组织切片保持在5um左右即可，后在显微镜进行观察并分析。
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石蜡切片和冷冻切片——傻傻分不清楚系列
欧阳光明（2021.03.07）
在组织实验中，组织切片和冷冻切片是最常见的两种切片方法，两种优缺点明显，在实验的应用上也大有不同。
而两个实验的相同点都是应用免疫学基本原理——即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内蛋白质，对其进行定位、定性及相对定量的研究。
一、石蜡切片
组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
1、固定：将新鲜组织切成小块，固定于4%多聚甲醛过夜。
凝固组
织中的物质成分，尽可能保持其活体时的结构。
同时能使组织硬化，有利于切片的进行。
2、脱水：为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1小时。
固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。
3、透明：常用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂。
纯酒精不
能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精。
材料块在透明剂浸渍过程称透明。
4、浸蜡：
先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1小时。
先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍1小时左右。
5、包埋：以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定。
6、切片：切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度。
通常切片厚度为5微米，用毛笔轻托轻放在37度水浴中展片。
7、贴片与烤片：将水浴中展片捞至玻片上铺正，然后将载玻片放入37℃温箱中干燥。
8、切片脱蜡及水化：干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化。
9、染色：
经典的苏木精和伊红：细胞核被苏木精染成紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。
实验操作简单。
免疫组化：指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应。
二、冰冻切片：
冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度，然后进行切片的一种方法。
制作过程较石蜡切片快捷、简便，因多应用
于手术中的快速病理诊断。
一、取材：应尽可能快地采取新鲜的材料，防止组织发生死后变化。
二、速冻：
1、将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm）。
2、如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内。
3、当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
4、在制成冻块后，即可置入恒冷箱切片机冰冻切片。
5、若需要保存，应快速以铝箔或塑料薄膜封包，立即置入-80℃冰箱贮存备用。
三、固定：
1、样品托上涂一层OCT包埋胶，将速冻组织置于其上，4℃冰箱预冷5-10min让OCT胶浸透组织。
2、取下组织置于锡箔或者玻片上，样品托速冻。
3、组织置于样品托上，其上再添一层OCT胶，以完全覆盖为宜，速冻架（PE）上30min。
四，切片：
1、恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机，其基本结构是将切片机置于低温密闭室内，故切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至5-10μm。
2、切片时，低温室内温度以-15℃ ~ -20℃为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。
3、切好室温放置30min后，入4℃丙酮固定5-10min，烘箱干燥20min。
PBS洗5min×3。
4、进行抗原热修复，微波热修复也可，室温自然冷却。
可用3%H2O2孵育5-10min，消除内源性过氧化物酶的活性。
五、免疫荧光染色：
1、冰冻切片室温晾干15min，可用含10%正常山羊血清的PBS室温封闭切片1小时（此步可不洗）。
2、滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液（抗体的量视组织大小而定，原则是可以均匀覆盖组织面，且保证整个过程中不会使组织干涸）。
3、将切片放在加了PBS的免疫组化湿盒，室温孵育2小时或4℃过夜。
4、第二天先将湿盒放到37℃回温1h，然后吸取片上的一抗进行回收，将切片插入到小染缸PBS冲洗。
5、滴加用PBS稀释好的二抗（避光）置于分子杂交箱中37℃孵育1小时。
回收二抗，切片置于染缸内，PBS洗5min×3次。
6、滴加DAPI工作液染核，室温10-20min（工作浓度0.1%染色
15min）。
7、回收DAPI，滴加5-10μl抗荧光衰减封片剂或中性树胶，用处理干净的盖玻片封片，即可到荧光显微镜或者共聚焦显微镜下观察拍照。
8、做好的切片放在切片盒内，置于4℃冰箱，可保存一周左右。
对比：。