cobasHPV检测介绍
基于E6、E7 mRNA 的新一代宫颈癌筛查技术
致癌
基于L1区设计的HPV，会导致宫颈癌的漏诊是全球公认的
Morris. Clin Chem Lab Med 2005; 43(11):1171-1177
检测L1 区域的局限性 – 假阴性
回顾全球多个临床实验，针对L1 的HPV DNA 试剂检测宫颈癌：
临床研究
Guerrero, J Clin Micro 1992 Williamson, J Med Virol 1994 Karlsen, Eur J Cancer 1995 Burger, J Nat Can Inst 1996 Baay, J Clin Micro 1996 Torroella-Kouri, Gynecol Oncol 1998 Schwartz, J Clin Oncol 2001 Shellekens, Gyn Onc 2004 Hoyer, Int J Cancer 2005 Sowjanya, BMC Int Dis 2005 Herrero, J Inf Dis 2005 Stevens, Int J Gyn Can 2006 Peedicayil, Int J Gyn Can 2006 Castellsaque, J Nat Can Inst 2006 Keita, Br J Cancer 2009 Wheeler, J Nat Can Inst 2009 Illades-Aguiar, Cancer Det Prev 2009 Roa, Int J Gyn Obstet 2009 Raza, Br J Cancer 2010
2011/2012
mRNA
cobas® HPV 12+2检测
2011
DNA
DNA
1990s
1999
2000s
罗氏cobas-h-232检测原理-WuPPT课件
Roche blood gas solutions - HospPoC Marketing 2009 page 17 © 2009 Roche
心机标志物市场分布
18
自动化检测设备采用的技术
酶联免疫 荧光免疫 化学发光
电化学发光
放射免疫
1960‘S
1970~80‘S
2000‘S
免疫检测原理未变，依旧利用抗原与抗体的特异性结合；改变的只是标记物的种 类以及相应的检测方法和手段。
（2）斑点免疫金渗滤法
应用微孔滤膜（如膜）作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体 金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。
（3）胶体金免疫层析法
将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结 合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的 胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合 物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察或者仪器光源检测得到 显色结果，从而得到待测物的检测值。
cobas e 411电化学发光全自动免疫分析仪
检测原理 测试速度 试剂通道 定标类型 样本位
样本类型 自动探测 操作界面
电化学发光免疫检测技术
86个测试/小时 18个 二维码定标、2点定标 30个样本位（盘式系统） 75个样本位（架式系统） 血清、血浆、尿液、其他 液面、气泡、凝块
中文操作界面
架式 盘式
Roche Diagnostics (Shanghai) Limited Shanghai 200031 China
COBAS and LIFE NEEDS ANSWERS are trademarks of Roche
透景HPV检测试剂在高危HPV DNA检测及宫颈上皮内瘤变筛查中的应用
透景HPV检测试剂在高危HPV DNA检测及宫颈上皮内瘤变筛查中的应用吴泽妮;秦宇;李婷媛;姜明月;刘彬;于露露;王红;崔剑峰;陈汶【摘要】目的评价国产透景试剂(透景HPV)用于HR-HPV DNA检测及宫颈病变诊断的有效性和可行性.方法 602例来自医院门诊健康体检的妇女或者宫颈上皮内瘤变(CIN)住院治疗的患者,经病理学明确诊断.采用透景试剂和Roche试剂(cobas HPV)平行检测子宫颈脱落细胞标本,比较两种方法的一致性.以病理诊断结果作为金标准,评估透景试剂和Roche试剂筛查子宫颈上皮内瘤变的敏感性和特异性.结果透景试剂与Roche试剂总一致率为94.62％(Kappa=0.881),阳性一致率为96.85％,阴性一致率为90.53％;透景试剂与Roche试剂HPV16、HPV18及其他12种高危型HPV的总一致率分别为95.92％(Kappa=0.906),98.70％(Kappa=0.885)和92.76％(Kappa=0.805).校正后两种检测的总一致率为98.51％(Kappa=0.967),阳性一致率为98.87％,阴性一致率为97.81％;校正后HPV16,HPV18及其他12种高危型HPV的总一致率分别为97.40％(Kappa=0.940),100％(Kappa=1.00)和97.58％(Kappa=0.950).透景试剂筛查CIN2+的敏感性和特异性分别为91.52％和52.06％,Roche试剂筛查CIN2+的敏感性和特异性分别为91.52％和54.29％,无统计学差异(P＞0.05).结论国产透景试剂与进口Roche试剂检测HR-HPV的一致性高,是有效的HPV DNA检测方法,可用于人群中宫颈癌和癌前病变的筛查.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2016(034)002【总页数】5页(P90-94)【关键词】人乳头瘤病毒(HPV);实时荧光定量PCR;宫颈上皮内瘤变(CIN)【作者】吴泽妮;秦宇;李婷媛;姜明月;刘彬;于露露;王红;崔剑峰;陈汶【作者单位】北京协和医学院/中国医学科学院肿瘤医院流行病学研究室,北京100021;大连医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室,辽宁大连116044;北京协和医学院/中国医学科学院肿瘤医院流行病学研究室,北京100021;北京协和医学院/中国医学科学院肿瘤医院流行病学研究室,北京100021;北京协和医学院/中国医学科学院肿瘤医院流行病学研究室,北京100021;北京协和医学院/中国医学科学院肿瘤医院流行病学研究室,北京100021;北京协和医学院/中国医学科学院肿瘤医院流行病学研究室,北京100021;北京协和医学院/中国医学科学院肿瘤医院流行病学研究室,北京100021;北京协和医学院/中国医学科学院肿瘤医院流行病学研究室,北京100021【正文语种】中文【中图分类】R446人乳头瘤病毒(HPV)与宫颈癌的发病密切相关，有研究显示，超过99%的宫颈癌患者宫颈标本中都能检测到HPV[1-2]。
HPV课件PPT
感染的病毒通过小的损伤进入
到基底层细胞。
~10%的人存在持续的感染，其中部分与宫颈癌发生
高相关。
Genotypes
%
HPV与宫颈癌 HPV相关亚型
Distribution in cervical cancers*25
16
57%
18
45 31 33 35 39 51
16% 7% 4% 3%
52 56 58
2. 其它12种hr-HPV，近期发生CIN2以上病变的风险相对较低， 无需进行基因分型 • ASCCP指南中明确指出，不应对16/18之外 should not be tested 的HPV进行基因分型
for individual HPV genotypes other than HPV16 and HPV18.
19
cobas HPV 唯一FDA批准、精确筛查同时提供风险 分层
HPV16/18型阳性将更快地发展为CIN3+（远期风险高），应立即阴道镜 其他hrHPV发展为CIN3+缓慢（远期风险低），可间隔1年随访，无需再具体分型
HPV检测方法所应具备的条件
2012年，ASCCP/ACS/ASCP 强调：对于HPV检测方法的评 估，应以CIN2和CIN3作为研究 判定终点
依靠宿主细胞进行复制、转录和翻译 宿主和组织特异性 〉100种基因型。
HPV病毒电镜图
感染皮肤、黏膜上皮细胞，引起细胞 病变。 传播途径：接触传播
HPV的分型
高 危 型 A9 HPV (大约60 种) (大约40 种) 嗜粘膜型HPV 高危型HPV 低危型HPV 非嗜粘膜/皮 肤型HPV 病症：皮肤疣 (主要在手脚) HPV A7
• 发病率逐年升高
罗氏cobash232检测原理Wu
6
POCT带来了哪些优点？
7
POCT的检测技术
POCT的基本原理是：把传统方法中的相关试剂浸润于试纸和各种微孔膜的吸水材 料中，成为整合的干燥试剂块，然后将其固定于硬质基质上。成为各种形式的诊断 试剂条；或把传统分析仪器微型化，操作方法简单化，使之成为便携式和手掌式的 设备，或将上述两种整合为统一的系统。
cobas h 232 检测原理及操作培训
上海亦扬医疗器械有限公司 罗氏血气分析仪
Company Logo
Contents
1 2 2
POCT简介
cobas h 232检测原理介绍
主要竞争对手及检测原理介绍
“在中心实验室以外进行的检验"
POCT 特点
中心实验室
商业实验室 检验科 监护室 手术室 急诊 时间：即时 地点：在患者床边 人物：医护人员，患者本人及家属等
每个抗体结合特定抗原双抗体夹心法胶体金标记物11cobas232检测原理以ntprobnp为例goldgold测试片m7m117biotinbiotin反应区检测区免疫胶体金抗体识别ntprobnp的抗体含有ntprobnp的血样包被好抗体反应膜层12cobas232检测原理以ntprobnp为例玻璃纤维膜血浆血浆反应反应区检测区免疫胶体金抗体识别ntprobnp的抗体双抗体夹心复合物玻璃纤维膜层双抗体夹心复合物随血浆过滤到下一层13cobas232检测原理以ntprobnp为例信号线质控线synthpetidestreptavidin检测反应区检测区醋酸纤维膜层双抗体夹心的抗原抗体复与信号线结合信号线显色免疫胶体金抗体结合质控线质控线显色没有结合的抗体与信号线结合信号线不显色14么么么么方面sds绝对是假的cobas232检测原理影响抗原抗体反应的因素外部因素?温度
roche-乙肝产品-迪安推介
区域
北美
欧洲 亚洲
国家
验证人群
检测方法
敏感性
特异性
（CIN2+） （CIN2+）
研究结论
美国
ATHENA研究 47000名≥21岁, ASCUS的1578例样本
cobas HPV HC2
93.5% 91.3%
69.3% 70.0%
对于ASCUS人群，cobas HPV检 测拥有与HC2一致的临床检测 性能1
• 开始治疗 • 治疗期间监测 (“治疗路线图”) • 监测耐药 • 治疗终点
4
慢性乙型肝炎治疗一般流程图
慢性乙型肝炎
无肝硬化
有肝硬化
HBeAg+
HBeAg-
HBV DNA≥20000 IU/mL HBV DNA≥2000 IU/mL
代偿期
失代偿期
ALT≥2ULN
ALT<ULN
ALT≥2ULN
HBeAg+ HBV DNA≥ 2000 IU/mL
对低浓度样本准确检出，更准确 反映应答情况
宽泛的线性范围，覆盖大部分临 床样本，减少二次检测
避免PCR反应管间差异，确保定 量准确
提高检测重复性；避免污染，杜 绝假阳性
确保不同方法间的可比较性
确保结果准确性
IU/mL=5.82*copies/mL 10
HCV RNA检测性能比较 COBAS TaqMan 检测提供更卓越的性能
灵敏度 线性范围 定量方法 自动化 浓度单位 可溯源性
COBAS Taqman检测 15 IU/mL
43 – 6.9 x 107 IU/mL
内部标准品法
全自动
HPV (HPV及常用试剂盒)
Hybrid Capture® 2 High-Risk HPV DNA Test
certificati on FDA APPROVED
Detectio n type
High-risk HPV types 16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/59/68
Num of test
8
Company name
9
NatureVolume: 488,Pages:S2–S3Date published:(30 August 2012)DOI:doi:10.1038/488S2a
Company name
HPV types linked disease
Human papillomaviruses are common throughout the world HPV infections are transmitted through sexual contact Most infections with HPV cause no symptoms
10
Human diseases associated with HPV and the most common HPV types associated with those diseases Company name
4 types women and girls should be most concerned about
26
Company name
Cervista HPV HR
27
First FDA approved high-risk HPV test in a decade (2009) Quantitative detection Use the Invade chemistry, a signal amplification method for detection of specific nucleic acid sequences High risk: 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 66 68 Cannot determine the specific HPV type present. Performed either manually or using the automated Cervista High Throughput Automation (HTA) system Company name 96 tests
宫颈癌筛查和初筛后分流方式及转诊时机
宫颈癌筛查和初筛后分流方式及转诊时机陈亚梅; 李凌【期刊名称】《《实用临床医学》》【年(卷),期】2019(020)009【总页数】5页(P97-101)【关键词】宫颈癌筛查; 宫颈高级别上皮内瘤变及以上病变; 初筛; 分流; 转诊; 医疗资源【作者】陈亚梅; 李凌【作者单位】南昌大学研究生院医学部; 江西省妇幼保健院肿瘤科南昌 330006【正文语种】中文【中图分类】R737.33宫颈癌是威胁女性健康的第四大常见恶性肿瘤，据统计宫颈癌每年的新发病例是98.9/10万，宫颈癌的病死率大约是30.5/10万[1]。
高危型高危人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)的感染与宫颈癌的发生发展密切相关，在宫颈高级别上皮内瘤变及以上病变(high-grade squamous intraepithelial lesions,HSIL+)中，感染HPV16/18型的女性所占的比例最高，随着病毒载量的升高，病变发生的风险和相对危险度也随之升高[2]，感染HPV病毒出现癌前病变后直到出现宫颈癌的周期大概是10～20年，这使宫颈癌及癌前病变的早发现、早治疗成为了可能[3]。
在现有的宫颈癌筛查系统中，常见的筛查方法有细胞学检测、HPV检测、碘染色和醋酸染色(visual inspection with acetic acid and Lugol’s iodine,VIA/VILI)检测等。
现阶段在宫颈癌的筛查中常用的细胞学检测方法是液基薄层细胞学(thinprep cytology test,TCT)，TCT检测技术较传统细胞学可提高细胞检测样品质量。
HPV检测包括HPV分型和HPV DNA定量等检测技术，其中HPV 16/18型检测具有较高的敏感性和阴性预测值[4]。
HPV和细胞学联合筛查可增加筛查的灵敏度和特异度，降低宫颈浸润癌的发生率和病死率[5]。
作为一种以患者为中心的检测方法，HPV自取样标本对HSIL+的检出与专业人员取样的检测结果没有显著差异[6]。
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输卵管 子宫 宫颈 宫颈癌 阴道
• •
3
HPV 是引起宫颈癌的主要因素
超过99%的宫颈癌都检测到HPV
• 目前根据DNA同源性将HPV分为100多种亚型，约 35种型别与生殖道感染 (如：生殖器疣等) 有 关，约20种型别与癌症相关。 • 与宫颈癌相关的高危型 HPV (high-risk HPV, or hrHPV)有14种：16，18，31，33，35， 39，45，51，52，56，58，59, 66, 68 • 低危型有 6，11，40，42，43，44 • 来自世界各地的宫颈癌组织标本的研究发现， HPV16、18型感染率最高（占70%）
HPV阳性 （管理方式与LSIL相同）
阴性
≥ASC
HPV阴性
常规筛查 （3年内细胞学检查）
阴道镜
不充分阴道镜检查未观察到上皮病变，首选颈管取样 充分阴道镜检查转化区有上皮病变，可接受颈管取样
重复联合检测 间隔 3年
参照ASCCP指南管理
Massad L S, Einstein M H, Huh W K, et al. 2012 updated consensus guidelines for the management of abnormal cervical cancer screening tests and cancer precursors[J]. Obstetrics & Gynecology, 2013, 121(4): 829-846.
HPV检测的临床应用 术后随访(2013 ASCCP)
阴道镜不充分，CIN2,3复发， 或颈管取样为CIN2,3
阴道镜充分
诊断性切除术或 转化区消融术
诊断性切除术
联合检测 12个月和24个月
连续两次联合检 测均为阴性
任何检测异常
常规筛查
重复联合检测 3年内
阴道镜 结合颈管取样
Massad L S, Einstein M H, Huh W K, et al. 2012 updated consensus guidelines for the management of abnormal cervical cancer screening tests and cancer precursors[J]. Obstetrics & Gynecology, 2013, 121(4): 829-846.
66 68
检测 12hrHPV 检测HPV16 检测HPV18
检测β-globin 内质控
12hrHPV指除HPV16/18型外的其他12种高危型HPV
检测通量
1 hr
2 hr
3 hr
4 hr
5 hr
6 hr
7 hr
8 hr
9 hr
160 min
120 min 160 min
94 Samples complete 120 min 188 Samples complete 160 min 120 min 282 Samples complete
Daily Maint
Setup
Sample Prep
Amp/Detect
1批88个样本，一天3批282个样本
罗氏cobas高风险HPV检测 －提供准确可靠的结果
结果准确可靠
内质控：Betaglobulin (B 球蛋白）
高保守的靶标选择, 优化的PCR引物、 探针设计
AmpErase抑制遗 留的扩因子
Cobas HPV检测原理
基于q-PCR的全自动检测
cobas® x 480 核酸提取仪
cobas® z 480
PCR扩增仪
FDA, CFDA, CE
cobas HPV的检测原理
风险分层,对每一份标本质控
通道 1 通道2 通道3 通道4
31 33 35 39 45 51 52 56
16
18
58 59
Saslow D, Solomon D, Lawson HW et al. American Cancer Society, American Society for Colposcopy and Cervical Pathology, and American Society for Clinical Pathology screening guidelines for the prevention and early detection of cervical cancer. Am J Clin Pathol. 2012 Apr;137(4):516-42.
避免假阴性
防止了低危型的交 叉反应
防止PCR反应中遗 留的扩因子可能产 生的污染
主要内容
宫颈癌简介
1
Cobas HPV实 验性能
Cobas HPV检 测的临床应用
HPV检测的临床应用
ASCUS人群管理（ 2013 ASCCP ）
意义不明的非典型鳞状上皮细胞（ASCUS）的管理 重复细胞学，间隔 1年（可接受） HPV检测（首选）
cobas HPV检测介绍
费茂贵 2014-7-24 IVD Molecular RocheBiblioteka 主要内容宫颈癌简介
1
Cobas HPV实 验性能
Cobas HPV检 测的临床应用
宫颈癌的临床背景
•
卵巢
宫颈癌在全球妇女的癌症死因中高居第二 位。全球每年新产生约 51万病例，死于宫 颈癌的妇女约有20万。 在中国近13万例，约占世界新发病例的 1/4、占亚洲1/2 。 在中国每年约有2—3万的妇女死于宫颈癌。
HPV检测的临床应用
HPV检测联合细胞学筛查（2012年ASCCP/ACS/ASCP ）
人乳头状病毒（HPV）
4
HPV16+，18+ 有更高的宫颈癌风险
5
宫颈癌发生模式（四个阶段）
• HPV一过性感染
• HPV持续感染（VS.清除） • 持续感染向CIN发展（两状态互为共存） • 发展为浸润癌
筛查的目标阶段
主要内容
宫颈癌简介
Cobas HPV 实验性能
2
Cobas HPV检 测的临床应用
HPV检测的临床应用
HPV联合细胞学筛查（2012年ASCCP/ACS/ASCP ）
人群 ＜21岁 不筛查 推荐筛查方法
21～29岁
30～65岁
每3年一次的单独细胞学筛查
每5年一次的HPV和细胞学联合筛查（优先推荐） 每3年一次的单独细胞学筛查（可接受的）
>65岁
近10 年有连续3次阴性细胞学结果或连续2 次阴 性联合筛查结果且末次筛查在近5 年内的>65 岁 女性,停止筛查。