恭城月柿果胶粗酶的酶学特性初探

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高中生物选修一专题四-酶的研究和应用-知识点

中学生物选修一4.1果胶酶在果汁生产中的作用 1.2.3.实力。

酶活性的凹凸可以用在肯定条件示。

45.在〔探究温度对酶活性的影响〕的试应确保各试验组相同的变量（无量和浓度、混合物的6.在〔探究PH 对酶活性的影响〕的试验加热。

反应液中的pH 可以通过体积分数为0.1%整。

互比照。

7.在〔探究果胶酶的用量〕的试验中，8.应了果胶酶的催化分解果胶的实力。

在不同的温度和pH4.2 探讨加酶洗衣粉的洗涤效果 1.2.繁殖造成水体污染。

加酶洗衣粉可以降环境的污染。

3.氨基酸或小分子的肽，使污迹简单从衣物上脱落，4.因素。

5.和加酶洗衣粉对衣物污渍的洗涤效果有何不同时，6.〔不同种类的酶洗衣粉对同一污渍的洗涤效果〕的试验原理是：不同种类的同。

8.比较一般洗衣粉和加酶洗衣粉去污原理的异同4.3 酵母细胞的固定化1.42%的糖浆，2.到破坏而失活。

3.4.反应柱能连续运用半年，降低了生产成本，提高了果糖的产量和质量。

5.固定化酶只能固定一种酶，而化学反6.采纳包埋法固定化，7.包埋法固定化细胞即将微生物细胞匀7.8.0.05mol/L的Cacl 2钠溶液与酵母细胞混合、固定化酵母细胞五个步骤。

10.10.的制备的是胜利的。

11.假如制作的凝胶珠颜色过浅、呈白12.。

果胶酯酶

其中PMEⅠ和 PMEⅡ是同工酶,分子量约为 36200 ,最适pH为716 ,而HMW- PE(高分子量的PE)的分子量约为54000 ,最适pH为810。在30 ℃时,PEⅠ和 PEⅡ的活性均达90 %以上,而在5 ℃时,其活性只有 30 ℃的 1 %,然而 HMW- PE在5 ℃时仍有活性。Moustacas A.M等从大豆细胞壁中分离纯化出了果胶酯酶,是一个相对分子量接近33000 的蛋白, 其最大活性在pH8.0 附近。A. Giovane 等研究了Actinidia chinensis 水果中的果胶酯酶,通过肝磷脂 - 琼脂糖色谱法分离得到两种形式的果胶酯酶PME1 和 PME2 ,
结束，谢谢！！结束，谢谢！！
时,20min内活力下降了60 %;酶活力因向日葵的成熟度不同而不同。A. F. Afifi 等用固体培养基培养研究了Curvularia inaequalis (Shear)Boedijn NRRL 13884中的果胶酯酶, 通过运用 Sephadex G- 100 和 DEAE Cellulose columnchromatography方法纯化 columnchromatography 分离出该酶,它约有40 个折叠,最适活性条件是pH4.4 ,温度为45 ℃。在 Co 、Mg 、 Na 存在下,该酶有强活性,然而在 Cu ,K ,Mn 和 Zn 存在下,活性较低。另外,Ag 、Ca 和 Hg 抑制了该酶的活性。
2.2果胶酯酶分子生物学研究
对果胶酯酶结构和基因方面的研究,目前研究的最多的是蕃茄和柑橘中的果胶酯酶。但也有不少学者将果胶酯酶从草莓、烟草以及一些真菌中得到克降与表达。如 Markovic·K等通过研究认为番茄中的果胶酯酶含有两个链内二硫键,它本身就是活性酶的内部结构组成部分, 并不是酶通过分离后氧化而产生的。

柑橘果实的酶活性与酶学特性

柑橘果实的酶活性与酶学特性柑橘是一种常见且受欢迎的水果，其酶活性和酶学特性对于柑橘果实的成熟度和质量具有重要影响。

本文将探讨柑橘果实中常见的酶类型，它们的酶活性变化以及对果实成熟度的影响。

柑橘果实中存在多种酶，包括淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、过氧化物酶和多酚氧化酶等。

这些酶在柑橘果实的生理和化学变化过程中发挥着重要作用。

首先，淀粉酶是柑橘果实中的主要酶之一。

淀粉酶能够将淀粉分解为可溶性糖类，为果实提供能量和味道。

研究发现，柑橘果实的淀粉酶活性在成熟过程中呈现先升高后降低的趋势。

刚摘下的柑橘果实中的淀粉酶活性较低，随着果实成熟度的增加，淀粉酶活性逐渐提高，直到果实完全成熟时达到最高峰。

因此，淀粉酶的活性变化可以作为评估柑橘果实成熟度的指标之一。

除了淀粉酶，蛋白酶也在柑橘果实的成熟过程中起到重要作用。

蛋白酶能够降解蛋白质，促进果实软化和降解不需要的蛋白质组分。

研究表明，随着柑橘果实成熟的增加，蛋白酶活性逐渐提高，从而促进果实软化。

这对于柑橘果实的风味和食用质量具有重要影响。

纤维素酶是一类在果实成熟过程中主要起到降解细胞壁纤维素的酶。

纤维素是构成果肉结构的主要成分之一，纤维素酶能够分解纤维素，导致果实软化和糖类的释放。

研究发现，柑橘果实中的纤维素酶活性在成熟过程中逐渐增加，与果实软化和糖类含量的增加相一致。

因此，纤维素酶的活性变化可以作为评估柑橘果实软化程度的指标之一。

过氧化物酶是柑橘果实中的一类抗氧化酶。

过氧化物酶能够降解果实中的过氧化物，减少氧化损伤，并保护果实免受外界环境的伤害。

研究表明，柑橘果实成熟过程中过氧化物酶活性呈现先升高后降低的趋势。

这与果实在自然成熟过程中逐渐降解过氧化物的需要相吻合。

最后，多酚氧化酶是柑橘果实中的另一类酶。

多酚氧化酶能够降解果实中的多酚化合物，尤其是花青素，进而改变果实的颜色。

研究发现，柑橘果实的多酚氧化酶活性在成熟过程中逐渐降低。

这与果实在成熟过程中花青素含量减少和果皮颜色变浅的观察一致。

食品中果胶酯酶的提取与特性研究

食品中果胶酯酶的提取与特性研究近年来，随着人们对健康食品的追求，食品中有机成分的研究变得越来越重要。

其中，果胶酯酶作为一种常见的酶类成分，在食品加工和消化吸收中扮演着重要角色。

本文将探讨食品中果胶酯酶的提取与特性研究的重要性以及研究方法和应用前景。

首先，在食品中果胶酯酶的提取研究中，研究人员常常采用酶解法。

该方法利用果胶酯酶的特性，在适宜的酶解条件下可以将果胶酯酶从食品中提取出来。

例如，一些研究表明，在酸性条件和适宜的温度下，某些水果中的果胶酯酶可以被高效地提取出来。

但在实际操作中，提取果胶酯酶的条件需要根据食品的不同特性进行调整，这是一个具有挑战性的工作。

其次，关于果胶酯酶的特性研究，研究人员发现果胶酯酶不仅包含在食品中，也存在于生物体内。

果胶酯酶是一种能够将果胶分解为果胶酯和果胶酸的酶，其具有增加食品口感、调节食品黏性、促进果胶的消化吸收等作用。

此外，果胶酯酶还被发现具有抗氧化、抗炎和抗菌等多种生物活性，这些特性为果胶酯酶的应用提供了广阔的发展前景。

值得注意的是，果胶酯酶的提取和特性研究对于食品加工和食品安全具有重要意义。

在传统食品加工过程中，果胶酯酶的提取和应用能够改善食品质地，增加口感和营养价值。

此外，果胶酯酶的应用还可以帮助消费者更好地消化和吸收果胶，提高食品的消化率。

这些都是当今食品行业所关注的问题，同时也是未来食品研究的重要方向。

在果胶酯酶的应用前景方面，尽管目前果胶酯酶的研究还处于初级阶段，但其潜力和前景是不可忽视的。

例如，果胶酯酶的应用可能有助于开发出更多的功能性食品，并且能够为制作低脂、低糖或高纤维的食品提供新的解决方案。

此外，果胶酯酶的生物活性还可以在医药和保健品领域得到应用。

总的来说，食品中果胶酯酶的提取与特性研究对于提高食品质量和满足人们对健康食品的需求具有重要作用。

综上所述，食品中果胶酯酶的提取与特性研究是一个具有挑战和潜力的研究领域。

通过酶解法的提取研究以及对果胶酯酶特性的深入研究，可以进一步了解果胶酯酶的作用机制和应用前景。

酶制剂在广式月饼皮中的应用研究

酶制剂在广式月饼皮中的应用研究广式月饼是中国传统的重要食品之一，其制作方法流程复杂，需要多种原料和工序。

其中，月饼皮是月饼的重要组成部分，其质地、口感和外观直接影响月饼的品质。

为了提高月饼皮的质量和效率，近年来酶制剂在月饼皮制作中的应用愈发受到关注。

酶制剂是生物技术在食品加工中的一种应用，其通过改变化学反应条件，促进反应速率，降低能耗，提高生产效率和产品质量。

在月饼皮的制作中，酶制剂可以替代传统的物理方法，如蒸、搓、擀等，充分发挥月饼原料的特性，降低人工成本，提高产品质量和稳定性。

下面将从酶制剂的种类、作用机理和应用实践等方面详细介绍其在广式月饼皮中的应用研究。

一、酶制剂的种类在月饼皮制作中，主要使用的酶制剂有面筋酶、淀粉酶和蛋白酶等。

这些酶制剂可以分别作用于面筋、淀粉和蛋白质等不同成分，改变其分子结构和性质，从而达到改善月饼皮质量的目的。

1、面筋酶面筋酶是由细菌或真菌发酵产生的淀粉酶，其主要作用是将面筋中的蛋白质水解成小分子肽和氨基酸，改变筋度和黏性，使得面团更易于加工和成形。

此外，面筋酶还可以分解面团中的淀粉，释放出糖分，增加面团中活性糖含量，使得月饼皮更酥脆。

2、淀粉酶3、蛋白酶蛋白酶是由细菌、酵母菌或动物酶中提取出来的酶制剂。

其主要作用是分解面团中的蛋白质，将长链蛋白质水解为短链肽和氨基酸，加速面团的发酵和软化。

此外，蛋白酶还可以增加面团中的氨基酸含量，提高其营养价值和美味度。

二、酶制剂的作用机理酶制剂在月饼皮制作中的作用机理是通过催化化学反应，降低反应能量，加速反应速率，改变反应平衡，达到改进月饼皮品质、提高生产效率和降低成本的目的。

1、水解作用面筋酶、淀粉酶和蛋白酶通过水解作用，将高分子化合物分解为低分子化合物。

其中，面筋酶可将面筋中的高分子蛋白质水解为肽和氨基酸，降低面筋的聚集度和筋度，使得面团更易加工和成形。

淀粉酶可将淀粉分子水解为糖分子，促进面团的发酵、酵母生长和馅料的膨胀。

蛋白酶可分解面团中的蛋白质成分，提高其延展性和柔软度，使得月饼皮更加酥软。

果胶酶的固定化及其活力测定

正文果胶酶的固定化及其活力测定一、目的：果胶酶（EC.3.2.1.15）广泛存在于植物界，参与果实的成熟及其它代谢过程。

在果品加工业中，果胶酶主要用于果汁的澄清和提高榨汁率。

果胶酶的固定化将有助于提高酶的利用率，同时还可减少外源物质对果制品的污染。

果胶酶需求量大，且多为一次性使用，既造成了很大的浪费，又大大提高了产品生产成本。

固定化果胶酶可以重复多次使用，能够减少果胶酶的使用量，节约生产成本。

通过本实验，了解载体的制备方法，掌握酶的固定化原理及方法。

二、原理：本实验固定化方法为共价结合法。

以壳聚糖为载体，通过戊二醛共价交联固定化果胶酶。

壳聚糖是从蟹、虾外壳中提取的一种氨基多糖（α-氨基-1.4-β-葡萄糖多聚物），对人和动物无毒副作用，是一种具有网状结构，机械性能好，化学性质稳定，耐热性好的酶固定化载体材料，特别是壳聚糖分子中含有游离的氨基，通过化学交联剂（如戊二醛）很容易与酶发生间接共价结合，使酶牢固地固定在壳聚糖分子上。

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,可用DNS法定量：3,5-二硝基水杨酸与醛糖共热能产生棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和含有呈色氨基化合物的反应液颜色深浅成正比，在540nm下测其吸光度，从而可计算出果胶酶活力。

三、试剂及仪器仪器：冷冻离心机分光光光度计比色皿（8只）摇床水浴箱混合振荡器天平瓷盘药匙剪刀(1把) 记号笔（1支）通风橱吸水纸具塞刻度试管（4支）三角瓶（2支）烧杯（100ml×3个）试管架（1个）试管（6支）量筒（100ml×1个）滴管（16个）离心管(5ml×2个,50ml×1个)移液管架(1个) 移液管(2ml×3个,5ml×1个) 注射器（1支）滴管(1个)吸耳球（1个）洗瓶（1个）玻棒（1个）烧杯(300 ml×5个)试剂：乙酸－乙酸钠缓冲液（0.2mol/L,pH5.0）磷酸缓冲液(0.1mol/L,pH7.0) 3,5－二硝基水杨酸氢氧化钠冰醋酸丙三醇戊二醛无水乙醇浓盐酸果胶酶果胶半乳糖醛酸壳聚糖蒸馏水若干桶四、方法步骤1 载体的制备1.1取壳聚糖4g加入180ml的3%的乙酸中，加20ml甘油搅拌溶解，制得壳聚糖溶液。

食品酶学实验指导书

食品酶学实验指导书陆剑锋、陈寒青2011年05月实验一果胶酶的特性及其应用一、实验目的1. 掌握果胶酶活性的检测方法；2. 了解与掌握果胶酶的特性；3. 了解果胶酶在果汁澄清中的作用；二、实验原理果胶质是指植物中呈胶状的聚合碳水化合物，是植物细胞间层和细胞壁的重要组分。

果胶质由三种化学成分：α-l，4-聚-D-半乳糖醛酸、阿拉伯聚糖和β-1，4-D-半乳聚糖。

果胶质按其分子中D-半乳糖醛酸上羧基酯化程度不同，可分为原果胶、果胶酸和果胶酯酸。

果胶是多缩半乳糖醛酸甲酯，为白色或黄褐色的粉末，溶于20倍的水则成粘稠状液体，与三倍或三倍以上的砂糖混合，更易溶于水，对酸性溶液较对碱性溶液稳定，不溶于乙醇及其它有机溶剂。

果胶酶(EC.3.2.1.15)是分解植物主要成分果胶质的酶类，与纤维酶相似，是一群酶，至少有8种酶分别作用于果胶分子的不同位点，基本上分为解聚酶和果胶酯酶两大类。

前者能催化果胶解聚，后者能催化果胶分子中的酯水解。

果胶水解酶澄清果汁分两步完成。

首先由果胶酯酶切断果胶的甲酯基，生成果胶酸和甲醇，紧接着液化型的果胶酸酶使果胶质低分子化，生成带羧基的产物。

多数羧基会与金属离子或其他成分结合而凝聚。

这是可能发生二次沉淀的原因。

果胶酶广泛地分布于高等植物(胡萝卜、番茄、草莓、香蕉、桔子等)和微生物中。

果胶裂解酶的生产局限于霉菌。

其高产菌株多为曲霉和青霉属。

解聚酶来自于霉菌、细菌等微生物和胡萝卜等植物中。

果胶酯酶除在水果和蔬菜中存在外，在细菌相霉菌亦有发现。

能引起橙、梨、苹果和香蕉腐败的微生物基本上都能产果胶酶，因为这些水果中果胶含量高。

有利于分解果胶的微生物的生长和发育。

虽然有不少微生物都能产果胶酶，但在工业生产中常采用真菌，例如产酶活力高的曲霉、青霉、核盘霉等。

果胶酶主要应用于食品工业，特别是水果加工。

由于果汁粘度高，致使过滤困难和产率低。

果实经破碎后榨汁，果胶溶出在果汁内，造成果汁浑浊，在储存中又会发生沉淀。

果胶裂解酶产生真菌的选育及酶学性质研究

ｉｎｄｕｓｔｙ，ｒｅｔｃ，ｗｈｉｃｈｉｓｍａｉｎｌｙｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｐｅｃｔｉｎｌｙａｓｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｓｔｒａｉｎ，ｂｕｔｔｈｅｓｔｒａｉｎｓｔｈａｔｈａｓｂｅｅｎｄｅｖｅｌｏｐｅｄｔｏｂｅｕｓｅｄｆｏｒｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｓｔｒａｉｎｒｅｓｏｕｒｃｅｓｉｓｌｉｍｉｔｅｄ．ＴｈｉｓｓｔｕｄｙａｄｏｐｔｅｄｔｈｅＣｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｔｏｓｃｒｅｅｎｏｕｔｐｅｃｔｉｎｌｙａｓｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｓｔｒａｉｎｆｒｏｍＹａ ’ ａｎｏｒｃｈａｒｄｓｏｉｌｔｈａｔｗａｓｒｉｃｈｉｎｐｅｃｔｉｎ．Ｉｔａｉｍｅｄｔｏｄｅｖｅｌｏｐｎｅｗｓｒａｔｉｎｓｒｅｓｏｕｒｃｅｓｏｒｆｐｅｃｔｉｎｌｙａｓｅｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｓｔｕｄｙｉｆｎａｌｌｙｇｏｔａｕｎｆｇｉｓｔｒａｉｎｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｐｒｏｄｕｃｅｐｅｃｔｉｎｌｙａｓｅ，ｗｈｏｓｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎｉｓ

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广西热带农业
2007 年第 1 期 (总第 108 期)
恭城月柿果胶粗酶的酶学特性初探
周文红 1 秦小明Байду номын сангаас2 覃玉 1 宁恩创 1
( 1 广西大学轻工与食品工程学院 , 南宁 530004 ; 2 广东海洋大学食品科技学院 , 湛江 524088)
摘要 : 对恭城月柿中的果胶酶进行了提取和初步分离纯化 , 并对其酶学性质进行了初步的探讨。结果表明 :月柿果胶酶在高酸、中性和碱性条件下不稳定 ,在 p H 值为 4. 0～5. 0 时较稳定 ,酶反应的最适 p H 值为 4. 5 ; 在低于温度 40 ℃时酶较稳定 , 温度 70 ℃酶活性基本全部丧失 , 酶反应的最适温度为 45 ℃; Mg2 + 、Al 3 +和 Cu2 +对酶有激活作用 ,但 Ca2 + 、Fe3 +有明显抑制作用。
(黄良飞莫婉霞广西恭城县水果办 ,542500)
关键词 : 柿子果胶酶特性
我国柿的品种极多 , 据不完全统计 , 已达 800 个以上 , 本实验所采用的原料 ———恭城月柿是优良品种之一 ,又名水柿 ,饼柿 ,产于广西恭城、平乐、荔浦和富川一带 , 由于果无核 , 汁多味甜 , 品质上乘 , 所以最宜制成柿饼 [1 ]。柿子皮是制柿饼的副产物 , 大约占柿子重量的 10 % ,产量可观。目前还没有找到有效的利用途径 ,只是作为食品填料 ,或者当作废物 ,造成了严重的资源浪费和环境污染。而柿子果皮渣中含有果胶和果胶酶。果胶在果胶酶的作用下水解可能产生具有某些特殊功能 (如抗菌性等) 的低聚糖 , 可在工农业生产、医疗保健等领域中应用 , 这样可做到充分利用资源而不浪费。但是 , 搜索显示仍没有关于柿子本身的果胶酶对其果胶的特异水解作用的报导。与柿子中果胶酶有关的报道只限于果品贮藏过程中果胶酶的活性变化 [1 ,2 ] ,并以此作为贮藏效果好坏的评价 ,没有专门研究柿子果胶酶的性质、功能及应用的报道。本文对广西恭城月柿的果胶酶特性进行了研究 , 以期为柿皮的综合利用提供确切的依据。
1 材料与方法
1. 1 材料与设备广西恭城月柿 ;果胶粉 ( Sigma 公司产品) ;其它化
学试剂均为国产分析纯 (A. R. ) 。组织捣碎机 ; 台式高速离心机 ; 冰箱 ; 721 分光光
度计等。
1. 2 方法
1. 2. 1 果胶酶制剂的制备 [3 ] 称取一定量柿子果肉 , 加入提取液 , 通过对细胞
合物 ,因此反应最快。
2. 5 热稳定性图 4 为酶在不同温度下水浴保温 1 个小时后 , 以
未经保温处理的酶液为对照所测得的残存活力。可看出当处理温度高于最适温度时 , 酶迅速失活 ; 当处理温度低于最适温度时 ,酶失活相当缓慢。
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广西热带农业
2007 年第 1 期 (总第 108 期)
[ 7] 彭志英编著 . 食品酶学导论 . 北京 : 中国轻工业出版社 ,2002. 62～93
[ 8] [ 美 ] F. B. 索尔兹伯里 , C. 罗斯著 . 植物生理学 . 北京 :科学出版社 ,1979. 169～170
“茶江牌”恭城月柿 (柿饼) 被评定为广西名牌产品
近日 , 由恭城瑶族自治县名特优果品公司申报的 “茶江牌”恭城月柿 (柿饼) 经广西名牌战略推进委员会审议确定为广西名牌产品 , 这标志着恭城水果品牌建设又向前迈出了一大步。
的破碎使酶释放到溶液中。根据酶和杂蛋白在高浓度盐溶液中的电荷性和溶解度的不同 , 可以进行分级沉淀 , 以达到酶的初步分离纯化。盐析后离心得到的沉淀用缓冲液溶解 , 装入透析袋 , 脱盐后可得到纯度较高的酶制剂。 1. 2. 2 果胶酶活力的测定方法 [4 ,5 ]
本实验以 3 , 5 —二硝基水杨酸比色法测定并比较酶活力 ,果胶质主要是由 D —半乳糖醛酸以α - 1 ,4 糖苷键连接形成的直链状聚合物。其中 , 部分 D —半乳糖醛酸上的羧基可为甲醇酯化形成甲酯。果胶酶作用α - 1 , 4 糖苷键 , 水解得到 D —半乳糖醛酸 , D —半乳糖醛酸是一种还原糖。在碱性条件下 , D —半乳糖醛酸与 3 ,5 —二硝基水杨酸共热 ,3 ,5 —二硝基水杨酸被还原为 3 —氨基 —5 —硝基水杨酸 (棕红色物质) 。在一定范围内 , 还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比。
参考文献 [ 1] 田建文 , 许明宪等 . 柿果实采收后软化生理分析
(简报) . 植物生理学通迅 ,1991 ,27(2) :109～111
[ 2] 李丽萍 , 韩涛等 . 单果真空包装对冷藏涩柿品质和有关生化变化的影响 . 农业工程学报 . 1998 , 14( 1) :233～234
[ 3] 沈全光 , 刘存德等 . 番茄果实中多聚半乳糖醛酸酶的纯化及其基本性质 . 植物学报 ,1991 ,33(3) : 243～247
企业要具备一定规模 , 并提供申报产品的注册商标、销售量、销售额、出口量、出口额、上缴税额等数据及相关证明 , 产品必须经过 2 年的质量检验合格 , 并严格按照《广西壮族自治区名牌产品和优质农产品管理办法》规定的程序 , 经市质量技术监督局初审 , 并通过现场考核答辩推荐 , 广西名牌战略推进委员会组织各专家组对申报产品进行市场评价、质量评价、效益评价和发展评价为主的综合评价 , 广西名牌战略推进委员会全体委员会议审议通过后才能确定。恭城月柿 (柿饼) 被确定为广西名牌产品 , 对恭城月柿的生产、加工、流通将起到极大的促进作用 , 今后恭城月柿将争创中国名牌产品 , 以创新提升水果质量 ,以品牌促进水果发展。
恭城瑶族自治县是广西的水果生产大县 , 2005 年水果种植面积 2. 6 万 hm 2 ,产量 46. 2 万 t ,其中恭城月柿种植 0. 67 万 hm 2 , 产量 10. 8 万 t , 月柿生产已经成为广大果农经济收入的主要来源之一。该县县委、政府在抓好 “养殖 —沼气 —种果”三位一体生态果业发展的同时 , 十分重视水果品牌建设 , 1996 年恭城被命名为“中国月柿之乡”和“中国柑之乡”;2000 年恭城月柿荣获“中华名果”称号 ; 2006 年初“恭城月柿”证明商标获国家工商总局注册。广西名牌产品是一块含金量较高的品牌 , 申报
表2
金属离子对恭城月柿果胶酶活力的影响
金属离子
0
相对活力 ( %)
100
MgCl2 110
CaCl2 30
Al Cl 3 109
CuCl 2 128
FeCl3 60
3 小结
果胶酶是分解果胶类物质的酶的总称 , 其组分十分复杂 ,来源不同 ,其种类和组分有所不同 ,酶学性质和作用方式也有所不同 [7 ,8 ]。本文主要研究了恭城月柿果胶粗酶的提取条件和酶学方面性质 , 结果表明 : 经盐析和透析后酶活提高了 5. 9 倍 ; 月柿果胶酶在高酸、中性和碱性条件下不稳定 , 在 p H 值为 4. 0～5. 0时较稳定 , 酶反应的最适 p H 值为 4. 5 ; 在温度低于 40 ℃ 时酶较稳定 ,温度 70 ℃酶活性基本全部丧失 ,酶反应的最适温度为 45 ℃; Mg2 + 、Al 3 +和 Cu2 +对酶有激活作用 ,但 Ca2 + 、Fe3 +有明显抑制作用。
2. 2 酸碱稳定性将酶液置于不同 p H 值的磷酸盐缓冲液中 , 放置
1 h 后 , 比较酶活力。结果见图 1 , 表明月柿果胶酶在 p H 值为 4. 0～5. 0 时较稳定。在 p H 值为 2. 0～4. 0 时 , 酶容易失活 ,残存的活力很低。在 p H 值为 6. 0 时 ,酶活降低。在中、碱性条件下 ,酶活力几乎全部丧失。由此说明 ,在高酸性、中性及碱性条件下 ,酶的构象很容易改变 ,使酶失去活力。所以 ,在酶液保存时 ,尽量不在高酸、偏碱的环境中保存。
具体操作 : 取所需测定的酶液与 1 %果胶溶液混合 ,在一定温度一定 p H 下反应到一定时间 ,然后加入 5 ml DNS 试剂混合。在沸水中精确保持 5 min。然后用自来水冷却。再用蒸馏水定容至 25 ml 。3000 g 离心 10 min , 取上清液 , 以经加热煮沸 10 min 的失活酶液代替原酶液作空白。在 540 nm 处测定吸光度。以 OD540nm 值为纵坐标 , 以所考察的对象为横坐标 , 绘制曲线图。从中求出考察对象的最适范围。
[ 4] 江洁 , 李彩芹等 . 果胶酶活性分光光度测定方法的研究 . 齐齐哈尔大学学报 ,1998 ,14(1) :62～66
[ 5] 鲁子贤等编著 . 蛋白质和酶学研究方法 . 北京 : 科学出版社 ,1989. 29～35
[ 6] 汪沛洪等编著 . 基础生物化学研究方法 . 西安 : 陕西科学技术出版社 ,1986. 66～68
2. 4 最适温度反应混合物维持在最适 p H 值的条件下 (p H =
4. 5) , 并固定其它反应条件 , 将反应混合物的温度从 30 ℃增加到 70 ℃,测定酶活力。结果如图 3 所示 ,当温度在 30 ～40 ℃酶活随温度升高而增大较少 , 在 40～45 ℃, 酶活随温度升高而增大显著 , 高于 45 ℃, 酶活开始下降 , 60 ℃后下降明显。从图上可看出 , 酶的最适温度为 45 ℃。酶的最适温度实质上是酶所催化的化学反应随温度升高而加速 (Q10) ,和酶蛋白质随温度升高而变性失活两方面综合作用的结果 , 当温度低于最适温度时 , 化学反应的升温加速起主导作用 , 当温度高于最适温度时 , 酶蛋白的热变性占主导作用 ,酶急剧失活 ,导致催化效果锐减。
基金项目 :教育部留学回国人员科研启动基金 (教外司留[ 2003]406 号) ;广西自然科学基金 (桂科基 0342005 - 1) 收稿日期 :2006 - 10 - 13