人教生物选修一专题2 课题1
人教版高中生物选修一课件：2.1微生物的实验室培养 (共60张PPT)
课题1 微生物的实验室培养
1
（一）培养基
1、定义：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制 出供其生长繁殖的营养基质。 2、培养基成分:碳源、氮源、水和无机盐等4类 ★另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,以及 氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。如:培养乳酸菌时需 添加维生素、霉菌PH调成酸性、细菌PH调成中性或微碱 性、厌氧微生物提供无菌条件。 ★ 4类成分齐全的培养基叫基本培养基，例如牛肉膏蛋白 胨培养基
根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指
示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种类的
微生物。
3
液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
4
固体培养基：菌落
单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落特征是鉴定菌种的重要依据。
5
于计算平均值，因为它不接近真实值，应重新实验
并注意：将菌液摇匀后再接种 P22
35
㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
半固体培养基：
无动力
有动力(弥散)
(是否运动) 6
选择培养基:从微生物群中选择具有特定表型的细胞. 使之进行繁殖所用的培养基,称为选择培养基.
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌
人教版高中生物选修一提分教程 专题2 微生物的培养与应用 课题1 第2课时 含答案
第2课时实验操作及实验结果[学习目标] 1.学会培养基的制备方法。
2.掌握大肠杆菌的纯化方法。
3.了解菌种保藏所用的方法。
知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基知识梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□01拔出棉塞。
(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□02火焰。
(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立刻盖上□03皿盖。
(4)待平板冷却凝固后，将平板□04倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
典题分析题型一培养基的制备过程分析[例1]下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B 正确；待培养基冷却至50 ℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。
[答案] A知识拓展(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。
(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
人教版高中生物选修一电子书
走近生物技术
专题1传统发酵技术的应用
课题1果酒和果醋的制作
课题2腐乳的制作
课题3制作泡菜并检测亚硝酸盐含量
专题2微生物的培养与应用
课题1微生物的实验室培养
课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题3分解纤维素的微生物的分离
专题3植物的组织培养技术
课题1菊花的组织培养
课题2月季的花药培养
专题4酶的研究与应用
课题1果胶酶在果汁生产中的作用
课题2探讨加酶洗衣粉的洗涤效果
课题3酵母细胞的固定化
专题5DNA和蛋白质技术
课题1DNA的粗提取与鉴定
课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段
课题3血红蛋白的提取和分离
专题6植物有效成分的提取
课题1植物芳香油的提取
课题2胡萝卜素的提取
附录1生物学实验室的基本安全规则
附录2生物学实验室中常用的国际单位
附录3常用培养基配方
附录4常用的消毒灭菌操作方法
附录5常用化学抑菌剂。
选修1_专题2_课题1 微生物的实验室培养 训练案及答案
高二生物选修1 训练案一、选择题：1．下列4种生物中，哪一种生物的细胞结构与其他3种生物的细胞有明显的区别：（）A．酵母菌B．乳酸菌C．青霉菌D．蘑菇2．细菌培养基通常在121℃压力锅中灭菌。
如果只有在100℃的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活？（）A．大肠杆菌B．一种青霉菌 C．枯草芽孢杆菌D．鼠伤寒沙门氏菌3．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌：（）A．接种针、手、培养基B．高压锅、手、接种针C．培养基、手、接种针D．接种针、手、高压锅4、在微生物培养过程中，需要对培养基等进行灭菌，其标准是：（）Ａ．杀死所有的病原微生物Ｂ．杀死所有的微生物Ｃ．杀死所有微生物的细胞、芽孢和孢子Ｄ．使病原菌不生长5．获得纯净培养物的关键是：（）Ａ．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌B．接种纯种细菌 C.适宜环境条件下培养 D.防止外来杂菌的入侵6．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是：（）A．.对比观察培养基有没有被微生物利用B．对比分析培养基上是否生有杂菌C．没必要放入未接种的培养基D．为了下次接种时再使用7．下列叙述错误的是：（）Ａ．培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素Ｂ．培养霉菌时需将培养基的PH调至碱性Ｃ．培养细菌时需将PH调至中性或微碱性Ｄ．培养厌氧微生物时则需要提B供无氧的条件8．关于牛肉膏蛋白胨培养基的配制需要在火焰旁操作的是：（）A.称量B.灭菌C.溶化D.倒平板9、下列有关碳源的叙述不正确的是：（）A．碳源主要用于构成微生物的细胞物质和一些代谢产物B．某些碳源可以作为微生物的主要能源物质C．蛋白质一定不能做碳源 D．不同种类的微生物的碳源可能不同10、消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。
消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。
高中生物 专题2 课题1 第1课时 培养基和无菌技术练习(含解析)新人教版高二选修1生物试题
第1课时培养基和无菌技术题型一培养基成分及种类分析1．不同培养基的具体配方不同，但所有培养基都含有( )A．碳源、磷酸盐和维生素B．氮源和维生素C．水、碳源、氮源和无机盐D．水、碳源、氮源和氧气答案 C解析虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐。
在某些特定培养基中需要维生素等特殊营养物质或氧气等。
2．下列叙述正确的是( )A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个菌体答案 A解析按物理状态不同，培养基可分为液体培养基、半固体培养基、固体培养基，按用途不同，培养基又可分为选择培养基和鉴别培养基，B错误；固体培养基由于添加了凝固剂琼脂，所以即使加入少量水也不可能制成液体培养基，C错误；单个菌体是肉眼看不见的，由同种微生物的众多菌体构成的菌落是肉眼可以看见的，D错误。
3．不同的微生物对营养物质的需求不同。
下列叙述正确的是( )A．配制培养基时都应该加糖类作为碳源B．同一种物质不可能既作碳源又作氮源C．碳源物质一定也是微生物生长所需能源物质D．氮源物质为该微生物提供必要的氮元素答案 D解析不同的微生物对碳源的要求不同，如自养型微生物不需糖类作碳源，A错误；对异养微生物来说，蛋白胨既是碳源，又是氮源，B错误；以糖类等有机碳作碳源时，碳源物质往往也是能源物质，以CO2等无机碳作碳源物质时，碳源物质不是能源物质，C错误；氮源物质在微生物培养中的主要作用是为微生物提供氮元素，D正确。
题型二无菌操作4．关于灭菌和消毒的理解，不正确的是( )A．灭菌是指杀灭物体内外一切微生物，包括芽孢和孢子B．实验者的双手用酒精消毒C．接种环用灼烧法灭菌D．常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌和紫外线照射等答案 D解析灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)，A 正确；实验者的双手用酒精消毒，B正确；金属接种工具常用灼烧灭菌法灭菌，C正确；微生物的培养过程中常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等，紫外线照射属于消毒方法，D错误。
高中生物选修一 专题二 课题1微生物的实验室培养知识点背诵
选修一专题二课题1微生物的实验室培养考点一培养基1、概念？种类？在液体培养基中加入？后可以制成固体培养基2、琼脂的来源？本质？特性？（P14最左侧）3、培养基一般都含有哪些成分？4、培养基在提供主要营养物质的基础上，还需要满足微生物生长的哪些要求？培养乳酸菌时需要添加？培养霉菌是需要将PH调至？培养细菌是需将PH调至？考点二无菌技术1、获得纯净培养物的关键是？2、如何避免杂菌的污染？3、消毒的概念？常用的消毒方法有哪些？4、灭菌的概念？常用的灭菌方法有哪三种？5、灼烧灭菌的对象A:微生物的接种工具，如？直接在酒精灯火焰的？灼烧B:在接种过程中，？等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌6、干热灭菌的条件？对象？干热灭菌过程中灭菌对象要用？包裹严密（附录4）灭菌物品为什么不能与干热灭菌箱内壁的铁板接触？（附录4）7、高压蒸汽灭菌的条件？过程？（附录4）对象：如培养基8、除了消毒和灭菌，实验室里还可以用？方法进行消毒考点三制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1、步骤？2、灭菌过程中用什么方法？3、倒平板时的温度是？过程？倒平板后平板倒置的原因？（即可防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发）考点四纯化大肠杆菌1、微生物接种的方法最常用的有？2、菌落的概念？3、平板划线法的概念？操作过程？用的工具？（接种环）4、稀释涂布平板法的概念？过程？用的工具？（涂布器）5、大肠杆菌的培养温度？是否需要设置空白对照？（P20最上）对照组有菌落生长说明什么？6、为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，对于频繁使用的菌种可以采用？方法。
具体过程？此方法的缺点？对于需要长期保存的菌种，可以采用？方法。
人教版选修1 专题2.课题1 微生物的实验室培养 作业
专题2 微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养理一理判一判1.所有的培养基中都要加入琼脂。
(×)2．微生物在液体培养基表面生长可形成菌落。
(×)3．培养不同微生物的培养基成分完全一样。
(×)4．培养纯净培养物的关键是防止杂菌污染。
(√)5．相对于消毒，灭菌对微生物的杀灭更彻底。
(√)6．无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。
(×)7．培养基最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。
(√)8．倒平板后，待平板冷凝之后需将其倒置。
(√)9．若皿盖和皿底之间溅上培养基，这个培养基不可再用。
(√)10．采取平板划线接种法时，每一次划线前都要挑取菌种。
(×)11．对微生物进行计数时最好采用稀释涂布平板法。
(√)12．需要一个不接种的培养基放在相同条件下培养以检验培养基的灭菌是否合格。
(√)悟一悟1.牛肉膏提供的主要营养是碳源、氮源、磷酸盐和维生素，蛋白胨提供的主要营养是碳源、氮源和维生素。
2．溶化后如需调整pH，应先调节pH，再灭菌。
3．培养基灭菌后要冷却到50 ℃左右时开始倒平板，其原因是琼脂是一种多糖，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，倒平板时高于50 ℃会烫手，低于50 ℃时，若不及时操作，琼脂会凝固。
4．倒平板时，要使锥形瓶的瓶口通过火焰。
通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
5．平板冷凝后，要将平板倒置。
因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可避免培养基中的水分过快地蒸发。
6．在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，那么这个平板不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
感悟体会：练一练1.[2019·江苏高考题]下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是( )A．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧C．接种后的培养皿要倒置，以防培养污染D．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基解析：接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理，接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用高压蒸汽灭菌法处理，A项错误；为了防止杂菌污染，每次接种前后，接种环都要进行灼烧灭菌，B项正确；接种后，培养皿需要倒置，以防皿盖上水珠落入培养基造成污染，C项正确；分离菌种可以用平板划线法和稀释涂布平板法，后者还可以用于微生物的计数，所用培养基为固体培养基，D项正确。
《专题2 课题1 微生物的实验室培养》作业设计方案-高中生物人教版选修1
《微生物的实验室培养》作业设计方案（第一课时）一、作业目标通过本次作业，学生应掌握微生物实验室的基本操作规范，熟悉微生物的培养过程，理解实验室安全与卫生的重要性，并能独立完成简单的微生物培养实验。
二、作业内容1. 实验准备：学生需根据课程内容准备实验器材和培养基，包括试管、烧杯、三角瓶、接种环、培养皿等。
同时，需根据课程要求配置适合的培养基配方。
2. 实验室规则学习：学生需了解并遵守实验室的各项规则，如实验前后的卫生清洁、实验器材的正确使用和存放、个人防护措施等。
3. 微生物分离与培养：学生需根据课程内容，利用准备好的接种环，从普通环境中（如土壤、水）或临床样本中分离特定微生物，并在实验室条件下进行培养。
4. 观察与记录：学生需观察并记录微生物的生长过程，分析其形态、颜色、大小等特征，记录结果应详细且具有逻辑性。
5. 总结与反思：学生需总结实验过程中遇到的问题及解决方法，并对自己的表现进行反思，如操作规范性、时间管理等。
三、作业要求1. 学生需独立完成实验，不得抄袭。
2. 实验过程中需遵守实验室规则，注意个人安全与卫生。
3. 实验报告应详尽，包括实验准备、操作过程、观察结果及总结反思等。
4. 实验器材需妥善处理，实验后的卫生需由学生自行负责。
四、作业评价1. 实验报告评价：根据实验报告的详尽程度、分析的准确性和逻辑性以及总结的全面性，给予学生相应的成绩。
2. 操作规范性评价：观察学生在实验过程中的操作是否规范，如接种环的使用、培养基的配置及存放等，给予相应的成绩。
3. 观察结果评价：根据学生的观察记录，评价其对微生物特征的描述是否准确，是否能够正确识别不同类型的微生物。
4. 反思与改进建议：根据学生的总结反思，给予针对性的建议，帮助学生提高实验技能和操作水平。
五、作业反馈1. 学生应积极提交作业，并在遇到问题时及时与教师沟通。
2. 教师应对学生的作业进行及时批改和反馈，针对学生的问题和不足，给予针对性的指导和建议。
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专题二课题1一、选择题1．菌种鉴定的重要依据是(B)A．细菌的大小、形状和颜色B．菌落的大小、形状、颜色C．有无鞭毛D．培养基的不同[解析]不同种类的细菌所形成的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定特征，所以，每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。
单个的细菌用肉眼是看不见的，故细菌的个体特征不能作菌种鉴定的依据。
2．下列生物与灭菌无关的是(C)A．接种前用火焰灼烧接种环B．接种前用酒精擦拭双手C．将平板倒置，放入培养箱中培养D．接种在酒精灯的火焰旁完成[解析]接种用具、器皿、空气中都充满了微生物，都有污染的可能，必须严格地消毒灭菌。
A、B、D都是实验操作过程中灭菌或防止杂菌污染的措施。
将平板倒置，放入培养箱中培养与灭菌无关。
3．下列关于平菇培养的操作程序，正确的是(D)A．配制牛肉膏蛋白胨培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养B．配制牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养C．配制棉子壳培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养D．配制棉子壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养[解析]平菇的代谢类型属于异养型，需要提供现成的有机物才能成长。
在题目给出的选项中，B选项是实验中培养细菌等的方法，D选项则是人们常用的培养平菇的方法，为了避免杂菌污染，应在接种前先进行灭菌处理。
4．下图是微生物平板划线示意图。
划线的顺序为1,2,3,4,5。
下列操作方法正确的是(D)A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B．划线操作必须在火焰上进行C．最可能得到所需菌落的区域是1D．在1,2,3,4,5区域中划线前后都要对接种环灭菌[解析]操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌；划线操作必须在火焰旁进行，而不是火焰上；最可能得到所需菌落的区域是5。
5．制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，关于倒平板的具体描述正确的是(C)①待培养基冷却至40℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰④用左手的拇指和食指完全打开皿盖⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖⑥等待平板冷却5～10s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上A．①③④⑤B．④⑤⑥C．③⑤D．①②④⑥[解析]琼脂是一种多糖，在98℃以上可溶解于水，在45℃以下凝固，倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不能及时操作，琼脂会凝固。
无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基。
6．(2017·西宁四中高二月考)下列有关细菌培养的叙述，正确的是(D)A．在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌B．在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长C．向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长D．在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动[解析]菌落是指单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，形成的一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，所以单个菌落中通常只有一种细菌，A错误；青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成，所以青霉素培养基抑制细菌生长而促进真菌生长，B错误；破伤风杆菌的代谢类型属于异养厌氧型，向其培养基中通入氧气会抑制其生长，C错误；在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动，D正确。
7．平板冷凝后要将平板倒置，其意义是(D)A．利于大肠杆菌的接种B．防止杂菌污染C．利于培养基的冷却D．防止皿盖冷却水倒流入培养基[解析]平板倒置可避免凝集在皿盖上的水流入培养基。
8．下表是关于四种生物能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述。
描述正确的一组生物是(D)AC．根瘤菌与衣藻D．硝化细菌与衣藻9．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶采用的灭菌、消毒方法依次是(A)①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥B．①②③④⑤⑥C．⑥②③④①⑤D．③④②①⑥⑤10．外科手术器械和罐头食品的消毒，都要以能够杀死什么为标准(D)A．球菌B．杆菌C．螺旋菌D．芽孢[解析]消毒一般以杀死芽孢、孢子为标准。
11．高温灭菌的原理是(C)A．每种微生物生长的最适温度是一定的B．微生物对高温环境不适应C．高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动D．高温降低了环境中氧的浓度[解析]相对于动植物来说，微生物的耐高温能力是很强的。
灭菌即杀死各种微生物及其他生命形态(如芽孢)，所以要采用更高温以破坏微生物体内蛋白质、核酸的分子活性，以使其永远丧失生活能力。
12．(2018·康杰中学高二期中)分离纯化大肠杆菌最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。
下列有关这两种方法的叙述正确的是(D)A．两种方法都可以用来计数活菌B．单菌落均是由一个细菌繁殖而来的C．都需要使用接种环进行接种D．两种方法的目的都是得到单菌落[解析]平板划线法只能用来分离大肠杆菌，不能用来计数，A项错误；单菌落可能是由一个或几个聚在一起的细菌繁殖而来的，B项错误；稀释涂布平板法需要使用涂布器，C 项错误；两种方法的目的都是得到单菌落，前者用于分离，后者可用于分离、计数，D项正确。
二、非选择题13．(2017·江苏盐城中学高二期末)烧伤病人容易感染绿脓杆菌，引起化脓性感染，比阿培南、美罗培南、头孢菌素和碳青霉烯类抗生素都是非常经典的抗绿脓杆菌的药物。
临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。
实验时，从病人身上获取少量样本，按照一定的实验步骤操作，以确定该病人体内的绿脓杆菌对不同抗生素的敏感性。
(1)获取绿脓杆菌单菌落：配制适于绿脓杆菌生长的培养基，培养基中的营养成分一般含有__碳源__、氮源、生长因子、水和无机盐，调节pH至7，灭菌处理，待培养基冷却至50℃时，在__酒精灯火焰__附近倒平板。
经过选择培养、鉴别等步骤获得单菌落。
(2)检测绿脓杆菌对不同抗生素的敏感性：取该单菌落适当稀释，用__涂布平板法__法接种于固体培养基表面，使其均匀生长，布满平板。
将分别含等剂量的比阿培南、美罗培南、头孢菌素和碳青霉烯类抗生素的相同大小的小滤纸圆片均匀置于该平板上的不同位置，适宜条件培养一段时间，结果是含不同抗生素的滤纸片周围均出现透明圈，这说明绿脓杆菌对上述抗生素__敏感__；含头孢菌素的滤纸片周围的透明圈比含美罗培南的小，这说明绿脓杆菌对头孢菌素的敏感性比美罗培南__弱__(填“强”或“弱”)；含比阿培南、碳青霉烯类的滤纸片周围的透明圈也比含美罗培南的小，且比阿培南透明圈中出现了一个菌落，请推测此菌落产生的可能原因：一是__杂菌污染__，二是__抗比阿培南的绿脓杆菌(或绿脓杆菌产生耐药性突变)形成的菌落__。
(3)根据上述实验结果，为达到抗绿脓杆菌的目的，对于该患者来说最好应选用抗生素__美罗培南__。
[解析](1)获取绿脓杆菌单菌落过程中，配制菌落生长需要的培养基，在培养基中一般含有碳源、氮源等营养成分物质，调节好pH后进行灭菌，灭菌完成后，冷却到适应温度，在酒精灯火焰边倒平板；在平板上进行接种，选择、鉴别等步骤最后获得单菌落；(2)检测菌体对不同抗生素的敏感性：取该单菌落适当稀释，用涂布平板法法接种于固体培养基表面，使其均匀生长，布满平板。
将分别含等剂量的比阿培南、美罗培南、头孢菌素和碳青霉烯类抗生素的相同大小的小滤纸圆片均匀置于该平板上的不同位置，适宜条件培养一段时间，结果是含不同抗生素的滤纸片周围均出现透明圈，这说明绿脓杆菌对上述抗生素都敏感；含头孢菌素的滤纸片周围的透明圈比含美罗培南的小，这说明绿脓杆菌对头孢菌素的敏感性比美罗培南弱；含比阿培南、碳青霉烯类的滤纸片周围的透明圈也比含美罗培南的小，这说明该杆菌对美罗培南最为敏感，比阿培南透明圈中出现了一个菌落，此菌落的产生可能是杂菌污染，也可能是形成了耐药性的突变菌；(3)根据上述实验结果，为达到抗绿脓杆菌的目的，而它对美罗培南最为敏感，那么对于该患者来说最好应选用抗生素是美罗培南。
14．某航空公司宣布，启用以生物柴油(俗称“地沟油”)为燃料的客机执行飞行任务，以减少碳排放。
科学家发现，在微生物M(单细胞)产生的脂肪酶作用下，从地沟油中提取的植物油与甲醇反应能够合成生物柴油。
(1)用培养基培养微生物时，培养基中应有__碳源__、__氮源__、__水__和__无机盐__等营养，同时还必须满足微生物生长对__特殊营养物质__、__pH__、__氧气__的要求。
在筛选产脂肪酶的微生物M时，应用__选择__培养基，可以在培养基中添加__植物油__作为唯一碳源。
(2)培养基灭菌采用的最适方法是__高压蒸汽灭菌__法。
(3)图示是采用纯化微生物M培养的两种接种方法接种后培养的效果图，过程一的接种方法是__平板划线法__，过程二的接种方法是__稀释涂布平板法__，此方法计数的微生物M 的数目__<__(选填“>”“＝”“<”)实际活菌数，接种后应注意培养皿要__倒置__放置。
15．请回答与大肠杆菌纯化培养有关的问题：(1)制备培养基。
配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须调节__pH__，培养基在接种前要进行__高压蒸汽__灭菌。
(2)纯化大肠杆菌。
①通过连续划线操作，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面，在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这种方法称为__平板划线法__。
②用该方法统计样本菌落数时__需要__(填“需要”或“不需要”)设置对照组。
为什么？__需要判断培养基是否被污染__。
(3)讨论分析。
①纯化大肠杆菌时，__不可__(填“可”或“不可”)用加入抗生素的方法防止杂菌感染。
②用该方法分离大肠杆菌时，从第二次划线操作起，每次总是要从上一次划线的末端开始划线，其原因是__线条末端的细菌数量少，最终可得到由单个细菌繁殖而形成的菌落__。
③大肠杆菌与酵母菌的最本质区别是__大肠杆菌无成形的细胞核(酵母菌有成形的细胞核)__。