SOD活性测定POD活性测定CAT活性测定质膜透性测定MDA含量测定色素含量测定实验方案及数据记录表格
抗氧化酶SOD、POD、CAT活性测定方法
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化复原法）1、试剂的配制1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液:取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/LPBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4)228.75ml，B母液(NaH2PO4)21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。
参照文件：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育第一版社，2000：267～268。
2）14.5mM甲硫氨酸溶液：取2.1637gMet用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至1000ml。
（3）30μMEDTA-Na2溶液：取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。
（4）60μM核黄素溶液：取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保留。
5）2.25mM氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.1840gNBT用PBS定容至100ml，避光保留。
酶液制备：取0.2g（可视状况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml50mmol/L 预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。
2、酶活性测定1）反响混淆液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液0.6ml，磷酸缓冲液5.4ml，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混淆后摇匀；（2）分别取3ml反响混淆液和30μl酶液于试管中光照下反响（3）将试管置于光照培育箱中在4000lux20min；同时做两支比较管，此中后测定作为最大光复原管，1支试管取3ml反响混淆液加入30μlPBS（不加酶液）照光另1支只加缓冲液置于暗中测准时用于调零。
抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）1、试剂的配制（1）L磷酸缓冲液(PBS，：A母液：L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量）71.7g；B母液：L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量）31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
L PBS（）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) ，B母液(NaH2PO4) ，用蒸馏水定容至1000ml。
参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。
（2）甲硫氨酸溶液：取 Met用磷酸缓冲液（）定容至1000ml。
（3）30μM EDTA-Na2溶液：取用磷酸缓冲液定容至100ml。
（4）60μM核黄素溶液：取核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。
（5）氮蓝四唑(NBT)溶液：取 NBT用PBS定容至100ml，避光保存。
酶液制备：取（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。
2、酶活性测定（1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液，磷酸缓冲液，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀；（2）分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中（3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min；同时做两支对照管，其中1支试管取3ml反应混合液加入30μl PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。
（4）以不照光的对照管（只有缓冲液并置于暗处）调零后，避光测OD560(出现颜色即可测定)。
（5）酶活性计算：SOD活性单位以抑制NBT光化还原50％所需酶量（测的样品值要在最大管的一半左右才合适，否则要调整酶量）为1个酶活单位（u）。
sod,pod,cat的测定
SOD，POD,CAT测定方法抗氧化酶活性的测定：（2.5g样）0.05mol/L磷酸缓冲溶液 (PBS)（pH=7.8）溶液的配制：65.5506g Na2HPO4·12H2O + 2.65285gNaH2PO4·2H2O, 定容到4L。
（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》，P134）。
取低温保存的鲜样，称2g左右的叶片（或根）放在50ml的离心管，加入20ml浓度为0.05mol/L 磷酸缓冲溶液（pH=7.8）（最好是较冷的磷酸缓冲溶液，防止研磨时温度过高使酶失活），研磨（用磨碎机磨），8000r/min的冷冻离心机下离心20分钟，上清液为粗酶液。
1超氧化物歧化酶（SOD）的测定：NBT(400ml)混合反应液:392mlPBS(Ph=7.8),+0.0206g NBT+ 0.776g甲硫酸铵+8ml核黄素溶液+0.4ml EDTA-Na溶液（100mlPBS缓冲溶液中含0.01204g核黄素）。
（另配）100ml PBS溶液加EDTA-Na 3.7224gEDTA-Na测试时：取3ml反应液+0.05ml(根)或0.02 ml(叶)粗酶液，于光照培养箱中6-10分钟，OD650下测定吸光度。
2过氧化物酶（POD）的测定：0.05mol/L磷酸缓冲溶液(PBS)（pH=7.0）溶液的配制：10.9251g Na2HPO4·12H2O + 3.042975gNaH2PO4·2H2O,定容到1000ml。
0.3%H2O2溶液的配制：吸2.5ml 30%H2O2，用0.05mol/L pH=7.0磷酸缓冲溶液(PBS)定容到250ml。
0.2%愈创木酚溶液的配制：称0.5g愈创木酚，用0.05mol/L pH=7.0磷酸缓冲溶液(PBS)定容到250ml。
2ml 0.3%H2O2溶液 + 0.95ml 0.2%愈创木酚溶液 + 1ml 0.05mol/L pH=7.0磷酸缓冲溶液(PBS)+ 0.02ml？？（原来为0.01）酶液（根加0.05ml酶液）（对照用0.05mol/L磷酸缓冲溶液代替酶液）（做三个重复），记录470nm处OD降低速度。
抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）1、试剂的配制（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。
参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。
（2）14.5mM甲硫氨酸溶液：取2.1637g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至1000ml。
（3）30μM EDTA-Na2溶液：取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。
（4）60μM核黄素溶液：取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。
（5）2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.1840g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。
酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。
2、酶活性测定（1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液0.6ml，磷酸缓冲液5.4ml，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀；（2）分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中（3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min；同时做两支对照管，其中1支试管取3ml反应混合液加入30μl PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。
抗氧化酶活性测定方法
抗氧化酶活性测定方法抗氧化酶是一类对抗氧化反应具有重要作用的酶。
其主要功能是清除体内的自由基，抑制过氧化物形成和脂质氧化反应，从而保护细胞免受氧化应激的伤害。
测定抗氧化酶活性有助于评估生物体内的氧化应激水平，为疾病的诊断和治疗提供重要的指导。
本文将介绍几种常见的抗氧化酶活性测定方法。
1.超氧化物歧化酶（SOD）活性测定方法：SOD能够催化超氧阴离子（O2-）的还原反应，将其转化为较为稳定的氧气和过氧化氢。
常见的SOD活性测定方法有：-标准醛缩法：根据SOD催化的还原反应，利用NBT（硝基蓝盐）和醛缩剂的变色反应来测定SOD活性。
-自动化测定法：利用包含其中一种还原物质和pH染料的较为稳定的底物，通过测定底物的氧化程度来确定SOD活性。
-XTT法和WST-1法：由于SOD具有还原型的性质，可以通过测定细胞培养基中的还原型琼脂糖（XTT）或水溶性四硝基噻唑盐（WST-1）的还原动力学来测定其活性。
2.过氧化氢酶（CAT）活性测定方法：CAT主要参与还原过氧化氢（H2O2），将其转化为氧和水。
常见的CAT活性测定方法有：-色素法：利用黄曲霉素作为还原剂，观察黄曲霉素的消费量来测定CAT活性。
-光度法：通过测定样品中H2O2浓度的下降程度来间接测定CAT活性。
-氧化还原电极法：通过测定样品中H2O2浓度的下降速度来测定CAT活性。
3.过氧化物酶（POD）活性测定方法：POD主要参与氧气与还原型供体之间的氧化还原反应，转化为过氧化物（ROO-）。
常见的POD活性测定方法有：-色谱法：利用酚类底物的氧化反应，测定产生的醌类产物的含量来测定POD活性。
-酶标法：POD催化氧化反应会形成有色产物，通过测定产物的吸光度来测定POD活性。
4.谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性测定方法：GPx主要参与还原过氧化物，将其转化为相对稳定的醇和水。
常见的GPx活性测定方法有：-碳酸盐法：根据GPx还原底物中的碳酸盐，观察样品溶液pH值的变化来测定GPx活性。
抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）1、试剂的配制（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。
加入10gPVP（聚乙烯吡咯烷酮）参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。
（2）130mmol/L甲硫氨酸溶液：取1.399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。
网上说定容到100ML我也不懂。
拜托（3）100μmol/L EDTA-Na2溶液：取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml；（4）100μM核黄素溶液：取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100ml，避光保存，随用随配，并稀释10倍（5）750μmol/L氮蓝四唑（NBT）溶液：称取0.06133g NBT用磷酸缓冲液定容至100ml 避光保存；酶液制备：取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，加2ml 磷酸缓冲液在冰浴下研磨成浆，加缓冲液使终体积为10ml。
取5ml于10000r/min下离心10min，上清液即为SOD粗提液。
提取酶液时如何保存;如果没有测完的需要放在4℃的冰箱里。
2、酶活性测定2．显色反应取试管（要求透明度好）5支，3支为样品测定管，1支为对照管，另外1支作为空白，按表39-1加入各溶液。
混匀后将空白管置暗处，其它各管于4000lx日光灯下反应20min（要求各管受光情况一致，反应室的温度高时时间可适当缩短，温度低时时间可适当延长）。
抗氧化酶SODPODCAT活性测定方法
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）1、试剂的配制（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。
参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。
（2）14.5mM甲硫氨酸溶液：取2.1637g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至1000ml。
（3）30μM EDTA-Na2溶液：取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。
（4）60μM核黄素溶液：取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。
（5）2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.1840g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。
酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。
2、酶活性测定（1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液0.6ml，磷酸缓冲液5.4ml，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀；（2）分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中（3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min；同时做两支对照管，其中1支试管取3ml反应混合液加入30μl PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。
SODPODCATMDA的测定方法
缩写：SOD：超氧化物歧化酶； CAT：过氧化氢酶； POD：过氧化物酶； MDA：丙二醛；PVP：聚乙烯吡咯烷铜K-30；L-Met：甲硫氨酸；NBT：氮蓝四唑；TBA：硫代巴比妥酸；TCA：三氯乙酸；PBS: 磷酸缓冲液1.SOD的测定方法加样顺序：（V=3ml）磷酸缓冲液：1.5ml L-Met: 0.3ml NBT: 0.3ml EDTA-Na2: 0.3ml 核黄素：0.3ml 酶液：0.05ml 蒸馏水：0.25ml试剂配制：(1) 0.05mol/L PBS：pH7.8(2) 130mmol/L L-Met: 1.9399g Met用PBS定容至100ml(3) 750mmol/L NBT: 0.06133g用PBS定容至100ml(避光保存)(4) 100umol/L EDTA-Na2: 0.03721g用PBS定容至1000ml(5) 20umol/L核黄素: 0.0753g用蒸馏水定容至1000ml(避光保存) 注：（1）对照：以加缓冲液、不照光为空白；照光的为最大还原管(2) 照光后至显蓝色要立即避光放置、迅速测定A560值2.MDA的测定方法试剂配制：（1）5% TCA： 5g用蒸馏水定容至500ml（2）0.5% TBA：2.5g用TCA定容至500ml方法：酶液1ml—3ml0.5%TBA和5%TCA—混合后在100度水浴煮沸15min—迅速冷却，10000r/min离心10min—用蒸馏水调零分别测定上清液在532nm、600nm处的吸收值3.POD的测定方法试剂配制：（1）0.1mol/L的醋酸缓冲液：8.8mlA+41.2mlB得到100mlph5.4的醋酸缓冲液A(0.2mmol/L的HAc溶液)—6ml冰醋酸溶到494ml蒸馏水中B(0.2mmol/L的NaAc溶液)—（2）0.25%愈创木酚溶液—125um愈创木酚溶于50ml 50%乙醇中（临用前配制）（3）0.75%H2O2溶液：1.25ml 30% H2O2定容至50ml（临用前配制）方法：比色杯中依次加入2ml 0.1mol/L的醋酸缓冲液—1ml 0.25%愈创木酚溶液—xml酶液（5min值为500-800即可）—0.1ml 0.75%H2O2溶液—迅速巅到混匀把A460调零并开始计时—1次/30s,连续读取3min4.CAT的测定方法试剂配制：(1) 50mmol/L的PBS（pH7.0） (2) 0.3% H2O2—1ml H2O2定容至100ml 方法：(1)以不加H2O2的50mmol/L的PBS（pH7.0）为空白把A240调零(2)50ul酶液—3ml 50mmol/L的PBS（pH7.0）—0.2ml 0.3% H2O2—迅速颠倒混匀，开始计时—1min后在240nm下比色，1次/1min(连续读取5min)。
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SOD活性测定POD活性测定CAT活性测定质膜透性测定MDA含量测定色素含量测定实验方案一、细胞质膜透性的测定（电导法）材料、仪器设备1.材料：植物叶片，每个样本1cm2的小叶片1g。
2.仪器药品：洗洁精；电导仪；电子天平；冰箱；真空泵；真空干燥器；恒温培养箱；电炉；50ml烧杯；50ml量筒；小镊子；纱布；表皿；滤纸条；镜头纸；剪刀；玻棒；胶头滴管；瓷盘。
实验步骤1.清洗用具所用玻璃用具均需先用洗洁精清洗，然后用自来水洗3次，再用蒸馏水洗3次，然后放入或倒置在洗净的且垫有洁净滤纸的器皿中干燥后备用。
2.实验材料的准备及处理选取叶龄叶位长势均相似的植物叶片，剪下后用湿布包住放在已经编号的保鲜袋中，最后用保鲜盒封存带回。
实验前用自来水冲洗叶片，除去表面沾污物，再用蒸馏水冲洗2次，用洁净滤纸轻轻吸干叶片表面水分放于已编号的洁净器皿中，然后分别剪成约1cm2的小叶片（或用直径为1cm2的打孔器钻取小圆片），注意除掉大叶脉。
将剪下的小叶片分别混合均匀，每个样本再快速称取鲜样2份，每份0.5g，分别放入编号为X-n-a、X-n-b的50ml烧杯中，另取编号C的烧杯，不加鲜样留作空白本底对照。
每个样本的三个烧杯中均加入蒸馏水30ml 浸泡，将盛有鲜样的a、b烧杯放入真空干燥器中，用真空泵抽气25min（以抽出细胞间隙中的空气），然后缓缓放入空气，从真空干燥器中取出a、b烧杯，a、C杯继续常温浸泡，b 杯称重，盖上表皿，置于电炉上煮沸15min，冷却后再称重并加蒸馏水至原重量，继续室温自然浸泡45min即可测定。
各样本处理时浸泡时间和处理温度要保持一致，均保持在室温下。
（注：自然浸泡需要4～5h以上，为防止样品表面气泡的影响故用真空干燥管去除气泡，也可以在振荡器上浸泡1～2h。
）3.测定电导值在测定前先将各杯浸泡液摇匀，测出各杯样本浸出液电导率值，记录到原始数据表上相应栏中。
（注意：每测定完一个样液后，用蒸馏水漂洗电极，再用滤纸将电极擦干，然后进行下一个样液的测定）原始数据表样表如下：电导率测定记录表：样本编号处理电导率值(μS · cm－1)相对外渗率（％）空白对照C管（常温蒸馏水空白）___—___ (第X组第n个重复)a管（常温）b管（煮沸）___—___a管（常温）b管（煮沸）___—___a管（常温）b管（煮沸）4、结果计算按下公式计算低温及常温处理电解质的相对外渗率：电解质的相对外渗率（％）＝× 100%二、叶绿素含量的测定（丙酮提取法）材料、仪器设备1.材料：植物叶片，每个样本0.5g。
2.仪器药品：分光光度计、电子顶载天平(感量0．01g)、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管； 95％乙醇(或80％丙酮) 、石英砂、碳酸钙粉。
实验步骤1. 实验材料的准备及处理分别取新鲜洁净叶片，去除中脉剪碎。
各称取剪碎的新鲜样品0.5g，放入洁净的研钵中（研完一个样本需将研钵洗净烘干才可研下一个样本），加少量石英砂和碳酸钙粉及2mL95％乙醇研成均浆，再加乙醇5mL，继续研磨至组织变白，静置3～5min。
取滤纸1张置于漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把各样本提取液倒入漏斗（用漏斗过滤完一个样本需将漏斗洗净烘干才可过滤下一个样本），滤液流至25mL 已编号的棕色容量瓶中；用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中，直至滤纸和残渣中无绿色为止。
最后用乙醇定容至25mL，摇匀。
2.测定样本吸光度以95％乙醇为空白对照来调零，对各样本叶绿体色素提取液在波长665nm、645nm 和652nm 下测定吸光度，记入原始数据记录表中。
样表如下：备注：时间：______年___月___日________________ 实验地点：_____________________________实验者：__________________ 记录者：___________________ 核对者：________________Cary: Wave Length（nm）：645nm 、652nm、665nm Ave Time（sec）：0.1 Replicates：3 样本总数：______ Save As:E\XXX\ ____光波长（nm）665 652 645 备注样本编号___—___(第X组第n个重复)___—______—___3、结果计算按照以下经验公式，分别计算植物材料中叶绿素a、b 和总叶绿素的含量叶绿素a ＝（12.7A665-2.69A645）×叶绿素b ＝（12.7A645-2.69A665）×总叶绿素a ＝（20.0A645+8.02A665）×或总叶绿素a ＝×其中V 为色素提取液总体积（ml,25ml，加入95%乙醇或80%丙酮的体积)； W为样品鲜重（0.5g）。
三、超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定（氮蓝四唑光化还原法）材料、仪器设备1.材料：植物叶片，每个样本0.2g。
2.仪器药品：（略）实验步骤1.配制试剂（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。
（2）14.5mM甲硫氨酸溶液：取0.21637g Met用0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。
（3）30μM EDTA-Na2溶液：取0.001gEDTA-Na2用0.05mol/L磷酸缓冲液定容至100ml。
（4）60μM核黄素溶液：取0.0023g核黄素用0.05mol/L磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。
（5）2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.1840g NBT用0.05mol/L PBS定容至100ml，避光保存。
（6）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液0.6ml，0.05mol/L磷酸缓冲液5.4ml，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀即可。
（注：反应混合液要现用现配！其他溶液如需保存需放在4℃温度下。
）2.酶液制备分别取0.2g洗净后的样本置于预冷的洁净研钵中，加入适量石英，然后加入1ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆转入10ml已编号的离心管中（研完一个样本需将研钵洗净烘干才可研下一个样本），然后再分两次各加入1ml 50mmol/L PBS 冲洗研钵，洗液也转入离心管。
各个离心管均在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液，将酶液转到另一已编号的洁净离心管中，再分二次对剩余余浆进行冲洗并进行同上的离心，每次冲洗用50mmol/L PBS 1ml，离心所得上清液也均转入到对应的离心管中，完成以上步骤所得到的约5ml上清液即为酶液。
（注：酶液如需保存需放在4℃温度下，可保存24h，长期保存需用液氮冷冻。
）3.酶活性测定（1）取一支试管只加0.05mol/L PBS置于暗中用于测定时调零（亦可不用试管待测定时直接倒入比色皿中，比色皿玻璃石英材质均可），另取一支试管加入6ml反应混合液和60μl 0.05mol/L PBS（不加酶液）作为对照，留待照光后测定作为最大光还原管。
然后每个样本分别取60μl的酶液和6ml的反应混合液混合于已编号的试管中；（2）将各个试管（盛有用于调零的PBS溶液的试管除外）置于光照培养箱中在4000 lux 光照下反应20min；（3）以不照光的PBS溶液调零后，避光测对照管及各样本管OD560下的吸光度，记入原始数据记录表中。
(注：测定前检查各样本管是否出现颜色，已出现颜色才可测定。
)样表如下：4、酶活性计算SOD活性单位以抑制NBT光化还原50％所需酶量（测的样品值要在最大管的一半左右才合适，否则要调整酶量）为1个酶活单位（u）。
SOD总活性＝ [( Ack -AE)×V]/（1/2Ack×W×Vt）其中SOD总活性以鲜重酶单位每克表示（u/g FW）； A ck为照光对照管的吸光度；A E为样品管的吸光度；V为样品酶液总体积（ml,5ml，加入PBS的体积)；Vt为测定时的酶液用量（ml，60ul）；W为样品鲜重（0.2g）。
四、过氧化物酶（POD）活性的测定（愈创木酚法）材料、仪器设备1.材料：植物叶片，每个样本0.2g。
2.仪器药品：（略）实验步骤1.配制试剂（1）0.2mol/L磷酸缓冲液(pH6.0)：分别取A母液(Na2HPO4) 123ml和B母液(NaH2PO4) 877ml混匀即为1000ml PBS(0.2M，pH6.0)；（2）反应混合液配制（以60个样为准）：取100ml 0.2mol/L PBS，加入0.038ml液体（原液）愈创木酚（2-甲氧基酚）加热搅拌溶解，冷却后加入0.056ml 30％的H2O2，混匀后保存于4℃温度下备用。
2.酶液制备酶液制取方法同SOD。
3.酶活性测定（1）取一支试管只加0.2mol/L PBS用于测定时调零（亦可不用试管待测定时直接倒入比色皿中，比色皿玻璃石英材质均可），然后每个样本分别取60μl的酶液和6ml的反应混合液混合于已编号的试管中；（2）用0.2mol/L PBS溶液调零后，测各样本管OD470下的吸光度，记入原始数据记录表中。
（注：要测定3min，分别在第0、1、2、3min各读数一次，以最后一次读数减第一次读数得ΔA470，即反应时间内吸光度的变化值。
边加样边测定，测定时动作要快，如果慢的话，要保证每个样品从加好样到开始记时的时间相差不大。
）样表如下：第__次铅胁迫实验第__天样本采集POD酶活性测定实验原始数据记录表POD=（ΔA470×Vt）/（W×Vs×0.01×t） (u/g min)其中ΔA470为反应时间内吸光度的变化；W为样品鲜重(0.2g)；t为反应时间(3min)；Vt为提取酶液总体积（ml，5ml）；Vs为测定时取用酶液体积（ml，60ul）。
五、过氧化氢酶（CAT）活性的测定材料、仪器设备1.材料：植物叶片，每个样本0.2g。
2.仪器药品：（略）实验步骤1.配制试剂（1） 0.15mol/L磷酸缓冲液（pH7.0）：取A母液(Na2HPO4) 457.5 ml 和B母液(NaH2PO4) 292.5 ml混合后用蒸馏水定容至1000ml。