动态浊度法测定复方苦参注射液中细菌内毒素
动态浊度法测定中药注射剂细菌内毒素的研究概况

关 键 词 : 态浊度 法 ; 试验 ; 动 鲎 中药 注射 剂 ; 菌 内毒 素检 查 法 ; 述 细 综
中 图分 类号 : 2 4 1 R cT ri tc A ey K A) K nt .udme i sa , T i r
检 测药 品 内毒 素 具 有 灵 敏 度 高 , 定量 测 定 出检 能 品内 毒 素 含 量 , 外 药 典 有 收 载 , 中 国 药 典 国 但 20 00版未 收 载 。应 用 K A检 测 中药 注 射 剂 的 细 T 菌 内毒 素 , 内有不 少 学 者对 此进 行 了研 究 探 讨 。 国 为 了解 国 内应 用 K A检 测 中药 注 射 剂 细 菌 内毒 T 素 的情况 , 笔者 总 结 了 国内研 究 情况 , 品种类 型 按 进 行综 述 , 为今 后进 行 大 规模 应 用提 供 参 考依 据 。 现将 结 果综 述如 下 。 1 丹 参 注射 液 苑 庆 华 等 … 采 用 K A( T 鲎试 剂 =0 0 E .3 U・ r ~, n 湛江 安 度 斯 生 物 有 限公 司 ) 样 品 ( l 对 中美 合 资安 徽 天祥药 业 有 限 公 司 ) 行 添 加 内毒 素 回收 进 试 验 及 热原 检 查法 的对 比试 验 分析 。结果 样 品稀 释 8 开始已部分无干扰 ,6 已完全无干扰作 倍 l倍 用 , 且 可 得 到更 好 回收 率 , 而 因此 1 稀 释 液 更 6倍 为适合。经 6 批样品 1 倍稀释后定量检测 , 同 6 并 时进行凝胶 、 热原检查 , 结果 , 1 除 批不合格外 , 其 余 5批 的 内 毒 素 含 量 均 在 02 E r 以下 , .5 U・ l n 且 回收 率 均在 7 % ~15 5 2 %范 围 内。 2 血 塞 通 注射 液 张 秀 萍 等 ] 过 采 用 鲎试 剂 ( 48L 规 格 : 通 K91, 每瓶 52 l美 国 E D S  ̄ ) K A对 样 品 ( .m , N OA 用 T 云南 昆 明兴 中制 药厂 ) 行 添 加 内毒 素 回收 试 验 及 与 进 热原 检 查 的对 比试 验 分 析 , 结果 样 品溶 液 在 8 0倍 以下 存在 很 强 的 抑 制 作 用 , 8 从 O倍 开 始 已 无 干 扰 , 在 10倍 时 能 得 到 更 好 的 回收 率 , 时 10 而 6 同 6 倍 也正 好 是 添加 内毒 素 浓 度 时 的试 验 稀 释 倍 数 , 此 日常检 查 时取 10倍 释 液 进 行 。对 4批 因 6 血 塞通 注 射 液 的 10倍 稀 释 液 进 行 干 扰 定 量 检 6 测 , 果 样 品 的 内 毒 素 含 量 均 在 12E m 结 .5 U・ l
细菌内毒素检查SOP(动态浊度法)

细菌内毒素检查SOP(动态浊度法)1.目的为规范细菌内毒素含量测定的操作,特制定本SOP。
2.范围本SOP适用于细菌内毒素含量测定的操作。
3.定义3.1.动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间,或是检测浊度增加速度的方法。
3.2.细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成,用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
3.3.细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价,用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
3.4.细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015 EU/ml(用于凝胶法)或0.005 EU/ml (用于光度测定法)且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水。
4.职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。
4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。
4.3.质量负责人/质量受权人负责本规程的批准。
4.4.QA负责本规程执行的监督。
5.引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部。
6.材料6.1.仪器设备细菌内毒素测定仪、漩涡混合器、干烤箱6.2.试剂及溶液6.2.1.鲎试剂6.2.2.细菌内毒素工作标准品:国家标准品或经过国家标准品标定的工作标准品。
6.2.3.细菌内毒素检查用水:内毒素含量应小于0.005EU/ml。
6.3.使用的器具移液器、无热原稀释管和反应管、无热原枪头。
7.流程图无8.程序8.1.原理细菌内毒素能激活鲎试剂(TAL)中的酶系统,使凝固酶原变成凝固酶,进而凝固酶再激活其中的凝固蛋白原变成凝固蛋白,呈现凝胶反应,动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间,计算内毒素浓度与反应时间关系的双对数标准曲线,利用标准曲线对供试品的内毒素含量进行定量测定。
8.2.试验前准备8.2.1.采样管用硅胶塞塞口,经180℃干烤2小时,除内毒素备用。
动态比浊法定量检测复方氨基酸注射液中的细菌内毒素

动态比浊法定量检测复方氨基酸注射液中的细菌内毒素【关键词】动态【关键词】复方氨基酸注射液;动态比浊法;细菌内毒素;干扰实验;鲎试剂1材料与方式1.1材料与试剂细菌内毒素检查用水(BET水)(批号030510,规格10 ml/支,厦门鲎试剂厂);鲎试剂(动态浊度法鲎试仪专用,批号030725,规格015 ml/支,厦门鲎试剂厂);细菌内毒素工作品(批号030610,规格10EU/支,厦门鲎试剂厂);复方氨基酸注射液(3AA)批号2,1,3,1,2,规格250ml/瓶,湖北峰江);BET32型细菌内毒素测定仪(天津大学无线电厂);ZH2自动漩涡混合器(天津药典标准仪器厂);实验所用玻璃器皿经铬酸洗液处置后,再经250℃干烤1h 以上,除去外源性内毒素。
1.2方式与结果1.2.1实验条件:检测温度为37℃;检测波长为660 nm;最长检测时刻为8400 s。
1.2.2细菌内毒素限值(L)的确信[1]:按公式L=K/M,K为静脉注射给药的细菌内毒素阈剂量=50EU・ml-1,M为病人每千克体重每小时最大给药剂量。
本文采纳家兔热原剂量M=10ml・kg-1・h-1,那么复方氨基酸注射液(3AA)细菌内毒素限值(L)为05 EU・ml-1。
1.2.3标准曲线制备及靠得住性:取细菌内毒素工作品1支加BET水10 ml,用封口膜封口,置漩涡混合器上混合15 min,进行10倍稀释,然后2倍稀释,且各步置漩涡混合器上混合30 s,使其最终内毒素浓度为10,05,025,0125,00625,00312,00156EU・ml-1稀释系列,各取015 ml别离加到预先加有015 ml鲎试剂的反映管内,混合均匀,插入浊度仪进行检测。
每一浓度平行3管,同时用BET水做2管阴性对照(NC),结果见表1。
表1标准曲线的靠得住性内毒素浓度(略)1.2.4供试品溶液配制及干扰实验:①供试品最大有效稀释倍数(MVD)计算:按公式MVD=L×C/λ,L为复方氨基酸注射液(3AA)的内毒素限值05EU・ml-1,λ为标准曲线最低浓度00156EU・ml-1,C为供试液浓度。
动态浊度法检测苦参碱葡萄糖注射液中细菌内毒素

[ 要 ] 目的 : 究 氟 罗沙星 葡 萄糖 注射液 在 阳光 直射 下 的 摘 研 稳 定 性 。 方 法 : 罗 沙 星 葡 萄糖 注 射 液 在 阳 光 下 直 射 6 h 氟 后, 观察 其 外观 、 H值 和 浓 度 的 变化 , p 用薄 层 色谱 法 检 查 有 无分 解产 物 生 成 。结 果 : 罗 沙 星 葡 萄 糖 注 射 液 遇 光 不 稳 氟
一
定 , 光分 解 。提示 此 药 物 必 须 避 光 保存 。实 验 考 察 , 罗 遇 氟 沙星葡 萄糖 注射 液 , 在 自然 光 下 1h 颜 色发 生 改 变 , 淡 放 , 为
黄 色 。建议 临床 使用 此 输 液 时 , 随配 随输 , 输 液 过 程 中 应 在
用 黑纸 套遮 光 , 免 光线 照射 。 避
[ 图分类 号 1 9 7 1 中 R 2.1 [ 文献 标识 码 ] A [ 文章 编 号 ]10 01
表 1 阳光直 射 时氟 罗沙 星葡 萄 糖注 射液 的 外观 、H值 和浓 度 变化 p
Ta Th ait n o oo , H a ea d c n e tai f eo a i a dgu o ei e t n i es n ih b1 ev r i f lr p v l n o cn r t n o r x c n lc s jci t u l t ao c u o l f n n o n h g
2 方法 与结 果
2 1 标 准 曲线 的绘 制 精 密 称 取 1 . 9mg氟 罗 沙 星原 料 . 0 2 药 . 2 置 5mL的量瓶 内, n 1to・ 1 酸 溶 解 至 刻 度 , J 0. lLI 盐 J o 配 成4 16ng LI 的标 准 溶液 。精 密量 取 标准 溶液 , 1 . a ・ 1 分别 置 6 个 1 0mL量 瓶 中 , n . o・ 1 酸 至 刻 度 , 匀 , 成 每 J 0 1t lLI 盐 J o 摇 配 1mL含 不 同浓度 的氟 罗 沙 星系列 溶液 , . o・ I 盐 酸 以0 1t lL 1 o 为空 白 , 2 6n 波 长 处 测 定 吸 收 度 【 , 算 得 标 准 曲线 在 8 m 计
动态浊度法定量检测氟罗沙星注射液中的细菌内毒素

表 2 干扰试验“=2 )
・
5 ・ 5
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江 苏 药学 与临 康 研 究
20 0 2年 第 l O卷 第 1 期
2 4 F 的 细 菌 内毒 素 定 量 检 测 与 热 原 检 查 . l 取 3 F 用 B T 水 分 别 作 1 0倍 稀 释 。 同 时 批 I E 2 并
效稀释 倍数为 10 。将 F 用 B T水 依次稀释 为 2 0倍 I E
1 0 2 0 4 0 9 0倍 , 为 A 液 ; 2 、4 、8 、6 记 i 同时 另 取 4管 , 进
行 同样倍 数 的稀 释 , 并在 稀 释 液 中添加 细 菌 内毒 素
浓 度 为 0 5 U・m I 的细 菌 内毒 素 标 准溶 液 , . 0E l1 记 为 B液, i 进行 回收试 验 。分 别取 上述各液 0 1 加 . ml 入 预 先加有 0 1m A . l L的反应 管 中 , 合均 匀 , T 混 插
2 方法 与结果 2 J F 的细 菌 内毒素限值计 算 . 1 F 成 人每d B l , t的最大 用量 为 4 0mg 人均 体重 0 , 按 6 g计 , 剂 量 为 6 6 Ok 即 . 7mg・k ~, 体致 热 阈 g 人 值 ( : . U ・k , F 的 细 菌 内毒 素 限 值 L K) 5 0 E g 则 I 为: / K M=0 7 U’ g , 6 U ’ 一 。 . 5E m 即 0 E ml
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江 靠 药学 与临 束 研 完
20 年 第 L 卷 第 L 02 Q 期
动态 浊 度法 定量检 测 氟 罗沙星 注射 液 中的细 菌 内毒 素
顾炳 仁
苏州市 药品检验 所
中国药典内毒素检测方法

中国药典内毒素检测方法内毒素是革兰阴性菌细胞壁中的脂多糖组分,只有在细菌死亡裂解后才被释放出来。
内毒素对人体细胞产生的危害较小,但可刺激机体产生非特异性炎症反应,如微循环障碍、寒战、发热、血栓形成等。
因此,内毒素的检测对于药品质量控制具有重要意义。
本文将介绍中国药典中规定的内毒素检测方法,包括凝胶法、动态浊度法和终点显色法等。
一、凝胶法凝胶法是一种经典的内毒素检测方法,具有操作简便、快速、经济等优点。
该方法的基本原理是根据内毒素与限量革兰阴性菌细胞中的脂多糖抗原起反应而产生凝集现象。
操作步骤如下:1.将稀释的内毒素样品与标准品同时加入凝胶反应管中,摇匀。
2.将反应管放入37℃恒温器中,保温30分钟。
3.观察反应结果,记录凝集情况。
凝胶法适用于注射剂、滴眼剂等药品的内毒素检测,但不适用于供局部用药的制剂。
该方法的准确性和灵敏度相对较低,但可满足一般药品制剂的质量控制要求。
二、动态浊度法动态浊度法是一种较灵敏的内毒素检测方法,适用于各类注射剂、输液等药品的内毒素检测。
该方法的基本原理是根据内毒素在试管中产生的浊度变化来计算内毒素含量。
操作步骤如下:1.将稀释的内毒素样品与标准品分别加入动态浊度反应管中。
2.将反应管放入37℃恒温器中,保温30分钟。
3.观察浊度变化情况,记录反应终点时的时间和吸光度值。
4.根据吸光度值计算内毒素含量。
动态浊度法具有操作简便、快速、准确性和灵敏度高等优点,可满足高精度内毒素检测的需求。
但需要注意的是,该方法易受到杂质、样品颜色等因素的影响,因此需进行空白校正和标准曲线绘制等操作以提高准确性。
三、终点显色法终点显色法是一种高灵敏度的内毒素检测方法,适用于各类药品制剂的内毒素检测。
该方法的基本原理是根据内毒素与限量革兰阴性菌细胞中的脂多糖抗原起反应而产生颜色变化来计算内毒素含量。
操作步骤如下:1.将稀释的内毒素样品与标准品分别加入终点显色反应管中。
2.将反应管放入37℃恒温器中,保温30分钟。
动态比浊法测定并控制小容量注射剂中间产品细菌内毒素

动态比浊法测定并控制小容量注射剂中间产品细菌内毒素小容量注射剂是一种用途广泛的药物剂型,通常用于给药时需要准确控制剂量的情况。
由于其注射后进入血液循环,因此对其中间产品的质量要求非常严格,尤其是对细菌内毒素的控制必须做到位。
细菌内毒素是一种非常强大的生物毒素,即使微量的细菌内毒素也可能引起人体严重的反应,甚至危及生命。
在小容量注射剂的生产过程中,必须采取严格的控制措施来确保产品的质量和安全性。
动态比浊法是一种用于检测细菌内毒素的方法,它是基于细菌内毒素与特定抗体或配体结合后形成比较明显的混浊度增加的原理。
在小容量注射剂的生产过程中,可以利用动态比浊法来对中间产品中的细菌内毒素进行测定和控制。
下面将详细介绍动态比浊法在小容量注射剂生产中的应用。
动态比浊法的操作步骤如下:1. 准备工作:准备好所需的试剂和仪器设备,包括抗体或配体、洗涤缓冲液、标准品和比色皿等。
2. 样品处理:将待测样品与抗体或配体混合,并在恰当的条件下进行反应,使细菌内毒素与抗体或配体结合。
3. 混浊度测定:将反应后的样品放入比色皿中,通过光散射或液体浊度测定仪器来测定其混浊度的变化,从而推断样品中细菌内毒素的含量。
4. 数据分析:根据混浊度测定的结果,通过比对标准曲线或标准品的浓度来计算出样品中细菌内毒素的含量。
在小容量注射剂的生产中,动态比浊法可以用来对中间产品中的细菌内毒素进行定量测定和控制。
具体操作步骤如下:1. 样品准备:从生产过程中取得的中间产品样品,根据需要对其进行预处理,如稀释或加入适当的缓冲液等。
2. 反应条件确定:根据试剂厂家提供的指导,确定适当的抗体或配体种类和浓度,并进行试剂的配制和质控测试。
3. 样品处理:将待测样品与试剂混合,经过一定时间的反应后,制备出待测样品。
通过动态比浊法对小容量注射剂中间产品中的细菌内毒素进行测定和控制,可以有效地保证产品的质量和安全性。
在实际生产中,还需要注意以下几点:一是严格控制试剂的质量,确保抗体或配体的纯度和活性;二是建立合适的质控体系,定期对试剂和仪器进行检验和校准;三是制定详细的操作规程,对每一个操作步骤都进行严格控制和记录。
动态浊度法定量检测内毒素的原理

动态浊度法定量检测内毒素的原理
动态浊度法定量检测内毒素的原理
内毒素是一种存在于细菌细胞壁中的有毒物质,其对人体和动物的健
康有着严重的危害。
因此,对内毒素的检测显得尤为重要。
动态浊度
法是一种常用的内毒素检测方法,其原理是利用内毒素对细胞的毒性
作用,使得细胞在生长过程中受到抑制,从而导致细胞生长速度的减缓,最终导致细胞密度的降低。
通过测量细胞密度的变化,可以间接
地推断出内毒素的含量。
动态浊度法的具体操作步骤如下:
1.准备培养基:将所需的培养基配制好,并进行无菌处理。
2.接种细胞:将待检测的细菌接种到培养基中,并进行预培养。
3.制备内毒素:将待检测的细菌培养至对数生长期,然后收集细菌细胞,通过破碎细胞壁的方式制备内毒素。
4.加入内毒素:将制备好的内毒素加入到培养基中,使得细胞受到内毒素的毒性作用。
5.测量细胞密度:通过测量培养基中细胞密度的变化,可以间接地推断出内毒素的含量。
动态浊度法的优点在于操作简单、快速、灵敏度高,且可以同时检测
多个样品。
但是,该方法也存在一些缺点,如对于不同种类的内毒素
可能存在检测灵敏度不同的问题,同时,该方法也无法区分不同种类
的内毒素。
总之,动态浊度法是一种常用的内毒素检测方法,其原理是通过测量
细胞密度的变化来间接推断出内毒素的含量。
该方法操作简单、快速、灵敏度高,但也存在一些缺点。
在实际应用中,需要根据具体情况选
择合适的检测方法。
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R a d i x S o p h o r a F l a v e s c e n t i s I n j e c t i o n
ZHU Yi n g - h u a Z HU Qi - b i n g ( Hu a i ' a n Ho s p i t a l o f Tr a d i i t o n a l Ch i n e s e Me d i c i n e , Hu a i a n 2 2 3 0 0 0 , J i a n g s u ,C h i n a )
s u i t a b l e f o r d e t e r mi n a i t o n o f t h e B E T i n C o mp o s i t e Ra d i x S o p h o r a F l a v e s c e n t i s I n j e c t i o n a n d c o ld u b e u s e d s a n a lt a e na r t i v e f o r t h e r a b b i t
p y r o g e n t e s t t o t h e i n j e c t i o n . 【 k e y w o r d s ] C o m os p i t e R a d i x S o p h o r a F l a v e s c e n t i s I n j e c t i o n ; B a c t e r i a l e n d o t o x i n ; T u r b i d i m e t r i c — K i n e t i c m e t h o d ; I n t e r f e r e f a c t o r s t e s t
中图分类 号 : R 2 8 6 . 0 文献标 识码 : A
Appl i c a t i o n o f t he
文章编 号 : 1 0 0 6 — 0 9 7 9 ( 2 O 1 3 ) 1 5 — 0 1 1 8 — 0 2
Me t ho d f o r t h e Me a s ur e me n t o f Endo t o x i n i n Co mp o s i t e
复 方 苦 参 注 射液 是 苦 参 和 白土 芩 溶 液提 取 物 的灭 菌 溶 液 , 准 曲线成 立 。
有 清热 利 湿 , 凉血 解 毒 , 散结止 痛 的功 能 。 目前我 国药 品标 准
表 1 标准 曲线 的可靠性 ( n = 3)
刈 注射 剂 采 用家 兔法 进 行热 原 检查 。但 复方 苦 参 注射 液 临床 用 量大 , 且 为 中药 制 剂 , 采 用 家兔 法 进 行热 原检 查 操 作 复杂 , 影 响 因素 多 , 而细 菌 内毒 素 限值 检查 又具 有 较大 的 干扰 性 , 故选 用 动 态 浊 度法 测定 其 细 菌 内毒素 可 消除其 干扰 , 结 果准 确 可靠 , 且 对 复 方苦 参 注射 液 进行 添 加 内毒 素 回收试 验 及热 原检 查 的对 比试
l 1 8
内蒙古中医药
动态浊度法测定复方苦参注射液 中细菌 内毒素
朱 英花 ’ 朱 其兵
摘 要: 目的: 建立定量检测复方苦参注射液中细菌内毒素试验方法。 方法: 采用《 中国药典} 2 0 0 5 年版( 三部 ) 附录检测细菌内毒素的动态 浊度法。 结果: 复方苦参注射液用细菌内毒素定量法检测无干扰因素影响, 内毒素回收率在5 0 %- 2 0 0 %范围内。 结论 : 使用动态浊度法定量 检测复方苦参注射液的细菌内毒素是可行的, - . j -  ̄细菌内毒素方法代替兔热原检查法, 同时又避免了限量法内毒素检测时的干扰。 关键词 : 复方苦参注射液; 细菌内毒素; 动态浊度法; 干扰试验
【 a b s t r a c t ] O b j e c t i v e T o d e v e l o p a n a s s a y f o r d e t e r mi n a t i o n o f b e c t e r i l a e n d o t o x i n( B E T ) i n C o m p o s i t e R a d i x S o p h o r a F l a v e s c e n t i s I n j e c t i o n . Me t h o d s B E T w a s d e t e mi r n a t e d b y t u r b i d i m e t r i c - k i n e t i c m e t h o d . R e s u l t s T h e c o n t e n t i n C o m p o s i t e R a d i x S o p h o r a F l a v e s c e n t i s I n j e c t e r f e r e wi t h t h e q u a n t i t a t i o n o f BET. Th e r e c o v e r y o f BET wa s b e t we e n 5 0% a n d 2 0 0% , Co n c l us i o n Th e me t h o d i s p r o v e d t o b e