ABI7500 Fast PCR作业指导书
ABI7500FAST荧光定量PCR仪操作规程
ABI 7500 FAST荧光定量PCR仪简明操作规程1. 双击桌面图标，或从Start >All Programs > Applied Biosystems >7500 Software > 7500 V2.0开启软件。
进入主界面后选择Advaneed Setup 。
2. 默认进入Setup 下的Experiment Properties 界面2.1 输入实验名称 (Experiment Name)2.2 确认仪器型号2.3 在实验类型中，选择Quantitation-Comparative CT ( CT)2.4 选择试剂种类2.5 确认运行模式3. 进入Setup下的Plate Setup界面，编辑基因(Target)及样本( Sample)；3.1 在“ define targets and samples'界面中设置基因3.2在“ assign targets and samples 中进行样品板的排布。
4. 在“ Select relative quantitation setting”中设置内参基因及对照样本。
5. 进入Run Method 界面，设定反应条件及反应体积。
6. 点击“ save” 按钮，文件储存成Experiment Doeument Single Files(*.eds)格式，然后在Run界面按下按钮，反应即开始进行。
7. 实验结束后，点击界面右上角的Analyze按钮，软件将会显示实验结果：7.1 在扩增图中(见上图)，可通过更改Plot Settings 来改变扩增图的显示方式。
如果想查看阈值线或基线，请将Threshold 及Baseli ne 打勾。
7.2查看相对表达量结果时，利用Plot Settings 选项，可以以不同方式显示相对表达量的结果。
7.3对于SYBR Gree法实验，可以在Melt Curve界面中查看熔解曲线。
PCR实验室7500SOP
分子生物操作手册版本号：B修订号：0发布日期：文件标题：ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用、维护、校准程序文件编号：LAB-SOP-FZSW-011生效日期：编写人：审核人：发布部门：中心主任：批准人：其他：页码：第 1 页，共 4页【】ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使用、维护、校准程序-LAB-SOP-FZSW-0111.目的：确保ABI7500仪器的正确使用及正常运行2.适用范围：美国应用生物系统公司生产的ABI7500实时荧光定量PCR仪3.运行环境：电源：推荐配备合适的UPS或稳压器。
通风：仪器的通风应该没有阻挡。
温度：推荐实验室配备空调，温度应该控制在10～30℃之间。
湿度：20-80%；对于潮湿的省份，推荐实验室配备除湿机。
空间：易于操作，安全。
4.操作程序：开关机程序：开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开ABI7500系统软件，进行实验。
关机顺序：确认实验已经结束后，首先关闭ABI7500系统软件，然后关掉定量PCR仪主机的电源，最后关闭电脑。
创建绝对定量反应板文件：依次选择 Start > Programs > Applied Biosystems 7500 >Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )，以启动 SDS 软件;或在桌面双击Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )图标。
选择 File （文件） > New （新建）。
在 New Document Wizard （新建文件向导）窗口中，从 Assay （实验）下拉列表中选择Absolute Quantification (Standard Curve)（绝对定量，标准曲线）。
接受 Container （反应板类型）和 Template （模板）字段中的默认设置（即分别为 96-Well Clear（空白96 孔板）和 Blank Document（空白反应板））。
PCR实验室7500SOP
PCR实验室7500SOP【】ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪使⽤、维护、校准程序-LAB-SOP-FZSW-0111.⽬的：确保ABI7500仪器的正确使⽤及正常运⾏2.适⽤范围：美国应⽤⽣物系统公司⽣产的ABI7500实时荧光定量PCR仪3.运⾏环境：电源：推荐配备合适的UPS或稳压器。
通风：仪器的通风应该没有阻挡。
温度：推荐实验室配备空调，温度应该控制在10～30℃之间。
湿度：20-80%；对于潮湿的省份，推荐实验室配备除湿机。
空间：易于操作，安全。
4.操作程序：4.1开关机程序：开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机⾯板上的绿灯亮后即可打开ABI7500系统软件，进⾏实验。
关机顺序：确认实验已经结束后，⾸先关闭ABI7500系统软件，然后关掉定量PCR仪主机的电源，最后关闭电脑。
4.2 创建绝对定量反应板⽂件：4.2.1依次选择 Start > Programs > Applied Biosystems 7500 >Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )，以启动 SDS 软件;或在桌⾯双击Applied Biosystems 7500 SDS Software ( )图标。
4.2.2选择 File （⽂件） > New （新建）。
4.2.3在 New Document Wizard （新建⽂件向导）窗⼝中，从 Assay （实验）下拉列表中选择Absolute Quantification (Standard Curve)（绝对定量，标准曲线）。
接受 Container （反应板类型）和 Template （模板）字段中的默认设置（即分别为 96-Well Clear（空⽩96 孔板）和 Blank Document（空⽩反应板））。
4.2.4在 Default Plate Name （默认反应板名）字段中输⼊反应板⽂件名，或接受默认⽂件名。
ABI7500 Fast PCR作业指导书
1、目的规范该型号ABI7500Fast荧光定量PCR仪操作程序，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行，操作人员人身安全和设备安全。
2、适用范围适用于ABI7500Fast荧光定量PCR仪的使用操作与维护。
3、职责3.1 操作人员按照本规程使用仪器，对仪器进行日常维护。
3.2 保管人员负责对仪器进行定期维护、保养。
3.3 科室负责人监督检查本操作程序的执行。
4、操作程序4.1启动笔记本电脑，进入Windows XP系统。
4.2待电脑桌面图标出现后，打开ABI7500Fast荧光定量PCR仪主机电源。
4.3待主机电源指示灯亮后，双击电脑桌面7500 SDS图标，打开软件。
4.4新建文件：在Quick Startup document窗口点击Create New Document 按钮，出现New Document Wizard窗口，在Assay菜单中选择Standard Curve （Absolute Quantification），点击Finish按钮后打开一个空白96孔板文件。
4．5探针设置：双击任意一个孔打开Well Inspector窗口。
4．6点击Add Detector按钮，打开Detector Manager窗口，选择Detector List中的探针，例如用的是TaqMan-FAM标记探针，在列表中选择Reporter：FAM，Quencher：TAMRA；如果用的是SYBR Green I，则在列表中选择Reporter：SYBR，Quencher：（none）。
选择所需探针，按住Ctrl键可选择多个探针，再点击Add To Plate Document 按钮，最后点击Done按钮关闭Detector Manager窗口。
此时Well Inspector窗口仍然是打开的。
填样品表：在96孔表中选择有样品的一个或者多个孔，然后在Well Inspector窗口的Sample Name输入样品的名称，在探针列表中的Use项下的方框中打钩选择要用的探针，在Task栏中选择指定样品类型：未知样品选择Unknown，阴性对照选择NTC，标准品选择Standard。
ABI7500荧光定量PCR仪标准操作规程
1. 目的为规范使用人正确和正常的使用ABI 7500型核酸扩增荧光定量检测仪，保证扩增及结果分析的标准化、规范化，特制定本规程。
2. 适用范围适用于本公司ABI7500荧光定量PCR仪的操作。
3. 职责3.1使用人员负责本规程的实施。
3.2 设备使用人负责设备维护保养工作；设备责任人负责设备的定期维护保养工作。
3.3 质量监督员负责监督本规程的实施。
4.内容4.1 程序设置4.1.1 打开电脑及仪器电源，待仪器电源项显示power绿色状态。
4.1.2 双击电脑桌面上的7500 software V2.3 图标打开程序，打开程序单击OK，待软件连接仪器并测试校准状态后（若有出现连接失败可尝试重启电脑，检查USB线接口），出现如下界面，单击Design Wizard选项，红色箭头指示位置有个下拉菜单，如下图所示。
下拉菜单中有一个Advanced Setup（高级设置）选项，如箭头所示：点击这个选项，可以进入下面这个界面，①②③如上图所示，红色箭头从上到下指示的分别是①实验名称、②仪器型号和③反应程序类型。
（带*号的必需填）此图是上面图的延续（自己电脑显示不完全），红色箭头从上到下指示的分别是①Plate Setup 选项、②探针类型和③程序应用速度类型，一般使用的探针就是TaqMan 探针，速度类型选择默认就可以了（如果是7500fast 的话则有快速模式可以选择）。
下一步我们可以看到左上角的红色箭头指示的一个Plate Setup 选项，点击这个选项，就可以进入下一个设置界面。
红色箭头①和②指的是设定反应探针和反应样品名称，箭头③处可以填写反应探针名称（如P1,HBV ,HCV ）。
箭头⑤是选择报告荧光，一般使用的发光基团是FAM ，箭头⑥是选择粹灭荧光，达安现在使用的是TAMRA 荧光，科华现在使用的是BHQ ，在这个仪器中无此选择项，那么就选择none 。
箭头⑧处可以填写样品名称。
点击箭头④和箭头⑨处可以添加反应探针体系名称和样品名称。
7500Fast_操作流程
7500Fast Real Time PCR简易操作流程（供参考）
1.打开电脑，等待WinXP桌面完全显示后打开7500Fast主机电源。
2.等待7500Fast主机“Power”指示灯稳定后，打开SDS软件。
3.创建绝对定量反应板文件：
a.选择Create New Document；
b.从Assay下拉列表中选择Absolute Quantification，然后单击
Next；
c.选择（或创建）所需探针加入到反应板文件中，然后单击Next；
d.为每个反应孔指定探针和任务，为标准品赋值，然后单击Finish；
4.选择Setup选项卡，选中样品对应的反应孔，在Well Inspector窗口
中输入样品名，并检查探针和任务设置；
5.选择Instrument选项卡，设定PCR条件、反应体系；
6.选择File 〉Save as，保存反应板文件为***.sds；
7.放入样品板（管），单击Start开始反应程序（八连管、单管请使用
光学平盖），等待软件倒计时开始后再离开。
8.程序运行结束后，选择Results选项卡〉Amplification plot选项卡，
选择Auto Ct分析方法，点击Analysis 〉Analyze进行分析，选择Report选项卡查看结果。
9.选择File 〉Export，导出所需结果。
10.关机顺序：关闭SDS软件，关7500Fast主机，关电脑。
ABI7500说明书1 4版一中文
ABI7500说明书1 4版一中文ABI7500说明书第一章产品简介1.1 产品概述本说明书是ABI7500实时荧光定量PCR仪的详细介绍，旨在帮助用户了解并正确使用该仪器。
1.2 产品特点1.2.1 准确可靠：ABI7500采用先进的光学系统和控制技术，确保高精度和可靠的实时荧光定量PCR结果。
1.2.2 高通量：该仪器支持多通道扩展，满足不同规模实验需求，最多可容纳96孔板。
1.2.3 快速高效：ABI7500具有快速升温和降温功能，大大缩短PCR 反应时间，提高实验效率。
1.2.4 用户友好：仪器操作简便，配备直观的触摸屏界面和友好的软件，使实验操作更加方便快捷。
第二章产品配置2.1 主机及配件ABI7500主机、电源线、数据传输线、安装光盘、用户手册、试剂盖、盖板、96孔板等。
第三章仪器安装与连接3.1 安装步骤1.将ABI7500主机放置在干燥、通风良好的实验室台面上。
2.连接电源线和数据传输线。
3.2 连接示意图（图略）第四章仪器操作4.1 打开仪器按下ABI7500主机上的电源按钮，待仪器启动成功后，进入操作界面。
4.2 设置实验参数根据实验需求，在仪器上设置反应温度、时间、通道数等参数。
4.3 添加样品和试剂按照实验方案，取适量的PCR模板DNA或cDNA，并添加相应的PCR Master Mix等试剂。
4.4 启动PCR反应将PCR反应混合液加入96孔板中，将孔板放入ABI7500中，启动PCR反应程序。
4.5 数据获取与分析待PCR反应结束后，ABI7500会自动采集并记录实时荧光信号。
用户可使用附带软件对数据进行分析和图像处理。
第五章维护与保养5.1 清洁定期清洁仪器表面和孔板槽，使用干净的布擦拭。
5.2 保养定期检查仪器线缆、接口和连接器的牢固性，如有发现损坏或松动，及时修复或更换。
第六章故障排除6.1 仪器无法启动6.1.1 检查电源线是否插入稳定，是否有电源供应。
6.1.2 检查电源开关是否处于开启状态。
(仅供参考)ABI 7500型使用维护操作规程
ABI 7500型荧光定量核酸扩增仪作业指导书1.目的：使ABI 7500型核酸扩增荧光定量检测仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。
2.范围：ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪。
3.性能参数：详见说明书4.程序：4.1.依次打开电脑显示器及电脑主机电源，进入windows XP 界面4.2.打开PCR主机电源4.3.点击桌面7500 software V2.0.6 图标，打开软件4.4.主界面点击SET UP 菜单下ADVANCED SETUP4.4.1.在试验属性界面：选择正确的机器型号，试验类型及试剂类型（探针法/染料法）4.4.2.在plate setup 界面，首先设定试验使用的探针，及样品名称，然后按照事先加样的位置顺序设定样品名称、类型，包括待检样本、阴性对照、阳性对照、阳性标准品、阳性室内质控样本。
4.4.3.在run method界面，编辑与试剂盒提供的温度程序相同的温度程序，包括温度与时间，及循环数4.5.将预先加好的0.2ML样品管按照设定顺序放置到仪器里面，进入到RUN界面，点击绿色START 按钮，弹出保存试验对话框，设定保存后，试验立即开始运行。
界面显示运行倒计时。
运行过程中在amplification plot界面可以查看实时的扩增曲线，在temperature plot界面可以查看实时的温度变化情况。
温度循环结束后试验自动结束。
5.结果分析5.1.在analysis setup里面修改各个探针的baseline与threshold数值，点击绿色analyze图标，软件及完成自动分析。
5.2.在amplification plot界面查看所有样品的扩增曲线。
6.整体曲线的观察,将所有曲线选中进行整体观察。
6.1.观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一 Ct值出现上涨的情况。
6.2.观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。
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1、目的
规范该型号ABI7500Fast荧光定量PCR仪操作程序，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行，操作人员人身安全和设备安全。
2、适用范围
适用于ABI7500Fast荧光定量PCR仪的使用操作与维护。
3、职责
3.1 操作人员按照本规程使用仪器，对仪器进行日常维护。
3.2 保管人员负责对仪器进行定期维护、保养。
3.3 科室负责人监督检查本操作程序的执行。
4、操作程序
4.1启动笔记本电脑，进入Windows XP系统。
4.2待电脑桌面图标出现后，打开ABI7500Fast荧光定量PCR仪主机电源。
4.3待主机电源指示灯亮后，双击电脑桌面7500 SDS图标，打开软件。
4.4新建文件：在Quick Startup document窗口点击Create New Document 按钮，出现New Document Wizard窗口，在Assay菜单中选择Standard Curve （Absolute Quantification），点击Finish按钮后打开一个空白96孔板文件。
4．5探针设置：双击任意一个孔打开Well Inspector窗口。
4．6点击Add Detector按钮，打开Detector Manager窗口，选择Detector List中的探针，例如用的是TaqMan-FAM标记探针，在列表中选择Reporter：FAM，Quencher：TAMRA；如果用的是SYBR Green I，则在列表中选择Reporter：SYBR，Quencher：（none）。
选择所需探针，按住Ctrl键可选择多个探针，再点击Add To Plate Document 按钮，最后点击Done按钮关闭Detector Manager窗口。
此时Well Inspector窗口仍然是打开的。
填样品表：在96孔表中选择有样品的一个或者多个孔，然后在Well Inspector窗口的Sample Name输入样品的名称，在探针列表中的Use项下的方框中打钩选择要用的探针，在Task栏中选择指定样品类型：未知样品选择Unknown，阴性对照选择NTC，标准品选择Standard。
对于Standard，还要在Quantity栏中输入对应DNA的拷贝数。
注意如果没有输入拷贝数，软件将不能自动生成标准曲线。
已设定过的Plate Document显示，同时右下方的Status显示“Connected”。
4．7参比荧光：如果所用的定量PCR试剂含有ROX参比荧光，则在参比荧光栏（Passive Reference）选择ROX；如果所用的定量PCR实际不含有参比荧光，则选择（none）。
完成后点击Close按钮关闭Well Inspector窗口。
4．8循环参数：切换到Instrument页面，设定及修改PCR热循环程序。
删除：按住Shift
键并在相应的Stage或Step中点击，使该步骤被选中变黑，再按Delete键即可删除。
插
入：在需要插入参数的位置点击，出现粗黑竖线后，分别点击Add Hold、Add Cycle 或Add Step按钮添加保温、循环或循环中的一个步骤。
修改温度和时间：拖动鼠标，选中需要修改的温度或时间数字，输入新的数值即可。
Reps栏可输入循
环数，Sample Volume(ul)栏输入反应体积。
融解曲线试验：点击Add Dissociation Stage按钮，仪器即在定量PCR循环完成后继续做融解曲线试验。
如果是采用SYBR Green I染料方法进行定量研究，建议进行融解曲线试验，以判定PCR反应特异与否。
单峰表示单一的PCR扩增产物，多峰表示PCR扩增有杂带。
注意：只有SYBR Green I染料方法才需要进行融解曲线试验，TaqMan探针和MGB探针法都不需要。
Run Mode：Standard 7500,模块的升降温速率为2.5℃/sec。
Data Collection:选择在退火温度步骤收集荧光信号，以黄色背景显示。
4．9启动扩增：确认96孔板或全部样品管在主机内放置妥当，点Save按钮保存文件设置，保存类型选SDS Documents(*.sds)。
点击Start按钮，开始
PCR循环。
屏幕上动态显示PCR进程和剩余时间。
4．10监控进程: 切换到Results页面的Amplification Plot子页面，可以实时显示PCR曲线随着循环增加而逐步增长的实际情况。
如果Detector选FAM 或VIC，只显示对应探针的变化情况；如果选All，则同时显示所有探针的反应进程。
4．11保存结果：程序结束后，点Disconnect 按钮，然后File → Save保存实验结果。
4．12关机顺序：确认实验已经结束后，首先关闭ABI 7500 SDS软件，然后关掉定量PCR仪主机的电源，最后关闭电脑。
5、日常维护方法。
5.1每周检查计算机磁盘空间；整理计算机硬盘驱动器碎片；归档或备份您的实验文件。
用不脱毛布块清洁PCR仪的表面。
5.2 严格按操作规程工作，出现异常情况立即关机，并请专业人员维护。
5.3实验室应定期做好清洁并开窗通风以防止交叉污染。
5.4使用前应进行仪器自检一次，自检正常方可使用。
5.5每次使用后，应做好清洁工作，罩上防尘罩。
每月对仪器清洁、保养、维护一次。
6、支持文件
ABI7500Fast荧光定量PCR仪使用说明书。
7、质量记录表格
仪器设备使用登记簿。