【CN109709179A】一种GPR120电化学受体传感器及其制备方法和应用【专利】
电化学生物传感器及其制备方法发明专利
电化学生物传感器及其制备方法技术领域本发明涉及分析领域，具体涉及一种电化学生物传感器及其制备方法。
背景技术生物传感器是利用电化学原理，把酶，抗体，抗原，微生物，核酸等生物活性物质作为敏感元件，将其浓度转化为电信号来快速，准确，方便测量生物物质含量的分析系统，其构成材料必须具有特定的性质，从而在体内发挥作用，并提供适宜的信号。
电化学生物感应器已经被广泛应用于临床诊断、食品和药品分析以及环境控制等领域。
近年来，葡萄糖传感器，尤其是可植入式葡萄糖传感器受到人们的广泛关注。
这类传感器在临床应用中具有重要意义，特别式在监测糖尿病方面有重要的应用价值。
基于过氧化氢电极的葡萄糖传感器具有很强的吸引力是因为它结构简单，适用于植入式监测。
这类传感器的基本原理是，在葡萄糖氧化酶的参与下，氧气将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢，然后通过过氧化氢和电极发生电化学反应产生的信号强度来计算葡萄糖的含量。
葡萄糖氧化酶或者乳酸氧化酶的电极扎入人体后，酶会脱落，使信号降低，因此人体需要频繁更换电极，造成痛苦。
过去十几年中，人们尝试各种方法来解决酶的固定化的问题。
但是目前固定的方法很复杂，并且固化效果不好。
发明内容基于此，本发明的目的是提供一种在体内监测长时间不脱落不降解，可以长时间保持电流稳定的电化学生物传感器。
具体技术方案如下：一种电化学生物传感器，包括工作电极，在所述工作电极上依次形成有酶层、载体层和交联层；所述酶层包括葡萄糖氧化酶或乳酸氧化酶；所述载体层由包括壳聚糖、二氧化硅、琼脂糖、和海藻酸或其盐中至少一种的原料制备而成；所述交联层由包括交联剂的原料制备而成。
在其中一些实施例中，所述壳聚糖为羧甲基壳聚糖。
在其中一些实施例中，所述海藻酸或其盐为海藻酸钠。
在其中一些实施例中，所述载体层由包括海藻酸钠的原料制备而成。
在其中一些实施例中，制备所述载体层的原料还包括羧甲基壳聚糖、二氧化硅和琼脂糖中的至少一种。
在其中一些实施例中，制备所述载体层的原料还包括羧甲基壳聚糖、二氧化硅和琼脂糖中的至少二种。
一种柔性自愈合导电水凝胶传感器及其制备方法[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911054577.X(22)申请日 2019.10.31(71)申请人 东华大学地址 201620 上海市松江区松江新城人民北路2999号(72)发明人 徐红 铁建飞 毛志平 隋晓锋 冯雪凌 王碧佳 张琳萍 钟毅 (74)专利代理机构 上海泰能知识产权代理事务所 31233代理人 黄志达(51)Int.Cl.C08J 3/075(2006.01)C08L 29/04(2006.01)C08L 33/26(2006.01)C08K 3/16(2006.01)C08F 220/56(2006.01)C08F 222/38(2006.01)G01L 1/18(2006.01)G01L 9/06(2006.01)(54)发明名称一种柔性自愈合导电水凝胶传感器及其制备方法(57)摘要本发明涉及一种柔性自愈合导电水凝胶传感器及其制备方法，所述由丙烯酰胺溶液与乙酰乙酸化聚乙烯醇溶液共混，引发聚合得到柔性前驱体水凝胶，之后通过浸泡三氯化铁溶液，制得。
本发明水凝胶具有优异的传感性能，可成功用于监测人体运动或生理信号，同时，该水凝胶器件具有良好的耐疲劳性与自愈性，因此可满足传感器件对使用寿命，信号稳定的要求。
权利要求书1页 说明书4页 附图4页CN 110698693 A 2020.01.17C N 110698693A1.一种自愈合导电水凝胶，其特征在于，所述水凝胶由包括聚丙烯酰胺、乙酰乙酸化聚乙烯醇构建的前驱体水凝胶与铁离子螯合获得。
2.根据权利要求1所述水凝胶，其特征在于，所述水凝胶前驱体由包括下列组分的体系聚合获得：丙烯酰胺类单体、交联剂、乙酰乙酸化聚乙烯醇、引发剂。
3.根据权利要求2所述水凝胶，其特征在于，所述丙烯酰胺类单体为丙烯酰胺单体，或者为水溶性丙烯酰胺单体同系物中的至少一种；所述乙酰乙酸化聚乙烯醇分子量为50000g/mol -100000g/mol，取代度为10-25％。
【CN109991298A】一种PtMOFGO标记的电化学传感器的制备方法及应用【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910361906.9(22)申请日 2019.04.30(71)申请人 山东理工大学地址 255086 山东省淄博市高新技术开发区高创园A座313室(72)发明人 李月云 吴张磊 张栓 贾翌雷 张春燕 禹晓东 刘尚华 (51)Int.Cl.G01N 27/327(2006.01)G01N 33/574(2006.01)(54)发明名称一种Pt@MOF-GO标记的电化学传感器的制备方法及应用(57)摘要本发明涉及一种Pt@MOF -GO标记的电化学传感器的制备方法及应用，属于免疫分析和生物传感技术领域。
本发明使用Au NPs作为基底材料，同时利用MOF -GO复合材料负载Pt纳米粒子与检测抗体孵化作为信号标记以增强电化学传感器的催化性能，成功制备了Pt@MOF -GO标记的电化学传感器，实现了对肿瘤标志物AFP、PSA的定量灵敏检测，具备检测限低，灵敏度高，重复性、选择性和稳定性好等优势，具有重要的科学意义和应用价值。
权利要求书2页 说明书7页CN 109991298 A 2019.07.09C N 109991298A1.一种Pt@MOF -GO标记的电化学传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）将直径4 mm的玻碳电极用Al 2O 3抛光粉打磨成镜面，超纯水清洗干净；（2）将6 µL、1 ~ 3 mg/mL的Au NPs溶液滴涂于上述电极表面，室温下晾干，超纯水洗电极表面，晾干；（3）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab 1滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 ℃冰箱干燥；（4）继续将3 µL、0.5 ~ 1.5 mg/mL、质量分数为1 %的牛血清蛋白溶液滴加到电极表面，用以封装电极表面的非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，除去未结合的BSA，4 ℃冰箱晾干；（5）继续滴加6 µL、10 fg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱晾干；（6）继续滴加6 µL、1.5 ~ 3.5 mg/mL的检测抗体孵化物Pt@MOF -GO -Ab 2溶液于电极表面，置于4 ℃冰箱中孵化40 min，超纯水冲洗、晾干，制得一种Pt@MOF -GO标记的电化学传感器。
【CN109916978A】一种用于检测双酚A的电化学传感器、制备方法及其应用【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910161979.3(22)申请日 2019.03.05(71)申请人 大连理工大学地址 124221 辽宁省盘锦市辽东湾新区大工路2号(72)发明人 王雪 石亚茹 武敏 李梦佳 (74)专利代理机构 大连理工大学专利中心21200代理人 李晓亮 潘迅(51)Int.Cl.G01N 27/30(2006.01)G01N 27/48(2006.01)(54)发明名称一种用于检测双酚A的电化学传感器、制备方法及其应用(57)摘要一种用于检测双酚A的电化学传感器、制备方法及其应用，属于电化学分析技术领域。
电化学传感器包括工作电极、参比电极、对电极和支持电解质溶液，其中，工作电极为在玻碳电极表面修饰铈基金属有机骨架材料(Ce -MOF)/电化学氧化石墨烯(ERGO)复合材料制得，支持电解质溶液含有十六烷基三甲基溴化铵，参比电极为Ag/AgCl电极，对电极为铂丝电极。
利用电化学还原的方法在玻碳电极表面修饰铈基金属有机骨架/电还原氧化石墨烯复合材料，制备电化学传感器，所述电化学传感器可用于检测双酚A，具有灵敏度高、选择性好、检测限低、响应快速等优点。
权利要求书1页 说明书6页 附图3页CN 109916978 A 2019.06.21C N 109916978A权 利 要 求 书1/1页CN 109916978 A1.一种用于检测双酚A的电化学传感器，其特征在于，所述的电化学传感器包括工作电极、参比电极、对电极和支持电解质溶液；所述的工作电极为玻碳电极，其表面修饰铈基金属有机骨架Ce-MOF)/电还原氧化石墨烯ERGO复合材料；所述的参比电极为Ag/AgCl电极；所述的对电极为铂丝电极；所述的电解质溶液为磷酸二氢钾和磷酸氢二钾的混合水溶液，且混合水溶液中含有0.05～0.2mmol L-1十六烷基三甲基溴化铵CTAB。
关于GPR120的脂肪酸类电化学受体传感器的研究
关于GPR120的脂肪酸类电化学受体传感器的研究肥胖已经成为一种现代流行性疾病,严重危害人类健康,影响生命质量,给社会增加了巨大的医疗负担。
作为一种营养过剩所造成的代谢类疾病,肥胖将成为21世纪全球最大的公共卫生问题。
2010年中国肥胖人口已经达到3.25亿,这个数字在未来20年还可能增加一倍,因此解决当代人的肥胖问题迫在眉睫。
脂肪酸受体目前正成为治疗代谢和炎症疾病的一个新的潜在目标。
我们需要更好地了解这一法规背后的分子机制,最终可能会导致限制食用富含脂肪和有害物质的新策略,从而正确应对肥胖。
味觉是食物对哺乳动物口腔内的化学感受系统刺激而产生的一种特殊感觉。
人的味觉除了酸、咸、苦、甜、鲜,人类还有第6味觉——脂肪味。
它们分别代表了摄入食物的卡路里含量、潜在的有毒物质、氨基酸含量、矿物质的存在、细菌性腐败等。
多样的食品成分以及灵敏的味觉感受系统成就了我们“有滋味”的世界。
同时,电化学受体传感器是一种复杂的测量仪器,它利用电化学作为换能器,并利用生物活性成分作为敏感原件。
在此基础上,本实验利用GPR120受体制备电化学受体传感器,检测了14种脂肪酸与其受体GPR120之间的作用。
通过NCBI查找到FFAR4受体基因GPR120,利用真核表达载体pcDNA3.0获得重组质粒。
通过脂质体转染法将重组质粒转染HEK-239T细胞,利用HEK-239T细胞表达系统获得目标蛋白。
然后,通过自组装的方法在玻碳电极表面按顺序固定壳聚糖,纳米金溶胶,GPR120蛋白溶液,硫堇-壳聚糖混合物,辣根过氧化物酶-纳米金溶胶,GPR120蛋白溶液在玻碳电极表面,最后用BSA溶液封闭。
组装的每个过程都使用循环伏安法进行表征。
使用电化学工作站,通过时间-电流法对分别对14种脂肪酸的不同浓度的溶液进行检测。
结果表明,GPR120与14种脂肪酸在一定浓度范围内均呈现双曲线,使用双曲线模型进行线性拟合,相关系数（R<sup>2</sup>）均达到0.95以上。
一种电化学传感器的制备方法及应用[发明专利]
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专利名称：一种电化学传感器的制备方法及应用
专利类型：发明专利
发明人：宋新建,谭小红,付菊,陈泇冰,郑寅,王东华,马小平申请号：CN201710486302.8
申请日：20170623
公开号：CN107064277A
公开日：
20170818
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种电化学传感器，包括电极芯及采用meso‑四(4‑羧基苯基)卟啉或其金属配合物的钠（或钾）盐作为剥离助剂制备的石墨烯复合物，且所述复合物膜附着在所述芯片的表面上。
该传感器的制备方法操作简便、省时、成本低、环境友好，且由于电极芯表面上的石墨烯复合物具有高的比表面和优良的导电性以及卟啉化合物的电催化性能，提高了传感器检测多巴胺或/和对乙酰氨基酚的稳定性、重复性和灵敏度，特别适用于测定对乙酰氨基酚片、感冒灵颗粒、精制银翘解毒片、盐酸多巴胺注射剂和人血清等样品中的多巴胺或/和对乙酰氨基酚的含量，具有广泛的应用前景。
申请人：湖北民族学院
地址：445000 湖北省恩施土家族苗族自治州恩施市学院路39号
国籍：CN
代理机构：武汉宇晨专利事务所
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一种电化学免疫传感器及其制备方法和应用[发明专利]
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专利名称：一种电化学免疫传感器及其制备方法和应用专利类型：发明专利
发明人：周影,双少敏
申请号：CN201911136254.5
申请日：20191119
公开号：CN110794014A
公开日：
20200214
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种电化学免疫传感器及其制备方法和应用，一种电化学免疫传感器，是以适配体/氨基作为功能化基团制备的Janus粒子，并用其修饰玻碳电极，制备得到的电化学免疫传感器。
该方法制备的电化学免疫传感器可用于β‑受体激动剂莱克多巴胺的检测。
该方法提高了电化学免疫传感器电极的灵敏度和选择性，使电极修饰过程更加简便，具有良好的稳定性和重现性，并且可以应用于人体尿液中莱克多巴胺的检测。
申请人：山西大学
地址：030006 山西省太原市小店区坞城路92号
国籍：CN
代理机构：太原智慧管家知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：马俊平
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【CN109765279A】基于硼酸亲和构建的三明治类型电化学传感器及其制备方法和应用【专利】
(51)Int .Cl . G01N 27/327(2006 .01) G01N 27/48(2006 .01)
(10)申请公布号 CN 109765279 A (43)申请公布日 2019.05.17
( 54 )发明 名称 基于 硼酸亲 和构建的 三明 治类型电 化学 传
感器及其制备方法和应用 ( 57 )摘要
(2)PAPBA/RGO/GCE的制备：将APBA溶液、HCl溶液和NaF溶液混合，得到混合液A，将上述 RGO/GCE电极在混合液A中进行循环伏安扫描，即得PAPBA/RGO/GCE电极；
(3)在PAPBA/RGO/GCE电极上滴加BSA溶液，得到BSA/PAPBA/RGO/GCE电极； (4)将PBS溶液、NADH和FcBA溶液混合得到混合液B，将BSA/PAPBA/RGO/GCE置于混合液B 中反应得到三明治类型电化学传感器。 2 .根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤(1)中，GO溶液的滴加量为8-12μL，GO 溶液的浓度为0 .8-1 .2mg/mL；和/或 PBS溶液的pH为6 .8-7 .2。 3 .根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤(1)中，电沉积的条件包括：电位范围 为-1 .4V～-1 .3V，时间为715-725s。 4 .根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤(2)中，APBA溶液的浓度为9-11mmol/ L，HCl溶液的浓度为0 .9-1 .1mol/L，NaF溶液的浓度为4-6mmol/L。 5 .根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤(2)中，循环伏安扫描的条件包括：电 位范围为-0 .5V～0 .7V，扫描速度为0 .09-0 .11V/s。 6 .根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤(3)中，BSA溶液的用量为8-12μL，其体 积浓度为4-6％； PAPBA/RGO/GCE电极上滴加BSA溶液后需放置28-32min。 7 .根 据权 利要求1所述的 制备方法 ，其中 ，在步骤 (4) 中 ，FcBA溶液的 浓度为0 .91 .1mmol/L；PBS溶液的pH为7 .3-7 .5；电聚合APBA圈数范围：8～12圈；和/或 NADH和FcBA溶液结合时间范围 ：15～35min。 8 .根据权利要求1所述的制备方法，其中，GCE电极在使用前用Al2O3在麂皮纸上打磨至 镜面，用二次蒸馏水冲洗干净超声，然后在0 .9-1 .1mmol/L Fe(CN)63-/4-溶液中表征，直到得 到稳定的电流响应。 9 .一种基于硼酸亲和构建的三明治类型电化学传感器，其特征在于，所述三明治类型 电化学传感器由权利要求1-8中任意一项所述的制备方法制得。 10 .根据权利要求9所述的三明治类型电化学传感器在NADH检测中的应用。
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910154710.2
(22)申请日 2019.03.01
(71)申请人 天津商业大学
地址 300134 天津市北辰区津霸公路东口
(72)发明人 庞广昌 鲁丁强 许秋达
(74)专利代理机构 天津市三利专利商标代理有
限公司 12107
代理人 肖莉丽
(51)Int.Cl.
G01N 27/26(2006.01)
G01N 27/30(2006.01)
G01N 27/327(2006.01)
(54)发明名称
一种GPR120电化学受体传感器及其制备方
法和应用
(57)摘要
本发明公开了一种GPR120电化学受体传感
器及其制备方法和应用，旨在提供一种灵敏度
高，能快速定量测定的传感器及其制备方法和应
用。
该方法为：在玻碳电极表面添加壳聚糖溶液
形成壳聚糖膜层；置于纳米金溶胶中自组装；表
面滴加GPR120受体蛋白溶液4℃自组装；滴加硫
堇-壳聚糖复合物溶液于电极表面，室温下晾干；
纳米金-辣根过氧化物酶溶液中4℃自组装；于
GPR120受体蛋白溶液中4℃自组装；封闭非特异
性位点，即得本发明的传感器。
该方法将GPR120
受体蛋白自组装到生物传感器上，利用电化学信
号放大系统模拟胞内受体信号级联放大过程，直
观地检测其与不同脂肪酸配体的相互作用关系，
灵敏度高，
有利于受配体相互作用的研究。
权利要求书2页 说明书9页CN 109709179 A 2019.05.03
C N 109709179
A
权 利 要 求 书1/2页CN 109709179 A
1.一种GPR120电化学受体传感器，其特征在于，包括基底玻碳电极，所述基底玻碳电极的表面从内向外依次设置有壳聚糖膜层、纳米金溶胶层、第一GPR120受体检测层、硫堇-壳聚糖复合物膜层、纳米金-辣根过氧化物膜层、第二GPR120受体检测层和封闭层。
2.一种权利要求1所述的GPR120电化学受体传感器的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
(1)在玻碳电极表面添加壳聚糖溶液，干燥，使玻碳电极表面形成壳聚糖膜；之后，使用低浓度NaOH中和膜表面的醋酸，之后用超纯水洗掉壳聚糖膜表面残留的NaOH离子晾干，形成壳聚糖膜层；
(2)置于纳米金溶胶中自组装，生成纳米金溶胶层；
(3)电极表面滴加GPR120受体蛋白溶液4℃自组装，生成第一GPR120受体检测层；
(4)滴加硫堇-壳聚糖复合物溶液于电极表面的中心，室温下晾干，生成硫堇-壳聚糖复合物膜层；
(5)将电极置于纳米金-辣根过氧化物酶溶液中4℃自组装，生成纳米金-辣根过氧化物膜层；
(6)于GPR120受体蛋白溶液中4℃自组装，生成第二GPR120受体检测层；
(7)滴涂BSA溶液，于37℃孵育，封闭非特异性位点，即得GPR120电化学受体传感器。
3.根据权利要求1所述的GPR120电化学受体传感器的制备方法，其特征在于，所述GPR120受体蛋白溶液通过下述方法制备：
①合成pcDNA3.0-GPR120重组质粒；②将上述得到的重组质粒转化入Top10甘油菌感受态细胞，通过氨苄青霉素培养基筛选挑取阳性克隆菌株，将上述菌株置于LB液体培养基中置于恒温摇床中进行扩大培养，然后提取质粒；③对提取的质粒进行抽提；④HEK-293T细胞质粒转染；⑤蛋白提取得到带有His标签的GPR120受体蛋白溶液。
4.根据权利要求2所述的GPR120电化学受体传感器的制备方法，其特征在于，所述玻碳电极的峰电位差为64-80mV。
5.根据权利要求2所述的GPR120电化学受体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(2)中的纳米金溶胶的光吸收峰的波长λmax为515-525nm；颗粒呈球形，粒径为18-20nm。
6.根据权利要求2所述的GPR120电化学受体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述纳米金/辣根过氧化物酶溶液采用下述方法制备：用0.1mol/L K2CO3调节所述纳米金溶胶的pH值至
7.0后，将所述纳米金溶胶与2.0g/L辣根过氧化物酶溶液按照体积比为1：1的比例搅拌混匀即可得到纳米金/辣根过氧化物酶溶液。
7.一种权利要求1所述的GPR120电化学受体传感器在用于多种脂肪酸测定方面的应用。
8.一种权利要求1所述的GPR120电化学受体传感器用于测定脂肪酸浓度的方法，其特征在于，包括下述步骤：
Ⅰ、采用三电极工作系统，将组装好的GPR120电化学受体传感器电极作为工作电极，Ag/ AgCl电极作为参比电极，铂丝电极作为对电极，以超纯水作为空白对照，采用时间-电流法在一定的电压下测定不同浓度的脂肪酸溶液与该受体的响应电流，以响应电流的变化率作
2。