真菌检测步骤(1)doc资料
真菌检测方法范文
真菌检测方法范文真菌是一类微生物，分布广泛，常见于土壤、水体、植物、动物以及人体等环境中，有些真菌对人类和其他生物有害。
因此，对真菌进行检测和监测是很重要的。
下面将介绍一些常见的真菌检测方法。
1.培养法培养法是最常用的真菌检测方法之一、该方法通过将样品（土壤、水体、食品等）接种在富含营养物的培养基上，利用真菌的生长特性进行培养和分离。
首先，样品经过稀释，然后将其接种在含有葡萄糖、氮源、矿物质等的培养基上，利用不同温度和湿度条件进行培养。
培养所得的真菌会在培养皿上形成菌落，这些菌落可以用肉眼观察或利用显微镜进行进一步鉴定。
2.直接显微镜检测法直接显微镜检测法是一种快速、直接的检测方法。
样品（如食品、空气、皮肤等）经过简单处理后直接观察。
在显微镜下，可以直接观察到真菌的形态、大小、结构和颜色等特征。
这种方法不需要等待真菌生长，对于一些难以培养的真菌也是有效的。
但是，该方法不能提供详细的物种鉴定，只能确定真菌的存在。
3.PCR法PCR（聚合酶链式反应）法是一种利用DNA扩增的方法来检测真菌的存在。
该技术通过设计特异性引物（PCR引物），在反应体系中引发DNA扩增反应。
首先，提取待检样品中的真菌DNA，然后在PCR反应中将目标DNA扩增为大量可见的DNA片段。
这些片段可以通过电泳等技术进行分析和鉴定。
PCR法可以快速、灵敏地检测真菌，并提供物种水平的鉴定结果。
4.免疫学检测法免疫学检测法是一种使用特异性抗体来检测真菌的方法。
该方法通过将待检样品与特定的抗真菌抗体结合，然后将该复合物与一种可视信号（如荧光素或酶染色剂）结合。
当真菌存在时，抗体与其结合，产生荧光或颜色的变化。
这种方法可以快速、高效地检测真菌，但需要特异性的抗体和相关设备。
5.分子生物学方法分子生物学方法（如扩增子测序和全基因组测序）对于真菌检测和鉴定来说是一种非常有力的工具。
这些方法利用高通量测序技术对待检样品中的所有基因进行测序，然后通过比对数据库中的已知基因组进行比较和鉴定。
微生物总数检测方法(真菌)
微生物总数检测方法（真菌）一、检测用培养基配方与培养条件1.培养基：马铃薯葡萄糖琼脂（PDA培养基）配制：以北京路桥PDA培养基为例，按说明上配制需称取培养基4克，加水100毫升。
2. 培养条件：25℃-30℃；时间：72-96小时。
二、检测与计数方法1. 梯度稀释称取适量的样品，加入带玻璃珠的三角瓶中，加入100mL的无菌水（无菌水中事先加入了分散剂3—5滴，分散剂可以是吐温，OP—80，用来分散菌团），用玻璃棒搅拌使之溶解吸水均匀后，上旋转式摇床200 r/min充分振荡60 min，,即成母液菌悬液（基础液）。
2. 用10mL无菌移液管分别吸取10mL上述母液菌悬液加入90 mL无菌水中，按1:10进行系列稀释，分别得到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……1:k稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管，每一个稀释度瓶种应放有适量的玻璃珠，以保证菌液分布均匀）。
3. 加样及培养取1个适宜的稀释度，用移液枪吸取菌悬液0.1 mL，加至预先制备好的固体培养基平板上，用无菌玻璃涂布棒将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。
此稀释度重复3次，同时以空白作对照，于适宜的条件下培养。
4. 菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。
当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。
5. 菌落计数以出现20—70个菌落数的稀释度的平板为计数标准，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。
有效活菌数按式（1）计算，同时计算杂菌数：nm = x kv1/(m0v2) ×10-8或 nv = x kv1/(v0v2) ×10-8（1）式中：nm —质量有效活菌数，亿/gnv —体积有效活菌数，亿/mLx—有效菌落平均数，个k —稀释倍数v1—基础液体积， mLv2—菌悬液加入量， mLv0—样品量，mLm0—样品量， g重点需要注意的部分在菌悬液的制备及震荡过程上，因为固态发酵的的产品大部分为聚集状态不容易分散开来，这点与液态发酵产品不同。
真菌检测方法
分离培养：无菌采取病料接种马铃薯琼脂培养基中，置37℃恒温箱中培养24小时，长成绒毛样菌丝，未见其它细菌生长。
经48小时培养长成白色菌落。
72小时菌落呈纽扣状，由中心向外周逐渐变深，转变成灰白色、灰绿色。
取培养物镜检可见大量球形的分生孢子。
通常人们把真菌和霉菌认为是一种病原的两种说法。
真正真菌包括霉菌，霉菌只是众多真菌中的一种。
真菌是由单细胞或多细胞组成，按有性或无性方式进行繁殖的真核细胞类微生物。
根据其侵犯人体的部位分为前部真菌和深部通常人们把真菌和霉菌认为是一种病原的两种说法。
真正真菌包括霉菌，霉菌只是众多真菌中的一种。
真菌是由单细胞或多细胞组成，按有性或无性方式进行繁殖的真核细胞类微生物。
根据其侵犯人体的部位分为前部真菌和深部真菌，包括皮肤癣菌、孢子丝菌、念珠菌、曲霉菌、隐球菌、组织胞浆菌等。
而霉菌多为细胞真菌的一种，也为深部感染真菌，包括烟曲菌、黄曲菌、黑曲菌、土曲菌等，常发生于免疫力低下的患者，引起全身播散性感然，影响预后。
培养基的选择应根据实验材料和检验目的来确定。
目前国标方法中使用的培养基有:马铃薯葡萄糖琼脂(PDA),孟加拉培养基(RBC)、高盐察氏培养基(CAO),其中PDA和RBC适合于一般的霉菌和酵母菌生长,而CAO则适合于高渗性霉菌生长,酵母菌几乎不长。
在日常检测中我们发现,有些常见的耐高渗性霉菌,如局限曲霉、谢瓦曲霉、赤曲霉、Wallemia等在PDA、RBC上生长非常缓慢或不长,而这些菌在高渗培养基如M40Y、DG18(M40Y琼脂配方:蔗糖400g,麦芽提取汁20g,酵母提取汁5g,琼脂20g,氯霉素50mg,蒸馏水1000ml;DG18琼脂配方:葡萄糖10g,蛋白胨5g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5g,氯霉素0.1g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH6.5)上则正常生长,孢子、形态特征发育良好,而且酵母菌也能在M40Y、DG18上生长,因此,若能同时采用PDA和M40Y(或DG18)分离培养各类样品中的霉菌,将能更全面地反映出污染霉菌的菌相。
真菌鉴定操作方法包括
真菌鉴定操作方法包括真菌鉴定是一个重要的实验操作，主要用于识别和分类不同类型的真菌。
下面是一个关于真菌鉴定的详细操作方法，包括准备实验材料、样品采集、样品处理、显微镜观察和种类鉴定等步骤。
1. 准备实验材料- 显微镜和镜片- 鉴别图谱或参考书籍- 培养基和培养皿- 高温消毒器、吹风机和灭菌剂- 实验手套和口罩- 细胞计数器或显微镜计数室2. 样品采集- 选择合适的样品，可以是土壤、植物组织、食物等。
- 使用消毒的工具（如消毒的剪刀或刮刀），在不受污染的情况下采集样品。
- 将采集的样品置于消过毒的袋子中，以防止交叉污染。
3. 样品处理- 使用消毒剂或抗菌液清洗样品表面，以去除外部的真菌。
- 将样品分为几个部分，可以在不同培养基上进行培养。
- 使用刮刀或剪刀将样品切碎或捣碎。
4. 培养基处理- 准备适当的培养基。
- 将培养基加热至溶解状态，然后轻轻摇晃，使其均匀分布。
- 将培养基倒入已消过毒的培养皿中，约为1/3至1/2的高度。
- 使用高温消毒器或微波炉将培养皿加热至液体沸腾。
5. 样品接种和培养- 使用一根消过毒的扁柔尖头棒，将样品均匀地涂抹在培养基表面上。
- 确保样品的分散和均匀分布。
- 使用针刺法或击悬法对样品进行无菌采样。
- 将培养皿盖好，尽量避免空气、灰尘或其他污染物进入。
6. 培养条件和观察- 将培养皿放在适当的温度下（通常是25至30），以利于细菌的生长。
- 观察培养皿的变化，包括真菌的形态和色素的产生，以及其他生长特征，如菌丝、分生孢子等。
- 使用显微镜观察真菌的微观结构，注意形状、大小和颜色的变化。
7. 种类鉴定- 使用鉴别图谱或参考书籍，对观察到的真菌进行分类和鉴定。
- 根据形态特征、生长条件、产孢体和孢子形态等进行确定。
- 与已知的真菌对照组进行比较，以确保准确性。
总之，真菌鉴定是一个复杂而重要的实验操作。
通过遵循上述操作方法，可以准确地鉴定出不同类型的真菌，并进一步研究和了解其生长、分类和特性。
检测不同环境中的细菌和真菌步骤
检测不同环境中的细菌和真菌步骤
1.样品采集：使用无菌工具（如消毒棉签、无菌采样袋等），在待测环境中采集样品。
可以选择不同的环境，如室内表面、土壤、空气或水源等。
2.样品处理：将采集到的样品进行处理，以便更好地分离和培养细菌和真菌。
处理过程可能包括样品的稀释、研磨或加入适当的缓冲液。
3.培养细菌和真菌：将处理后的样品分别接种在适当的培养基上。
选择适当的培养基可以有助于细菌和真菌的生长和繁殖。
培养基可以根据需要添加抗生素或选择性剂，以抑制非目标微生物的生长。
4.孵育：将接种的培养基置于适当的温度和湿度条件下，培养细菌和真菌。
不同的微生物可能对温度和湿度有不同的要求，因此需要根据目标微生物的特性进行相应的调整。
5.观察和鉴定：在培养一定时间后，观察培养基上是否有细菌和真菌的生长。
可以使用显微镜观察细菌和真菌的形态特征，如形状、大小和颜色等。
也可以使用一些生化试剂或基因检测方法来鉴定微生物的种类。
6.数据分析：根据观察结果，进行数据记录和分析。
可以统计不同环境中细菌和真菌的数量、种类和分布情况等。
真菌检测的质量控制的流程
真菌检测的质量控制的流程一、引言真菌检测是一项重要的质量控制措施，用于确保产品的安全和合规性。
本文将详细介绍真菌检测的质量控制流程，包括样品收集、实验室分析和结果解读等方面。
二、样品收集1. 样品选择：根据产品类型和检测要求，选择代表性的样品进行检测。
2. 样品采集：采用无菌技术收集样品，避免外部污染。
3. 样品存储：将样品储存于适当的温度和湿度条件下，避免真菌生长和样品变质。
三、实验室分析1. 样品准备：将样品进行处理，如研磨、稀释等，以便于后续实验操作。
2. 真菌培养：将样品接种于含有适当培养基的培养皿中，培养一定时间，促使真菌生长。
3. 真菌分离：从培养物中分离出单个真菌菌株，避免混杂现象。
4. 真菌鉴定：通过形态学和生物化学方法，对分离出的真菌进行鉴定，确定其种属和属属。
5. 真菌计数：使用显微镜和计数室，对样品中的真菌进行计数，得出真菌数量。
四、结果解读1. 标准值设定：根据相关法规和标准，确定真菌数量的合理范围。
2. 结果比较：将实验结果与标准值进行比较，判断样品是否符合要求。
3. 结果报告：将实验结果整理成报告，包括样品信息、实验方法、结果数据和结论等内容。
4. 异常处理：如果样品超过标准值，需要进行异常处理，如重新采集样品、改进生产工艺等。
五、质量控制措施1. 内部质量控制：实验室应建立内部质量控制体系，包括使用标准菌株进行日常验证、定期校准仪器设备、培训人员等。
2. 外部质量控制：参加相关质量控制组织的外部质量评估，与其他实验室进行比对，确保结果的准确性和可靠性。
3. 仪器设备维护：定期维护和校准实验室使用的仪器设备，确保其正常运行和准确性。
六、结论真菌检测的质量控制流程包括样品收集、实验室分析和结果解读等环节。
通过严格执行质量控制措施，可以确保真菌检测结果的准确性和可靠性，保障产品的质量和安全。
实验室应建立完善的质量控制体系，并参与外部质量评估，不断提高真菌检测水平。
真菌培养检查方法
真菌培养检查方法真菌培养检查是医院常用的检查方法，用于检测和鉴定真菌感染。
以下是真菌培养检查的步骤和注意事项：1. 采集标本：根据感染部位的不同，采集不同的标本。
例如，对于皮肤真菌感染，可以从病灶边缘刮取皮屑；对于深部真菌感染，可能需要采集血液、尿液等标本。
采集的标本应该尽快送往实验室进行培养，以免影响检查结果。
2. 培养基选择：根据不同的真菌种类，选择不同的培养基。
常用的培养基有沙保弱培养基、孟加拉红培养基等。
培养基的选择应该根据实验室的具体要求进行选择。
3. 接种：将采集的标本接种在培养基上，接种时要避免污染。
接种后将培养基放入恒温箱中进行培养。
4. 观察：在培养期间，需要定期观察培养基上是否有菌落生长。
一般情况下，真菌在培养基上生长需要几天到几周的时间。
如果发现有菌落生长，需要进行形态学鉴定和生化反应等试验，以确定真菌的种类。
5. 鉴定：通过形态学鉴定和生化反应等试验，可以确定真菌的种类。
有时还需要进行其他检查，如药敏试验等，以确定真菌对不同药物的敏感性。
6. 报告：鉴定完成后，医生会将结果报告给患者。
报告中包括真菌的种类、药敏试验结果等内容。
根据报告，医生可以制定相应的治疗方案。
注意事项：1. 在采集标本前，应该注意个人卫生，避免污染标本。
2. 培养期间，应该保持恒温箱的温度和湿度，以确保培养基上的真菌能够正常生长。
3. 在鉴定真菌时，应该注意观察菌落的形态和颜色等特征，以及进行生化反应等试验，以确保鉴定结果的准确性。
4. 对于深部真菌感染，需要进行多次检查，以排除假阳性的可能。
真菌检测的质量控制的流程
真菌检测的质量控制的流程一、背景介绍真菌检测是一种重要的质量控制过程，用于确定食品、环境和药品中是否存在真菌污染。
真菌污染可能对人体健康造成危害，因此确保真菌检测的准确性和可靠性至关重要。
本文将详细介绍真菌检测的质量控制流程。
二、样品采集1. 样品选择：根据需要检测的物质类型，选择合适的样品，如食品、环境表面或者空气中的微生物样品。
2. 样品采集：使用无菌工具采集样品，并确保采样过程符合卫生要求，避免交叉污染。
三、实验室准备1. 实验室环境：确保实验室环境符合相关标准，包括温度、湿度和洁净度等。
2. 实验室设备和试剂：根据检测要求，准备好所需的设备和试剂，确保其质量和有效性。
四、样品处理1. 样品预处理：根据样品类型，进行适当的预处理步骤，如样品的分离、稀释或者浸泡等。
2. 样品制备：将样品制备成适合检测的形式，如制作培养基平板或者提取样品中的真菌DNA。
五、质控样品1. 正负对照样品：准备正样品和负样品作为质控样品，用于验证检测方法的准确性和灵敏度。
2. 外部质控样品：参预外部质量控制计划，定期接受第三方机构提供的质控样品，以评估实验室的准确性和可靠性。
六、检测方法1. 培养法：使用适当的培养基和条件，培养样品中的真菌，并进行观察和鉴定。
2. 份子生物学方法：如聚合酶链式反应（PCR）或者实时荧光定量PCR等，通过检测特定的真菌DNA或者RNA序列来确定真菌的存在。
七、结果评估与记录1. 结果解读：根据检测方法和标准，对检测结果进行解读和判定。
2. 结果记录：将检测结果准确记录在实验记录中，并确保记录的完整性和可追溯性。
八、质量控制措施1. 内部质量控制：使用正负对照样品进行内部质量控制，确保每批次检测的准确性和一致性。
2. 外部质量控制：参预外部质量控制计划，接受第三方机构提供的质控样品，以评估实验室的准确性和可靠性。
3. 人员培训：对实验人员进行相关培训，确保其熟悉并正确执行检测方法和质量控制流程。
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真菌检查步骤1.采集标本浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标本在分离前常先用75%的乙醇消毒。
深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、脓液、口腔或阴道分泌物、血液、脑脊液、各种穿刺液和活检组织，采集标本时应注意无菌操作。
2.检查方法真菌检查的方法主要有：（1）直接涂片：为最简单而重要的诊断方法。
取标本置玻片上，加一滴10%KOH溶液，盖上盖玻片，在酒精灯火焰上稍加热，待标本溶解，轻轻加压盖玻片使标本透明即可镜检。
可用于检查有无菌丝或孢子，但不能确定菌种。
（2）墨汁涂片：用于检查隐球菌及其他有荚膜的孢子。
医学教育|网搜集整理方法是取一小滴墨汁与标本（如脑脊液）混合，盖上盖玻片后直接镜检。
（3）涂片或组织切片染色：涂片染色可更好地显示真菌形态和结构。
革兰染色适用于白念珠菌、孢子丝菌等；瑞氏染色适用于组织胞浆菌；组织切片通常用PAS染色，多数真菌可被染成红色。
（4）培养检查：可提高真菌检出率，并能确定菌种。
标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基上，置室温或37℃培养1～3周，必要时可行玻片小培养协助鉴定。
菌种鉴定常根据菌落的形态及显微镜下形态判断，对某些真菌，有时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生物学方法确定。
四、真菌学检验的基本技术（一）直接镜检是最简单也是最有用的实验室诊断方法，常用的方法有：①氢氧化钾/复方氢氧化钾法：标本置于载玻片上，加一滴浮载液，盖上盖玻片，放置片刻或微加热，即在火焰上快速通过2～3次，不应使其沸腾，以免结晶，然后轻压盖玻片，驱逐气泡并将标本压薄，用棉拭或吸水纸吸去周围溢液，置于显微镜下检查。
检查时应遮去强光，先在低倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列等。
浮载液：A.10%~20%的KOH。
配方：氢氧化钾10～20g，蒸馏水加至100ml，待氢氧化钾完全溶解后揺匀存放在塑料瓶内，适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、痰、粪便、组织、耵聍等的检查。
B.复方氢氧化钾溶液配方：氢氧化钾（AR）10g，二甲基亚砜（AR）40ml,甘油50ml, 蒸馏水加至100ml,配制方法：将氢氧化钾先加入30ml蒸馏水中溶解后，再依次加入DMSO、甘油揺匀后，用蒸馏水加到100ml，装入塑料瓶内。
此配方的优点是：配方中加DMSO，能促进角质的溶解，有甘油涂片不易干，不易制成氢氧化钾结晶，氢氧化钾的浓度相对低，腐蚀性亦低，为进行大面积普查或大批量采集标本作镜检带来了方便。
②胶纸粘贴法：用1cm×1.5cm的透明双面胶带贴于取材部位数分钟后自取材部位揭下，撕去复带在上面的底板纸贴在载玻片上，使原贴在取材部位的一面暴露在上面，再进行革兰染色或过碘酸锡夫染色，在操作过程中应注意双向胶带粘贴在载玻片上时不可贴反，而且要充分展平，否则影响观察。
③涂片染色检查法：在载玻片上滴1滴生理盐水，将所采集的标本均匀涂在载玻片上，自然干燥后，火焰固定或甲醇固定。
再选择适当的染色方法，染色后，以高倍镜或油镜观察。
常见镜检染色方法有：①革兰染色。
所有真菌、放线菌均为革兰染色阳性，被染成蓝黑色。
适用于酵母菌、孢子丝菌、组织孢浆菌及诺卡菌、放线菌的感染。
②乳酸酚棉蓝染色：用于各种真菌培养物的镜检。
③印度墨汁：用于检测脑脊液（CSF）中的新生隐球菌。
④抗酸染色：用于抗酸菌及诺卡菌的诊断。
⑤瑞氏染色：用于组织胞浆菌和马内菲青霉的检测。
⑥过碘酸锡夫染色（PAS）：用于体液渗出液和组织匀浆等。
真菌胞壁中的多糖染色后呈红色，细菌和中性细胞偶可呈假阳性，但与真菌结构不同，不难区别。
⑦嗜银染色（GMS）：真菌可染成黑色，主要用于测定组织内真菌。
（二）真菌培养从临床标本中对致病真菌进行培养，目的是为了进一步提高对病原体检出的阳性率，以弥补直接镜检的不足，同时确定致病菌的种类。
真菌培养检查除需要一般细菌检验用到的器具外，还应准备真菌专用的接种针、接种环、或接种钩（用铂丝或镍丝制成）、微型小铲、刀片、针头等，常规分离鉴定使用的培养基为沙氏葡萄糖琼脂（SDA）斜面培养基，加0.05%氯霉素，还有多种性质的培养基（见第二部分）以满足各种不同的需要，可酌情选用接种的方法，根据不同的临床标本，大体可分为点植法和划线法两种。
①点植法：适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、组织等有形固体标本，将标本直接与培养基表面点状接触。
②划线法：适用于痰、分泌物、脓液、组织液、组织块的研磨液等液体标本，用接种针（环）划线接种在培养基表面。
培养方法有多种，接临床标本接种时间分为直接培养法和间接培养法；按培养方法分为试管法、平皿法（大培养）和玻片法（小培养）。
①直接培养：采集标本后直接接种于培养基上。
②间接培养：采集标本后，暂保存，以后集中接种。
③试管培养：是临床上最常用的培养方法之一，培养基置于试管中，主要用于临床标本分离的初代培养和菌种保存。
④大培养：将培养物接种在培养皿或特别的培养瓶内，主要用于纯菌种的培养和研究。
⑤小培养：主要用于菌种鉴定，大致分为三种：玻片法，方块法和钢圈法。
A.玻片法：在消毒的载玻片上，均匀地浇上熔化的培养基，不宜太厚。
凝固后接种待鉴定菌株，置于平皿中，保湿。
待有生长后，盖上消毒的盖玻片，显微镜下直接观察，常用米粉吐温琼脂培养基观察白念珠菌的顶端厚壁孢子和假菌丝。
B.方块法：适用于霉菌菌落的培养。
取无菌平皿倒入约15ml熔化的培养基，待凝固后用无菌小铲或接种刀划成1cm2大小的小块。
取一小块移在无菌载玻片上，然后在小块上方四边的中点接种待鉴定菌株，盖上消毒的盖玻片，放入无菌平皿中的V形玻棒上，底部铺上无菌滤纸，并加入少量无菌蒸馏水，孵育，待菌落生长后直接将载玻片置显微镜下观察。
C.钢圈法：先将固体石蜡加热熔化，取直径约2cm，厚度约0.5cm有孔口的不锈钢小钢圈，火焰消毒后趁热浸入石蜡油，旋即取出冷却，石蜡油即附着于小钢圈中。
再取一无菌载玻片，火焰上稍加热，将小钢圈平置其上，孔口向上。
小钢圈上石蜡油遇载玻片的热即熔化后凝固，钢圈就会固定在载玻片上。
用无菌注射器经孔口注入熔化的培养基，培养基量约占小钢圈容量的1/2，注意避免气泡。
待培养基凝固后取一消毒盖玻片，火焰上加热后，趁热盖在小钢圈表面，也即固定其上。
最后用接种针伸入孔口进行接种。
这种方法的优点是形成一种封闭式培养，在显微镜下直接观察菌落时可避免孢子吸入人体，而且不易被污染，盖玻片也可取下染色后封固制片保存。
（三）培养检查标本接种后，每周至少检查2次，观察以下指标：①菌落外观：A.生长速度：缓慢生长菌：7～14d，快速生长菌：2～7d。
一般浅部真菌超过2周深部真菌超过4周仍无生长，可报告阴性。
B.外观：a.扁平。
b.疣状。
c.折叠规则或不规则。
d.缠结或垫状。
e.其他。
C.大小：菌落大小用cm来表示，菌落大小与生长速度和培养时间有关。
D.质地：a.平滑状。
b.粉状。
c.粒状。
d.棉花状。
e.粗毛状。
f.皮革状。
g.粘液状。
h.膜状。
E.顔色：不同的菌种表现出不同的顔色，呈鲜艳或暗淡。
致病性真菌的顔色多较淡，呈白色或淡黄色，而且其培养基也可变色，如马尔尼菲青霉等，有些真菌菌落不但正面有顔色，其背面也有深浅不同的顔色。
菌落的顔色与培养基的种类、培养温度、培养时间、移种代数等因素有关。
所以，菌落的顔色虽在菌种鉴定上有重要的参考价值，但除少数菌种外，一般不作为鉴定的重要依据。
F.菌落的边缘：有些菌落的边缘整齐，有些不整齐。
G.菌落的高度和下沉现象：有些菌落下沉现象明显，如黄癣菌、絮状表皮癣菌等，更有甚者菌落有时为之裂开。
H.渗出物：一些真菌如青霉、曲霉的菌落表面会出现液滴。
I.变异：有些真菌的菌落日久或多次传代培养而发生变异，菌落顔色减退或消失，表面气生菌丝增多，如絮状表皮癣菌在2～3周后便发生变异。
②显微镜检查：小培养可置普通显微镜下直接观察，而试管和平皿培养的菌落则需挑起后做涂片检查。
五、组织病理学检查真菌病的组织病理检查与直接镜检培养同样具有相当重要的价值，尤其对深部真菌病的诊断意义更大，如用特殊染色可提高阳性率。
真菌的组织病理反应与其他一些疾病的组织病理反应极其相似，往往只有在仔细研究了病理切片并发现了真菌之后才考虑到真菌病的诊断。
而在这种情况下，标本已被固定，培养有时已不可能进行，组织病理切片就成了真菌感染的主要依据。
所以临床上在送病理标本的同时，要尽可能考虑到真菌感染的可能，以便同时采集标本送真菌实验室进行真菌学检查。
真菌在组织内一般表现为：①孢子：酵母和双相型真菌在组织内表现为孢子。
②菌丝：许多真菌在组织中只表现为菌丝。
组织中发现无色分隔、分支的菌丝多为念珠菌和曲霉。
粗大、不分隔少分支的菌丝为接合菌，多为毛霉、根霉、犁头霉等。
粗大、少分支有隔的菌丝为蛙粪霉菌。
棕色菌丝为暗色丝孢霉病，由暗色孢科真菌引起。
③菌丝和孢子，主要见于念珠菌感染。
④颗粒：为组织内由菌丝形成的团块。
⑤球囊或内孢囊：球囊内含有内孢子，为球孢子菌或鼻孢子菌在组织内的特征性结构。
组织病理片中根据形态和染色能基本确定种名的真菌为：荚膜组织胞浆菌、杜波伊斯组织胞浆菌、副球孢子菌、皮炎芽生菌、链状芽生菌、粗球孢子菌、新生隐球菌和鼻孢子菌等。
根据组织病理中真菌的形态能确定属而不能确定种的病为：放线菌病、奴卡菌病、无绿藻病、念珠菌病、曲霉病和不育大孢子菌病等。
多个属的真菌感染可引起相同的临床表现，在组织病理中真菌的形态无法区别的病有皮肤着生芽生菌病、暗色丝孢霉病、接合菌病、皮肤癣菌病和足菌肿等。
足菌肿的颗粒若染色适当，很易确定为放线菌性或真菌性的，也能区别出细菌性颗粒。
真菌性颗粒中的菌丝又分为无色或暗色两大类。
各种病原菌基本上形成各自顔色、大小、形成和结构的颗粒，可以初步区别，但最后确定必须依靠真菌培养。
六、血清学方法随着诊断技术的进展，以免疫学方法检测真菌病已成为可能，引起深部真菌感染的病原菌主要有白念珠菌、曲霉菌和隐球菌等，传统的检测方法主要为血培养和组织活检，但血培养历时太长，且深部真菌感染的病原菌常不易培养成功，阳性率较低。
而深部真菌感染的临床征象错综复杂，又使得组织活检缺乏典型改变，影响正确诊断，这些都使得这些方法所起的作用极为有限，真菌的抗原、抗体及代谢产物的血清学检查用于深部真菌感染的实验室检测，可取得很好的效果。
目前常用的免疫诊断方法有：①特异性抗原的检测：A.乳胶凝集试验（LA）。
B.酶联免疫试验（EIA）。
C.荧光免疫测定法（FA）。
②特异性抗体检测：由于受检者都为免疫低下患者，因其致阳性率低，故现已少用。
七、分子生物学方法近年来随着分子生物学的发展，已有聚合酶链反应（PCR）扩增、分子探针、限制性酶切片段长度多态性分析（RFLP）、DNA指纹图谱、随机扩增DNA多态性（RAPD）等方法。
用于深部真菌病的诊断和分型研究，形成了以PCR技术为基础的一系列分子诊断方法。