动物组织H_E_染色石蜡切片技术的改进
制作石蜡切片易出现的问题及改进措施
容 易 出现 的 问题 主要是 脱 水不 净和 过 度 硬 化 ，要控制 过 度硬 化只 需调 整好 各步
骤 的脱 水时 间 。若组 织脱 水不 净时 ，造
织 时 动 作 应 轻 柔 ，不 宜 过 度 用 力 ， 应 避 免 使 用 有 齿 镊 ， 否 则会 挫 伤 或 挤 压 组 织 ， 引起 组 织 结 构 的挤 压 变 形 和 损
％ 中性福 尔 马林 固定液 ，切片 卜如 出现
一
种 细黑 色沉 淀 物 ，出现 在 组 织 边缘 、
细胞 间 隙及血 管 内 ，则提 示形 成 了福 尔 马林 色素 。它 常 见于 含 血 多 的 组织 中 ，
无光泽 ，不溶于 水 、乙醇 、二 甲苯 等 ，如
些 。透 明要求 在 肉 眼观 察组 织 呈棕黄 色 或 暗红 色透 明状 （ 珀样 ） 可 。浸蜡 要 琥 即 求掌 握时 间 ，过短 石蜡 没有 完全 渗入 组
５ Ｉ ～６ ｎ，轮转 式切 片机切 取组织 时是 由下 向上切 ，为得到 完 整的切 片 ，防止
的 问题 及 改进措 施
组 织 以 至组 织 成 分 难 辨 ， 因 此 取 材 要
避 开 脂肪 组 织 、 坏 死 组 织 或 血 块 ；取
温 度控制 在 ２ ℃ 。固定时 要注意 组织 在 ５ 固 定 液 中 的位 置 ，并 且 随 时 翻 动组 织 ， 使其 充 分 固定 。组织 固定 过程 中如果 固
组 织 应 梢 延长 染 色 时 间 。二 是 伊 红 染
【】 １杨捷 频 ． 常规石蜡 切 片方 法的 改 良 ．
生物 学杂志 ． ０ ６ ２ （）４ －４ ２ ０ ， ５１： ５ ６
ｉＬ ｒｏ ｆ ．１ （ 【 ｗ＋ｌ ｋ ｙ Ｌ ｒ ｉｈ ． 】 ｅ ＞ ． ｈｇ 】 ． ［
组织学石蜡切片制作方法的改进
如 果组 织未 得 到及 时 固定或 固定 不够 充分 ， 超 过６ ｈ组 织就 要 自溶 与腐 败 ， 制 作 的组 织 切 片 因 自 溶染 色 时较 易脱 片 ， 镜 下观 察 组 织 结 构 不 清 楚 ， 呈 现“ 发 白” 或“ 灰染 ， ， Ｅ １ ３ 。我 们 在 固定 液 的瓶 底 上 放 上药 棉 或几 层纱 布 ， 使组织不直接与瓶底接触， 此 法 能使 固定 液迅 速 而又均 匀 地从 上 、 下、 左、 右、 前、 后各 方 渗入 组织 内 ， 使组 织 固定 的更 均匀 、 快速 、 充 分 。新鲜 柔 软器 官我 们先 固定 ， 待 基本 硬化 后再 修 剪成 小块 ， 然 后再 投 入 新 配 的 固定 液 内， 这 样 既 能 获得 理想 大小 的标本 ， 又 能使 组织 在 常规 固定 时间
不 要超 过 １ ｈ 。
２ 结 果
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
的石 蜡教 学切 片 ， 从而 提 高 了切 片 质量 。现 将 改进
方 法 介绍 如下 。 １ 材 料 与方 法
１ ． １ 材料
固定 液 、 药棉 、 纱布 、 组织块 、 １ ０ 乙醇 、 氯仿 、
温 度计 、 蜡箱。
１ ． ２ 方 法
剂 内。
脱 水 就是 把 固定 好 的组 织 块 用 乙 醇 脱尽 其 中 的水分 ＿ ２ ］ 。乙 醇脱水 能 力较 强 ， 常使组 织过 度收 缩
４８
Ｊ Ｊ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ Ｕｎ ｉ ｖ， Ｆ ｅ ｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ ２ ０ １ ４， Ｖｏ １ ． ３ ７ ， Ｎｏ ． １
小鼠部分组织器官石蜡切片制作方法的改良
小鼠部分组织器官石蜡切片制作方法的改良作者：陈思怀李德龙高继业来源：《安徽农业科学》2021年第11期摘要為了克服小鼠组织器官传统石蜡切片制作方法存在组织易碎、结构不完整的缺点，对传统石蜡切片制作进行了改良。
将浸蜡前的透明步骤改为异硬脂醇与石蜡混合液处理，替代苯类透明剂制作空肠、脾脏2种器官的石蜡切片，并以切片机切片时蜡带质量和HE染色后镜下质量为切片制作效果的评定指标。
结果表明，2种器官在切片机上均能切出完整、较长的蜡带，组织块无硬化、不碎裂，展片平整;HE染色过程中不掉片，染色后光镜下细胞质与细胞核染色对比清晰，器官组织结构完整。
就脾脏和空肠而言，应用异硬脂醇与石蜡混合液替代苯类透明剂能制作出优良的石蜡切片。
关键词石蜡切片;异硬脂醇;透明剂;小鼠中图分类号 R-361.2 文献标识码 A文章编号 0517-6611（2021）11-0094-02doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.11.025开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Improvement of Preparation Method of Paraffin Sections of Some Tissues and Organs in MiceCHEN Si-huai，LI De-long，GAO Ji-ye（College of Veterinary Medicine，Southwest University， Chongqing 402460）Abstract In order to overcome the defects of fragile tissue and incomplete structure in the traditional paraffin section preparation method of mice tissues and organs， the traditional preparation method of paraffin section was improved.Paraffin sections about jejunum and spleen were made with the mixed solution of isostearin and paraffin instead of benzene transparent agents.The quality of ribbon and microscopic observation after HE staining were selected as judgment indices .The results showed that two kinds of representative organs could be cut into long and complete wax bandes on the microtome， and flatten out with no hardening or non-fragmentation.After HE staining， the cytoplasm and nucleus were stained clearly， and the structures of organs and tissues were intact.As for jejunum and spleen，the mixture of isostearic alcohol and paraffin could be used to treat the tissues instead of benzene transparent agents to make good paraffin sections.Key words Paraffin section;Isostearic alcohol;Transparent agent;Mice小鼠作为实验动物，其组织器官在大小、质地等方面不同于成年畜禽，如小肠壁薄、肝细胞脂类丰富、脾脏小等。
组织胚胎学研究方法和技术—石蜡切片与HE染色
是最常用的经典技术
02 石蜡切片术基本步骤
取材和固定 脱水和包埋 切片和染色 封片ห้องสมุดไป่ตู้
03 HE 染色
最常用的染色方法是苏木精和伊红染色法，简称HE 染色法
原理： 苏木精（Hematoxylin）-- 伊红（Eosin）
碱性染料
酸性染料
嗜碱性
将嗜碱性物质 （本身酸性）
构具有被碱性染料着色的性质称嗜碱性。
光镜技术— 石蜡切片术和HE染色
目录
CONTENT
01 光镜技术概述
02 石蜡切片术
03 HE染色
01 光镜技术概述
应用一般光学显微镜(简称光镜)观察是组织学研究的最基本方法 放大倍数可达1500，分辨率约为0.2μm 光镜下能被分辨的微细结构称光镜结构（LM） 组织学研究需要制备能使光线透过、微细
染成蓝色
中性
细胞核中的染色质、 细胞质中的核糖体
将嗜酸性物质 （本身碱性） 染成红色
嗜酸性
细胞质、膜性结构（线粒体、溶 酶体、滑面内质网）、细胞间质
脑垂体，H&E, x400
特殊染色法
镀银染色法
醛复红染色法
活体染色法
小结
1. 组织学最常见的研究方法是采用光镜观察。 2. 石蜡切片术是光镜观察时标本制备最常用的经典技术。 3. 组织切片常用的染色法是苏木精—伊红染色法，称HE染色。 4. 凡组织结构具有被酸性染料着色的性质称嗜酸性，凡组织结
石蜡切片制作和HE染色实验报告
石蜡切片制作和HE染色实验报告英文回答：Introduction:Paraffin sectioning and H&E staining are essential techniques in histopathology for examining tissue samples under a microscope. Paraffin sectioning involves embedding tissues in paraffin wax, cutting thin sections, and mounting them on glass slides. H&E staining is a common staining method that uses hematoxylin and eosin to differentiate cell components.Materials and Methods:Tissue samples。
Paraffin wax。
Microtome。
Glass slides。
Hematoxylin。
Eosin。
Ethanol。
Xylene。
Procedure:Paraffin Sectioning:1. Fix the tissue samples in formalin and process them through a series of graded ethanol solutions.2. Embed the tissues in paraffin wax and allow them to solidify.3. Use a microtome to cut thin sections (5-10 microns)from the paraffin block.4. Mount the sections on glass slides and allow them to dry.H&E Staining:1. Deparaffinize the sections by passing them through xylene and ethanol solutions.2. Stain the sections with hematoxylin and rinse with water.3. Differentiate the hematoxylin staining with hydrochloric acid and rinse with water.4. Counterstain the sections with eosin and rinse with water.5. Dehydrate the sections by passing them through graded ethanol solutions and clear them in xylene.6. Mount the sections with a coverslip and examine them under a microscope.Interpretation of Results:Hematoxylin stains the nuclei blue, while eosin stains the cytoplasm pink.The stained sections allow for the examination of tissue morphology, identification of cell types, and detection of pathological changes.Conclusion:Paraffin sectioning and H&E staining are fundamental techniques in histopathology that provide valuable information for the diagnosis and study of diseases.中文回答：石蜡切片制作和HE染色实验报告。
鸡胚脾脏石蜡切片制作及H.E.染色方法改良的探讨
水、 透 明及浸 蜡时 间按 照 时间设 置 操作 如 表 １ 所示。
石蜡切 片机切 片 ， 厚度 为 ３ ～４ ｍ， 展 片 机 水 浴 展 片
并烤 干 ， 常规 Ｈ． Ｅ ． 染色。
表 １ 鸡胚脾脏脱水 、 透明 、 浸 蜡流 程
组 别 Ｅ １ ５ － Ａ（ Ｆ ／ Ｆ）Ｅ １ ５ － Ｂ （ Ｓ ／ Ｆ ）Ｅ ｌ ５ 一 Ｃ（ Ｆ ／ Ｓ ）Ｅ ｌ ５ 一 Ｄ（ Ｓ ／ Ｓ ）Ｅ ２ １ － Ｅ（ Ｆ ／ Ｆ ）Ｅ ２ ｌ ＿ Ｆ （ Ｓ ／ Ｆ ）Ｅ ２ １ 一 Ｇ（ Ｆ ／ Ｓ ）Ｅ２ １ 一 Ｈ（ Ｓ ／ Ｓ ）
１ ． １ 样本 获取
选 用 ＡＡ 智 能控 温控 湿 ， 温 度 保 持 为 ３ ７ ℃， 湿度为 ５ Ｏ ～６ Ｏ 。分别 在 １ ５胚 龄 （ Ｅ ｌ ５ ） 和 ２ １ 胚龄（ Ｅ ２ １ ） 摘取 完整 的鸡 胚脾 脏 （ ｎ 一８ ） 。取 材 后
８６
中 国兽 医杂 志 ２ ０ １ ３年 （ 第 ４ ９卷 ） 第 ９ 期
Ｃｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
鸡 胚 脾 脏 石 蜡 切 片 制 作 及 Ｈ． Ｅ ． 染色 方 法 改 良 的探 讨
作石 蜡切 片 ； 脱 蜡 至水 ； 室温 ２ Ｏ ℃ 以上 ， 用苏 木 精 分 别浸 染 ２ Ｏ ｍｉ ｎ 、 ４ ５ ｍｉ ｎ 、 ３ ． ５ ｈ ； 分 色及 蓝 化 ， 其 中染 色 ３ ． ５ ｈ的一 组 用 两次 分 色 法 ， 即短 暂 分 色 一 次后 自来 水蓝 化 １ ０ ｍｉ ｎ ， 然 后 二 次 分 色 至 细胞 质 无 色 ； 常规 脱水 ， 伊 红浸 染 ， 封片。
改善HE染色技术提高病理石蜡切片制作质量的体会
蒸馏水 中， 然后将钾明矾溶液加热沸腾后加入已溶解 的苏木素精， 再加入 １５ｇ １ 黄色氧化汞 ， 煮沸 ２ｍｎ ｉ 后 立即用凉水冷却 ， 加入 １ 柠檬酸 ， ｇ 搅拌后加入 ５ Ｌ ０ｍ 甘油 ， 用时过滤。每次配制 ｌ ０ Ｌ 可使用 １ 周左 ０ｍ ， ０ ｌ
１４ ０
包
头
医
学
院
学
报
第２ ７卷
样经染伊红后 ， 才能形成胞核与胞浆蓝 、 红对 比鲜 明， 便于观察。如果分化不够 ， 核染为浓蓝色 ， 不能辩认核 膜 及染 色质 的形态 特点 ， 胞浆等 背景 也会有 浅蓝 色 ， 再 经伊红染色后 即成红紫色 ， 难以观察 ； 而分化过度核呈 浅蓝 色且 模糊 不 清 ， 不易 判定是 否有异 型性 ， 医生诊 给
切片 晾干后 ， 采用 梯度 酒精 脱 水 ， 先浸 入 ７ ５％ 乙醇脱 水２ ， 浸 入 ８ ５Ｓ再 ５％ 乙醇 脱水 ２ ， 后才 浸 入 无水 ５Ｓ最 乙醇 中 ３ ６ 。染 色效 果 较未 改 进时 比较 ， 浆染 Ｏ一 ０Ｓ 胞 色清 晰 、 匀且质 感好 。 均 １３ 组织 固定后 脱 水剂 的改 善 ． 常 规 法 采用 ７ ５％ 、 ８ ５％ 、５％ 乙醇 及无 水 乙醇 逐 级 脱 水 。改 善 的办 法 ９
氧化 而破坏 苏木红 的分子 结构 而导致染 液效果 持久性 差 。未 氧化 的苏木 精在使 用过程 中会逐 渐 自然 氧化成
苏木红 ， 从而不断地补充染色所消耗的苏木红 ， 因此能 够保持染液的稳定性和较持久的染色能力。 １２ 伊红染液染 色步骤的改进 切片先在 ０５％伊 ． ． 红水溶液中染 Ｉ ３ｒｎ 迅速用蒸馏水快速冲洗 ２Ｓ ～ ｉ， ａ ， 然后再浸入 ８ ５％ 乙醇分 色 ２ Ｓ 迅速取 出， 待切 片晾 干， 直接浸入 ９ ５％ 乙醇脱水 ２ ， 浸入无水 乙醇 ５Ｓ再 ５ ， ０Ｓ取出晾干 ， 甲苯透 明。改进 以前的方 法为： 二 待
石蜡切片制作和HE染色实验报告
石蜡切片制作和HE染色实验报告自查报告。
实验名称，石蜡切片制作和HE染色实验。
实验日期，2021年10月15日。
实验目的，通过石蜡切片制作和HE染色实验，观察组织结构和细胞形态，掌握组织学技术操作和HE染色方法。
实验步骤：
1. 取得组织标本，进行脱水、透明和浸蜡处理。
2. 将标本置于蜡块中，进行切片制作。
3. 将切片置于载玻片上，进行HE染色处理。
4. 用显微镜观察切片的组织结构和细胞形态。
实验结果，实验中成功制作了石蜡切片，并进行了HE染色处理。
观察切片时，能清晰地看到组织的细胞结构和染色效果良好。
实验分析，通过本次实验，我掌握了石蜡切片制作和HE染色的
基本操作技能，了解了组织学技术的重要性。
同时，观察到了组织
结构和细胞形态的细微变化，对细胞学和组织学有了更深入的了解。
存在问题，在实验中，切片制作过程中需要更加细心，避免切
片出现断裂或者变形的情况。
同时，染色处理的时间和浓度也需要
进一步优化，以获得更好的染色效果。
改进措施，在今后的实验中，我将更加细致地操作每一个步骤，提高操作技能和经验。
同时，我会针对染色处理的时间和浓度进行
实验设计，找到最适合的条件。
结论，本次实验通过石蜡切片制作和HE染色实验，使我对组织
学技术和细胞形态有了更深入的了解，同时也发现了自身在操作技
能和实验设计方面的不足之处。
通过今后的努力和实践，我相信能
够不断提高自己的实验技能和科研水平。
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收稿日期:20060227 作者简介:任成林,(19502),男,河北张家口人,河北北方学院动物医学系副教授.动物组织H 1E 1染色石蜡切片技术的改进任成林,田 勇,梁淑珍(河北北方学院动物医学系,河北张家口075000) 摘要:组织切片方法是教学、科研、病理检验工作中广泛应用的一种实验技术.近年来对传统的组织切片方法进行了全面地改进试验研究,使组织固定完全,脱水彻底,透明适度,浸蜡充分,切片较薄,染色良好;不仅缩短时间,简化程序,节省药液,而且提高了组织切片的质量.关键词:动物组织;H 1E 1染色;石蜡切片中图分类号:S 852131 文献标识码:A 文章编号:167321492(2007)0120041205T echnical Innovation of Paraff in Slice for H 1E 1Staining in Animal TissuesREN Cheng 2lin ,TIAN Y o ng ,L IAN G Shu 2zhen(Department of Veterinary Medicine ,Hebei North University ,Zhangjiakou 075000,Hebei ,China ) Abstract :Technology of paraffin slice met hod for tissues is widely used in teaching ,st udying and pat hological inspection.In recent years we have made an all 2round innovation of t his technology ,which makes t he combination of t he fixation completely ,dehydration t horoughly ,t ransparence moderately ,slice t hinner and dye better.This technology shortens t he time ,simplifies t he p rocedure and saves t he liquor ,but also imp roves t he quality of paraffin slice.K ey w ords :animal tissue ;H 1E.staining ;paraffin slice1860年Klerbs 介绍了石蜡包埋法,1870年His 发明了切片机,以后经相关学者们逐步完善,形成了完整的生物组织石蜡切片法,在细胞和组织学领域内广为应用,是教学、科研和病理检验的一种传统经典而常用的方法.但程序繁多,耗时很长,用药量大,安全性差,且易造成组织收缩和硬变.在实际工作中,常会遇到各种原因导致切片质量不佳.为此,笔者近年来做了大量的试验,并对制片中的各个环节不同程度地做了改进,使动物组织的常规石蜡切片方法在技术和制片质量上都得到了显著提高.1 方法要创新111 笔者采用了3种方法制片[1]常规石蜡制片法,在室内20℃左右的常温下进行.加温法在56℃的恒温箱内进行.振荡法在温度56℃、振荡速度150次/min 的水浴恒温振荡器内进行.组织大小为8mm ×6mm ×3mm ,用三种方法进行固定、脱水、透明和浸蜡,然后常规切片染色试验比较.结果表明,常规石蜡制片从固定、脱水、透明到浸蜡共需要25h 10min 才能完成;加温法可用5h 30min 完成,振荡法仅用2h 20min 便可完成,用加温法和振荡法制片质量良好.染色结果证明:固定、脱水、透明、浸蜡很充分,能顺利切出4μm 的薄切片.组织细胞结构清晰,染色较好,有利于镜检和诊断.由于在短时间内完成组织固定、脱水、透明和浸蜡,所以避免了因长时间处理标本而引起的组织发硬,发脆,扭曲和过度收缩等不良弊病,提高了制片质量(见表1).第23卷第1期2007年2月 (自然科学版)Journal of Hebei North University (Natural Science Edition ) Vol 123No 11Feb 12007表1 采用3种方法进行组织块固定、脱水、透明、浸蜡的程序时间常规温度20℃加温温度56℃振荡温度56℃速度150次/min固定FAA 固定液12h 40min 20min 脱水70%酒精2h 40min 15min 80%酒精2h 40min 15min 95%酒精2h 40min 15min 100%酒精1h 30min 10min 100%酒精1h 30min 10min 共需8h 3h 65min 透明二甲苯Ⅰ20min 10min 5min 二甲苯Ⅱ20min 10min 5min共需40min 20min 10min 浸蜡石蜡Ⅰ1h30min 30min 15min 石蜡Ⅱ1h30min 30min 15min 石蜡Ⅲ1h30min 30min 15min 共需4h30min 1h30min 45min 总共需要25h10min5h30min 2h20min 112 采用微波技术制片法[2]用自控微波技术进行组织固定、脱水、透明、浸蜡全过程所需时间:小组织(2mm ×2mm ×2mm )只需63min ,大组织(15mm ×10mm ×3mm )只需215h.效果良好,切片均完整、较薄,厚度3～4μm ,染色效果核质对比清楚,透明度良好,见表2.表2 使用无水乙醇+异丙醇,30位组织仓的染片条件蜡块规格(mm )总时间(min )固定(min ,50℃)无水无醇(min ,50℃)异丙醇(min ,℃)真空(min ,70℃,500mbar )浸蜡(min ,℃,mbar )2323263201318,55～681151015,66～70,400～100103533102251835,63～681152215,70～66,500～1001531033150302065,63～681153315,70～66,500～100113 采用组织块染色石蜡包埋制片法[3]笔者采用组织块先染色后包埋切片,用加温振荡法进行组织块的固定、脱脂、染色、脱水、透明和浸蜡,不仅缩短时间、简化程序、节省药液,减少了工作量,而且提高了蜡块和切片的质量,蜡块及切片可以重切并永存.取得了简便、快速、省药、效果良好的结果,见表3.2 取材固定要完全[4]211 取材要新鲜、迅速,应争取在动物死后30h 内处理完毕选材部位以病灶与正常组织交界处的组织标本为好,取材要完整,还要尽可能注意到整个器官的结构特点.组织块的大小适宜、厚薄均匀、形状规整,一般是8mm 36mm 33mm 为宜.夹取组织时不要用力压、揉、挤,避免机械损伤组织.212 固定要及时、充分固定液一般采用10%中性福尔马林溶液,但是检查糖元、粘液、尿酸结晶类物质最好用无水乙醇固定,固定24～48h ,最短不短于30～60min.固定时间与取材大小、性质以及类型有关,视具体情况而定.固定时间过长或固定液浓度过高,会使组织变硬,减弱了固定液对组织的渗透能力或造成组织中间部分固定不好.如浓度太低,在正常固定时间内,蛋白质的沉淀和凝固不够充分,由胶状物变为不溶性的固2007年2月 河北北方学院学报(自然科学版) 第1期体,必然固定也不充分,使细胞成分产生的光学差异不够显著,影响媒染效果,导致染色片子发生灰染现象.总之,固定是切片制作过程中的重要一环,它直接会影响后面的脱水、浸蜡、切片、染色等步骤,并直接影响观察结果。
表3 加温振荡法与传统常规切片程序时间比较程 序 方法常规温度20℃振荡温度56℃速度150次/min固定FAA固定液12h20min脱脂70%、80%、95%酒精3h30min无水酒精Ⅰ、Ⅱ1h10min二甲苯Ⅰ、Ⅱ1h10min无水酒精Ⅰ、Ⅱ1h10min95%、80%、70%、50%酒精4h40min蒸馏水1h10min染苏木精25h 5h 分色40min 10min蓝化 115h 15min脱水50%、70%、80%、95%酒精4h 1h 复染伊红6h 115h脱水95%无水酒精Ⅰ、Ⅱ1h 15min透明 二甲苯Ⅰ、Ⅱ40min 10min浸蜡 石蜡Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ415h 45min 总共需要66h20min 11h15min 3 脱水要彻底组织经固定水洗后,内含大量水分,只有将水分彻底除尽才有利于透明、浸蜡.最常用的脱水剂是酒精.采用逐级提高酒精浓度,以防组织过度收缩、变脆或脱水不完全而影响制片效果.脱水一般在室温下进行,由50%、70%、80%、90%和95%酒精各2h;100%Ⅰ和100%Ⅱ酒精各115h.我室常把组织块在95%酒精中过夜,这样处理组织都能将水分脱净,且不会有过硬过脆现象;但组织块在100%酒精中容易变硬,时间不宜过长.如切片后的蜡块中央成灰白粗糙而不透亮,放置一天后蜡块中央出现一陷窝,这表明组织脱水不彻底,以后水分蒸发,蜡块中央收缩形成陷窝,严重时难以切出完整切片.还要注意各级酒精浓度应尽量精确,定时更换新的脱水剂.4 透明要适度组织块经固定、水洗、脱水后,因酒精不能与石蜡相溶,必须通过一种媒浸剂取代酒精,这种媒浸剂与石蜡相溶.媒浸剂取代酒精后常使组织呈现透明状态,因此该过程称为透明.最常见的透明剂是二甲苯.二甲苯折光率为11497,透明力强,但易使组织收缩和变硬变脆.采用二甲苯在室温下进行透明组织块,一般过程是100%酒精+二甲苯(1∶1)20min,二甲苯Ⅰ、Ⅱ各15min.组织在二甲苯中贮留时间必须严格掌握,时间稍长,则使组织脆硬易碎;时间过短,石蜡又不易渗透进去.在正常透明时间内不透明,可能的原因是脱水不净,组织太厚或与组织本身的性质有关.2007年2月 任成林等:动物组织H. E.染色石蜡切片技术的改进 第1期2007年2月 河北北方学院学报(自然科学版) 第1期5 浸蜡要充分浸蜡的目的是除去组织中的透明剂(二甲苯)而石蜡浸透到组织中,使软的组织块转变成硬的石蜡块,以便切片.此步骤是在温箱内进行,温度应调至58℃左右,使它恰好溶好石蜡.浸蜡过程一般是二甲苯+石蜡(1∶1)30min,石蜡Ⅰ、Ⅱ各2～3h.浸蜡的时间和温度是关键的问题.浸蜡的温度过高或时间过长,会使组织块发生较大的收缩和脆变;如温度低了或时间短了,石蜡将得不到充分的饱和,组织块与石蜡结构不严,将会给制片带来许多困难.6 包埋要认真包埋是指将组织埋入石蜡,凝固成块.包埋用蜡温度应高于浸蜡温度.夏天气温高可用溶点60～62℃切片石蜡;冬天气温低,可用56～58℃切片石蜡.包埋之前应将包埋框与包埋镊子一起放在温箱中加热.包埋时速度要快,以防止包埋蜡与组织块的温度相差太大,蜡与组织城结合不紧密,导致切片困难.包埋后的蜡块均质半透明状,如在组织的周围出现白色浑浊状,说明浸蜡和包埋不佳,其主要的原因是脱水不彻底,包埋的石蜡温度低,包埋时蜡已成凝结状,浸蜡不彻底,石蜡不纯.7 切片要完整切片是整个制作切片过程中关键的一步.切片刀一定要锋利,不能有缺口,应定期磨刀,每次切片前应仔细磨刀,否则易造成切片断裂、破碎、不完整等现象.有条件的采用一次性刀片,上述现象可改善.切片时,要将蜡块在切片机上固定好,各个角度调整好,以防切片薄厚不一,或者损伤切片刀及组织块.8 贴片、烤片要牢固[5]在常规石蜡制片过程中,必须把切片用蛋白甘油、明胶、水棉胶、淀粉糊等粘贴剂粘在载玻片上.在染色时会造成组织片周围的区域红染,且不易擦掉,切片显得比较“脏”.多年来笔者不用粘贴剂制出的切片质量稳定,优片率增高.关键是把载玻片处理干净,新的载玻片必须放入清洁液(重铬酸钾300g,浓硫酸300ml,自来水3000ml)浸泡1～3d,取出经清水充分冲洗,转入95%酒精内浸泡1天以上后,用干净的软布擦干备用.旧切片可先在酒精灯上加温除去盖玻片,或放入大量废二甲苯浸泡1周左右,盖玻片即能脱落,然后投入洗衣粉水溶液(每100ml自来水中加2g左右)内加热煮沸20min,趁水尚热时用棉布擦去载玻片上的残留物,经自来水冲洗后,按新玻片处理法处理.展开时将一个盛水的恒温水箱,加温到45～50℃,温度太高易导致组织片上的细胞组织间隙分散,温度太低展片不充分,组织片易皱折.将切片光泽面向下铺在温水上.等切片展开后用清洁的载玻片从水中捞出,拨正位置,把贴好切片的载玻片放在染色架上竖立排水,然后立即烤片.如切片有泡状褶迹,着色不良.由于贴片时水中有小气泡上升附于切片下面,或放片时切片入水角度不当,烘干时气泡逸出,形成一个泡状褶迹.应在切片入水前用玻璃棒在水底搅动,赶走水底的气泡;展片所用温水应先煮沸冷却至所需温度为好,避免搅动产生气泡;注意贴片入水角度.贴片后应在烤箱内烘烤切片,温度和时间的掌握很重要.一般以65℃烘烤30min左右为宜.温度太高,时间太长,会造成对组织的损伤;温度太低,时间不足,染色时易发生脱片或脱蜡不净,染的切片会着色浅,不上色或灰染。