一氧化氮供体型与传统型NSAID对小鼠骨折骨愈合的影响分析

一氧化氮供体型与传统型NSAID对小鼠骨折骨愈合的影响分析[摘要] 目的对比分析骨科术后氟比洛芬酯和no-氟比洛芬酯对小鼠骨折损伤模型的干预结果，探讨一氧化氮供体型非甾体抗炎药（nsaid）对骨愈合的治疗作用。

方法 4月龄，体重相近，雄性balb/c小鼠45只分成3组进行腓骨骨折造模。

造模后，a、b两组分别注射氟比洛芬酯和no-氟比洛芬酯50 mg/kg，c组注射等量的0.9%氯化钠溶液。

术后2周、4周x线观察，术后4周测量骨折处骨密度、组织学观察。

结果术后x线示，2周时各组小鼠骨折处两端可见骨痂生长，骨折线模糊，其中b组骨痂范围较其余两组较大。

4周时骨痂完全包裹骨折区域，a组和b组小鼠骨折线完全消失，c组有4只小鼠骨折线仍可见；术后应用一氧化氮型非甾体药物组的小鼠骨密度明显高于其余两组，差别具有统计学意义（p ＜0.01）；小鼠术后4周处死，患肢下肢整体观察中得到，b组小鼠的骨骼肌比a组和c组略有肥大。

结论应用一氧化氮供体型nsaid在减少小鼠不良反应的同时能够在一定程度上促进骨折愈合。

[关键词] 非甾体类消炎药；骨折；骨愈合；骨密度[中图分类号] r332[文献标识码] a[文章编号] 1674-4721（2012）04（c）-0018-03骨折后或骨折术后为了缓解疼痛临上常用非甾体类抗炎药（non-steroidal-innammatory drug，nsaid）镇痛。

近来多数学者研究倾向于nsaid在镇痛的同时对骨折愈合会产生不良影响[1]。

一氧化氮供体型非甾体抗炎药是近年来科学家新合成的一种甾体类抗炎药，本实验拟通过各组小鼠骨折后应用不同抗炎药物观察骨痂量及骨密度变化，探讨其对骨折愈合情况的影响，为骨折愈合过程中骨组织的修复重建提供一个新的用药途径。

1 资料与方法1.1 一般资料选取2011年3月购买的昆明小鼠45只，4月龄，体重21~25 g，雄性balb/c小鼠。

动物来源于山西医科大学动物中心。

1.2 方法所有小鼠饲养环境相同。

实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。

1.2.1 小鼠腓骨骨折模型的制作：用10%水合氯醛以3.5 mg/10 g 剂量对小鼠腹腔注射麻醉，针刺脚趾验证麻醉效果。

将左后肢外侧的毛发剃光，左下肢医用酒精消毒清洗。

沿腿部外侧近端到跟骨结节约12 mm处做一个5~7 mm切口。

钝性剥离腓骨周围软组织和肌肉，露出腓骨，将其横行剪断，缝合伤口。

1.2.2 实验动物分组与干预：45只小鼠分为a、b、c 3组，每组15只。

a组为空白对照组不加药物干预，b组术后注射新药no-氟比洛芬酯，c组术后注射传统药物氟比洛芬酯。

药物注射方法为腹腔注射，注射剂量均为 50 mg/kg，术后连续注射7 d。

1.2.3 影像观察和骨密度测定：骨折后2、4周，麻醉下，小鼠仰卧位，行x线检查。

术后4周空气栓塞处死小鼠，取左侧胫腓骨，去除软组织，以lunar双能x线吸收仪扫描，标准兴趣区是以骨折端为中心的2.0 mm×1.5 mm区域，测量骨痂骨密度，同时采集病理标本做切片染色分析。

1.2.4 术后4周处死小鼠，小鼠患肢摘除，拍照。

1.3 统计学分析采用spss 16软件进行数据分析，计量数据用均数±标准差表示，采用单因素方差分析，组间比较采用bonferroni法。

p ＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果2.1 术后x线比较术后x线示，2周时各组小鼠骨折处两端可见骨痂生长，骨折线模糊，其中b组骨痂范围较其余两组大。

4周时骨痂完全包裹骨折区域，a组和b组小鼠骨折线完全消失，c组有4只小鼠骨折线仍可见。

2.2 骨折后4周骨密度比较见表1。

由表1可见，术后应用一氧化氮型非甾体药物组的小鼠骨密度明显高于其余两组，差异具有统计学意义（p ＜ 0.01）。

2.3 患肢下肢观察小鼠术后4周处死，患肢下肢整体观察中得到，b组小鼠的骨骼肌比a组和c组略有肥大。

由左到右依次为a、b、c组。

详见图1。

3 讨论骨折后或骨折术后为了缓解疼痛临床上常用非甾体类抗炎药（non-steroidal-innammatory dmg，nsaid）镇痛。

目前对非甾体抗炎药物应用对骨折愈合的影响尚无定论，但大多数学者倾向于它对骨折愈合有不良影响。

一氧化氮供体型非甾体抗炎药的问世是近年来抗炎药物研究的重大进展[2]，此类药物既抑制 cox，产生抗炎、镇痛，又具有no介导的胃黏膜和心血管保护作用[3]。

比传统的非甾体药物和cox-2的特异性抑制药安全性有大幅提高。

已有报道表明，hct1026（含一氧化氮的氟比洛芬衍生物）能抑制老年痴呆大鼠模型脑部炎症，减少β-淀粉样蛋白沉积[4]；还发现hct1026具有抗骨质疏松作用[5]。

由以往研究结果我们已知正常生理条件下，成骨细胞的增殖肢及其骨基质蛋白分泌的功能依赖于少量的no的存在。

no水平的下降，使碱性磷酸酶活性、钙沉积、成骨细胞相关的基因表达下降，使成骨细胞分化抑制[2]。

此外，骨折局部的血流供应是影响骨折愈合的重要因素，骨折no能松弛血管平滑肌、使血管舒张、抑制血小板凝集，改善组织灌注。

骨折早期分泌no可紧急提供骨折区的局部血供[3]。

在骨形成过程中，成骨细胞首先经历增殖阶段，其数目的多少决定骨形成的最初速度，因此刺激成骨细胞增殖的药物有可能促进骨形成。

no-nsaids在体内外释放no的速度比其他类型no供体如硝普钠（snp）和s-亚硝基-n·乙酰-d，l-青霉胺（snap）缓慢。

这也是其区别于其他“经典”no供体药物的重要指标[6-7]。

正因为如此，no-nsaids在成骨细胞分化成熟的各个阶段均起到提供no的作用，且效果明显优于传统非甾体药物的使用，分析其可能的机制包括以下几点：传统非甾体药物，而no-nsaids释放no 为一缓慢过程；小剂量缓慢释放的 no 对成骨细胞的增殖，分化等一系列过程具有重要的调节作用。

在体外，no-氟比洛芬酯能有效地抑制基础的和il1刺激的破骨细胞形成与重吸收，而传统氟比洛芬对于破骨细胞的数量几乎没有作用，仅能部分恢复il1的作用[8]。

本实验中的传统非甾体药物为现今临床上常用的cox-2抑制剂氟比洛芬酯，大多实验表明此类药物对骨折愈合有抑制作用，主要表现在骨折愈合中，间充质干细胞的分化在起着枢纽作用，前列腺素又是其分化的重要炎性介质，对骨折后的骨形成和再吸收无疑起着不可取代的作用。

其中前列腺素e2在成骨细胞增殖分化成为骨细胞系和骨细胞的进一步增殖成熟过程中起着重要作用，其机制为促进细胞内环磷酸腺苷的大量表达，环磷酸腺苷作为信号分子促使间充质干细胞募集、增殖及分化，并进一步促进骨折部位的软骨内化骨和膜内化骨。

然而多数动物试验都提示多种选择性cox-2抑制剂均有可能阻碍骨折的愈合。

根本原因都是因为抑制了cox-2的生成进而影响了前列腺素e2的产生。

有研究报道，在动物模型上使用前列腺素e2确实增加了骨折愈合的概率。

系统性或局部注射前列腺素e2也刺激了骨生成。

而且，通过抑制cox而阻断前列腺素的合成，进而减少骨形成。

no-nsaids在体内分解过程中除了释放no 外，还会分解成其相应的非甾体药物，同样会抑制前列腺素e2的生成。

然而它的优点在于，通过释放no开辟了另一条促进骨折愈合的道路，同时也延缓了降解出的传统非甾体药物的生成，继而延缓了对前列腺素e2生成的抑制。

可见，no-nsaids比传统非甾体药物有着更广阔的应用前景，其在临床方面，尤其是骨科领域的新作用还有待我们进一步发现，期待着进一步研究使其早日在临床中发挥作用。

[参考文献][1]张奕华，彭司勋. 一氧化氮供体型创新药物的研究进展[j]. 中国药科大学学报，2009，37（5）：387-396.[2]xiao zs，quarlesld，cben qq，et al. effcet of asymmetlh dimel by lalginiue on osteoblastit diffemnlialion[j]. kidney-lnt，2001，60（5）：1699-1704.[3]nonmra s．rakano．yamamoto t molecular revent caused bymachanieal stress in bone [j]. matrix bi，2000，19（2）：91-96.[4]张超，董英海. 非甾体类消炎药对骨折愈合影响的研究进展[j]. 临床骨科杂志，2009，12（2）：226-229.[5]ann marie simon, bs, j. patrick o’connor, phd. dose and time-dependent effects of cyclooxygenase-2 inhibition on fracture-healing[j].the journal of bone & jointsurgery ·，2007，89-a（3）：500-511.[6]carlni m，aldini g，stefani r，et al．nitrosylhemoglobin,an unequivocal index of nitric oxide release from ni．troaspirin：in vitro and in vivo studies in the rat by esrspectroscopy[j]. j pharm biomed anal，2001，26（4）：509-518．[7]陈传意，周剑涛，蒙丽华. 释放一氧化氮型非甾体抗炎药[j].西北药学杂志，2006，21（3)：138-140.[8]armour kj，vanl hof rj，2hinour ke，et al．inhibition of bone resorption in vitro and prevention of ovafiectemy induced bone loss in vivo by flurbiprofennitroxybutylester(hctl026)[j]. arthritis rhettm，2001，44（9）：2185-2192．（收稿日期：2012-02-15本文编辑：马双）。