高考生物深化复习+命题热点提分专题16基因工程和细胞工程
高考生物专题复习 专题16 基因工程和细胞工程
特别提醒 ①DNA 连接酶连接两个 DNA 片段， 而 DNA 聚合酶只能 将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。 ②限制酶是切割某种特定的脱氧核苷酸序列，并使两条链在特 定的位臵断开，而解旋酶是将 DNA 的两条链间的氢键打开形成 两条单链。
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疑难点拨 1．从“基因表达”层面理解基因表达载体的必需元件 (1)基因表达载体的组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标 记基因＋复制原点。 (2)启动子和终止子：启动子是 RNA 聚合酶结合位点，启动 转录；终止子是终止转录的位点。插入的目的基因只是结构 基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插 入部位前需要有启动子，后需要有终止子。
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(3)基因表达载体的构建过程
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2. 区分一个至多个限制酶切点与每种酶一个切点 (1)一个至多个限制酶切点：作为载体必须具有一个至多个限 制酶切点，以便与外源基因连接。 (2)每种酶一个切点：每种酶的切点最好只有一个。因为某种 限制酶只能识别单一切点，若载体上有一个以上的酶切点， 则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点 区，则进入受体细胞后便不能自主复制。一个载体若只有某 种限制酶的一个切点，则酶切后既能把环打开接纳外源 DNA 片段，又不会丢失自己的片段。
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的功能是启动转录，因此其识别并结合的部位是基因的转录起 始区或启动子区域。第(5)题中A项蛋白酶酶解核糖体中的蛋白 质后，只剩下rRNA，利用了酶的专一性，A项正确；B项中用无 水乙醇处理叶片，进行色素的提取和分离，是因为无水乙醇是 有机物，可溶解各种色素，不属于特异性结合，B项错误；C项 是用基因探针法，利用已知基因的碱基序列可与另一基因上的 碱基进行互补配对的性质来进行基因定位，C项正确；D项中提 到一种mRNA和另一种mRNA的互补，这种互补也遵循碱基互补配 对原则，属于特异性结合。
备战2023年高考生物全国通用母题题源解密16 转基因生物,从基因工程中溯源(原卷版)
专题16 转基因生物，从基因工程中溯源考向一基因工程【母题来源】2022年全国乙卷【母题题文】(2022·全国·高考真题)新冠疫情出现后，病毒核酸检测和疫苗接种在疫情防控中发挥了重要作用。
回答下列问题。
(1)新冠病毒是一种RNA病毒，检测新冠病毒RNA(核酸检测)可以采取RT-PCR法。
这种方法的基本原理是先以病毒RNA为模板合成cDNA，这一过程需要的酶是______，再通过PCR技术扩增相应的DNA 片段。
根据检测结果判断被检测者是否感染新冠病毒。
(2)为了确保新冠病毒核酸检测的准确性，在设计PCR引物时必须依据新冠病毒RNA中的______来进行。
PCR过程每次循环分为3步，其中温度最低的一步是______。
(3)某人同时进行了新冠病毒核酸检测和抗体检测(检测体内是否有新冠病毒抗体)，若核酸检测结果为阴性而抗体检测结果为阳性，说明______(答出1种情况即可)；若核酸检测和抗体检测结果均为阳性，说明______。
(4)常见的病毒疫苗有灭活疫苗、蛋白疫苗和重组疫苗等。
已知某种病毒的特异性蛋白S(具有抗原性)的编码序列(目的基因)。
为了制备蛋白疫苗，可以通过基因工程技术获得大量蛋白S。
基因工程的基本操作流程是______。
【试题解析】PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术；过程：①高温变性：DNA 解旋过程(PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开)；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。
(1)分析题意可知，新冠病毒的遗传物质是RNA，而RT-PCR法需要先得到cDNA，由RNA到DNA的过程属于逆转录过程，逆转录过程需要的酶是逆转录酶(反转录酶)。
(2)PCR过程需要加入引物，设计引物时应有一段已知目的基因的核苷酸序列，在该过程中为了确保新冠病毒核酸检测的准确性，在设计PCR引物时必须依据新冠病毒RNA中的特异性核苷酸序列来进行；PCR过程每次循环分为3步，分别为变性(90-95℃)、复性(55-60℃)、延伸(70-75℃)，故其中温度最低的一步是复性(或退火)。
2024年高考生物复习重点、难点、热点专项解析—细胞工程与基因工程
2024年高考生物复习重点、难点、热点专项解析—细胞工程与基因工程高考感知课标要求——明考向近年考情——知规律12.1植物细胞工程包括组织培养和体细胞杂交等技术12.2动物细胞工程包括细胞培养、核移植、细胞融合和干细胞的应用等技术12.3对动物早期胚胎或配子进行显微操作和处理以获得目标个体12.4基因工程是一种重组DNA技术12.5蛋白质工程是基因工程的延伸12.6转基因产品的安全性引发社会的广泛关注12.7举例说出生殖性克隆人面临的伦理问题12.8世界范围内应全面禁止生物武器2023·湖南基因工程在农牧业、制药及环境等方面的应用2023·湖北DNA重组技术的基本工具、基因表达载体的构建、目的基因的检测与鉴定2023·广东DNA的粗提取及鉴定的方法2023·新课标DNA重组技术的基本工具、基因表达载体的构建2023·北京动物细胞融合与单克隆抗体的制备2023·山东植物细胞工程的实际应用2023·广东植物体细胞杂交技术2023·广东动物的体外受精、胚胎的体外培养、胚胎移植技术2023·浙江动物的体外受精、胚胎的体外培养2023·浙江生物技术的安全性和伦理问题综合2023·海南将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定、基因工程的应用2023·山东PCR扩增的原理与过程、DNA重组技术的基本工具、基因表达载体的构建2023·湖北动物细胞融合与单克隆抗体的制备2023·浙江动物细胞融合与单克隆抗体的制备、动物体细胞核移植技术和克隆动物2023·全国遗传信息的翻译、基因表达载体的构建、目的基因的检测与鉴定命题趋势1.细胞工程，胚胎工程的命题多以选择题呈现，基因工程的命题多以简答题呈现，属于年年必考的题目。
2.试题情境以下列几种居多：（1）以单克隆抗体为情境考查细胞工程。
高考生物第16讲 基因工程、细胞工程
(4)复性是引物和模板结合的过程,复性温度过高会破坏引物 与模板的碱基配对。复性温度一般比Tm值(把DNA双螺旋结 构降解一半时的温度)低5 ℃。DNA中G—C含量越高,Tm值 越高。(5)如果PCR反应得不到任何扩增产物,可能是复性温 度太高,破坏了引物与模板的碱基配对,也可能是引物设计错 误,改进措施是降低复性温度和重新设计引物。
命题点二 克隆技术及其伦理道德问题
整合提升 1.容易混淆的三种细胞——杂种细胞、重组细胞和杂交细胞 (1)杂种细胞:植物体细胞杂交过程中,两种细胞去掉细胞壁之 后形成的原生质体融合,融合的原生质体出现细胞壁之后形成 的细胞叫杂种细胞。 (2)重组细胞:体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞之后形成 的细胞叫重组细胞。 (3)杂交细胞:动物细胞融合形成的细胞常称为杂交细胞。
2.(2018全国Ⅰ理综)回答下列问题。 (1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)将非洲爪蟾核糖体蛋白基 因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达。该研究除 证明了质粒可以作为载体外,还证明了___________________ (答出两点即可)。 (2)体外重组的质粒可通过Ca2+参与的_________方法导入大 肠杆菌细胞;而体外重组的噬菌体DNA通常需与_________组 装成完整噬菌体后,才能通过侵染的方法将重组的噬菌体 DNA导入宿主细胞。在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中,可作 为重组噬菌体宿主细胞的是___________________________。
(1)“中中”和“华华”的获得涉及核移植过程,核移植是指
。
通过核移植方法获得的克隆猴,与核供体相比,克隆猴体细胞
的染色体数目
(填“减半”“加倍”或“不变”)。
(2)哺乳动物的核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核
高考生物考点解读命题热点突破专题16基因工程和细胞工程0414154
高考生物考点解读命题热点突破专题16基因工程和细胞工程0414154专题16基因工程和细胞工程【考向解读】1.基因工程的诞生(ⅰ)2.基因工程的原理及技术(ⅱ)3.基因工程的应用(ⅱ)4.蛋白质工程(ⅰ)5.植物的组织培养(ⅱ)6.动物的细胞培养与体细胞克隆(ⅰ)7.细胞融合与单克隆抗体(ⅱ)高频考点：基因工程的原理、操作步骤及操作工具；动物的细胞培养与体细胞克隆中频考点：植物组织培养与植物体细胞杂交的原理及应用低频考点：蛋白质工程及应用【命题热点突破一】综合考查基因工程的原理及应用领域1．目的基因应当填入启动子与终止子之间的部位。
2．将目的基因引入受到体细胞没碱基优势互补接合现象。
3．原核生物作为受体细胞的优点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少。
4．通常情况下，用同一种管制酶研磨质粒和所含目的基因的片段，但有时需用两种管制酶分别研磨质粒和目的基因，以防止质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的相连接。
5．标记基因的作用――筛选、检测目的基因是否导入受体细胞。
6．受到体细胞常用植物受精卵或体细胞(经组织培养)、动物受精卵(通常不必体细胞)、微生物(大肠杆菌、酵母菌)等。
7．启动子(dna片段)≠起始密码子(rna)；终止子(dna片段)≠终止密码子(rna)。
基准1．（2021新课标ⅲ卷.40）图（a）中的三个dna片段上依次则表示出来了ecori、bamhi和sau3ai三种限制性内乌酶的辨识序列与研磨位点，图（b）为某种抒发载体示意图（载体上的ecori、sau3ai的切点就是唯一的）。
1根据基因工程的有关科学知识，提问以下问题：（1）经bamhi酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。
（2）若某人利用图（b）右图的抒发载体赢得了甲、乙、丙三种所含目的基因的重组子，例如图（c）右图。
这三种重组子中，无法在宿主细胞中抒发目的基因产物的存有____________，无法抒发的原因就是____________。
生物高考专题 基因工程和细胞工程
归纳总结 (1)真核生物的cDNA与基因组类型cDNA基因组基因中启动子和内含子无
有大小小大基因多少
某种生物的部分基因 某种生物的全部基因
物种间的基因交流
可以
部分基因可以
(2)胞内DNA复制与PCR技术的比较
比较项目
胞内DNA复制
PCR技术
解旋
解旋酶，边解旋边复制
变性
酶
解旋酶，DNA聚合酶
(2)生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是解__旋__酶__。在体 外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链 的条件是_加__热__至__9_0_～__9_5_℃__。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA 双链分子中的_氢__键__。
解析 生物体细胞内DNA复制开始时是利用解旋酶进行解旋的，而在体 外利用PCR技术扩增目的基因时，则是通过加热至90～95 ℃进行解旋的， 二者都破坏了DNA双链分子中的氢键。
热稳定DNA聚合酶
模板
DNA母链
DNA母链
能量＋原料 dCTP、dATP、dGTP、dTTP dCTP、dATP、dGTP、dTTP
温度
最适温度
3个不同温度(90～95 ℃， 55～60 ℃，70～75 ℃)
缓冲液
Mg2＋，缓冲对
Mg2＋，缓冲对
子链合成 半保留复制，但不连续复制
连续复制
2.(2018·全国Ⅱ，38)某种荧光蛋白(GFP)在紫外光或蓝光激发下会发出绿 色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某 种病毒的外壳蛋白(L1)基因连接在GFP基因的5′末端，获得了L1-GFP融 合基因(简称为甲)，并将其插入质粒P0，构建了真核表达载体P1，其部 分结构和酶切位点的示意图如下，图中E1～E4四种限制酶产生的黏性末 端各不相同。 回答下列问题： (1)据图推断，该团队在将甲插入质粒P0时，使用了两种限制酶，这两种 酶是_E_1_和__E_4_。使用这两种酶进行酶切是为了保证甲__的__完__整__，也是为了 保证_甲__与__载__体__正__确__连__接__。
2017年高考生物深化温习命题热点提分专题16基因工程和细胞工程
【答案】 (1)囊胚 滋养层 (2)胚胎分割 内细胞团 (3)①灭活的病毒 ②细胞膜的流动性 m＋n
3．以下图是制备抗埃博拉病毒VP40蛋白的单克隆抗体的进程，请回答：
【答案】 (1)纤维素酶和果胶(答纤维素酶也可) 吸水涨破(或破裂) (2)提高营养 (3)⑨⑩(答⑨或⑩都可) (4)聚乙二醇 秋水仙素 (5)遗传 (6)光合作用 透气
6.(在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培育基上生长。以下图为取得抗虫棉的技术流程。请据图回答：
(1)进程①当选用EcoRⅠ和XhoⅠ两种限制酶切割的优势是____________，另外还要用到________酶。
(2)进程②中第一需要用________处置大肠杆菌，使其处于感受态，VP40基因进入大肠杆菌后维持稳固并表达的进程称为________。
(3)与植物原生质体融合相较，进程④特有的方式是用________处置。通常在选择培育基中需加入抗生素，目的是________________________。选择培育基上存活的杂交瘤细胞产生的抗体________(填“是”或“不是”)单克隆抗体。
专题16 因工程和细胞工程
1．依照基因工程的有关知识，回答以下问题：
(1)限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其结尾类型有________和________。
(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：
AATTC……G
G……CTTAA
为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必需具有的特点是_______________________________。
2021届高考生物热点：基因工程和细胞工程
2021届高考生物热点：基因工程和细胞工程考点考情1.基因工程的诞生(Ⅰ)2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(Ⅱ)3.基因工程的应用(Ⅱ)4.蛋白质工程(Ⅰ)5.植物的组织培养(Ⅱ)6.动物的细胞培养与体细胞克隆(Ⅱ)7.细胞融合与单克隆抗体(Ⅱ) 1.考查题型：非选择题。
2.呈现文字：文字题、流程图题。
3.命题特点：对于基因工程的考查频度较高，侧重于考查操作工具的种类、功能以及操作基本程序等。
动物细胞工程技术中的核移植技术及单克隆抗体的制备也有所考查。
题目常借助简洁的文字材料或模式图的形式来考查其基本原理和技术手段，尤为注重对教材中一些关键词的填充及对结论性语句的准确表述。
| 以图串知|(1)质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并且具有自我复制能力的很小的环状DNA分子。
(√)(2)DNA分子经限制酶切割后产生的DNA片段末端一定是黏性末端。
(×)(3)基因表达载体组成除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及标记基因等。
(√)(4)启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位。
(√)(5)基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质，而蛋白质工程则可对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质。
(√)(6)微型繁殖技术既能保持优良品种的遗传特性，还可以高效快速地实现种苗的大量繁殖。
(√)(7)动物细胞培养中需用胃蛋白酶或胶原蛋白酶将组织细胞分散成单个细胞。
(×)(8)原代培养的细胞遗传物质没有改变，而传代培养的细胞有的已经发生突变，获得了不死性。
(√)(9)动物体细胞核移植技术获得的克隆动物在遗传性状上与供核母体完全一致。
(×)(10)动物细胞融合技术和植物体细胞杂交技术类似，也可获得杂种动物。
(×)。
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专题16 基因工程和细胞工程1．根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。
(2)质粒运载体用Eco RⅠ切割后产生的片段如下：AATTC……GG……CTTAA为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用Eco RⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是_______________________________。
(3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶。
(4)反转录作用的模板是________，产物是________。
若要在体外获得大量反转录产物，常采用________技术。
(5)基因工程中除质粒外，________和________也可作为运载体。
(6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是______________________________________。
【答案】(1)黏性末端平末端(2)切割产生的DNA片段末端与Eco RⅠ切割产生的相同(其他合理答案也可)(3)大肠杆菌T4(4)mRNA(或RNA) cDNA(或DNA) PCR(5)噬菌体动植物病毒(其他合理答案也可)(6)未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱(其他合理答案也可)2．下图表示胚胎发育某一时期示意图和利用高等动物细胞融合技术制备单克隆抗体的部分过程，请据图回答下列问题：(1)图1为胚胎发育的________期，其中②为_________________________。
(2)若要通过胚胎移植获得遗传物质完全相同的两个新个体，可对图1所示时期的胚胎进行________________处理，再移入受体内。
这一操作要求是均等分割③________，以免影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
(3)若图2表示动物细胞融合的过程，则有：①过程a常用________________作为诱导剂(此诱导剂不能用于植物细胞融合)。
②由甲乙融合得到丙细胞的基本原理是________________________；若甲细胞有m条染色体，乙细胞有n条染色体，筛选后的丁细胞有________条染色体。
【答案】(1)囊胚滋养层(2)胚胎分割内细胞团(3)①灭活的病毒②细胞膜的流动性m＋n 3．下图是制备抗埃博拉病毒VP40蛋白的单克隆抗体的过程，请回答：(1)过程①中选用Eco RⅠ和XhoⅠ两种限制酶切割的优点是____________，此外还要用到________酶。
(2)过程②中首先需要用________处理大肠杆菌，使其处于感受态，VP40基因进入大肠杆菌后维持稳定并表达的过程称为________。
(3)与植物原生质体融合相比，过程④特有的方法是用________处理。
通常在选择培养基中需加入抗生素，目的是________________________。
选择培养基上存活的杂交瘤细胞产生的抗体________(填“是”或“不是”)单克隆抗体。
(4)图示过程应用的生物技术有________________________________________________________(至少答出三种)。
(2)图中②过程用人工方法，使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，一般将受体大肠杆菌用Ca2＋处理，以增大细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。
VP40基因进入大肠杆菌称之为导入，导入后维持稳定并表达的过程称为转化。
(3)过程④表示B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，动物的细胞融合要利用促融剂—灭活的病毒。
动物细胞培养的培养基中要加入抗生素，因抗生素能防止细胞在培养过程被污染。
经选择性培养基筛选出来的杂交瘤细胞能产生多种抗体，还需要进一步筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞才能产生单克隆抗体。
(4)据图示分析，图中涉及的现代生物技术有基因工程、动物细胞培养和动物细胞融合。
【答案】(1)防止目的基因自身环化(其他合理答案也可) DNA连接(2)Ca2＋转化(3)灭活的病毒防止培养过程中的污染不是(4)基因工程、动物细胞培养、动物细胞融合4．应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品，是生物科学技术转化为生产力的重要体现。
请据图回答下列问题：(1)在培育转基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是________________，②过程常用的方法是________。
(2)转基因牛可通过分泌乳汁来生产人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有________，其作用是能够被________识别和结合，从而启动转录过程。
(3)PrG基因的产物能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是________细胞，Ⅲ代表的细胞具有________________的特点。
(4)在抗虫棉培育过程中，需将抗虫基因(Bt毒蛋白基因)插入Ti质粒的________上，通过农杆菌的转化作用就可以使抗虫基因进入棉花受体细胞。
要检测抗虫基因是否翻译成Bt毒蛋白，应从抗虫棉中提取蛋白质，并用________方法进行检测。
【答案】(1)限制酶和DNA连接酶显微注射法(2)启动子RNA聚合酶(3)效应B 既能无限增殖，又能产生特定抗体(4)TD NA 抗原—抗体杂交5．(植物组织培养技术被广泛应用于无病毒植株培育、育种及获得细胞产物的工厂化生产等。
结合下图中番茄植株的培育过程，回答相关问题：(1)①过程中通常使用______________酶来获取植物细胞原生质体，此处使用的外界溶液浓度不宜过小，以防止细胞原生质体_______________________。
(2)铺平板类似于微生物接种，平板培养基中添加蔗糖的目的除了调节渗透压外，还有________的作用。
(3)图中属于再分化的过程是________(填序号)。
(4)多倍体番茄植株所结果实中维生素含量更高，若想培育多倍体番茄，可选择在图中的过程③中添加________(物质)进行处理，也可以选择在过程⑥中添加一定浓度的________(物质)进行处理。
(5)植物组织培养技术不仅可以保持优良品种的________特性，还可以高效快速地实现种苗的大量繁殖。
(6)“人工种子”由胚状体，包埋胚状体的胶质以及人造种皮等3部分组成，包埋胚状体的胶质中富含有机营养，这是因为胚状体在萌发初期不能进行________，为了满足胚状体代谢的需求，“人造种皮”则必须具有良好的透水、________的性能。
(5)植物组织培养技术属于无性繁殖，不仅可以保持优良品种的遗传特性，还可以高效快速地实现种苗的大量繁殖。
(6)胚状体在萌发初期不能进行光合作用，因此包埋胚状体的胶质中富含有机营养，以供胚状体在萌发初期细胞生命活动的需要。
胚状体细胞要进行细胞呼吸等代谢活动，因此“人造种皮”则必须具有良好的透水、透气的性能。
【答案】(1)纤维素酶和果胶(答纤维素酶也可) 吸水涨破(或破裂) (2)提高营养(3)⑨⑩(答⑨或⑩均可) (4)聚乙二醇秋水仙素(5)遗传(6)光合作用透气6.(在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。
下图为获得抗虫棉的技术流程。
请据图回答：(1)A过程需要的酶有________________。
(2)要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用________处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为________态；将________在缓冲液中混合培养完成转化过程。
(3)含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，将离体棉花叶片组织培养成再生植株要经过[D]________和[E]________。
如要确保再生植株中含有抗虫基因，可在C过程的培养基中加入________。
(4)如想利用分子杂交技术检测再生植株中的抗虫基因是否转录，应该用放射性同位素标记的目的基因作为探针与________杂交。
【解析】(1)图中A为基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒。
【答案】(1)(同一种)限制酶、DNA连接酶(缺一不可)(2)Ca2＋感受重组质粒和感受态(农杆菌)细胞(答一个不给分)(3)脱分化再分化卡那霉素(4)mRNA7.为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。
(1)研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用________法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。
在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用________酶处理两个基因后，得到________端(填图中字母)相连的融合基因。
(2)将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T－DNA中，构建________并导入农杆菌中。
将获得的农杆菌接种在含____________的固体平板上培养得到单菌落，再利用______________培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。
(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是_______________，进一步筛选后获得转基因油菜。
(4)提取上述转基因油菜的mRNA，在________酶的作用下获得cDNA，再依据________的DNA片段设计引物进行扩增，对扩增结果进行检测，可判断融合基因是否完成________。
(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜。
(4)提取上述转基因油菜的mRNA，在逆转录酶的作用下获得cDNA，再依据融合基因的DNA片段设计引物进行扩增，对扩增结果进行检测，可判断融合基因是否完成转录。
【答案】(1)PCR ClaⅠ(限制酶)和DNA连接A、D(2)表达载体(或“重组质粒”)四环素液体(3)利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞(4)逆转录融合基因转录8.下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。
请回答：(1)天然质粒往往需经过改造才能作为基因工程中的运载体，经改造后的质粒同时具备的条件有____________(填序号)。
①标记基因②多个限制酶切割位点③对受体细胞无害④启动子⑤起始密码子(2)若对图1中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性将会________。
(3)用图2中的人乳铁蛋白目的基因和图1所示的质粒构建重组质粒时，选用的限制酶是________(从“Eco RⅠ”、“Bam HⅠ/HindⅢ”、“SmaⅠ/HindⅢ”中选择)。