免疫血清的制备
免疫血清的制备
免疫血清的制备免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。
高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂(如用于制备免疫标记抗体等)，也可供特异性免疫治疗用。
免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。
如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体，常可获得高效价的免疫血清。
…免疫血清的制备是常用的免疫学实验技术。
高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂(如用于制备免疫标记抗体等)，也可供特异性免疫治疗用。
免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。
如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体，常可获得高效价的免疫血清。
而使用免疫原性弱的抗原免疫时，则需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性。
免疫血清的特异性主要取决于免疫用抗原的纯度。
因此，如欲获得高特异性的免疫血清，必须予先纯化抗原。
此外，抗原的剂量、免疫途径及注射抗原的时间间隔等，也是影响免疫血清效价的重要因素应予重视。
一、原理具有免疫原性的抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。
由于抗原分子表面的不同决定簇为不同特异性的B细胞克隆所识别，因此由某一抗原刺激机体后产生的抗体，实际上为针对该抗原分子表面不同决定簇的抗体混合物(即多克隆抗体)。
另外，抗体的产生具有回忆应答的规律性，牨m现为初次免疫注射与再次免疫注射后的抗体应答特点截然不同。
是由于记忆性B细胞参与再次应答所致。
二、免疫方法根据抗原的性质不同而异。
下面以制备家兔抗人IgG免疫血清为例作具体说明。
1. 用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛，以酒精及碘酒消毒皮肤；2. 第一次免疫：用2ml注射器吸取弗氏完全佐剂(FCA)乳化的抗原(人IgG)下称FCA-IgG)液1ml，每侧脚掌皮下各注入0.5ml。
3. 第二次免疫：间隔10-14天后，于两侧窝及鼠蹊部肿大的淋巴结内注入FCA-IgG，每淋巴结注0.1ml，其余注入淋巴结附近皮下共1ml。
如淋巴结未肿大或肿大不明显时，直接注入两侧窝及鼠蹊部皮下。
免疫血清制备
注意事项
1. 免疫血清制备是一项常用的免疫学实验技术，而制备效价 高、特异性强的抗血清必须具备理想的免疫原、选择适宜 的动物、制定可行的免疫方案（如Ag剂量、剂型、注射 途径、注射次数、间隔时间等），才能达到预期目的。 2. 福氏完全佐剂在注射后易造成局部持久溃疡及形成肉芽肿， 但对抗体生成无影响。 3. 免疫剂量不宜过大，剂量过大时易形成免疫耐受；若抗原 宝贵可采取淋巴结直接注射。 4. 抗体鉴定除特异性、效价鉴定外，还需进行纯度检测： 采用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳，若出现多条电泳带， 提示抗血清中杂蛋白较多，需进一步分离提纯。
免疫过程
3.放血并鉴定（第21天）： A.放血：心脏穿刺抽血 将家兔仰卧固定，用食指触摸其胸壁，探明心脏搏动最明 显处，用大号无菌空针在预定部位与胸壁呈45º 角刺入，针 头刺中心脏时有明显搏动感。待见血液进入针头后，固定 注射器位置取血。 注意抓紧动物，避免挣扎，改变体位。 B.分离血清： 将抽取的家兔血（约50-70ml)室温自然沉降或2000rpm/min 离心，分离出血清。 C.鉴定： 采用双扩或对流免疫电泳鉴定抗血清特异性及工作效价
将抗血清（Ab）分别用NS作1:2、1：4、1：8 及1：16
不同稀释度稀释；
以1：30稀释血清作为Ag，进行双扩或对流免疫电泳 若Ag、Ab二者交界处出现沉淀线，说明有特异性 以出现沉淀线的Ab最高稀释度作为该Ab的工作效价
免疫过程
4.保存： 将工作浓度达到1:16的抗血清分成小包装（放入EP管内）， 贴上标签，注明血清名称、效价，制备日期，置-20º C冰箱 中冻存，备用。
免疫血清制备
目的要求
通过免疫动物制备抗血清，掌握可溶性抗 原制备抗血清的原理、实验步骤及影响因 素。
免疫血清的制备实验报告
免疫血清的制备实验报告
《免疫血清的制备实验报告》
实验目的：
本实验旨在通过免疫反应制备免疫血清，以便用于后续的免疫学研究和临床诊断。
实验材料和方法：
1. 实验动物：选择适合的实验动物，如小鼠或兔子，进行免疫原注射。
2. 免疫原制备：根据研究需要选择合适的抗原，并进行纯化和浓缩处理。
3. 免疫程序：将免疫原与适宜的佐剂混合，然后注射到实验动物体内，以激发免疫反应。
4. 血清采集：在免疫原注射后，定期采集实验动物的血清样本，以监测抗体水平。
5. 血清制备：通过离心和沉淀的方法，从血清中分离出免疫球蛋白，得到免疫血清。
实验结果：
经过一系列的免疫程序和血清采集，成功制备得到了免疫血清。
通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹（Western blot）等方法，验证了免疫血清中存在特定的抗体，具有对应的特异性和亲和力。
实验结论：
本实验成功制备了具有特定抗体的免疫血清，为后续的免疫学研究和临床诊断提供了重要的实验材料。
免疫血清的制备过程复杂而精细，需要严格控制各个环节，以确保免疫血清的质量和稳定性。
实验意义：
免疫血清作为一种重要的实验试剂，在免疫学研究和临床诊断中具有广泛的应
用前景。
通过本实验的制备过程，可以更好地理解免疫反应的机制，为疾病的
诊断和治疗提供重要的实验依据。
同时，免疫血清的制备也为相关领域的科研
人员提供了一种重要的实验技术和方法，有助于推动免疫学研究的进展和应用。
1-1-免疫血清制备及效价测定
测定免疫血清中抗体效价旳措施诸多，如凝集反应、沉淀反应、溶血反应、 ELISA分析等均可用于对抗体效价旳测定。
此次试验将采用溶血试验测定所获免疫血清旳效价。
• 抗原旳两种特征：免疫原性与抗原性
• 免疫原性旳本质——异物性
• 与机体亲缘关系越远，组织构造旳差别越 大，异物性越强。
试验材料
1. 40% SRBC 2. 18-22g旳BALB/C系小白鼠 3. 无菌1ml 注射器 4. 抗凝剂（枸橼酸钠或肝素） 5. 新鲜豚鼠血清（作为补体用） 6. 小试管等
实验内容
1、免疫动物
首次免疫小鼠为腹腔注射40%绵羊红细胞 （SRBC）0.2ml，后来分别于第4天、第7天和第10 天时间，以相同免疫剂量、相同免疫途径加强免疫。
小ห้องสมุดไป่ตู้腹腔注射
1. 小鼠腹腔注射能够用1ml旳注射器，配合4号针头。 2. 腹腔注射时右手持注射器，左手旳小指和无名指抓住小鼠旳
尾巴，另外三个手指抓住小鼠旳颈部，使小鼠旳头部向下。 这么腹腔中旳器官就会自然倒向胸部，预防注射器刺入时损 伤大肠、小肠等器官。进针旳动作要轻柔，预防刺伤腹部器 官。 3. 尤其是对于体重较小旳小鼠，腹腔注射时针头能够在腹部皮 下穿行一小段距离，最佳是从腹部一侧进针，穿过腹中线后 在腹部旳另一侧进入腹腔，注射完药物后，缓缓拔出针头， 并轻微旋转针头，预防漏液。
试验1-1 免疫血清制备及效价测定
实验目旳和要求
1、学习抗血清旳制备措施； 2、掌握抗血清旳搜集和保存措施； 3、掌握免疫血清效价旳测定措施。
1实验一 免疫血清的制备及应用(1)
实验一免疫血清的制备及应用（1）免疫血清（溶血素）的制备【实验原理】用绵羊红细胞(SRBC)免疫家兔，可获得抗绵羊红细胞抗体(抗SRBC抗体)。
SRBC与抗SRBC抗体结合，在补体参与下，可出现红细胞溶解，因此抗SRBC抗体也称为溶血素。
【主要试剂与器材】1.健康雄性家兔、绵羊。
2.2%碘酒、75％酒精、无菌生理盐水。
3.0.10g/L硫酸镁生理盐水溶液。
4.无菌三角瓶(内装玻璃珠)、离心管、吸管、注射器。
5.离心机。
【操作方法】1.抗原制备（1）用碘酒、75％酒精消毒绵羊颈静脉处皮肤，抽血，缓慢注入含有玻璃珠的无菌三角瓶内，轻轻摇动三角瓶，脱纤维抗凝。
抗凝绵羊血用Alsever液可保存2周。
（2）无菌取抗凝绵羊血于离心管中，加适量生理盐水，2000r/min离心5min，吸去上清液和白细胞层，再用较多的无菌盐水与红细胞混匀，离心再弃上清，重复3次，最后一次离心10min。
（3）根据红细胞压积，用0.10g/L硫酸镁生理盐水溶液配成20％SRBC悬液。
2.免疫动物（1）取健康雄性家兔，通过耳静脉免疫，免疫程序见表1-2。
表1-2 溶血素制备免疫方案【结果判断】收获的抗血清应是无菌、无溶血的。
【注意事项】注意无菌操作，并尽可能多的采集血清。
【方法评价】溶血素方法简便易行，但是动物个体间产生溶血素质量差异较大。
【临床应用】溶血素可直接用于补体参与的溶血反应，如总补体溶血活性和单个补体成分溶血活性测定。
用溶血素和SRBC做指示系统，可进行补体结合试验。
【思考题】在制备绵羊红细胞过程中为什么要洗涤并吸去红细胞表面的白细胞层?。
《免疫血清的制备》课件
总结
免疫血清的制备是一项复杂的过程，需要严格的质量控制。同时，免疫血清 在疾病诊断、生物学研究等方面具有举足轻重的作用。
参考文献
• 张三，李四。免疫学。北京：人民卫生出版社，2015。 • 王五，赵六。生物制品生产技术。北京：化学工业出版社，2016。
将免疫原注射到动物体内，使其免疫产生特异性抗 体。
采血
采集免疫动物的血液，制备成免疫血清。
灌装和贮存
对免疫血清进行筛选、灌装和储存。
体外机制合成免疫血清的步骤
1
抗原制备
制备抗原并纯化，确保其具有特异性。
抗体产生
2
利用体外细胞培养方法合成特异性抗体。
3
免疫沉淀
用盐析法或其他方法将抗体沉淀下来。
纯化和灌装
4
对产生的免疫血清进行纯化和灌装。
免疫血清的质量控制
纯度检测方法
免疫电泳、SDS-PAGE等方法可以检测免疫血清 的纯度。
效价测定方法
ELISA、放射免疫测定等方法可以检测免疫血清 的效价。
免疫血清的应用案例
免疫血清在疾病诊断中的应用
检测患者血液中是否存在特定抗体，以确诊疾病。
免疫血清在生物学研究中的应用
免疫血清的制备
免疫血清是一种重要的生物制品，本课程介绍了免疫血清的制备方法、质量 控制和应用案例。
背景介绍
定义
免疫血清是从免疫动物血清或体外制备中获得的含有特异性抗体的血清。
用途和重要性
免疫血清广泛应用于疾病诊断、生物学研究等领域，对于人类健康和科学发展具有重要意义。
动物免疫血清的
教学项目五免疫诊断血清制备
教学项目五免疫诊断血清制备
免疫诊断血清制备
血清是人类血液中的一种结构，由蛋白质，糖和脂类物质组成。
血清
在医学领域是非常重要的，它在诊断疾病，监测患者病情和治疗方面发挥
着重要作用。
目前，免疫诊断血清已被广泛应用于临床检测，用于确定患
者是否携带其中一种病毒、细菌或原虫等病原体，或者检测有无免疫异常
的血清抗体等，以及免疫系统发生变化的相关指标，为诊断和治疗提供重
要的指导服务。
血清是指由蛋白质，酶，抗体，脂质，碳水化合物和其他微量组分所
组成的混合液。
血清的组成与患者的性别，年龄，肠道菌群等有关，其什
么病毒或细菌的变化也受影响。
因此，免疫诊断血清的标准化制备是免疫
诊断的前提。
免疫诊断血清的制备，主要分为血清萃取和血清分离两个部分。
血清
萃取，即将病人的血液中的血清萃取出来，进行后续处理。
血清萃取主要
有分离管、抽液器、超离子导体滤液器等。
血清分离，即将血清从血液中
分离出来，血清分离的方法主要有电沉淀法、对抗剂结合法、膜分离法等。
免疫学实验实验一免疫血清制备
三、实验材料
1. 动物：小白鼠8周左右体重18克，2-3kg的健康雄家兔或 未怀孕的雌家兔
2. 抗原：小牛血清白蛋白（BSA） 3. 佐剂：完全福氏佐剂 (抗原，羊毛脂,石蜡油,卡价苗
75mg／ml) 4. 器材：一次性注射器，碘酒酒精棉球，塑料管① 家兔仰面，四肢由助手抓住四肢固定。 ② 剪去左胸部兔毛，消毒皮肤。 ③ 用左姆指摸到胸骨剑突处，食指及中指放在右胸处轻轻向左
推，使心脏固定于左胸侧位置。然后，以左拇指触摸心脏搏 动最强的部位。 ④ 用2-10 ml注射器(连接9号针头)，倾针45°角度，对准心搏 最强处刺入心脏抽血。 ⑤ 将抽取的血液立即注入无菌三角烧瓶中或无菌离心管中，待 凝固后将三角烧瓶的血置37℃温箱1小时，再置4℃冰箱3～ 4小时或直接过夜。然后用毛细滴管吸取血清，如还有红细 胞则离心用3000rpm离心15分钟，取上清液。
实验一 免疫血清的制备
一、目的要求
1、熟悉佐剂的制备和动物免疫的常用方法 2、制备兔抗牛血清白蛋白（BSA）的免疫血清
二、实验原理
• 免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。为制备抗 体通常将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间， 动物血清中可出现大量特异性抗体，这种含抗体的血清称 为免疫血清。
抗血清保存有三种方法：
第一种 是4℃保存，将抗血清除菌后，可以液体状态保存于普通冰箱，存 放3个月到半年，效价高时，一年之内不会影响使用。如需要长期保存 时要加入0.1％～0.2％NaN3以防腐和加入半量的甘油保存期延长。
第二种 是低温保存，放在－20℃－80℃，一般保存5年效价不会有明显 下降，但应防止反复冻融，反复冻融几次则效价明显降低。因此低温 保存应用小包装，以备取出后在短期内用完。
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皮内 全血 2.0
皮内 全血 1.0
耳静脉 20%悬液 1.0
耳静脉 20%悬液 2.0
（3）试血 末次注射后第7天，耳静脉采血1ml ,分离血清，用试
管凝集试验滴定效价。（1：2000以上可用）
让学生摆出来、画出来、做出来
（1）用碘酒和75% 消毒绵羊皮肤，抽取颈静脉血液， 注入含有等量阿氏液的三角烧瓶内，混匀。阿氏液既 有抗凝作用，又适于储存SRBC。分装后置4℃冰箱内， 可使用3周。
（2）无菌取上述绵羊血于离心管中，用无菌生理盐 水洗涤红细胞，2000r/min，离心5min，吸弃上清液 和白细胞层，再用无菌生理盐水与SRBC混匀， 2000r/min，离心5min，重复3次。最后一次离心 10min，以使血细胞沉积于管底，弃去上清液。
材料
1.动物 健康成年家兔，雄性，体重2-3kg；健康成年 绵羊。
2.试剂 生理盐水、碘酒、75%酒精。 3.器材 剪刀、镊子、无菌注射器、量筒、无菌毛细
滴管、无菌试管、离心管、三角烧瓶（200ml）、动 物固定架、手术器械一套、塑料放血管等。
阿氏液（Alsever's Solution）
（3）根据红细胞积压，用生理盐水配成20%SRBC悬 液。
2.免疫动物 （1）全班分为4组，每组选择健康雄性兔1只，用于免疫。
（2）用全血和SRBC悬液按下述方案免疫兔子。
免疫日期 第1天 第3天 第5天 第7天 第12天 第15天Leabharlann 注射途径 免疫原 剂量(ml)
皮内 全血 0.5
皮内 全血 1.0
阿氏液是一种红细胞保存液，含有抗凝剂柠檬酸钠和 细胞需要的养分葡萄糖。
阿氏液配方如下： 葡萄糖 2.05克 柠檬酸钠 0.8克 柠檬酸 0.055克 氯化钠 0.42克 加蒸馏水至100毫升，加热溶解后将pH值调到6.1，
高压灭菌，放置在4℃备用。
方法 兔抗羊红细胞免疫血清（溶血素）的制备
1.抗原制备