荧光定量PCR联合ELISA检测丙型肝炎病毒的临床应用研究
高灵敏荧光定量检测HCV-RNA在丙肝诊疗中的应用研究

2021年2月第11卷第3期CHINA MEDICINE AND PHARMACY Vol.11 No.3 February 2021175·检验医学·高灵敏荧光定量检测HCV-RNA在丙肝诊疗中的应用研究吴嘉锐 王 军 梁连辉 邓纪望 李淑丽 何 娟 蔡常辉广东省中山市第二人民医院检验中心,广东中山 528447[摘要]目的 观察评价分析高灵敏荧光定量检测丙型病毒性肝炎病毒核酸(HCV-RNA)在丙型病毒性肝炎诊疗中的应用效果。
方法 选择2018年2月至2019年2月中山市第二人民医院肝病门诊及戒毒所体检可疑感染丙肝的患者临床血清样本126例,分别采用HCV 磁珠法试剂和对照试剂检测血清中RNA 水平。
结果 磁珠法试剂检测126例样本中有54例阳性,72例阴性;对照试剂检测126例临床样本中有44例阳性,82例阴性,磁珠法试剂定量检测血清中RNA 水平阳性率42.86%高于对照试剂34.92%(χ2=1.670,P =0.196);磁珠法试剂和对照试剂的阳性样本具较好的一致性(P =0.0000),磁珠法试剂与对照试剂的定量检测结果具有线性相关(r =0.947,P <0.05)。
结论 磁珠法高灵敏荧光定量检测丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)具有更高的灵敏度,是一种比较理想的HCV-RNA 定量检测试剂,值得临床大力推广应用。
[关键词] 丙型病毒性肝炎;丙型病毒性肝炎病毒核酸;高灵敏荧光定量;磁珠法[中图分类号] R473.71 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616(2021)03-0175-04Application research of highly sensitive fluorescence quantitativedetection of HCV-RNA in diagnosis and treatment of hepatitis CWU Jiarui WANG Jun LIANG Lianhui DENG Jiwang LI Shuli HE Juan CAI ChanghuiInspection Center, Zhongshan Second People's Hospital, Guangdong, Zhongshan 528447, China[Abstract] Objective To observe, evaluate and analyze the application efficacy of highly sensitive fluorescence quantitative detection of HCV-RNA in diagnosis and treatment of hepatitis C. Methods A total of 126 clinical serum samples of patients suspected to be infected with hepatitis C through physical examination in hepatic disease clinic and drug rehabilitation center of Zhongshan Second People's Hospital from February 2018 to February 2019 were selected. Meanwhile, the RNA level in serum was detected by the HCV magnetic bead method reagent and the control reagent respectively. Results Among 126 samples detected by magnetic bead method, 54 cases were positive, and 72 cases were negative, 44 cases were positive, and 82 cases were negative in 126 clinical samples detected by the control reagent. The positive rate of serum RNA level in serum detected by magnetic bead method was 42.86%, which was higher than 34.92% of the control reagent (χ2= 1.670, P = 0.196). The positive samples of magnetic bead reagent and control reagent had good consistency (P = 0.0000). There was a linear correlation between the results of quantitative detection between magnetic bead reagent and control reagent (r = 0.947, P < 0.05). Conclusion The magnetic bead method is an ideal reagent for quantitative detection of hepatitis C virus nucleic acid (HCV-RNA) with higher sensitivity, and it is worthy of promotion and application in clinic.[Key words] Viral hepatitis C; Hepatitis C virus nucleic acid; Highly sensitive fluorescence quantification; Magnetic bead method丙型病毒性肝炎(hepatitis C virus,HCV 简称“丙肝”)是较常见的一种肝脏疾病传染性疾病,呈全球流行,不同性别、年龄、种族人群均对HCV 易感,HCV 的感染具有隐匿性,丙型肝炎病毒也是导致肝硬化和肝细胞癌的主要危险因素[1-2]。
丙型肝炎病毒核酸的荧光定量检测及其临床意义

by r a - i u r s e e q n ia i e RT—PCR e l tme f o e c nc ua tt tv l
S i in C i hcu H a gZ uu h n oge Wa gHu n ( m y l i l aoao , adoacl a oa r, fltd h a, u Z i , u n hቤተ መጻሕፍቲ ባይዱn, agD n l , n i J h Z i mi E zmo g a L brtr C ri s a Lb rt Afi e oc y v ur o y ia
H s i l f a t gU i r t J n s a tn 2 0 1 C i ) o pt no nv s y i gu N no g2 6 0 , hn ao N n e i, a a
A s atObet e t dvl e e o rdtco f HC R A q atyb elt ef oecneq atai T bt c r jc v : ee panw m t df eet no V- N u n t yra-i u rsec u nit eR - i o o h o i i m l tv
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通医学 2 0 0 7年 第 2 卷第 期 Me o o m nct n , 0 ,o.1 o 1 dJ f m u i i s 0 7V 1 . . C ao 2 2N 4
丙型肝病毒核酸和抗体联合检测及临床应用

医学信 息 2 1 0 2年 8 月第 2 5卷第 3 Meia Ifr ai . u . 0 2 V 12 . o 3 期 dclnom t n A g 2 1 . o. 5 N . o
丙型肝病毒核酸和抗体联合检测及临床应用
代 国仲 , 成利 , 雅 姜 王
湄 山 市人 民 医 院 , 四川 眉 山 6 0 1 2 00) 摘要 : 目的 探讨 丙型肝炎病毒核 酸和抗体联合检测在 临床 中的应用价值 。方法 丙型肝 炎病毒抗体 . — C 检测用 E I n H V) d LS A法. V R A HC — N
.ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
An i HCV e a i e a d HC — t— n gt n V v
R A p s iefr ai t w t %. n l s n teh p t i ca t o ya dHC — NA jit n p c o rc nc l i n s ,rame t e i c n N o iv t n s i 2 Co cu i h e a t ni d n V R n s e t n f l i a oi t t n, f c v a d t o p e h o is b o i i o i adg s e fa
丙型肝炎病毒检测的临床应用效果分析

应试 剂 , 湖南景 达制药 有 限公 司提 供 的 C a g试 剂 和 北 京 金 浩 制 药 有 限 公 司 生 产 的 Ab试 剂 。3种 检 测 试 剂 均 在 有 效 期 内 , 且 均 被 国 家 药 检 所 批 检 为 合 格 产 品 ] 。 1 . 2 . 2 仪 器 检 测 HC v_ R NA 时 运 用 AB I 一 7 3 0 0荧 光 定 量
检 验 医学 与 临 床 2 O 1 3年 7月 第 1 0卷 第 l 4期
L a b Me d C l i n , J u l y 2 0 1 3 , Vo 1 . 1 0 , No . 1 4
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1 8 57 ・
临床 研 究 ・
丙 型 肝 炎 病 毒 检 测 的 临床 应 用 效 果 分 析
1 . 1 一般资料
选取本 院 8 4例 已 知 HC V — R NA 结 果 的 临 床
径, 因此有效诊断 H C V 感 染 就 显 得 尤 为 重 要 。HC V 感 染 之
标本, 其中 5 3例 为 阳 性 , 3 1例 为 阴 性 。所 有 患 者 均 是 来 自本
后 病 毒 在 周 围血 中具 有 较 低 的 含量 , 用 血 清 学 方 法 无 法 对 病 毒 抗原进行检 测 , 现 阶段 主要 依靠 检 测抗一 HC V 免疫 球蛋 白 G ( HC V— l g G)和 HC V— RNA 来 诊 断 。 1 9 8 9 年 抗一 HC V— I g G E L I S A试剂问世 , 促 使 包 被 抗 原 迅 速 发 展 成 为 第 3代 试 剂 , 包
仪 , 检 测 HC V - C a g 、 抗一 HC V时运用 E L X 一 8 0 0酶 标 仪 l 3 ] 。
丙型肝炎临床检验技术现状及研究进展

丙型肝炎临床检验技术现状及研究进展【摘要】丙型肝炎是一种发病较隐匿的肝脏炎性病变,主要为丙型肝炎病毒(HCV)感染所致。
随着医学检测技术相关研究的不断深入,与丙型肝炎流行病学相关的临床检验技术的应用范围正逐渐扩大。
分析各项检验技术的应用现状及价值,不仅是加快 HCV 临床检验技术的关键措施,也是提高临床丙型肝炎诊治水平的必要手段。
【关键词】丙型肝炎;临床检验技术;研究进展;丙型肝炎在全球范围内均具有较高的发病率,丙型肝炎病毒(HCV) 感染是其主要诱发因素,而 HCV感染的传播途径复杂多样,除了常见的血液传播以外,HCV病毒还可能通过性接触、母婴物质交换,甚至一些综合性途径、隐性途径传播。
据世界卫生组织统计数据显示,不同年龄段、种族的人群均对HCV易感,每年因此类感染而死亡的人数达到35万例,其中仅有近25%的患者出现特异性症状。
考虑到HCV感染传播途径具有显著的复杂性,且早期症状较隐匿,早期提升丙型肝炎大面积筛查能力、推进 HCV 检验技术研究、完善 HCV 防控机制、有效控制 HCV 感染是全面降低丙型肝炎发病率及提升人类健康水平的有效方式。
对于丙型肝炎而言,其临床上也没有研制出专门有效的丙型肝炎疫苗,基于此需要找寻出更加敏感的HCV检验途径,实现早预防,早发现的目的,更好实现干预工作,给人类的生命健康造成威胁[1]。
1 当前对丙型肝炎的检验技术有哪些?1.1ELISAELISA是临床较常用的抗 - HCV 检测手段,其利用酶结合物与HCV 抗原抗体复合物融合后产生的显色反应分析 HCV 阴阳性。
ELISA 凭借简单的操作步骤、低成本等在临床抗 - HCV 检验中占有一定的地位。
1.2 间接 ELISA间接 ELISA 检验也是临床应用度较高的一种检测方法。
间接 ELISA 阳性检出结果不理想或与抗 - HCV ELISA 试剂与血清中高免疫球蛋白 G(IgG)的含量有关,抗 - HCV ELISA 试剂与血清中 IgG 结合形成少量非特异性吸附,可对 HCV 阳性检测结果产生干扰,应尽量在检测前稀释样本以避免血清中非特异性 IgG 所形成的固相吸附反应导致假阳性[2]。
荧光定量PCR技术临床应用

EB病毒载量与鼻咽癌
血浆EBV载量与鼻咽癌显著相关 鼻咽癌病人血浆EBV与肿瘤复发相关 10个复发病人:32,250copies/ml 15个二年持续缓解病人:0 copies/ml 17个随访病人:临床恶化前6月显著升高
荧光定量PCR技术用于肺部感染的诊 断
一、肺炎支原体的检测 二、结核杆菌的检测
adw2 ayw1
C ayr;adrq+; Adrq-; adr;adw2
3215
58%(常)
乙型肝炎检测标志物
HBsAg,抗-HBs HBeAg,抗-Hbe 抗HBc HBV-DNA
病原学
乙型肝炎免疫检测和PCR结果异同
• “大三阳” PCR结果阴性
• 抗-HR技术对性传播疾病的检测
注意事项
• 缺乏分子诊断标准
• 辅助指标
荧光定量PCR技术检测21三体综合 征
孕妇外周血中有胎儿的少量细胞 通过PCR技术检测孕妇外周血中的胎儿细胞
荧光定量PCR技术用于性别鉴定
荧光定量PCR检测SRY基因 SRY基因,雄性的性别决定基因,指Y染色体上 具体决定生物雄性性别的基因片段
科研应用不提供商业试剂
荧光定量PCR技术在临床 医学研究中的应用及注意事项
内 容 提 要
一、基因诊断技术在医学检验中的地位
二、荧光探针定量PCR在临床医学中的应用 三、荧光探针定量PCR在临床医学中的主要问题
细胞膜 细胞核 DNA 转录 mRNA 翻译 基因诊断
蛋白质
免疫学诊断
基因诊断的 物质基础及 与其它 诊断方法的 区别
体液
• 临床体液标本包括胸水,腹水,脑脊液, 尿液等,可按水样标本的方式离心取沉 淀后,提取核酸。沉淀样本的保存同上。
丙型肝炎的检测方法及其敏感性比较

丙型肝炎的检测方法及其敏感性比较丙型肝炎(Hepatitis C,HCV)是一种由丙型肝炎病毒引起的肝脏疾病。
与乙型肝炎相比,丙型肝炎的传播途径更多样化,且长期感染可能导致肝硬化和肝癌等严重后果。
因此,准确的丙型肝炎检测方法对于早期诊断、干预治疗以及预防传播具有重要意义。
本文将介绍几种常见的丙型肝炎检测方法,并对其敏感性进行比较。
一、抗体检测法抗体检测法是最常用的丙型肝炎筛查方法之一。
该方法通过检测人体血液中的抗体反应,判断是否感染丙型肝炎病毒。
目前,常用的抗体检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光法(IFA)等。
这些方法具有操作简便、成本低廉等优点,可用于大规模筛查。
然而,抗体检测法只能确定感染的事实,无法判断感染的时间和病情的严重程度。
二、核酸检测法核酸检测法是一种直接检测丙型肝炎病毒核酸的方法,可用于早期诊断和病毒载量监测。
常用的核酸检测方法包括聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量PCR 等。
这些方法具有高度敏感性和特异性,能够检测到非常低浓度的病毒核酸,有助于早期发现感染者。
然而,核酸检测法操作复杂、费用较高,通常用于已经确定感染的患者的病情监测。
三、基因芯片技术基因芯片技术是近年来发展起来的一种高通量、高灵敏度的检测方法。
该技术通过将多个基因探针固定在芯片上,可以同时检测多种病原体。
在丙型肝炎检测中,基因芯片技术可以检测丙型肝炎病毒的基因组序列,从而确定感染类型和亚型。
这种方法具有高度敏感性和特异性,能够提供更详细的感染信息。
然而,基因芯片技术的设备和试剂成本较高,目前仍处于研究和发展阶段。
综上所述,丙型肝炎的检测方法包括抗体检测法、核酸检测法和基因芯片技术。
抗体检测法适用于大规模筛查,核酸检测法适用于早期诊断和病情监测,基因芯片技术可以提供更详细的感染信息。
不同的检测方法具有不同的敏感性,选择合适的方法需要根据具体情况综合考虑。
对于高风险人群或已经确定感染的患者,建议综合运用多种检测方法以提高准确性。
丙型肝炎病毒核酸的荧光定量检测及其临床意义

摘要 目的: 建立实时荧光定量 RT- PCR( RFQ- RT- PCR) 检测 HCV- RNA 含量方法的临床应用价值。方法: 在
HCV 基 因 组 5’非 编 码 区(5’- UTR)设 计 特 异 性 引 物 和 一 对 杂 交 探 针 , PCR 扩 增 目 的 片 段 并 构 建 相 应 基 因 片 段 载
1 材料和方法
1.1 样品来 源 我 院 感 染 科 和 南 通 市 第 三 人 民 医 院 住 院 ELISA 法 测 得 HCV 抗 体 阳 性 样 本 138 例 , 包括慢性肝炎(CH) 64 例 , 肝硬化(LC)43 例, 肝 细胞 癌(HCC)31 例.正 常 对 照 为 我 院 输 血 科 献 血 样 本 60 例.血清于抽血后 1h 内分离, 置- 70℃保存。 1.2 主要试剂 限制性内切酶(TaKaRa 公司), Trizol (Invitrogen 公司), 胶回收试剂盒、质粒抽提试剂盒 (上 海 华 舜 生 物 工 程 公 司), pGEM- T 载 体 、IPTG、X- gal、dNTPs、Taq DNA 聚 合 酶(Promega 公 司), 体 外 转 录试剂盒、毛细管(Roche 公司), Onmiscript 逆转录试 剂盒(Qiagen 公司)。 1.3 引物和探针设计 根据 HCV 全序列( GenBank
图 1 标准曲线的线性范围
2.2 标准品检测的重复性 将系列稀释的 RNA 标
准品, 用荧光定量 PCR 重复测定 20 次, 每次每个稀
炎患者 (P<0.05), 而且 HCV RNA 含量与 ALT 水平呈正相关(r=0.91)。结论: RFQ- RT- PCR 检测 HCV- RNA 含量比
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例 临 床 已 确 诊 为 丙 型 肝 炎 患 者 的 血 清 , 同 时 检 测 血 清 并 AL T。探 索 能 够 提 高 丙 型 肝 炎 病 毒 检 出 率 的 方 法 , 临 床 诊 为 断丙 型 病 毒 肝 炎 , 断 病 情 和疗 效 提 供 参 考 依 据 。 判
l 对 象 和 方 法 1 l 对 象 _
检 验 , < 00 P . 5为 差 异 有 显 著 性 。
2 结果
诊 和 住 院患 者 17例 , 6 例 , 5 1 男 7 女 O例 , 龄 l ~7 岁 , 均 年 4 3 平 4 . 岁 。 全部 病 例 均 为 已确 诊慢 性 丙 型 肝 炎 患 者 , 除 其 它 50 排
以 ( z士 s )表 示 , 间 比较 用 t 验 , H V —R 组 检 对 C NA 含 量 的
选 取 佳 木 斯 大 学 附 属 第 一 医 院 2 O 一 O ~ 2 O一 O O 6 l O 7 8门
对 数 值 与 AL 含 量 进 行 线 性 相 关 关 系 分 析 和 相 关 性 显 著 性 T
关键词 : 丙型 肝 炎病 毒 核 酸 ; 丙型 肝 炎病 毒 抗体 ; 荧光 定 量 逆 转 录聚 合 酶 链 反 应 ; 联 免 疫 吸 附试 验 ; 酶 丙氨 酸 氨 基 转 移 酶
中 图分 类 号 : 4 ; 1 . 3 文 献 标 识 码 : R4 6 R5 2 3 B 文 章 编 号 : 0 8 1 4 2 0 ) 3 0 1 一O l 0 —0 0 ( 0 8 0 — 0 7 2
率 ∞ ]耽 误 了一 部 分 患 者 疾 病 的 治 疗 和 引 起 输 血 后 HC 感 “, V
染 的 流行 。 此 , 因 我们 用 F Q—P R 联 合 E S 方 法 检 测 1 7 C U A 1
血 清 A T 检 测 采 用 酶 动 力 学 法 , 常 参 考 值 :~ 4U/ L 正 5 O
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HEI LONGJANG E CI I M DI NE AND HARM ACY u 2 0 , 1 3 . P J n. 0 8 Vo. 1No 3
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荧 光 定 量 P R 联 合 E I A 检测 丙 型肝 炎 病 毒 的 临床 应 用研 究 C LS
我 国 一 般 人 群 抗 一:C 阳性 率 为 3 2 1. 性 丙 型 肝 iV . %[ 急 ]
炎 绝 大 多 数 都 将 形 成 慢 性 丙 型 肝 炎 , 形 成 肝 硬 化 和肝 癌 的 是
贝/ mL。
1 2 2 抗 一HCV 检 测 ..
重 要 原 因 [ 目前 , 院 和 血 站 大 多 采 用 E IA 法 检 测 血 清 。 医 LS 中 抗 一HC 来 诊 断 可 疑 感 染 者 和 筛 选 献 血 员 。但 E IA 法 V LS
高英英 马 , 雷 孙玉鸿 ,
( . 木 斯 大 学 临床 医 学 院检 验 系. 龙 江 佳木 斯 1 4 0 ; . 木 斯 大 学 附属 第一 医 院检 验 科 , 1佳 黑 5032佳 黑龙 江 佳 木 斯 1 4 0 ) 5 0 3
摘要: 目的 : 讨 荧光 定量 逆 转 录 聚 合 酶 链 反 应 ( Q—P R) 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 ( L S 联 合检 测 丙 型 肝 炎 病 毒 的 临 床 探 F C 、 E LA) 意 义 。方 法 : Q—P R 联 合 E lA 方 法 检 测 1 7 临床 已确诊 为 丙 型肝 炎 患 者 的 血 清 , 时检 测 它 们 的 丙氨 酸 氨 基 转 移 酶 用F C LS 1例 同 ( AT) 结 果 : 抗 一HC 阳性 率 随 着HC A 。 ① V V—RNA 含 量 的升 高 而增 高 , 阳性 率 与HC 其 V— R NA 含 量 呈 正 相 关 。 8 例 H v ② 7 C
—
RN 阳 性 标 本 中, 5 例 AL 异 常 , 异 常 率 随 着 HC A 有 O T 其 V—R NA 含 量 的 升 高 而增 高 , T 异 常 率 与 HC AL V—RNA 含 量 呈 正
相 关 ,A T 水 平 和 HC L V—R A 含 量 之 间 呈 正 相 关 。 F N ⑧ Q—P R 检 测 敏 感 性 为 7 . ( 7 1 7 , C 4 4 8 / 1 ) 漏栓 率 为 2 . ( 0 1 7 。 5 6 3 / l ) E I A 法检 测 敏 感 性 为 7 . ( 0 1 7 , 栓 率 为 2 , ( 7 1 7 。 种 方 法 联 合 检 测 敏 感性 为 9 . ( 0 / l ) 漏栓 率 为 LS 69 9/1)漏 3 1 2 / 1) 两 2 3 18 17 ,
L(7 , 3 ℃)试剂采 用 日本 和光试剂 , 测』【 为 日本 Olmp s 检 ! ; 器 y u
AU10 全 自动 生 化 分 析 仪 。 00
1 2 4 统 计 学 处 理 ..
采用S S 1. P S 1 0统 计 软 件 , 数 资 料 用 检 验 , 量 资 料 计 计
检 测 血 清 抗 一 HC 敏 感 性 不 高 , 在 3 左 右 的 漏 检 V 存 O
抗 一HC 检 测 采 用 E IA 法 , 格 按 试 剂 盒 说 明书 操 V LS 严
作 , 剂 盒 由沈 阳惠 民 生物 工程 有 限 公 司 提 供 。 试
1 2 3 ALT 检 测 _ .
77 (/1)结论 : . 9 l7 。 两种 方 法联 合 检 测 , 互相 补 充 , 大提 高 了 丙 型肝 炎病 毒 的栓 出 率 , 临床 早 期 , 确 诊 断 丙型 病 毒 肝 炎 、 大 为 准
监 测 病 情 、 察 疗 效 提 供 了有 力 的依 据 , 观 为献 血 人 员筛 选 和 血 制 品 安 全提 供 了 有 力 保 障 。