弗氏完全佐剂对小鼠细胞免疫功能的影响
单抗制备小鼠免疫SOP
单抗制备免疫一、材料准备：弗式完全佐剂（complete Freunds adjuvant，CFA）弗氏不完全佐剂（incomplete Freunds adjuvant，IFA）实验动物：小鼠（Balb/c）雌性，8周以上,体重20g以上每种抗原蛋白免疫小鼠4只靶抗原：具有免疫原性的抗原或蛋白质、多肽，生理盐水抗原要求：抗原要尽量在无毒无刺激溶液中（PBS或生理盐水），纯度大于80%，浓度1mg/ml以上，总量大于2mg。
抗原尽量是可溶性抗原，溶液为PBS，如必需加入刺激物质，SDS浓度在0.5%以下，尿素在2M以下，不含咪唑，丙烯酰胺等变性剂，要求溶液澄清，无沉淀。
二、实验步骤1.抗原准备：每只小鼠按照100ug/100ul蛋白质或多肽置于生理盐水中制备成抗原。
2.抗原-佐剂的准备：将抗原液与佐剂混合制成乳状液，抗原与佐剂混合按照1：1比例进行，加入搅拌子后于4度搅拌过夜。
注射量为200ul 每只小鼠，抗原量为100ug。
第一次免疫使用弗氏完全佐剂，以后加强使用弗氏不完全佐剂，最后一次加强不加佐剂，免疫前采集阴性血做为对照，乳化因考虑损失，多计算两只小鼠的量。
乳化完全判断标准：挤出一滴乳状液滴于冷水表面以检测乳状液是否稳定，如果液滴散开则继续混合操作直至稳定的乳状液形成。
将乳状液移入1ml注射器。
3.小鼠免疫：将小鼠放在鼠笼上，拉住小鼠尾尖部，背部75%酒精消毒，针头15度角刺入小鼠皮下，挑起注射。
皮下注射共200ul，分5个点（背部皮下任意点）4.冲击免疫：如计划在免疫3d后进行细胞融合实验，则使用水相溶解的游离抗原进行直接脾脏免疫。
过程：将小鼠在固定架上固定，脾脏位置毛剪掉并消毒，快速分别剪开外皮和内皮，将脾脏拉出，吸取100ul/100ug抗原注入脾脏内，并快速用手术线分别缝合内皮和外皮。
5.小鼠阳性血清采集：尾部剪尾采血20ul，用生理盐水稀释10倍，离心收集上清。
6.效价检测：间接法检测小鼠多抗血清效价。
完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎和糖尿病的机理研究
【Abstract】 Objective To study the effects and significance of Bax protein and heat shock protein 70 (HSP70) in prevention of insulitis and diabetes by complete Freund's adjuvant (CFA) in female NOD mice. Methods 5 female NOD mice of CFA-treated group were injected into the pad of hind foot with 50 μl CFA and 5 female NOD mice of control group with 50μl normal saline (NS) at 4 weeks of age. They were sacrificed at 30th week of age or when diabetes occurred. The pancreatic tissues were routinely processed and HE-stained and scoring of insulitis was done under optical microscopy. The Bax oncoprotein and HSP70 were stained with ABC immunohistochemical method and the counts of positive cells in islets were finished under high power field. Results The incidence of in-insulitis and the average score of insulitis were significantly lower in CFA-treated mice than that in NS-treated mice (P＜0.01). None of CFA-treated mice and 3 out of 5 NS-treated mice developed diabetes. The positive rate of Bax oncoprotein in islet cells was significantly lower in CFA-treated mice than that in NS-treated mice, the positive rate of HSP70 in islet cells was significantly higher in CFA-treated mice than that in NS-treated mice. Positive correlation was found between the positive rate of Bax oncoprotein in islet cells and the score of insulitis (r=0.613), and negative correlation between positive rate of HSP70 in islet cells and the score of insulitis (r=-0.913) was also revealed. Conclusion CFA can reduce insulitis severity and decrease incidence of diabetes in NOD female mice. CFA is able to inhibit the expression of Bax oncoprotein and induce the expression of HSP70 in islet技术公司进口，鼠抗人HSP70单抗(1/100)、兔抗人Bax蛋白多抗(1/100)、生物素标记羊抗鼠IgG或羊抗兔IgG(1/300)和ABC试剂盒(1/500)均购自Sigma公司，DAB-HCl为瑞士进口分装。
弗氏佐剂使用方法
弗氏佐剂使用方法弗氏佐剂是一种广泛应用于实验动物免疫接种的添加剂，能够增强疫苗的免疫原性，提高疫苗的效果。
在使用弗氏佐剂时，需要注意以下使用方法：一、弗氏佐剂的分类与选择1. 根据成分可分为油剂弗氏佐剂和水剂弗氏佐剂。
油剂弗氏佐剂主要包括油酸钠和胆固醇等，适用于油溶性抗原；水剂弗氏佐剂主要包括氢氧化铝和磷酸铝等，适用于水溶性抗原。
2. 根据剂型可分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。
不完全弗氏佐剂主要适用于初次免疫，添加比例一般为0.5%-5%；完全弗氏佐剂适用于加强免疫，添加比例一般为1%-5%。
二、弗氏佐剂的使用步骤1.准备抗原：根据实验需要，制备相应浓度和纯度的抗原溶液。
2.配制弗氏佐剂：根据实验需求，将弗氏佐剂与抗原溶液混合，充分搅拌，确保抗原充分吸附。
3.免疫接种：将配制好的弗氏佐剂-抗原混合物接种到实验动物体内，如小鼠、大鼠等。
接种部位可选择腹腔、皮下、肌肉等。
4.观察与监测：在免疫过程中，定期观察实验动物的生长状况、疫苗反应等，以评估疫苗效果。
三、弗氏佐剂的注意事项1.严格无菌操作：弗氏佐剂在使用过程中，应确保无菌操作，避免细菌污染。
2.适量使用：根据实验动物的体重、年龄等因素，合理控制弗氏佐剂的用量，避免过量导致不良反应。
3.观察动物反应：在免疫过程中，密切观察实验动物的反应，如食欲、精神状态等。
一旦发现异常，应及时处理。
4.储存条件：弗氏佐剂应存放在密封容器中，置于阴凉、干燥处，避免高温、潮湿。
总之，弗氏佐剂在实验动物免疫接种中发挥着重要作用。
正确选用和使用弗氏佐剂，可以提高疫苗的免疫效果，为实验研究奠定基础。
在使用过程中，要严格遵循使用方法，注意观察实验动物的反应，确保实验安全顺利进行。
动物疫苗中灭活剂与佐剂的种类及其作用
动物疫苗中灭活剂与佐剂的种类及其作用摘要介绍了动物疫苗中的灭活剂和佐剂的种类及其作用,以期为灭活剂和佐剂的推广应用提供参考。
关键词动物疫苗;灭活剂;佐剂;种类;作用动物疫苗种类包括弱毒苗和灭活疫苗,在灭活疫苗生产过程中,必然涉及灭活剂和佐剂,二者的安全性和效力也决定了疫苗的质量和推广应用效果。
1疫苗灭活剂灭活是指破坏病原体的生物学特性,但尽可能避免影响其免疫原性或破坏血清中补体活性的过程。
常用的灭活剂有甲醛、β-丙内酯(BPL)或其他有效灭活剂。
1.1甲醛甲醛是一种有强烈刺激性的致癌物质,其既可作用于病毒含氨基的核苷酸碱基(如A,G,U),又可作用于病毒壳蛋白。
作用于病毒壳蛋白时,易使蛋白质发生交联或病毒颗粒聚集,不能再作用于壳蛋白内的核酸。
这样,病原体蛋白的抗原性会遭到严重破坏,并可能有病原体存活。
用甲醛灭活时间长,一般需要在37～39℃处理24h以上或更长时间,使用浓度一般为0.1%。
其灭活的效果易受温度、pH值、浓度、是否存在有机物、病原体的种类和含氮量等因素影响,残留的游离甲醛若随疫苗注入机体后,会产生制激性反应。
1.2β-丙内酯β-丙内酯(Beta-Propiolactone,BPL)在国外已广泛用于各种疫苗的灭活,是一种杂环类化合物,沸点155℃,常温下是无色粘稠状液体,对病毒具有很强的灭活作用。
能作用于病原体DNA或RNA,改变病毒核酸结构达到灭活目的,而不直接作用于蛋白,不破坏病原体的免疫原性。
大剂量β-丙内酯(BPL)虽是一种致癌物,但极易水解,在37℃水浴水解2h后消失,其水解为无毒性的人体脂肪代谢产物β-羟基丙酸。
另外,由于其能在疫苗液体中完全水解,不必考虑在成品疫苗中的残留,接种反应也轻微。
同时,β-丙内酯灭活病原时间短,从而显著地缩短了疫苗生产周期,提高了经济效益。
但与甲醛相比,价格明显昂贵,不适用于发展中国家或经济落后国家。
2免疫佐剂免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用、能增强机体针对抗原的免疫应答能力、或改变免疫反应类型的物质。
弗氏佐剂说明书
弗氏佐剂说明书
弗氏佐剂（Freund's adjuvant）是一种常用的免疫佐剂，用于增强抗原的
免疫原性，常用于制备疫苗和进行免疫学研究。
以下是弗氏佐剂的基本信息和使用说明：
1. 成分：弗氏佐剂主要包含羊毛脂和液体石蜡，有时还会加入卡介苗（BCG）或其他微生物成分。
2. 用法：在免疫动物前，将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，制备成“油包水”乳状液。
佐剂和抗原体积比一般为1：1。
制备好的乳化剂可用于免疫
注射。
3. 作用机制：弗氏佐剂的作用机制包括延缓抗原的释放，保护抗原不被水解，延长抗原在体内滞留时间，有利于高亲和力抗体的产生。
此外，弗氏佐剂还能活化巨噬细胞并促进巨噬细胞与T细胞的相互作用，对淋巴细胞有特异性加强刺激的作用。
4. 注意事项：
弗氏佐剂对动物有一定的毒性，使用时应严格按照说明书操作，避免直接接触皮肤或吸入。
储存和运输过程中应避免阳光直射和高温，选择阴凉干燥处存放。
弗氏佐剂含有羊毛脂等成分，可能会引起过敏反应，使用前应了解受试者的过敏史，如有过敏情况应及时处理。
注射后可能会引起局部和全身的不良反应，如注射部位红肿、炎症等，应密切观察受试者的反应情况，及时处理。
5. 安全性：弗氏佐剂具有一定的安全性，但也有一定的副作用和不良反应，如局部炎症、全身发热等。
因此，在实验过程中应严格控制剂量和使用条件，确保安全有效。
总之，在使用弗氏佐剂时，应严格按照说明书操作，注意安全性和有效性。
如有任何疑问或需要更多帮助，请咨询专业人士。
佐剂的免疫生物学作用
佐剂的免疫生物学作用
佐剂是一种能够增强疫苗免疫原性的物质，它能够激活免疫系统，促进疫苗的免疫效果。
佐剂的免疫生物学作用主要包括以下几个方面。
佐剂能够增强疫苗的免疫原性。
疫苗中的抗原通常是一种蛋白质，它们往往不足以激活免疫系统产生足够的免疫反应。
佐剂的作用就是增强疫苗的免疫原性，使得免疫系统能够更好地识别和攻击病原体。
佐剂能够改变疫苗的免疫反应类型。
不同类型的免疫反应对于不同的病原体具有不同的作用。
例如，细胞免疫反应能够清除细胞内寄生的病原体，而体液免疫反应则能够清除体液中的病原体。
佐剂能够调节疫苗的免疫反应类型，使得免疫系统能够更好地应对不同类型的病原体。
第三，佐剂能够增强疫苗的持久性。
疫苗的免疫效果通常是有限的，需要定期接种才能保持免疫力。
佐剂能够增强疫苗的持久性，使得免疫效果能够更长时间地持续。
佐剂能够提高疫苗的安全性。
疫苗中的抗原通常是病原体的一部分，如果疫苗的免疫原性不足，可能会导致疫苗接种后出现疾病症状。
佐剂能够增强疫苗的免疫原性，减少疫苗接种后出现疾病症状的风险。
佐剂在疫苗免疫生物学中具有重要的作用。
它能够增强疫苗的免疫原性，改变疫苗的免疫反应类型，增强疫苗的持久性，提高疫苗的安全性。
随着科技的不断进步，佐剂的种类和作用也在不断扩展，为疫苗的研发和应用提供了更多的可能性。
佐剂的免疫生物学作用
佐剂的免疫生物学作用
佐剂是指在免疫接种过程中加入的一种辅助物质，其作用是增强免疫原的免疫原性，提高接种后产生的免疫反应强度和持续时间，从而增强疫苗的免疫效果。
佐剂的免疫生物学作用主要包括以下几个方面：
1. 增强免疫原性：佐剂能够激活免疫系统，刺激免疫细胞的活性，增强免疫原的免疫原性，使其更容易被免疫系统识别和攻击。
2. 增加抗原摄取和处理：佐剂能够促进抗原在接种部位的摄取和处理，使其更容易被免疫系统中的抗原呈递细胞识别并启动免疫反应。
3. 激活免疫细胞：佐剂能够刺激免疫系统中的免疫细胞，如巨噬细胞、树突状细胞等，增强它们的活性和免疫反应能力，促进其与抗原的相互作用，从而增强免疫效果。
4. 促进免疫记忆：佐剂能够促进免疫系统中的B细胞和T细胞产生持久性的免疫记忆，使其在未来再次接触相同抗原时能够快速产生有效的免疫反应，从而增强疫苗的免疫效果和持久性。
总之，佐剂在免疫原接种中扮演着非常重要的角色，能够增强疫苗的免疫效果，提高接种后产生的免疫反应强度和持续时间，从而保证接种者的免疫保护效果。
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免疫失调(讲义)(原卷版)
4.3 免疫失调知识点1：过敏反应★★★1.过敏反应（1）定义：的机体，在再次接触相同的抗原时，有时会发生的引发或的免疫反应。
（2）机理（3）特点：过敏反应有之分；许多过敏反应有明显的和。
（4）防治：找出过敏原并且尽量避免再次接触该过敏原，若出现过敏症状应及时去医院诊断治疗。
2.过敏反应与体液免疫的比较过敏反应体液免疫激素因素..反应时机机体同种过敏原机体接触抗原抗体分布在皮肤、呼吸道、消化道黏膜、血液中某些细胞的表面、组织液反应结果使细胞释放等，从而引发过敏反应形成复合物【典例1】（2023春•岳阳期末）过敏性鼻炎（AR）是一种鼻黏膜非感染性疾病，以阵发性喷嚏、清水样鼻涕、鼻痒、鼻塞等为临床症状。
AR作为呼吸系统常见病，近年随着空气及环境质量下降，该病在全球范围内呈高发趋势，其中多见于儿童及青壮年人群，该病经药物治疗后症状可得到控制，但无法有效根治，该疾病受易感因素影响可反复发作，继而影响患者生活质量。
下列相关叙错误的是（）A．排查过敏原并避免与之接触是预防过敏性鼻炎有效的方法B．对过敏性鼻炎的过敏原检测需提取分析患者血清中的各种抗体C．再次接触过敏原时，浆细胞识别过敏原后能够分泌特异性抗体D．过敏反应中产生的抗体存在部位与一般免疫反应产生的抗体不同【变式1】（2023春•宜丰县校级期末）《美国科学院院报》杂志上发表的一项研究中，研究人员使用一种过敏原特异性抑制剂，有效地阻止了花生过敏原与IgE（一种抗体）的结合，以抑制对花生的过敏反应，在过敏反应初期，IgE和过敏原蛋白结合在肥大细胞表面，使肥大细胞释放出组织胺等化学物质，这是患者过敏反应中的第一步，也是最关键的一步。
下列相关分析错误的是（）A．过敏反应是人体免疫功能过强的一种表现，属于体液免疫B．过敏反应有快慢之分，许多过敏反应还有明显的遗传倾向和个体差异C．Ig E由浆细胞合成和分泌，参与其分泌的具膜细胞器有内质网、高尔基体和线粒体D．特异性抑制剂通过阻止过敏原与IgE的结合，促进肥大细胞释放组织胺、可有效避免人体发生过敏反应【变式2】（2023春•大荔县期末）过敏反应是一种免疫失调症状，如花粉过敏、吃海鲜呕吐腹泻，甚至有些人注射青霉素后出现胸闷、气急、呼吸困难等症状。
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弗氏完全佐剂对小鼠细胞免疫功能的影响
弗氏完全佐剂(CFA)是一种常用免疫佐剂，其提高体液免疫应答的作用已被公认，而对细胞免疫应答的影响鲜有报道。
作者测定了一些注射佐剂后小鼠的细胞免疫应答指标，同时测定体液免疫指标对CFA剂量作一监测，报告如下。
1材料和方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物昆明种小鼠24只，由本校实验动物室提供。
1.1.2主要试剂弗氏完全佐剂，为sigma公司生产。
1.2实验方法
1.2.1CFA对小鼠产生抗卵黄抗体水平的影响昆明种小鼠24只，体质量18～22 g，雌雄随机分组，8只/组，以5倍稀释鸡卵黄为抗原。
免疫方法及程序见表1。
表1卵黄抗原免疫程序
组别注射物第1天第4天第10天佐剂组佐剂(ml)0.2抗原(ml)0.20.2非佐剂组抗原(ml)0.20.2空白对照组生理盐水(ml)0.20.20.2注：以上均为背部皮下多点注射
末次注射7 d后，将小鼠眼球取血并分离血清，用ELISA方法测定待检血清中抗卵黄抗体：鸡卵黄抗原5倍稀释包板，待检血清1∶10稀释，HRP-SPA按说明书配制。
1.2.2CFA对小鼠足跖肿胀的影响实验动物及免疫程序同表1，末次注射6 d 后每只小鼠右后掌皮下注射卵黄(5倍稀释)0.02 ml/只致敏，第2天测量其足的后掌至踝关节体积(ml)，并与小鼠自身左后足体积作对照，计算足肿率，如下：
足肿率(%)=免疫后右足体积-自身左足体积自身左足体积×100%
1.2.3CFA对小鼠碳粒廓清实验的影响昆明种小鼠16只，体质量18～22 g，雌雄随机分组，分为佐剂组与对照组，8只/组。
佐剂组小鼠腹腔注射CFA 0.2 ml/只，对照组腹腔注射无菌生理盐水0.2 ml/只，1 w后给2组小鼠分别经尾静脉注射20%墨汁0.2 ml/只，注射后1 min与5 min于小鼠眼球采血20 μl，置于2.0 ml 0.1%碳酸钠溶液中混匀，于680 ml波长下测定A值，并按如下公式计算K值：
K=logA5-logA1[]T5-T1=[SX(]logA5/A1[]4[SX)]
1.3统计分析数据均采用SPSS统计软件进行组间t检验，方差不齐时行t′检验。
2结果
2.1CFA对小鼠产生抗卵黄抗体水平的影响佐剂组小鼠产生抗卵黄抗体水平明显高于非佐剂组。
见表2。
2.2CFA对小鼠足跖肿胀率的影响佐剂组比非佐剂组的足肿率明显提高。
见表3。
2.3CFA对小鼠碳粒廓清能力的影响佐剂组小鼠碳粒廓清能力明显高于非佐剂组，结果见表4。
3讨论
实验表明，弗氏完全佐剂能显著增强机体细胞免疫应答能力。
足肿胀实验是体内测定细胞免疫功能的指标，佐剂组足肿率高于非佐剂组，证明佐剂提高体液应答能力的同时，也能增强细胞免疫功能。
佐剂作用机制，以往比较侧重于与抗原混合后起到油包水作用，从而增强抗原表面积，或者使抗原缓解，增强与免疫细胞接触，从而达到增强免疫应答效果的作用。
本次实验并未将抗原与佐剂混合为油包水状态，而是与抗原分离，先将抗原注射给小鼠，结果小鼠特异性抗体产生能力明显高于未注射佐剂组，其机制之一可能与活化巨噬细胞有关。
通过碳粒廓清实验得以证实，佐剂确能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬能力，而巨噬细胞在免疫应答中起到递呈抗原的作用，这与佐剂提高免疫应答有密切关系。
随着人们对佐剂的深入了解，目前对新型佐剂的研究开发进入了新的阶段。
本实验为免疫调节剂的选择提供了一个客观的参照依据。